利用超微量冷冻麦管冷冻复苏睾丸穿刺精子成功妊娠一例
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第 ４８卷 第 ２期 ２０１８年 ２月
新 疆 医 学 ＸＩＮＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬＪＯＵＲＮＡＬ
Ｖｏ１．４８ Ｎｏ．２ Ｆｅｂ．２０１８
· 个案报道 ·
利用超微量 冷冻麦管冷冻复苏睾丸穿刺精子成 功妊娠一例
孙 健，谭志国，李维娟，甘晓静，张 坤
（新疆佳音 医院生殖医学中心 。乌鲁木齐 ８３０００１）
更高 。相对与常规精液冷冻使用 的精液冷冻瓶 、麦 适宜用于睾丸手术取精 患者精子冷冻的方法 。
管而言 ，超微量麦管 的体积更小 ，降温 和复苏 时的
温度传导能力更快 ，能更快 的通过玻璃化转化 的温 度区 ，所以能够在冷冻过程中避免冰核的形成 ，进 而提高精子冷冻复苏的存活率 。由于睾丸手术获得 的精子本身数量就 比较少 ，如果使用常规的冷冻载
患 者胚 胎移植 后 １２ ｄ，血 ＨＣＧ１５６．８２ ｍｌＵ／ｍＬ， 于移植后 １８ ｄ复查 ，血 ＨＣＧ１５７４ ｍｌＵ／ｍＬ，显示 已成 功 妊娠 。 ２讨论
随着 ＩＣＳＩ技术的广泛使用 ，无精症患者尤其是 梗阻性无精症患者 ，可 以通过睾丸穿刺或睾丸显微 取 精 的技术 获得 精子 并达 到 成功受 孕 的 目的 。但 反 复 的睾丸手术操作 除了带来心理和精神上 的压力 外 ，患者还要 面对睾丸组织破坏 、附睾纤维化 、不可 逆 的睾 丸萎缩 、生精功能下降 ，甚至丧失 内分泌功 能需 要外 源 激 素 替代 治 疗 的 问题翻。如果 能将 这些 患者通过睾丸手术获得的精子进行冷冻保存 ，可以 为取卵当 日成功受精提供一定的保 障，同时还能减 少 反复穿刺取精 给患者带来 的身体及精神上的压 力 和经济负担［４】。
中图分类号 ：Ｒ７１１．６ 文献标识 码：Ａ 文章编号 ：１００１—５１８３（２Ｏ１８）０２＿＿２２１—０２
精子冷冻是冷冻 生物学在人类辅 助生殖技术 （ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＲＴ）中最早应 用 和 开展的技术之一 ，是保存男性生育力 的重要手段 。 对于无精症患者 ，可 以通过睾丸手术获得的精子并 获得与精液精子 相同的妊娠 率【ｎ，但非梗阻性无精 症 患 者 （ｎｏｎｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ，ＮＯＡ）而 言 ，即使 是首次睾丸活检发现精子 ，下次手术也有约 ３０％的 失败风险圆。所 以冷冻保存睾丸手术取精患者 的精 子 ，对 于 避免 反 复穿 刺 和 手术 给 患者 带 来 的 身 心痛 苦 ，降低取卵 当 日手术 失败 的风险都非 常必要 。 ２０１７年新疆佳音 医院生殖 医学 中心采用超微量冷 冻麦管冷冻保存睾丸穿刺精子 ，复苏后行单精子卵 胞浆 显微注射 （Ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＩＣ— ＳＩ），获得临床妊娠 ，现报告如下。 １资料 与方 法
新 疆 医 学
第 ４８卷
段 时间太长 ，尤其是复温过程 中 ，则可能使冰 晶再 冷冻 ，也有 研 究者 呶寸精 子 进行 小体 积 （３ ｕＬ）的玻 璃
次 出现 ，从而损伤精子园。刘锋［６１等比较 了传统冷冻 化冷 冻 ，但 这 些 方 法 要 么对 技 术要 求 较 高 ，要 么 需
取卵 日女方获卵 ８枚 ，其 中 ＭⅡ卵 ５枚 ，Ｍ Ｉ卵
１枚 ，ＧＶ２枚 ，解冻复苏精液，复苏时双人核对患者信 息 ，取出麦管，将套管上的霜擦去 ，３７％水浴中复苏 ３ ｓ ，麦管套于注射器上 ，将精液小心吹打于复苏液液滴 中并盖上石蜡油 ，于培养箱中培养 １０ ｒａｉｎ后于倒置 镜下观察 ，可见 已有部分精子恢复活动能力，表明复 苏成功，于培养箱中再孵育 ２ ｈ后行 ＩＣＳＩ。次 日观察 正常受精 ３枚 ，ｌ枚 ＩＰＮ，ｌ枚未见原核，第三天共获 得胚胎 ５枚 ，其 中 Ｉ级 ２枚 ，移植 ，Ⅱ级两枚 ，冷冻保 存 ，Ⅲ级 １枚 ，培养囊 胚未形 成后丢 弃。
