培养基及其配制
培养基配制
茎尖培养可看作是这方面较为特殊的一种方式。它采用极其幼嫩的顶芽的茎 尖分生组织作为外植体进行接种。在实际操作中，采用包括茎尖分生组织在内 的一些组织来培养，这样便保证了操作方便以及容易成活。 用靠培养定芽得到的培养物一般是茎节较长，有直立向上的茎梢，扩繁时主要 用切割茎段法，如香石竹、矮牵牛、菊花等。但特殊情况下也会生出不定芽，形 成芽丛。 2）不定芽的发育 在培养中由外植体产生不定芽，通常首先要经脱分化过程，形成愈伤组织的细 胞。然后，经再分化，即由这些分生组织形成器官原基，它在构成器官的纵轴 上表现出单向的极性（这与胚状体不同）。多数情况下它形成芽，后形成根。 另一种方式是从器官中直接产生不定芽，有些植物具有从各个器官上长出不 定芽的能力如矮牵牛、福禄考、悬钩子等。当在试管培养的条件下，培养基中 提供了营养，特别是提供了连续不断植物激素的供应，使植物形成不定芽的能 力被大大地激发起来。许多种类的外植体表面几乎全部为不定芽所覆盖。在许 多常规方法中不能无性繁殖的种类，在试管条件下却能较容易地产生不定芽 而再生，如柏科，松科，银杏等一些植物。许多单子叶植物储藏器官能强烈地 发生不定芽，用百合鳞片的切块就可大量形成不定鳞茎。 在不定芽培养时，也常用诱导或分化培养基。用靠培养不定芽得到的培养物， 一般采用芽丛进行繁殖，如非洲菊、草莓等。
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。
（4）配制MS铁盐母液
一般配制成100倍MS铁盐母液。 依次称取 EDTA二钠 3.73g FeSO4·7H2O 2.78g
配成1L母液，倒入1L试剂瓶中，存放于冰箱中。 所以MS母液有5种大量元素母液，加上MS微量元素母液、MS有机母液和MS铁盐 母液，共8种母液。 激素母液的配制 各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，生长素类一般要先用
培养基及其配制
4、培养皿 规格：9、12cm直径； 适于：游离细胞、 原生质体、花粉等的静置培养、 看护培养、无菌种子的发芽、植物材料的分离等。 5、果酱瓶 规格：200ml罐头瓶，加盖半透明的塑料盖； 特点：成本较低，操作方便，也减少了培养材料的
损伤；缺点是易引起污染。
6、瓶口封塞
要求：要具有一定的通气性和密闭性， 以防止培养基干燥和杂菌污染。
MS salts reduced to 0.47 g. l-1
Some root growth but reduced development of shoots
MS salts increased to 9.52 g. l-1
Shoots developed on upper surface of
Profuse development of roots over the explant upper and lower surface, and few shoots. Some callus
No MS salts
No sign of regeneration from explant
at all.
肌醇：使用浓度一般为100mg／L 氨基酸：是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收
利用，常用甘氨酸。
4、植物生长调节物质
1）生长素类： 作用：诱导愈伤组织形成、根的分化和促进细
胞分裂、伸长生长。 IAA(indo acetic acid吲哚乙酸) NAA(naphthalene acetic acid萘乙酸) IBA(indolebutyri acid吲哚丁酸) 2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸) 作用的强弱顺序：2,4-D > NAA > IBA >IAA
各种培养基配方范文
各种培养基配方范文培养基是一种用于微生物培养的基础物质，能够为微生物提供所需的营养和环境条件。
不同的微生物在其生长过程中需要不同的养分和环境条件，因此培养基的配方需要根据微生物的需求来进行调整。
下面是几种常见的培养基配方。
1.大肠杆菌液体培养基配方：-蛋白胨或复合氮源：10g-酵母浸出物：5g-葡萄糖：1g-NaCl：5g-K2HPO4：2g-MgSO4：0.2g-pH调节至7.0后加水至1000mL2.牛心提取物琼脂糖培养基配方：-牛心提取物：3g-高级琼脂糖：15g-葡萄糖：10g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL3.玉米浸出物琼脂糖培养基配方：-玉米浸出物：4g-高级琼脂糖：15g-酵母浸出物：1g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL4.LB琼脂糖培养基配方：-液体LB培养基：10mL-高级琼脂糖：15g-NaCl：5g-pH调节至7.0后加水至1000mL 5.血寒养基配方：-羊血：50mL-肉浸出物：3g-酵母浸出物：3g-肉汤培养基：1L-红细胞素：5g-高级琼脂糖：3g-pH调节至7.0后加水至1000mL6.厌氧培养基配方：-肉浸出物：5g-酵母浸出物：5g-NaCl：5g-蒸馏水：900mL- 加入0.1%的L-cysteine：10mL-pH调节至7.0后用氮气替换空气注意事项：-培养基中的成分应严格按照配方比例加入，并保持无菌。
