细菌对药物的敏感试验
药物敏感试验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过药物敏感试验，了解病原菌对各种抗生素的敏感性，为临床合理选用抗生素提供科学依据，以指导临床治疗，提高治疗效果。
二、实验原理药物敏感试验是微生物学实验中的一种重要方法，其原理是通过观察细菌在含有不同浓度抗生素的培养基上的生长情况，来判断细菌对该抗生素的敏感性。
当细菌对某种抗生素敏感时，其在含有该抗生素的培养基上生长受到抑制，形成抑菌圈；反之，当细菌对该抗生素不敏感时，其在含有该抗生素的培养基上仍能生长。
三、实验材料1. 样本：临床分离的细菌菌株2. 培养基：琼脂平板、肉汤培养基3. 抗生素：青霉素、链霉素、红霉素等4. 仪器：恒温培养箱、显微镜、酒精灯、镊子等5. 试剂：生理盐水、消毒液等四、实验方法1. 样本处理：将临床分离的细菌菌株接种于肉汤培养基中，37℃培养18-24小时，观察细菌生长情况。
2. 琼脂平板制备：将肉汤培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，加入抗生素纸片，轻轻摇匀，倒入平板，待凝固。
3. 抑菌圈测定：将培养好的细菌菌株接种于琼脂平板上，37℃培养18-24小时，观察抑菌圈的形成情况。
4. 结果记录：记录不同抗生素对细菌的抑菌圈直径，并按抑菌圈直径大小进行敏感性分级。
五、实验结果1. 青霉素：抑菌圈直径为20mm，敏感；2. 链霉素：抑菌圈直径为15mm，中敏感；3. 红霉素：抑菌圈直径为10mm，低敏感。
六、实验讨论1. 通过本实验，我们了解到青霉素对所检测的细菌菌株具有较好的敏感性，可以作为一种治疗该菌株感染的抗生素选择。
2. 链霉素对所检测的细菌菌株具有中敏感，可以作为一种辅助治疗药物。
3. 红霉素对所检测的细菌菌株具有低敏感，不建议作为首选治疗药物。
4. 在临床治疗过程中，应根据药物敏感试验结果，合理选用抗生素，以减少耐药菌株的产生。
七、实验结论本实验通过药物敏感试验，成功检测了细菌对各种抗生素的敏感性，为临床合理选用抗生素提供了科学依据。
实验结果表明，青霉素对所检测的细菌菌株具有较好的敏感性，可以作为一种治疗该菌株感染的首选抗生素。
一般细菌抗菌药物敏感试验稀释法
一般细菌抗菌药物敏感试验稀释法稀释法是用培养基将抗菌药物作不同浓度稀释，再接种待检细菌，定量测定抗菌药物抑制或杀死细菌的最低药物浓度的体外办法，分为肉汤稀释法和琼脂稀释法。
稀释法所测得的某抗菌药物能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最低抑菌浓度（MIC)。
CLSI的M07文件系列对于MIC法给出了具体的标准。
（一）肉汤稀释法肉汤稀释法包括常量稀释法（macrodilution）和微量稀释法（microdilution)。
两者原理相同，只是反应液的体积不同。
前者采纳试管，每管中菌药混合物体积为2 mL；后者采纳微孔板，每孔菌药混合物的体积为0.1 mL。
1．原理用MH肉汤将抗菌药物对倍稀释，接种一定量的待测菌，以肉眼看不见细菌生长的最低药物浓度为MIC；此办法定量测定抗菌药物杀灭受试菌的最低浓度为最低杀菌浓度（minimal bactericidalconcentration,MBC)。
2．培养基MH肉汤为基础培养基，用于常规需氧菌和兼性厌氧菌检测。
而相对苛养的细菌，如和流感检测则需要添加养分成分。
虽然不是苛养菌，但也需要添加2％（质量浓度）的NaCI 以提高耐葡萄球菌的检出率。
3．药物稀释 (1)抗菌药物储存液的配制。
抗菌药物干粉不能挺直用于AST，普通保存在-20℃以下的干燥容器中。
用法前先配制抗菌药物储存液，其浓度起码为1000 ug/mL（如1280ug/ML）或最高实验浓度的10倍。
取少量体积的抗菌药物储存液于无菌玻璃、、或小瓶中，密封置于-60℃或更低温度，需要时解冻并且当天用法，用过的储存液应在24 h后丢弃。
大多数的抗菌药物储存液可在-60℃或更低温度保存6个月或以上，其活性无显著变幻。
(2)抗菌药物稀释液的配制。
药物稀释液的浓度参考CLSI M100文件表格2的说明折点，试验室可按照实际调节。
建议挑选的浓度范围起码包括一种质控菌的折点。
对药物储存液举行对倍稀释，其终浓度可为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125 ug/mL（图10-3)。
微生物实验 药物敏感实验
微生物药物敏感实验
⏹一、实验目的
⏹1、熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判断方
法。
⏹2、了解药敏试验在实际生产中的重要意义
二、实验原理
⏹将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部
位。
