瑞舒伐他汀钙通过TLR4NF-κB信号通路对急性脑梗死患者的疗效及炎症因子的影响

·论著·
瑞舒伐他汀钙通过TLR4/NF-κB 信号通路对急性脑梗死患者的疗效及炎症因子的影响
胡丹兰
张杰
张美珍
DOI ：10.13558/ki.issn1672-3686.2020.011.009基金项目：衢州市科技项目（2019098）作者单位：324004
浙江衢州，浙江衢化医院药剂科
[摘要]
目的探讨瑞舒伐他汀钙通过Toll 样受体4/核转录因子-κB （TLR4/NF-κB ）信号通路对急性脑梗死（ACI ）
患者的临床疗效及对炎症因子的影响。

方法
将98例ACI 患者随机分为低剂量瑞舒伐他汀钙组（Rcl 组）和高剂
量瑞舒伐他汀钙组（Rch 组），每组49例。

Rcl 组予以瑞舒伐他汀钙10mg 口服，Rch 组予以瑞舒伐他汀钙20mg 口服，每日一次，治疗15d 。

利用美国国立卫生研究院卒中量表（NIHSS ）、神经功能缺损评分量表（CSS ）、简易智力状态检查量表（MMSE ）和改良Rankin 量表（MRS ）对两者患者进行评分，测量中层内膜厚度（IMT ），检测血清白介素-1β（IL-1β）、白介素-8（IL-8）、人单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和白介素-6（IL-6）的含量，Western blotting 检测TLR4、NF-κB 和HMGB1蛋白表达量。

结果
Rch 组治疗后NIHSS 评分、CSS 评分和MRS 评分均低于Rcl 组治疗后，
MMSE 评分高于Rcl 组治疗后（t 分别=3.86、3.49、3.56、-3.26，P 均＜0.05）。

Rch 组治疗后左侧IMT 、右侧IMT 、斑块厚度和斑块面积均低于Rcl 组治疗后（t 分别=3.12、3.17、3.34、3.66，P 均＜0.05）。

Rch 组治疗后IL-1β、IL-8、MCP-1和IL-6均低于Rcl 组治疗后（t 分别=3.66、3.45、3.57、3.59，P 均＜0.05）。

两组治疗后，Rch 组患者的总有效率高于Rcl 组，差异有统计学意义（χ2=4.36，P ＜0.05）。

Rch 组HMGB1、TLR4和NF-κB 蛋白相对表达量均低于Rcl 组，差异均有统计学意义（t 分别=3.74、3.53、3.57，P 均＜0.05）。

结论高剂量瑞舒伐他汀钙治疗ACI 总有效率高于低
剂量瑞舒伐他汀钙，能有效改善ACI 动脉粥样硬化和炎症反应，其作用机制可能与TLR4/NF-κB 信号通路相关。