-配制好的培养基需要高温高压灭菌以保证无菌。
-不同的微生物可能对一些成分非常敏感，需要根据实际情况进行微调。
-培养基的pH值应根据微生物环境要求进行调整，一般在7.0左右。
-配好的培养基应存放在4℃的冰箱中，避免阳光直射以防止成分分解。
这只是一些常见的培养基配方，不同的微生物有不同的需求，可以根据具体的情况进行配方的调整。
在实际使用中，还需要根据微生物的特性和实验目的来选择合适的培养基。
几种微生物培养基配方
几种微生物培养基配方微生物培养基是用来培养和繁殖各类微生物的营养基质，其配方可以根据不同微生物种类和研究需求进行调整。
下面将介绍几种常见的微生物培养基配方。
1.普通营养琼脂培养基普通营养琼脂培养基是最常见的一种培养基，适用于大多数微生物的培养。
其主要成分包括肉汤，琼脂，氨基酸和糖类等。
普通营养琼脂培养基的配方如下：-肉汤：10克-酵母浸泡液（菌种培养基，可选）：5克-琼脂：15克-蒸馏水：1000毫升将肉汤和酵母浸泡液加入蒸馏水中，搅拌均匀后加热至溶解，再加入琼脂，继续加热至完全溶解。
搅拌均匀后，将溶液倒入培养皿中，冷却凝固后即可使用。
2.高营养琼脂培养基高营养琼脂培养基适用于对营养需求较高的微生物，如快速生长的细菌或真菌。
其配方相对于普通营养琼脂培养基略有不同，具体配方如下：-肉汤：10克-蛋黄粉：10克-葡萄糖：5克-琼脂：15克-蒸馏水：1000毫升将肉汤和蛋黄粉加入蒸馏水中，搅拌均匀后加热至溶解，再加入葡萄糖和琼脂，继续加热至完全溶解。
搅拌均匀后，将溶液倒入培养皿中，冷却凝固后即可使用。
3.铁琼脂培养基铁琼脂培养基用于培养铁菌等对铁元素营养要求较高的微生物。
其配方如下：-琼脂：15克-蔗糖：10克-磷酸二氢钾：0.2克-氯化铵：2克-硫酸亚铁：0.1克-蒸馏水：1000毫升将以上成分加入蒸馏水中，搅拌均匀后加热至溶解，然后继续加热至沸腾。
搅拌均匀后，将溶液倒入培养皿中，冷却凝固后即可使用。
4.特殊需求培养基除了普通营养基外，一些微生物需要特定的培养基才能生长。
例如，大肠杆菌需要含有葡萄糖和氧气的LB培养基；霉菌需要含有麦芽提取物和琼脂的SDA培养基。
这些特殊需求培养基的配方可以根据具体要求进行调整，以适应不同微生物的生长。
总结：微生物培养基有许多种，以上仅介绍了几种常见的配方。
实际应用中，根据不同微生物种类和研究需求，配方可以根据需要进行调整。
制备培养基时，需要严格按照操作规程操作，避免外界污染，以保证培养基的质量和可靠性。
植物组织培养培养基及其配制
（四）天然复合物
• 其成分比较复杂，大多含氨基酸、激素、
酶等一些复杂化合物。它对细胞和组 织的增殖与分化有明显的促进作用，
于双子叶植物特别是木本植物。
• (3) White培养基 1943年，White，培养番茄根尖。 • 特点：无机盐数量较低，适于生根培养。
（养4。）N6培养基 1974年，朱至清等，水稻等禾谷类作物花药培
广特泛点应：用成于分小较简麦单、，水K稻N及O其3和他（植N物H4的）花2S药O4培含养量和高其。他在组国织内培已 养。
种代谢活动，对生长、分化等有很好的促 进作用。
• V活B力l(盐有酸重硫要胺作素用)。：对愈伤组织的产生和生
• VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长。 • Vpp(烟酸)：与植物代谢和胚的发育有一定
关系。
• Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用。 (酚类物质-醌)
一般用量：0．1—1．0mg／L。有时用量 较高。有时还使用生物素、叶酸、VB12等。
提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积 累。
• (3)K • 作用：对碳水化合物合成、转移、以及氮素代
谢等有密切关系。一般为1—3mg／L为好。 • 供应物质：KCI、KN03等盐类提供。
• (4)Mg、S和Ca • Mg-是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；
S-是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。 • Ca-是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、
常用的培养基及特点如下：
• (1) MS培养基 1962年，Murashige和Skoog，培养烟草细胞。 • 特点：无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液；硝酸
实验室36种微生物培养基配制方法
实验室36种微生物培养基配制方法实验室养菌基是为微生物的培养和研究提供合适营养和条件的培养基质。
不同微生物对培养基的要求各不相同，因此实验室通常需要配制多种不同的培养基。
下面是36种常用的微生物培养基的配制方法。
一、通用培养基1. 营养琼脂培养基（Nutrient Agar）营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、葡萄糖5克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
2. 营养肉膏培养基（Nutrient Broth）营养肉膏培养基是一种通用的液体培养基，适用于大多数微生物的培养。
