气相色谱法测定睾酮凝胶中肉豆蔻酸异丙酯的含量

气相色谱法测定睾酮凝胶中肉豆蔻酸异丙酯的含量
颜红;徐伟娜;刘林;杨清华
【摘要】目的建立睾酮凝胶中肉豆蔻酸异丙酯的含量测定方法.方法运用气相色谱法,采用固定液为5％苯基-95％二甲基硅氧烷的毛细管柱(GsBP-5,30 m×320 μm×1.8 μm),FID检测器,载气为氮气,柱温220℃,检测器温度250℃,进样口温度230℃,分流进样(10∶1).结果线性范围为0.100 4～2.51 mg·mL-1(r=0.999 9);仪器重复性良好(RSD=1.61％);平均回收率为98.96％,RSD为0.53％(n=9).结论该法准确、可靠、重现性好,可用于睾酮凝胶中肉豆蔻酸异丙酯含量的测定.
【期刊名称】《药学研究》
【年(卷),期】2016(035)008
【总页数】3页(P469-471)
【关键词】气相色谱法;睾酮凝胶;肉豆蔻酸异丙酯;含量测定
【作者】颜红;徐伟娜;刘林;杨清华
【作者单位】山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司,山东省黏膜与皮肤给药技术重点实验室,山东济南250101;山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司,山东省黏膜与皮肤给药技术重点实验室,山东济南250101;山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司,山东省黏膜与皮肤给药技术重点实验室,山东济南250101;山东省药学科学院,山东省化学药物重点实验室,山东济南250101;山东福瑞达医药集团公司,山东省黏膜与皮肤给药技术重点实验室,山东济南250101
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
睾酮凝胶是一种雄性激素，商品名Andrgel，美国Unimed公司生产(现为Abbott Prods)，美国食品药品监督管理局(FDA)于2000年2月28日批准上市[1-2]，主要用于治疗男性内源性睾酮激素分泌不足或者缺乏的替代治疗[3-4]。

该制剂为无色透明均匀的水醇凝胶剂，均匀涂于两肩、双上臂或腹部，睾酮经透皮吸收后，可使男性性腺功能低下的患者达到并维持血液中正常睾酮浓度[5]。

肉豆蔻酸异丙酯(IPM)，又名十四酸异丙酯，是一种很重要的长链羧酸酯类化合物[6]。

其极易被皮肤吸收，是半固体基质的组分之一，也可作为局部给药制剂中许多物质的溶剂，应用于各种局部制剂和化妆品中[7-9]。

其作为透皮吸收促渗剂，能显著提高睾酮凝胶的经皮透过速率[1]。

药物制剂中肉豆蔻酸异丙酯的含量测定方法鲜有报道。

本文采用气相色谱法，测定了自制睾酮凝胶中肉豆蔻酸异丙酯的含量。

该方法专属性强、准确度和重复性好，简便可行。

Agilent 6890N气相色谱仪(包括氢火焰离子化检测器、HV-5空气压缩机、SPE-300氢气发生器)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；肉豆蔻酸异丙酯对照品(梯希爱化成工业发展有限公司，批号:AGNO1)；棕榈酸异丙酯(梯希爱化成工业发展有限公司，批
号:GJ01-BHWJ)；睾酮凝胶(自制，批号:20141201、20141202、20141203)。

2.1 色谱条件[9]色谱柱为5%苯基-95%二甲基硅氧烷的毛细管柱(美国GS-TEK公司，GsBP-5，30 m×320 μm×1.8 μm)，载气为氮气，纯度99.999%，流速:2.0 mL·min-1，氢气流速:30 mL·min-1，空气流速:300 mL·min-1，柱温:220℃，检测器温度:250℃，进样口温度:230℃，分流比:10∶1，尾吹:25 mL·min-1，进样
量:2 μL。

2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备精密称取肉豆蔻酸异丙酯对照品125 mg，置25 mL量瓶中，以正己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取1 mL置10 mL量瓶中，以正己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备精密称取睾酮凝胶2.5 g(约相当于肉豆蔻酸异丙酯12.5 mg)，置烧杯中，加正己烷适量，搅拌、超声提取3次，提取液转移至25 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照品溶液的制备按处方工艺制备不含肉豆蔻酸异丙酯的样品，同供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察
2.3.1 系统适应性试验精密称取肉豆蔻酸异丙酯45 mg和棕榈酸异丙酯5 mg，置于同一10 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，即为系统适应性溶液。

精密称取肉豆蔻酸异丙酯125 mg，置于25 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀。

分别精密量取上述溶液2 μL，分别注入气相色谱仪，记录色谱图，结果见图1，系统适应性溶液中，肉豆蔻酸异丙酯峰与棕榈酸异丙酯峰分离良好(分离度
R≈18.9)。

2.3.2 专属性试验分别精密量取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各2 μL，依法进行测定，结果阴性对照品溶液无干扰。