在精子冷冻 和复苏的过程 中，温度的控制是一 个 非常重要 的因素。酵母 中的实验表明 ，将冷冻速 度提高到可 防止 细胞外 冰晶的形成可增加细胞 的 存 活率 ，同时又能避免细胞 内冰晶形成损伤细胞 ， 而 一１３５％是玻璃化转变的温度 ，如果停留于此温度
基金项目：２０１６年 自治区临床 重点专 科建 设项 目（２０１６５６）。 作者简介：孙健 。男 ，硕士 ，研究方 向：辅助生殖实验室技术。 通信作者 ：谭志 国，男 ，副主任医师 ，研 究方向 ：泌尿外科及男性 不育症治疗 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｔｚ．ｇ＠ｊｙｎｋ．ｃｏｍ。
患者 ，夫妇 ，女方 ，４２岁 ，婚后性生活规律 ，至今 未 孕 。子 宫输 卵管超 声 造影示 双 侧输 卵 管通 而不 畅 可能 ；宫腔镜检查 示子宫 内膜炎 中度 ，给予相关对 症处理。男方 ４３岁 ，精液常规检查提示无精症 ，行 睾丸 穿 刺活 检术 ，显微 镜 下 分 离组 织 后 可见 精 子 ， 倒置显微镜下可见左 、右侧 Ｏ—ｌ条精子 ／ＨＰ，对 获 得 的精 子进 行冷 冻保存 。取 无 菌 ｌｍＬ注射 器 于 ３００３培养皿 中剥离睾丸组织 ，收集剥离组织并进行 梯度离心处理 ，所获沉淀物 于 ＨＥＰＥＳ中清洗两次 ， 按照冷冻保护剂 ：精液 ＝ｌ：２的比例混合成液滴 ，取 出超微 量冷冻麦管 ，标明患者信息 ，将混匀的液滴 缓慢 的 吸人 麦管 中 ，两 端 封 口后 于液氮 面 ５ ｃｍ处 熏 蒸 ５ ｍｉｎ后 ，置于液 氮 中保 存 。
使用 的 ０．２５ ｍＬ和 ０．５ ｍＬ麦管与 超微 量麦管 的精 要 特 殊 的载 体 ，目前 都 不 适 合 广泛 使 用 ，相 比较 而
液冷冻效果 ，发现超微量麦管的冷源自降温速率明显 言 ，超微量麦管的使用成本和操作都 相对简单 ，而
高于传统使用麦管 ，而且精子冷冻复苏后 的活率也 且冷冻复苏率也可达 到使用要求 ，是 目前为止 比较
新 疆 医 学 ＸＩＮＪＩＡＮＧ ＭＥＤＩＣＡＬＪＯＵＲＮＡＬ
Ｖｏ１．４８ Ｎｏ．２ Ｆｅｂ．２０１８
· 个案报道 ·
利用超微量 冷冻麦管冷冻复苏睾丸穿刺精子成 功妊娠一例
孙 健，谭志国，李维娟，甘晓静，张 坤
（新疆佳音 医院生殖医学中心 。乌鲁木齐 ８３０００１）
更高 。相对与常规精液冷冻使用 的精液冷冻瓶 、麦 适宜用于睾丸手术取精 患者精子冷冻的方法 。
管而言 ，超微量麦管 的体积更小 ，降温 和复苏 时的
温度传导能力更快 ，能更快 的通过玻璃化转化 的温 度区 ，所以能够在冷冻过程中避免冰核的形成 ，进 而提高精子冷冻复苏的存活率 。由于睾丸手术获得 的精子本身数量就 比较少 ，如果使用常规的冷冻载
患 者胚 胎移植 后 １２ ｄ，血 ＨＣＧ１５６．８２ ｍｌＵ／ｍＬ， 于移植后 １８ ｄ复查 ，血 ＨＣＧ１５７４ ｍｌＵ／ｍＬ，显示 已成 功 妊娠 。 ２讨论
随着 ＩＣＳＩ技术的广泛使用 ，无精症患者尤其是 梗阻性无精症患者 ，可 以通过睾丸穿刺或睾丸显微 取 精 的技术 获得 精子 并达 到 成功受 孕 的 目的 。但 反 复 的睾丸手术操作 除了带来心理和精神上 的压力 外 ，患者还要 面对睾丸组织破坏 、附睾纤维化 、不可 逆 的睾 丸萎缩 、生精功能下降 ，甚至丧失 内分泌功 能需 要外 源 激 素 替代 治 疗 的 问题翻。如果 能将 这些 患者通过睾丸手术获得的精子进行冷冻保存 ，可以 为取卵当 日成功受精提供一定的保 障，同时还能减 少 反复穿刺取精 给患者带来 的身体及精神上的压 力 和经济负担［４】。
中图分类号 ：Ｒ７１１．６ 文献标识 码：Ａ 文章编号 ：１００１—５１８３（２Ｏ１８）０２＿＿２２１—０２