其配方为：蛋白胨10克、牛肉提取物5克、葡萄糖5克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，高压灭菌，分装，即可使用。
3. 大肠杆菌选择性培养基（MacConkey Agar）大肠杆菌选择性培养基是一种常用的培养基，用于选择和鉴定大肠杆菌。
其配方为：蛋白胨17克、葡萄糖1.5克、恶瓜胆汁5克、硼酸紫0.5克、亮矾0.09克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至7.0-7.2，加入琼脂，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
4. Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基（Sabouraud Dextrose Agar）Sabouraud脱氧胆汁蔗糖琼脂培养基是用于真菌的培养和鉴定。
其配方为：脱氧胆汁10克、蔗糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、调节pH至5.6-6.4，高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
二、选择性培养基1. VC菌属选择性平皿培养基（Vogel-Johnson Agar）VC菌属选择性平皿培养基是用于选择和鉴定Voges-Proskauer菌属（如克雷伯菌）的培养基。
其配方为：葡萄糖1克、琼脂15克、盐酸75克、蒸馏水1000毫升。
将以上成分溶解、加热煮沸，冷却至55-60°C，加入胆盐酯高压灭菌，倒入平皿中，待凝固后用。
发酵工业产品培养基配方大全
发酵工业产品培养基配方大全1.酵母培养基配方：-加糖培养基配方：-酵母提取物10g-葡萄糖20g-氯化镁1g-磷酸二氢钾2g- H2O 1000ml-加酵母提取物培养基配方：-酵母提取物20g-葡萄糖10g-氯化镁1g-磷酸二氢钾2g- H2O 1000ml2.细菌培养基配方：-肉膏蛋白胨加入培养基配方：-肉挫3g-蛋白胨5g-NaCl5g- 纯净水 1000ml-牛肉精加入培养基配方：-牛肉精3g-NaCl10g- Agar 15g- 纯净水 1000ml3.真菌培养基配方：-绵白糖加入培养基配方：-麦芽提取物10g-蔗糖30g-K2HPO41g-MgSO40.5g- 纯净水 1000ml-麦芽提取物加入培养基配方：-麦芽提取物20g-FeSO40.1g-K2HPO42g-MgSO41g- 纯净水 1000ml4.菌丝体培养基配方：-淀粉加入培养基配方：-玉米粉20g-淀粉10g-NaCl5g-MgSO40.5g- 纯净水 1000ml-牛肉精加入培养基配方：-牛肉精3g-酵母提取物2g-NaCl5g-MgSO40.5g- 纯净水 1000ml5.发酵液培养基配方：-玉米加入培养基配方：-玉米粉100g-蛋白胨10g-NaCl5g-淀粉10g- 纯净水 1000ml-葡萄糖加入培养基配方：-玉米粉10g-蛋白胨5g-葡萄糖20g-淀粉10g- 纯净水 1000ml上述配方仅为其中几种常用的发酵工业产品培养基配方，不同的微生物和发酵过程需要有针对性地选择合适的配方。
在实际应用中，还需要根据具体情况进行调整和优化。
同时，培养基的制备过程中，要注意使用无菌操作，以确保微生物培养的纯净性和成功率。
各种培养基的配方
各种培养基的配方在微生物学中，培养基是为微生物提供营养和生长所必需的营养物质的混合物，可以根据微生物的特性和需求来设计不同成分的培养基。
不同种类的微生物需要不同的培养基来生长和繁殖，为了获得最佳的生长效果，需根据微生物的特性制备相应的培养基。
下面介绍几种常用的培养基及其配方。
1. 加尔沙基培养基（Luria-Bertani，LB培养基）LB培养基是一种常用的细菌培养基，适用于大多数细菌的培养。
其成分包括牛肉浸出物、酵母提取物和氯化钠，PH为7.0。
配方：- 水：1000ml-氯化钠：10g-酵母提取物：5g-牛肉浸出物：10gLB培养基的主要特点是富含氨基酸和碳源，适合于细菌的快速生长。
2. PDA培养基（Potato Dextrose Agar）PDA培养基是一种适合真菌和霉菌生长的培养基，成分简单易得。
它主要包括马铃薯提取物、葡萄糖和琼脂。
PDA培养基是一种半固体培养基，适合于真菌的产孢。
配方：-马铃薯提取物：200g-葡萄糖：20g-琼脂：20g-静置180s后，灭菌PDA培养基适合于真菌和霉菌的生长，常用于菌落计数和生长的研究中。
3.营养琼脂培养基营养琼脂培养基是一种通用的培养基，适用于多种微生物的培养。
它主要包括蛋白水解物、酵母提取物、氯化钠和琼脂。
配方：-蛋白水解物：5g-酵母提取物：1g-氯化钠：5g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌营养琼脂培养基适合于大多数微生物的生长，是最常用的培养基之一4. 马尼特尔-梅尔特培养基（Mannitol-Salt Agar，MSA）MSA培养基是一种选择性培养基，主要用于金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的分离和鉴定。
它的成分包括马尼托尔、氯化钠、酵母提取物和琼脂。
配方：-马尼托尔：5g-氯化钠：75g-酵母提取物：1g-琼脂：15g- 水：1000ml-蒸馏后灭菌MSA培养基在金黄色葡萄球菌的生长过程中，可以通过红色菌落的形成来进行识别。