[关键词]
急性脑梗死；瑞舒伐他汀钙；TLR4/NF-κB 信号通路；炎症因子
Effect of rosuvastatin calcium on the efficacy and inflammatory factors of patients with acute cerebral infarction through TLR4/NF-κB signaling pathway HU Danlan ，ZHANG Jie ，ZHANG Meizhen.Department of Pharmacy ，Zheji-ang Quhua Hospital ，Quzhou 324004，China.[Abstract]
Objective
To investigate the clinical efficacy of rosuvastatin calcium on patients with acute cerebral in-farction （ACI ）and its influence on inflammatory factors through TLR4/NF-κB signaling pathway.Methods
A total of
98patients with ACI were randomly divided into low-dose rosuvastatin calcium group （Rcl group ）and high-dose rosuv-astatin calcium group （Rch group ），49cases in each group.The patients in Rcl group were given rosuvastatin calcium 10mg orally ，while the patients in Rch group were given rosuvastatin calcium 20mg orally ，once a day for 15days.The national institutes of health stroke scale （NIHSS ）score ，neurological deficit score scale （CSS ）score ，mini-mental sate examination （MMSE ）score ，modified rankin scale （MRS ）score ，the intima-media thickness （IMT ），the serum levels of IL-1β，IL-8，IL-6and MCP-1，TLR4，NF -κB and HMGB1were compared between two groups.Results
After treatment ，NIHSS
score ，CSS score and MRS score of Rch group were lower than those of Rcl group ，while MMSE score was higher than that of Rcl group （t =3.86，3.49，3.56，-3.26，P ＜0.05）.After treatment ，the IMT of left and right ，plaque thickness and plaque area in the Rch group were lower than those in the Rcl group （t =3.12，3.17，3.34，3.66，P ＜0.05）.The levels of IL-1β，IL-8，MCP-1and IL-6in the Rch group were lower than those in the Rcl group after treatment （t =3.66，3.45，3.57，3.59，P ＜0.05）.After treatment ，the total effective rate of Rch group was higher than that of Rcl group （χ2=4.36，P
＜0.05）.The relative expression levels of HMGB1，TLR4
and NF -κB in Rch group were lower than those in Rcl group （t =3.74，3.53，3.57，P ＜0.05）.Conclusion The total effective rate of high-dose rosuvastatin calcium
in the treatment of ACI is higher than that of low-dose rosuvastatin calcium.It can effectively improve the atherosclerosis and inflammatory reaction of ACI，and its mechanism may be related to TLR4/NF-κB signaling pathway.
[Key words]acute cerebral infarction；rosuvastatin calcium；TLR4/NF-κB signaling pathway；inflammatory factors
急性脑梗死（acute cerebral infarction，ACI）作为由脑组织血液供应障碍导致局部缺血缺氧性坏死性的疾病，是世界范围内脑血管病致残致死的首要原因[1]。

ACI临床表现主要为脑血管闭塞造成的脑组织缺氧缺血坏死[2]。

针对ACI，目前主要以降血脂、抗血小板药物联合治疗手段、溶栓治疗及动脉内膜切除术为治疗的主要方向[3]。

瑞舒伐他汀钙作为代表性的他汀类药物以其调脂功能、抗动脉粥样硬化功能和抗炎作用已然成为现代医疗广泛使用的降脂药物。

对于瑞舒伐他汀钙对ACI的疗效及机制方面缺乏系统报道[4]。

本次研究旨在探讨瑞舒伐他汀钙通过Toll样受体4（toll-like receptor4，
TLR4）/核转录因子-κB（nuclear nuclear transcrip⁃tion factor-κB，NF-κB）信号通路对ACI患者的临床疗效及对炎症因子的影响。

现报道如下。

1资料与方法
1.1一般资料选取2018年10月至2019年12月于浙江衢化医院治疗的初次ACI患者98例，其中男性34例、女性64例；年龄39～95岁，平均年龄（61.56±13.04）岁；纳入标准为：①符合ACI的诊断标准；②ACI发病在24h以内；③患者临床病例资料齐全。

并剔除：①药物过敏者；②排除肝肾功能异常、心血管疾病患者；③出现头痛、头晕、恶心、腹痛和四肢无力不良反应的患者；④具有溶栓治疗史及复发出血等的患者[5]。

本次研究经医院伦理委员会批准，且所有研究对象或其代理人均自愿签署知情同意书。

随机分为瑞舒伐他汀钙低剂量组（Rcl 组）和瑞舒伐他汀钙高剂量组（Rch组），每组49例。

Rcl组中男性18例、女性31例；平均年龄（61.27±1
2.96）岁；Rch组中男性16例、女性33例；平均年龄（61.85±1
3.05）岁。

两组在年龄、性别分布上比较，差异均无统计学意义（P均＞0.05）。

1.2方法两组患者均给予常规方法进行治疗，主要包括抗血小板聚集、清除自由基、营养神经及脑保护对症治疗。

在以上基础上，Rcl组患者予以瑞舒伐他汀钙（由京新药业有限公司生产）10mg口服，每日一次；Rch组予以瑞舒伐他汀钙20mg口服，每日一次。

15d为一疗程，治疗一个疗程。

1.3检测指标①比较两组治疗前后各量表评分：ACI美国国立卫生研究院卒中量表（national insti⁃tutes of health stroke scale，NIHSS）评分对患者的意识程度、回答问题的能力、遵从指令的能力等11个项目进行评分，总分为42分，NIHSS评分越高表示神经受损越严重。