精子冷冻是冷冻 生物学在人类辅 助生殖技术 （ａｓｓｉｓｔｅｄ ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＡＲＴ）中最早应 用 和 开展的技术之一 ，是保存男性生育力 的重要手段 。 对于无精症患者 ，可 以通过睾丸手术获得的精子并 获得与精液精子 相同的妊娠 率【ｎ，但非梗阻性无精 症 患 者 （ｎｏｎｏｂｓｔｒｕｃｔｉｖｅ ａｚｏｏｓｐｅｒｍｉａ，ＮＯＡ）而 言 ，即使 是首次睾丸活检发现精子 ，下次手术也有约 ３０％的 失败风险圆。所 以冷冻保存睾丸手术取精患者 的精 子 ，对 于 避免 反 复穿 刺 和 手术 给 患者 带 来 的 身 心痛 苦 ，降低取卵 当 日手术 失败 的风险都非 常必要 。 ２０１７年新疆佳音 医院生殖 医学 中心采用超微量冷 冻麦管冷冻保存睾丸穿刺精子 ，复苏后行单精子卵 胞浆 显微注射 （Ｉｎｔｒａｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｓｐｅｒｍ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ＩＣ— ＳＩ），获得临床妊娠 ，现报告如下。 １资料 与方 法
新 疆 医 学
第 ４８卷
段 时间太长 ，尤其是复温过程 中 ，则可能使冰 晶再 冷冻 ，也有 研 究者 呶寸精 子 进行 小体 积 （３ ｕＬ）的玻 璃
次 出现 ，从而损伤精子园。刘锋［６１等比较 了传统冷冻 化冷 冻 ，但 这 些 方 法 要 么对 技 术要 求 较 高 ，要 么 需
取卵 日女方获卵 ８枚 ，其 中 ＭⅡ卵 ５枚 ，Ｍ Ｉ卵
１枚 ，ＧＶ２枚 ，解冻复苏精液，复苏时双人核对患者信 息 ，取出麦管，将套管上的霜擦去 ，３７％水浴中复苏 ３ ｓ ，麦管套于注射器上 ，将精液小心吹打于复苏液液滴 中并盖上石蜡油 ，于培养箱中培养 １０ ｒａｉｎ后于倒置 镜下观察 ，可见 已有部分精子恢复活动能力，表明复 苏成功，于培养箱中再孵育 ２ ｈ后行 ＩＣＳＩ。次 日观察 正常受精 ３枚 ，ｌ枚 ＩＰＮ，ｌ枚未见原核，第三天共获 得胚胎 ５枚 ，其 中 Ｉ级 ２枚 ，移植 ，Ⅱ级两枚 ，冷冻保 存 ，Ⅲ级 １枚 ，培养囊 胚未形 成后丢 弃。
在精子冷冻 和复苏的过程 中，温度的控制是一 个 非常重要 的因素。酵母 中的实验表明 ，将冷冻速 度提高到可 防止 细胞外 冰晶的形成可增加细胞 的 存 活率 ，同时又能避免细胞 内冰晶形成损伤细胞 ， 而 一１３５％是玻璃化转变的温度 ，如果停留于此温度
基金项目：２０１６年 自治区临床 重点专 科建 设项 目（２０１６５６）。 作者简介：孙健 。男 ，硕士 ，研究方 向：辅助生殖实验室技术。 通信作者 ：谭志 国，男 ，副主任医师 ，研 究方向 ：泌尿外科及男性 不育症治疗 ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｊｔｚ．ｇ＠ｊｙｎｋ．ｃｏｍ。
患者 ，夫妇 ，女方 ，４２岁 ，婚后性生活规律 ，至今 未 孕 。子 宫输 卵管超 声 造影示 双 侧输 卵 管通 而不 畅 可能 ；宫腔镜检查 示子宫 内膜炎 中度 ，给予相关对 症处理。男方 ４３岁 ，精液常规检查提示无精症 ，行 睾丸 穿 刺活 检术 ，显微 镜 下 分 离组 织 后 可见 精 子 ， 倒置显微镜下可见左 、右侧 Ｏ—ｌ条精子 ／ＨＰ，对 获 得 的精 子进 行冷 冻保存 。取 无 菌 ｌｍＬ注射 器 于 ３００３培养皿 中剥离睾丸组织 ，收集剥离组织并进行 梯度离心处理 ，所获沉淀物 于 ＨＥＰＥＳ中清洗两次 ， 按照冷冻保护剂 ：精液 ＝ｌ：２的比例混合成液滴 ，取 出超微 量冷冻麦管 ，标明患者信息 ，将混匀的液滴 缓慢 的 吸人 麦管 中 ，两 端 封 口后 于液氮 面 ５ ｃｍ处 熏 蒸 ５ ｍｉｎ后 ，置于液 氮 中保 存 。
使用 的 ０．２５ ｍＬ和 ０．５ ｍＬ麦管与 超微 量麦管 的精 要 特 殊 的载 体 ，目前 都 不 适 合 广泛 使 用 ，相 比较 而
液冷冻效果 ，发现超微量麦管的冷源自降温速率明显 言 ，超微量麦管的使用成本和操作都 相对简单 ，而
高于传统使用麦管 ，而且精子冷冻复苏后 的活率也 且冷冻复苏率也可达 到使用要求 ，是 目前为止 比较