第三章 培养基及其配制
本章的教学目标
熟悉培养基的组成成分及其作用 了解培养基的基本类型及其特点 掌握培养基的配制、保存方法。
本章的主要内容
培养基的成分 培养基的类型及特点 培养基的筛选、配制和保存
培养基的概念
培养基（medium）是外植体生长的物质基础，它的组成对离体的植物器官 和组织的生长起着重要作用。
有良好的促进效果。
种类：
最常用：Gly 其他：如Arg、Glu，Gln、Asp、Asn、Ala等也常用。
用量为2～3mg/L
（三）、植物生长调节物质
生长素类(auxin) 细胞分裂素类
赤霉素类 生长抑制剂类
1、生长素类(auxin)：
作用：主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进 细胞分裂、伸长生长。
BAP reduced to 0.1 mg. L-1
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA
应用： 茎尖初代培养，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，一般为 0.1%—0.2%，不能超过0.2%。 活性炭在生根时有明显的促进作用，可能是通过减弱光照保护IAA。 降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃苗有良好作用，一般浓度 为0.3%。 活性炭在胚胎培养中也有一定作用，如在葡萄胚珠培养时向培养基 加入0.1%的活性炭，可减少组织变褐和培养基变色，产生较少的愈伤 组织。
浓度：0.05－10mg／L。 作用：
诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 促进细胞分裂与扩大。 抑制根的分化。
第二章 培养基1
• 水解酪蛋白 为蛋白质的水解物，主要成分 为氨基酸，使用浓度为100-200mg／L。受 酸和酶的作用易分解，使用时要注意。
• 其他 酵母提取液(YE)(0．01％-0．05％)， 主要成分为氨基酸和维生素类；麦芽提取 液(0．01％~0.5％)、苹果和番茄的果汁、 黄瓜的果实、未熟玉米的胚乳等。遇热较 稳定，大多在培养困难时使用，有时有效。
4．2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)
优点：诱导能力要比IAA高10-20倍，特别在促进愈伤组 织的形成上活力最强。 缺点：但它会强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。因 而其适宜的用量范围较狭窄，过量常有毒效应。 适用：一般用于细胞启动脱分化阶段，而诱导分化阶段 往往不用2,4-D，而用NAA 或IAA 、IBA等。 脱分化---是指使已分化了的停止分裂的细胞失去分化特 性，回复到未分化的幼龄状态，恢复细胞分裂的 能力的过程。 分化---是指使脱分化形成的处于幼龄状态的细胞团或组 织，再产生根、芽、胚状体等有高层次组织结构 的特化细胞。
五、糖类
糖在组培中是不可缺少的 1.作用： 一是作为离体组织赖以生长的碳源 二是使培养基维持一定的渗透压（一般在1.5-
4.1MPa）。
2.种类：蔗糖（多用），其浓度为1%-5%,也可 用砂糖、葡萄糖或果糖等。
• 不同糖类对生长的影响不同。从各种糖对 水稻根培养的影响来看，以葡萄糖效果最 好，果糖和蔗糖相当，麦芽糖差一些。不 同植物不同组织的糖类需要量也不同，实 验时要根据配方规定按量称取，不能任意 取量。高压灭菌时一部分糖发生分解、制 定配方时要给予考虑。在大规模生产时， 可用食用的绵白糖代替。
1．吲哚乙酸（IAA）:是从植物中提取出来的，它 在高等植物中普遍存在，在幼嫩的生长旺盛的部 位含量更高。 优点：对器官形成的副作用较小 缺点：易受体内酶的分解，受光易氧化，在高温 高压的灭菌中热稳定性较差，并且其药剂 的活性也较低，可能是最弱的激素。 而人工合成的生长素则不会受到酶的分解，高温 高压下表现也比较稳定。所以在组织培养中通常 使用人工合成的类似物，如IBA 、NAA和2,4-D。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B 族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
S2实验二培养基及其配制理论
实验二培养基及其配制（理论）一、培养基成分及作用培养基（culture medium）是植物组织培养的物质基础，也是植物组织培养能否获得成功的重要因素之一。
培养基成分对离体培养植物的生长发育起调控作用。
选择合适的培养基并掌握正确的制备方法是组织培养成功的前提。
（一）植物必需的营养元素植物体内至少含有几十种化学元素，其中大部分元素在植物体内起到一定的生理作用：1、组成各种化合物，参与机体的建造，成为结构物质；2、构成一些特殊的胜利活性物质，参与活跃的新陈代谢；3、这些元素之间相互协调，以维持离子浓度平衡、胶体稳定、电荷平衡等点化学方面的作用；4、在发育方面，特定的元素影响植物的形态发生和组织、器官建成。