中国脑卒中患者临床神经功能缺损程度评分量表（Chinese stroke scale，CSS）对患者的意识程度、下肢能力、步行能力等8个项目进行评分，总分为45分，CSS评分越高表示病情越严重。

简易精神状态评价量表（mini-mental state evaluation，MMSE）对患者的定向力、记忆力、计算能力和注意力等5各项目进行评分，总分30分，MMSE 评分越高表示病情越轻。

改良Rankin量表（modi⁃fied Rankin scale，MRS）评分对患者生活自理能力进行评估，MRS评分为0～5分，MRS评分越高表示病情越严重。

②比较两组治疗前后患者两侧的中层内膜厚度（intima-media thickness，IMT），以及斑块厚度和面积。

IMT≤0.9mm为正常，≥1.0mm 且＜1.5mm为增厚，≥1.5mm表示粥样硬化斑块形成。

③比较两组患者治疗前后白细胞介素1β（interleukin1β，IL-1β）、IL-8、人单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein1，MCP-1）和IL-6的含量。

④治疗后的临床疗效判定：基本治愈：患者偏瘫肢体的肌力恢复到Ⅱ级及以上，治疗前后NIHSS评分减少介于91％～100％之间，且生活基本可以自理，语言功能基本恢复正常，病残为0级；显效：治疗前后NIHSS评分减少介于71％～90％之间，偏瘫和失语都有明显地改善，生活大部分可以自理，病残为1级；有效：治疗前后NIHSS评分减少介于46％～70％之间，生活有一部分可以自理，偏瘫、失语有所改善，病残程度在2～3级；无效：治疗前后NIHSS评分评分减少于45％，体征、症状都没有改善，甚至严重。

总有效率=（基本痊愈例数+显效例数+有效例数）/总例数×100％。

1.4Western blotting检测血液TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白表达量分别抽取两组患者治疗前、治疗后的晨起静脉血5ml，室温条件下离心10min，离心分离后裂解，Trizol法提取细胞总蛋白，使用二喹啉甲酸蛋白定量试剂盒对提取的总蛋白进行定量，
按比例加入4×蛋白上样缓冲液，95°C变性5min，置于-20°C保存备用。

聚丙烯酰胺凝胶电泳，转印。

取聚氟乙烯膜用洗涤缓冲液洗膜5min，共3次，加入到2％BSA-TBS-吐温20溶液配制封闭液中进行封闭，室温摇床孵育2h。

洗膜后先后加入一抗工作液（TLR4、NF-κB、HMGB1抗体）和二抗工作液进行孵育，将新鲜配制的化学发光液滴加到聚氟乙烯膜表面，转移至成像分析系统暗箱中曝光，采集图像并分析。

蛋白定量：以相对光密度值代表蛋白相对表达量，以甘油醛-3-磷酸脱氢酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）为内参进行分析，实验至少重复三次。

1.5统计学方法采用SPSS2
2.0统计学软件进行数据分析。

正态分布的计量资料以均数±标准差（x±s）表示。

组间计量资料比较采用t检验；组间计数资料比较采用χ2检验。

设P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果
2.1两组治疗前后的NIHSS评分、CSS评分、MMSE 评分和MRS评分比较见表1
表1两组治疗前后的NIHSS评分、CSS评分、MMSE评分和MRS评分比较/分组别
Rch组Rcl组治疗前
治疗后
治疗前
治疗后
NIHSS评分
46.02±2.78
25.71±2.54*#
45.69±1.73
33.25±2.64*
CSS评分
17.43±2.66
8.89±2.07*#
17.24±2.88
13.46±2.24*
MMSE评分
15.63±0.06
23.86±2.10*#
15.67±0.05
17.15±1.48*
MRS评分
3.76±0.39
2.23±0.33*#
3.75±0.48
2.97±0.46*
注：*：与同组治疗前比较，P＜0.05；#：与Rcl组治疗后比较，P＜0.05。

