新霉素液相检测(英国药典)

相关物质液相色谱法（2.2.29）

待测溶液用流动相溶解25.0mg的待测物质并稀释到50.0ml。

标准溶液（a）用流动相溶解25.0mg硫酸新霉素B的化学标准品并稀释到50.0ml。

标准溶液（b）吸取5.0ml参比溶液（a）并用流动相稀释到100.0ml。

标准溶液（c）吸取1.0ml参比溶液（a）并用流动相稀释到100.0ml。

标准溶液（d）用流动相溶解一小瓶新霉胺化学标准品物质（相当于0.5mg）并用流动相稀释到50.0ml。

标准溶液（e）用流动相溶解10mg硫酸新霉素化学标准品并用流动相稀释到100.0ml。

色谱柱：

——尺寸：长度=0.25m，直径=4.6mm，

——固定相：色谱级球形碱性去活辛基硅胶（5μm），

——温度：25℃。

流动相混合20.0ml三氟乙酸试剂，6.0ml去CO2氢氧化钠溶液试剂和500ml试剂水，平衡后用试剂水稀释到1000ml，脱气。

流速0.7ml/min。

柱后溶液预先脱气的去CO2氢氧化钠溶液试剂稀释25倍（对使用375μl聚合混合线圈的柱流失施加更低的脉冲？）。

流速0.5ml/min。

检测附加一个金检测电极、一个银-氯化银参比电极和一个不锈钢附加电极的脉冲安培检测器，作为元件主体，分别保持0.00V检测电位、+0.80V氧化电位好-0.60V还原电位，及设备使用的脉冲宽度。

注入10μ；注入待测溶液和标准溶液（b）（c）（d）（e）。

运行时间新霉素B保留时间的1.5倍。

标准品保留时间相对新霉素B保留时间（大约10min）的相对保留率：杂质A=约0.65；杂质C=约0.9；杂质G=约1.1。

系统适配性：

——分辨率：根据标准溶液（e）所获谱图中杂质C与新霉素B的峰值最小间隔2.0；如有需要，调整流动相中去CO2氢氧化钠溶液试剂的体积，

——信号/噪音比率：对于由标准溶液（C）所获谱图的主峰此值最小为10。

限值

——杂质A：不高于由标准溶液（d）（2.0%）所获谱图的主峰面积，

——杂质C：不高于由标准溶液（b）（15.0%）所获谱图主峰面积的3倍；且不低于由标准溶液（b）（3.0%）所获谱图主峰面积的0.6倍，

——任意其它杂质：不高于由标准溶液（b）（5.0%）所获谱图的主峰面积，

——其他杂质总量：不高于由标准溶液（b）（15.0%）所获谱图的主峰面积的3倍，

——忽略限值：由标准溶液（c）（1.0%）所获谱图的主峰面积。