Arnon和Stout（1939）提出的确定植物必需营养元素的3个标准：A、缺乏该元素，植物生育发生障碍，不能完成其生活史B、缺乏该元素，就表现为专一的病症，且这种缺素症可以用补充改元素来预防和恢复C、改元素在植物营养生理上表现直接的效果，而不是由于土壤的物理、化学、微生物条件的改进而产生的间接效果。
国内外公认的高等植物所必需的营养元素有16（17）种：C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S、Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl、（Ni）在植物中含量差别很大，同一元素在植物不同时期、不同条件下含量也不同。
根据植物体内含量多少，可把这些元素分为：大量营养元素：占干物质重量的%以上；C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S等9种。
微量营养元素：占干物质重量的%以下有的只含kg。
Fe、B、Mn、Cu、Zn、Mo、Cl等7种。
（二）培养基营养成分及作用培养基是外植体生长的土壤，它所含有的不同营养元素直接影响着培养材料的生长发育。
培养基中的营养元素以有机物和无机物两类形式存在，绝大多数营养元素以无机物的形式存在。
按照国际植物生理协会的建议：所需浓度> L的元素为大量元素所需浓度< L的元素为微量元素1、大量元素N是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，在植物生命活动中占有重要的位置，又称生命元素。
简述配制培养基的基本步骤及注意事项
简述配制培养基的基本步骤及注意事项配制培养基是在实验室中进行细胞培养和微生物培养的重要步骤。
正确的配制培养基对于细胞和微生物的生长和繁殖至关重要。
下面将简述配制培养基的基本步骤及注意事项。
一、准备培养基所需的原料和试剂配制培养基所需的原料和试剂包括蛋白胨、酵母提取物、葡萄糖、盐酸、硝酸钠等。
在备用的容器中准备好这些原料和试剂，确保其纯度和质量。
二、称量原料和试剂按照所需的培养基配方，准确称量所需的原料和试剂。
注意要使用准确的称量工具，并遵循准确的称量方法，以确保配制的培养基的准确性和一致性。
三、溶解原料和试剂将称量好的原料和试剂逐一加入适量的蒸馏水中，并充分搅拌溶解。
溶解过程中要注意控制溶解温度和时间，避免结晶或沉淀的产生。
四、调节pH值根据培养基配方的要求，使用盐酸或硝酸钠等酸碱溶液逐渐调节培养基的pH值。
调节过程中要注意使用准确的pH计，并逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值过大或过小。
五、加入其他添加物根据具体需要，可以添加抗生素、染料或其他添加物来增强培养基的特定功能。
添加时要注意添加的量不能过多，以避免对细胞或微生物的生长产生不良影响。
六、灭菌配制好的培养基需要进行灭菌处理，以杀死其中可能存在的细菌、真菌或其他微生物。
常用的灭菌方法有高温高压灭菌和过滤灭菌。
要选择适合的灭菌方法，并严格按照操作规程进行灭菌处理。
七、保存和使用灭菌后的培养基应尽快冷却并储存在无菌条件下。
使用时要注意避免污染，使用无菌的培养皿或试管，并采取无菌操作，以确保培养基的纯净度。
在配制培养基的过程中，我们需要注意以下几点：1. 严格按照培养基配方的要求进行操作，避免原料和试剂的误用或误量。
2. 使用纯净的蒸馏水和高质量的原料和试剂，以确保培养基的质量和纯度。
3. 在配制过程中要注意溶解的充分和均匀，避免结晶或沉淀的产生。
4. 调节pH值时要小心操作，逐渐添加酸碱溶液，以避免pH值的剧烈变化。
5. 添加其他添加物时要谨慎，避免添加过多或添加不当。
配置培养基的步骤
配置培养基的步骤1、准备培养基：根据培养细菌或霉菌所需养分，准备添加合适量的养分和水份。
可以选用已准备好的快速培养基，或者通过实验中调整成分组成和比例来配置不同养分质量和浓度的培养基。
2、配料步骤：根据配方要求，根据具体实验配置合适的原料质量和量，以谷物粉状的一般原材料为例，如糖、蛋白质、粘粉和滑石粉等，分别从各种原料容器中取出适量原料，放入适当容器中混合，组装成一体。
3、热处理：将搅拌好的原料放入加热装置中，在70℃-80℃的温度下持续加热和搅拌（根据原料不同可能略有改变）10分钟，以除去杂质和有害物质，保证培养基的质量。
4、冷却：培养基热处理搅拌完毕后，送入冷却设备中进行冷却。
控制水温，使温度从100℃～30℃降低，当培养基温度降至30℃～35℃时，可尽快停止加热，不要使培养基在高于50℃的温度下停留时间太长。
5、灭菌：当培养基温度降至50℃以下后，放入灭菌设备中进行滤过灭菌，灭菌温度设置为95℃～105℃，灭菌有功率设置为12W / cm2。
培养基中优先蒸馏或吸附的微生物在温度较低的情况下，然后再进行灭菌。
6、成型：灭菌完毕后，将其中的培养基通过滤装置进行筛选，排除大的杂质，然后将培养基倒入模具中成型，并调节压力，以控制成型品的形状和大小，达到要求。
7、灌装：灌装时，将培养基放入适当的容器，如瓶、盒等，灌装至一定位置，然后进行装封，保证培养基充分被封口，以保持产品质量稳定，防止空气中的细菌进入塑料袋，从而防止培养基污染。
8、包装：通过灌装完毕后，将培养基用内衬袋和外衬袋包装，方便产品的运输和存储，防止空气和光线的污染，同时还可以防止外界杂质进入。
9、检测：将包装完毕的培养基置于检测室中，进行分析检测。
检测产品质量及其各项性能，主要包括微生物活性、消毒效果、润湿性、颗粒大小等。
检测结果与产品要求一致时，即证明培养基产品符合国家标准要求，可以进行量产。