由表1可见，两组治疗前的NIHSS评分、CSS评分、MMSE评分和MRS评分比较，差异均无统计学意义（t分别=0.08、0.07、0.07、0.09，P均＞0.05）；两组治疗后NIHSS评分、CSS评分和MRS评分均低于治疗前，MMSE评分均高于治疗前（t分别=9.46、8.80、8.24、-7.47、5.28、5.19、5.08、-5.35，P均＜0.05），且Rch组治疗后NIHSS评分、CSS评分和MRS评分均低于Rcl组治疗后，MMSE评分均高于Rcl组治疗后（t分别=3.86、3.49、3.56、-3.26，P均＜0.05）。

2.2两组治疗前后动脉粥样硬化变化见表2
表2两组治疗前后动脉粥样硬化变化组别
Rch组Rcl组治疗前
治疗后
治疗前
治疗后
左侧IMT/mm
1.05±0.19
0.80±0.15*#
1.08±0.18
0.99±0.14*
右侧IMT/mm
1.15±0.27
0.90±0.14*#
1.17±0.25
1.01±0.13*
斑块厚度/mm
2.35±0.77
2.03±0.34*#
2.38±0.75
2.26±0.38*
斑块面积/mm2
22.19±9.69
10.63±6.41*#
22.17±9.85
13.18±6.33*
注：*：与同组治疗前比较，P＜0.05；#：与Rcl组治疗后比较，P＜0.05。

由表2可见，两组治疗前左侧IMT、右侧IMT、斑块厚度和斑块面积比较，差异均无统计学意义（t分别=0.64、0.47、0.75、0.73，P均＞0.05）；两组治疗后左侧IMT、右侧IMT、斑块厚度和斑块面积均低于治疗前（t分别=7.49、5.32、5.02、15.35、5.67、4.29、3.95、8.12，P均＜0.05），且Rch组治疗后均低于Rcl组治疗后（t分别=3.12、3.17、3.34、3.66，P均＜0.05）。

2.3两组治疗前后炎症因子变化见表3
表3两组治疗前后炎症因子变化/pg/ml 组别
Rch组Rcl组治疗前
治疗后
治疗前
治疗后
IL-1β
18.33±3.53
13.24±2.83*#
18.19±3.48
9.17±2.75*
IL-8
5.18±1.76
3.93±1.88*#
5.13±1.84
3.05±1.58*
MCP-1
8.33±1.65
6.06±1.28*#
8.28±1.45
4.57±1.35*
IL-6
7.38±1.45
5.84±1.85*#
7.41±1.49
4.45±1.77*
注：*：与同组治疗前比较，P＜0.05；#：与Rcl组治疗后比较，P＜0.05。

由表3可见，两组治疗前IL-1β、IL-8、MCP-1和IL-6表达水平比较，差异均无统计学意义（t分别
=0.21、0.14、0.15、0.10，P均＞0.05）；两组治疗后IL-1β、IL-8、MCP-1和IL-6均低于治疗前（t分别=4.01、4.18、4.23、4.28、5.86、5.18、5.56、5.48，P均＜0.05），且Rch组治疗后均低于Rcl组治疗后（t分别=3.66、3.45、3.57、3.59，P均＜0.05）。

2.4两组治疗效果比较见表4
表4两组治疗效果比较
组别
Rch组Rcl组基本痊
愈/例
26
16
显效/例
15
12
有效/例
5
11
无效/例
3
10
总有效
率/例（%）
46（93.88）*
39（79.59）
注：*：与Rcl组比较，P＜0.05。

由表4可见，治疗后，Rch组患者的总有效率高于Rcl组，差异有统计学意义（χ2=4.36，P＜0.05）。

2.5两组HMGB1、TLR4、NF-κB蛋白表达量见表5
表5两组HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白相对表达量
组别Rch组Rcl组
HMGB1
0.61±0.14*
1.07±0.19
TLR4
0.42±0.11*
0.66±0.15
NF-κB
0.84±0.23*
1.13±0.17
注：*：与Rcl组比较，P＜0.05。