2.3.3 线性与范围精密称取肉豆蔻酸异丙酯125.5 mg，置25 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀；分别精密量取0.2、0.5、1.0、2.0、5.0 mL置10 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀。

精密量取上述溶液各2 μL，分别注入气相色谱仪，记录色谱图及峰面积。

以峰面积A对浓度C进行线性回归，得回归方程:A=2 186.1C+13.673，r=0.999 9，表明肉豆蔻酸异丙酯在0.100 4～2.51 mg·mL-1
的浓度范围内具有良好的线性关系。

2.3.4 精密度试验精密称取肉豆蔻酸异丙酯适量，加正己烷溶解并稀释制成0.7 mg·mL-1的溶液，重复进样6次，每次2 μL，记录色谱峰图及峰面积，结果肉豆蔻酸异丙酯峰面积的RSD为1.61%(n= 6)。

2.3.5 溶液稳定性试验取“2.2”项下的供试品溶液及对照品溶液，分别于0、2、4、6、8 h进样，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，记录色谱图及峰面积。

结果，对照品溶液峰面积的RSD为1.76%，供试品溶液峰面积的RSD为1.16%，表明对照品溶液和供试品溶液在8 h内稳定。

2.3.6 定量限精密称取肉豆蔻酸异丙酯适量，加正己烷溶解定量稀释成不同倍数的系列溶液，按上述色谱条件进行测定。

测得肉豆蔻酸异丙酯的定量限为0.16
ng(S/N≈10)。

2.3.7 回收率试验精密称取处方量的80%、100%、120%的肉豆蔻酸异丙酯及相应量空白基质于烧杯中，搅拌均匀，各3份，共9份；分别加正己烷6 mL，充分搅拌，提取肉豆蔻酸异丙酯，重复提取3次，提取液转移至25 mL容量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

另精密称取肉豆蔻酸异丙酯对照品约125 mg，置25 mL量瓶中，加正己烷稀释至刻度，摇匀，精密移1 mL至10 mL量瓶中，正己烷稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取供试品溶液及对照品溶液各2 μL，注入气相色谱仪，记录谱图及峰面积，外标法计算含量，结果见表1。

测得平均回收率为98.96%，RSD为0.53%(n=9)。

2.4 样品含量测定取本品，按含量测定方法进行测定，外标法计算供试品中肉豆蔻酸异丙酯的含量，结果见表2。

3.1 色谱条件的筛选《美国药典》(USP38)及《英国药典》(BP2015)均收载了肉豆蔻酸异丙酯，均采用气相色谱法测定了含量，但是色谱条件不同，见表3。

我们分别按USP38和BP2015方法，取系统适应性溶液进样，记录色谱图。

从试
验结果来看，按USP38和BP2015方法，采用程序升温，肉豆蔻酸异丙酯峰与棕榈酸异丙酯峰的分离度大于6.0。

我们根据实际情况，采用等温的方式，选择使用柱效高、分离度好、检测灵敏度高的毛细管柱，以氮气为载气。

通过适当调整载气流速、检测器温度、进样口温度以及柱温等，使系统适应性试验结果符合测定要求(肉豆蔻酸异丙酯峰与棕榈酸异丙酯峰的分离度不小于6.0)，且空白基质无干扰。

表明采用等温方式，同样可以达到此要求，且节约分析时间，提高了试验效率。

同时，我们按《中国药典》2010年版(二部)中的药品质量标准分析方法验证指导原则[10]对该分析方法进行了验证，结果表明该法适用于本品的测定。

3.2 提取次数的选择同一批号睾酮凝胶(批号: 20141201)按“2.2.2”项下方法，除提取次数分别为1、2、3、4、5次外，其他步骤平行操作，含量测得结果分别为0.43%、0.49%、0.51%、0.50%、0.51%。

从测定结果可以看出，提取了2次即能基本提取完全。

综合考虑试验结果的准确性和可操作性，选择提取次数为3次。

【相关文献】
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/patents/6503894.html.
[3]王怀秀，王如瑛，秦琴.睾酮经皮吸收制剂的研究[J].中国药物与临床，2012，12(2):190-191.
[4]BOULOUX P.Testim 1%Testosterone Gel for the Treatment of Male
Hypogonadism[J].Clin Ther，2005，27(3): 286-298.
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18(6):353-355.
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[9]罗明生，高天惠，宋民宪.中国药用辅料[M].北京:化学工业出版社，2005:734-735.
[10]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(二部) [S].北京:中国医药科技出版社，2010:附录194-195.。