植物组培培养基及其配制
植物组培培养基及其配制培养基好比土壤，是组织培养中离体材料赖以生存和发展的基地。
因此，在组织培养基的各个环节中，应着重掌握培养基，了解它的组成和配制方法。
一、组成培养基的五类成分目前，大多数培养基的成分是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成的。
1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成，大量元素中，氮源通常有硝态氮或铵态氮，但在培养基中用硝态氮的较多，也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。
磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。
钾是培养基中主要的阳离子，在近代的培养基中，其数量有逐渐提高的趋势。
而钙、钠、镁的需要则较少。
培养基所需的钠和氯化物，由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。
微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁。
培养基中的铁离子，大多以螯合铁的形式存在，即FeSO4与Na2—EDTA(螯合剂)的混合。
2.碳源培养的植物组织或细胞，它们的光合作用较弱。
因此，需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。
培养基中的碳水化合物通常是蔗糖。
蔗糖除作为培养基内的碳源和能源外，对维持培养基的渗透压也起重要作用。
3.维生素在培养基中加入维生素，常有利于外植体的发育。
培养基中的维生素属于B族维生素，其中效果最佳的有维生素B1、维生素B6、生物素、泛酸钙和肌醇等。
4.有机附加物包括人工合成或天然的有机附加物。
最常用的有酪朊水解物、酵母提取物、椰子汁及各种氨基酸等。
另外，琼脂也是最常用的有机附加物，它主要是作为培养基的支持物，使培养基呈固体状态，以利于各种外植体的培养。
5.生长调节物质常用的生长调节物质大致包括以下三类：(1)植物生长素类。
如吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。
(2)细胞分裂素。
如玉米素(Zt)、6-苄基嘌呤(6-BA或BAP)和激动素(Kt)。
(3)赤霉素。
组织培养中使用的赤霉素只有一种，即赤霉酸(GA3)。
二、常用培养基配方及其特点1.常用培养基配方组织培养是否成功，在很大程度上取决于对培养基的选择。
试液标准品滴定液培养基的配制及其使用管理制度
试液标准品滴定液培养基的配制及其使用管理制度一、试液标准品滴定液培养基的配制1.1 实验室物资准备（1）试剂：葡萄糖、牛肉膏、酵母粉、表面活性剂（Tween 80），草酸，氢氧化钠，柠檬酸。
（2）装备：自来水，净水器，玻璃棒，电子天平，量筒，蒸馏器，无菌瓶，pH计。
1.2 实验步骤（1）准备基础试液：将1g牛肉膏与10g葡萄糖混合后加入1L自来水中搅拌至完全溶解为止，滤过灭菌，取50ml加入100ml容量瓶中，加入0.1g酵母粉和1mlTween 80，加水至刻度。
（2）制备柠檬酸-草酸缓冲液：称取7.5g柠檬酸和9.0g草酸，混合后加入1L自来水中，调节pH至6.8（用0.1mol/L NaOH和0.1mol/L HCl溶液），滤过灭菌，取100ml加入预先准备好的基础试液中，做成100ml/瓶的滴定液。
1.3 基础试液质量控制为保证制出培养基的准确性与可靠性，在进行瓶装前，应先对基础试液进行质量检测。
检测方法如下：（1）pH测定：使用pH计，精确至小数点后一位，每个批次均应满足6.8左右的品质标准。
（2）细菌总数检测：将新制备的基础试液分别接种到TSA琼脂平板上，分别在37℃下37±1小时当前后进行菌落数统计。
每个批次的规格应满足100CFU/ml。
1.4 滴定液使用管理滴定液的密封性要求高，使用过后尽量使其保存在条件十分良好、密封性极佳的情况下，杜绝了液体的混杂。
“六择八换”是一种制剂生产管理原则，但有音乐网站的套路一样，制剂生产的“八换”十分可怕。
为充分发挥试液标准品滴定液的效能，在使用该试液时，要严格掌握以下事项：（1）保持环境清洁：因为每一个瓶装滴定液都可能会受到环境的影响导致其质量被污染，因此，在污染等环境条件下，滴定液的使用效果会受到严重限制。
（2）密封保存：如果不正确地保存滴定液，其质量将快速退化。
因此，最好将滴定液保存在密封的瓶子当中，长时间放置时，应放在阴凉、干燥的地方。
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4、生长抑制剂类
☺ 作用：
☺ 适当种类和数量的生长抑制剂能调节内源和外源的植物 激素，是他们所处的相互关系恰好能产生我们所希望的 变化。
☺ 种类：
☺ ABA ☺ 三碘苯甲酸：可以促进秋海棠叶片形成芽
并与细胞分裂素互作促进芽的增殖和生长。 ☺ 2，4—D：起动能力比IAA高10倍，特别在促进愈伤组织的形成上活
力最高，但它强烈抑制芽的形成，影响器官的发育。 ☺ 强弱顺顺序为：2,4-D＞NAA＞IBA＞IAA
☺ 溶于95％酒精或0.1mol/L的NaOH
2、细胞分裂素类