由表5可见，Rch组HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白相对表达量均低于Rcl组，差异均有统计学意义（t 分别=3.74、3.53、3.57，P均＜0.05）。

3讨论
他汀类药物具有降血脂、阻断动脉硬化斑块形成、增加斑块的稳定性和改善内皮细胞功能的作用，从而可以有效预防ACI的发生和复发[6]。

瑞舒伐他汀是一种选择性羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂，用于治疗高脂血症、高胆固醇血症及动脉硬化症等相关疾病。

瑞舒伐他汀可能通过上调过氧化物酶体增生物激活受体而发挥抗炎、抗动脉粥样硬化作用[7]，在预防小鼠动脉粥样硬化形成的机制可能与唾液酸转移酶表达密切相关[8]。

姜金钟等[9]研究认为瑞舒伐他汀可能通过影响血管内皮生长因子的表达而影响H型高血压大鼠血管内皮功能。

此外还有研究显示，瑞舒伐他汀通过影响心脏血流动力学参数来改善心肌组织病理损害[10]。

基于以上研究可知，瑞舒伐他汀治疗心血管疾病可通过多机制发生相关作用。

亦有研究证实瑞舒伐他汀治疗ACI具有明显的临床效果[11]，然而其相关作用机制鲜有报道。

本次研究旨在观察不同剂量瑞舒伐他汀对TLR4/NF-κB信号通路、ACI患者的疗效及炎症因子的影响，初步探讨可能机制。

目前用于评估ACI疗效的方法很多，其中NI⁃HSS评分、CSS评分、MRS评分和MMSE评分广泛应用于评价临床ACI疾病严重程度[12,13]，NIHSS评分、CSS评分和MRS评分的分值越高表示疾病越严重，本次研究结果显示，两组治疗后NIHSS评分、CSS评分和MRS评分低于治疗前，而MMSE评分高于治疗前（P均＜0.05），且高剂量瑞舒伐他汀钙组治疗后NIHSS评分、CSS评分和MRS评分均低于低剂量瑞舒伐他汀钙组治疗后，MMSE评分均高于低剂量瑞舒伐他汀钙组治疗后（P均＜0.05），提示两组均行瑞舒伐他汀钙治疗后ACI疾病严重程度有所改善，高剂量瑞舒伐他汀钙效果更明显。

另一方面，两组治疗后左侧IMT、右侧IMT、斑块厚度和斑块面积均低于治疗前，且高剂量瑞舒伐他汀钙组治疗后均低于低剂量瑞舒伐他汀钙组治疗后（P均＜0.05），结果表明瑞舒伐他汀钙有效改善颈动脉狭窄及动脉斑块作用，对预防动脉粥样硬化具有积极作用，高剂量瑞舒伐他汀钙效果更明显。

本次研究结果显示，在临床疗效评估中，高剂量瑞舒伐他汀钙组总有效率高于低剂量瑞舒伐他汀钙组（P＜0.05），证实了高剂量（20mg）瑞舒伐他汀钙临床疗效优于低剂量（10mg）。

通过检测两组血清炎症因子含量发现，高剂量瑞舒伐他汀钙组IL-1β、IL-8、MCP-1和IL-6表达水平均低于低剂量瑞舒伐他汀钙组（P均＜0.05），提示高剂量瑞舒伐他汀钙效更能抑制炎症因子的表达。

众所周知，TLR4/NF-κB信号通路是促发炎症反应的通路，TLR4/NF-κB信号通路异常活化可促进炎症反应。

HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白是评价TLR4/NF-κB信号通路活化的关键蛋白，其表达水平在本次研究中高剂量瑞舒伐他汀钙组低于低剂量瑞舒伐他汀钙组（P均＜0.05），提示高剂量瑞舒伐他汀钙效更能有效抑制TLR4/NF-κB信号通路作用。

综上所述，高剂量瑞舒伐他汀钙治疗ACI总有效率高于低剂量瑞舒伐他汀钙，更能有效改善ACI 动脉粥样硬化和炎症反应，其作用机制可能与TLR4/NF-κB信号通路相关。

参考文献
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（收稿日期2020-02-26）
（本文编辑蔡华波）
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