☺种类：是腺嘌吟的衍生物 ☺6－BA：常用 ☺KT (kinetin ）:激动素 ☺ZT (zeatin 玉米素)：活性最强 ☺生理作用的强弱顺序：ZT＞6-BA＞KT。
☺常用的有:
☺椰乳： ☺香蕉： ☺水解酪蛋白：
☺作用：
☺对细胞和组织的增殖与分化有明显的促进作用， 但对器官的分化作用不明显。
☺注意：其成分大多不清楚，所以一般应尽量避免使用。
2.活性炭
☺作用：活性炭结构疏松，孔隙大，吸水力强，有很强的吸附作 用它可以吸附非极性物质和色素等大分子物质。 ☺浓度: 0.5—l0g／L。
Poor shoot development and no roots
NAA reduced to 0.1 mg. L-1
Poor shoot development and no roots. Extensive
callus generation
NAA increased to 5.0 mg. l-1
☺浓度：0.05－10mg／L。 ☺作用：
☺诱导芽的分化促进侧芽萌发生长。 ☺促进细胞分裂与扩大。 ☺抑制根的分化。
两种激素配比模式
有利于根芽的 分化
有利于根 的形成和 愈伤组织 的形成；
适中
高 生长素/细胞分裂素比例 低
有利于 芽的形 成
No BAP （苄氨基嘌呤）
Profuse development of roots and a reduced number of shoots. Undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
生长。
☺ 作用：
☺ 糖作为碳源，为细胞提供合成新化合物的碳骨架 ☺ 为细胞的呼吸代谢提供底物与能源 ☺ 同时维持一定的渗透势，并且能够维持一定的渗透压
（一般在1.5～4.1×10５Pa）。
☺ 浓度：在2%—3%，常用3%。高压灭菌时，一部分糖会发
生分解，制定配方时要给予考虑。 ☺ 在大规模生产时，可用食用的绵白糖代替。
种类
MS (Murashige and Skoog,1962)
特点
适应范围
无机盐成分含量较高，微量元素种 类较全，浓度也较高
应用最广，对许 多植物均是适宜
的
LS(Linsmainer和 Skoog,1965)
由MS改进，无机成分同MS，有机 物仅保留盐酸硫胺素0.4mg/L及肌
醇100mg/L，蔗糖3%
☺应用： ☺茎尖初代培养，可以吸附外植体产生的致死性褐化物，一般为 0.1%—0.2%，不能超过0.2%。 ☺活性炭在生根时有明显的促进作用，可能是通过减弱光照保护IAA。 ☺降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃苗有良好作用，一般浓度 为0.3%。 ☺活性炭在胚胎培养中也有一定作用，如在葡萄胚珠培养时向培养基 加入0.1%的活性炭，可减少组织变褐和培养基变色，产生较少的愈伤 组织。
有良好的促进效果。
☺ 种类：
☺ 最常用：Gly ☺ 其他：如Arg、Glu，Gln、Asp、Asn、Ala等也常用。
☺ 用量为2～3mg/L
（三）、植物生长调节物质
生长素类(auxin) 细胞分裂素类
赤霉素类 生长抑制剂类
1、生长素类(auxin)：
☺ 作用：主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进 细胞分裂、伸长生长。
MS+ 6-BA 2.0mg/L+ 2, 4-D 0.3mg/L 。
一、培养基的主要成分
☺无机营养成分
☺有机营养成分 ☺植物生长调节物质 ☺附加物和天然的有机添加物质 ☺琼脂 ☺pH值
（一）无机营养成分
☺无机营养又叫矿质营养，指植物在生长发 育时所需要的各种维持其正常生理活动的 化学元素。
☺主要有： ☺大量元素： ＞0.5mmol／L ☺微量元素： ＜0.5mmol／L
BL（Brown和 Lawrene,1968）
成分与MS类似
BM(Button,1975)
成分与MS类似，仅将盐酸硫胺素除 去，蔗糖为3%
ER(Eriksson,1965)
☺少数喜酸性的植物有用到pH5.4，甚至pH 4.6的。
二、培养基的类型及特点
（一）培养基的类型
☺ 基本培养基（根据培养基中无机盐含量的不同 ）
☺ 含盐量高的培养基如: MS, LS, BL, BM, ER ☺ 硝酸钾含量高的培养基 如: B5, N6, SH ☺中等无机盐含量培养基 如: H, Nitsch, Miller ☺ 低无机盐培养基 如: White, WS, HB
（Heide,1971）。 ☺ 矮壮素 ☺ 比久（B9） ☺ 根皮苷：在培养基中加入适当的根皮苷可提高莲叶秋海棠、雪松和月季
的分化出苗效率（李洲，1983）用量为1~7mg/L。
☺ 间苯三酚
（四）附加物和天然的有机添加物质
☺天然的有机添加物质
☺附加物
☺ 活性炭、Vc等 ☺ 抗生物质
1、天然的有机附加物：
（五）、琼脂
☺特性：琼脂(agar)是固体培养基的必要成分
☺琼脂是一种由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并不 提供任何营养。琼脂能溶解在热水中，成为溶胶，冷却至 40℃即凝固为固体状凝胶。
☺用量：琼脂条6—10g／L，琼脂粉3—4g／L。
（六）pH
☺培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境
☺一般应将培养基的pH值用1mol/L的K0H或 NaOH调整到pH 5.6～5.8的范围内，有时调 到pH 6.0
or callus.
3、GA (赤霉素)：
☺作用： ☺有20多种，生理活性及作用的种类、部位、效应等各 有不同。 ☺培养基中添加的是GA3，主要作用是促进幼苗茎的伸 长生长，促进不定胚发育成小植株； ☺赤霉素还用于打破休眠，促进种子、块茎、鳞茎等提 前萌发。 ☺一般在器官形成后，添加赤霉素可促进器官或胚状体 的生长。
BAP reduced to 0.1 mg. L-1
More balanced development of roots and shoots. However, undifferentiated callus is developing at the edges of the explant
No NAA
2、维生素
☺主要作用：是以各种辅酶的形式参与多种代谢活动， 对生长、分化等有很好的促进作用。 ☺主要种类：
☺VBl(盐酸硫胺素)：愈伤组织的产生和生活力有重要 作用 ☺VB6(盐酸吡哆醇)：能促进根的生长 ☺Vpp(烟酸)：植物代谢和胚的发育有一定关系 ☺Vc（抗坏血酸）：有防止组织变褐的作用 ☺生物素、叶酸、VB12等。 ☺一般用量为0.1—1.0mg／L。
3、肌醇（环己六醇）
☺ 作用：
☺ 在糖类的相互转化中起重要作用。 ☺ 适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和
芽的形成。 ☺ 对组织和细胞的繁殖、分化有促进作用，对细胞壁的
形成也有作用。
☺ 使用浓度一般为l00mg／L
4、氨基酸
☺ 作用：
☺ 是很好的有机氮源，可直接被细胞吸收利用。 ☺ 丝氨酸和谷氨酰胺有利于花药胚状体或不定芽的分化。 ☺ 甘氨酸能促进离体根的生长，对植物组织培养物的生长也
☺形式：MgSO4·7H20
☺Ca：
☺作用：Ca是构成细胞壁的一种成分，对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用 ☺形式：CaCl2·2H2O。
2.微量元素：
☺主要元素：Fe、B、Mn、Cu、Mo、Co等。
☺Fe:
☺作用： ☺是某些酶的组成成分：氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶
☺是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和 幼苗转绿有促进作用。
没有一种培养基能够适合一切类型的植物组织或器官，在建立一项新的 培养系统时，首先必须找到一合适的培养基，培养才有可能成功。
MS + 6-BA 3.0 mg/L + 2,4-D 0.2 mg/L。
MS + 6-BA 2.0 mg/L + 2,4-D 0.1 mg/L。
MS+6-BA 1.0mg/L+2,4-D 0.6mg/L，
☺形式：FeSO4·7H20和Na2—EDTA ☺思考：为何不用Fe2（SO4）3，和FeCl3？
☺B，Mn，Zn，Cu，Mo，Co等，也是植物组织培养中不可缺少 的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。
（二）有机营养成分
☺碳源 ☺维生素 ☺肌醇（环己六醇） ☺氨基酸
1、碳源
☺ 种类：
☺ 最常用：蔗糖 ☺ 葡萄糖和果糖也是较好的碳源，可支持许多组织很好的
☺ 应用培养基
☺ 诱导培养基，又称脱分化培养基。用作外植体诱导发生愈伤 组织的培养基
☺ 继代培养基：诱导出的愈伤组织需用一种培养基让它继续不 断地生长下去。
☺ 分化培养基：用于从愈伤组织诱导形成小苗（幼芽或胚状体） 的，称为。
☺ 生根培养基:为诱导再生小苗生根的培养基称为。
类型
MS 及 其 类 似 培 养 基