药物借其分子的扩散力向周围琼脂中扩散，形成了随着离纸片距离加大，琼脂中的药物浓度逐渐减少的梯度浓度。
其纸片周围一定区域琼脂内的药物浓度高于抑制待检菌所需浓度时，则该区域内细胞不能生长，形成透明抑制圈。
抑菌圈的大小可以反映待检对测定药物的敏感程度，抑菌圈愈大，说明该菌对此药物越敏感三、实验器材
⏹1．菌种大肠埃希菌。
⏹2．培养基牛肉膏蛋白胨培养基。
⏹3．试剂无菌生理盐水，抗菌药物纸片：
包括青霉素、氨苄西林、土霉素、链霉素等。
⏹4．其他无菌棉拭子、镊子、毫米尺、接种环。
四、实验方法和步骤
⏹1．菌液制备
菌浓合适，一般为106
⏹2．接种
细菌悬液制备后15min内接种至倒好的牛肉膏蛋白胨培养基平板中，接种量0.1-0.2mL。
涂布均匀。
⏹3．贴药敏纸片
⏹涂布后的平板在室温下干燥3~5min，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面
并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。
各纸片中心相距应大于24mm，纸片贴上后就不能再移动位置。
⏹4．培养
⏹将平板倒置放入37℃培养箱培养，16~18h读取结果。
五、实验结果
六、思考题
⏹ 1.圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？
⏹ 2. 试述药敏试验的意义。
细菌药物敏感试验执行标准和典型报告解读
细菌药物敏感试验执行标准和典型报告解读1. 引言细菌药物敏感试验，也称细菌药物敏感性试验或细菌敏感度试验，是临床微生物学中的一项重要内容。
它通过对细菌感染的病人样本进行试验，评估不同抗生素对细菌的敏感性，以确定最佳的抗生素治疗方案。
本文将全面评估细菌药物敏感试验的执行标准和典型报告解读，帮助大家更深入地了解这一重要的临床实验。
2. 细菌药物敏感试验执行标准在进行细菌药物敏感试验时，有一系列执行标准的要求需要满足。
必须采集来自病人临床样本的细菌，并在无菌条件下进行培养。
培养后，需要对细菌进行纯化和鉴定，以确保获得的细菌纯种。
接下来，根据临床样本中的细菌培养液，制备不同抗生素的浓度梯度，利用扩散法或微量培养法进行敏感性试验。
试验中必须包括阳性和阴性对照，确保实验结果的准确性。
3. 典型报告解读细菌药物敏感试验的典型报告通常包括细菌菌株的鉴定信息、不同抗生素的敏感性结果以及解释说明。
在报告中，每种抗生素都会根据细菌对其的敏感性被划分为敏感、中介和耐药三个等级。
解释说明部分将说明每种抗生素的敏感性结果，并结合临床数据，提供建议的治疗方案。
通过典型报告的解读，临床医生可以更好地选择最有效的抗生素治疗方案，提高治疗效果。
4. 个人观点和理解细菌药物敏感试验是临床微生物学中至关重要的一环，对于临床治疗具有重要的指导意义。
在执行标准要求和报告解读中，需要严格遵守规范，确保实验结果的准确性和可靠性。
在个人看来，细菌药物敏感试验不仅需要有严格的技术操作，还需要理解临床背景和病人情况，结合临床实际制定治疗方案，才能更好地发挥其作用。
5. 总结和回顾细菌药物敏感试验的执行标准和典型报告解读对于临床治疗非常重要。
在执行标准中，关键是保证细菌培养的纯化和鉴定准确无误，以及抗生素敏感性试验的准确进行。
而在典型报告解读中，医生需要结合临床情况，选择最佳的抗生素治疗方案。
细菌药物敏感试验是临床微生物学中的一项重要内容，其准确性和可靠性直接关系到病人的治疗效果，因此需要高度重视。
细菌的药物敏感试验原理
细菌的药物敏感试验原理细菌的药物敏感试验是一种旨在确定特定细菌对不同类型抗生素的敏感程度的实验。
这种试验可以帮助医生制定有效的抗生素治疗方案，以治疗感染性疾病。
细菌的药物敏感试验原理基于细菌细胞对不同抗生素的反应。
不同细菌在处理特定抗生素时显示不同的反应，因此这种试验可以帮助确定哪种抗生素适用于特定类型的细菌。
在药物敏感试验中，细菌的生长在使用不同药物后被观察。
细菌的药物敏感试验可以使用不同类型的方法来评估细菌细胞对药物的反应。
其中最常见的方法是盘扩散法和肉汤微量法。
盘扩散法盘扩散法是一种常用的细菌药物敏感试验方法。
试验中，细菌悬液被涂在含有各种不同抗生素的培养基上的纸片上。
在此后的12至24小时内，这些纸片被观察，以确定细菌对每种药物的敏感性。
成功的实验需要满足以下要求：1. 培养基的成分必须要适合试验。
2. 细菌的浓度必须要合适。
3. 用于测试的药物的浓度和数量必须准确。
在这种试验方法中，测定抗生素有效性的准确度受到很多因素的影响。
这些因素包括不同细菌株之间的变异性、培养基成分的变化以及试验特定参数设置的准确性等。
肉汤微量法肉汤微量法是一种最近流行的细菌药物敏感试验方法。
在这种试验中，细菌细胞通过液体培养基进行生长。
这种方法的主要优点是能够使用更少的细胞进行试验，而且可以有效避免人为误差的出现。
在肉汤微量法中，细菌细胞被分为一个或多个小容器中，每个容器包含不同浓度的抗生素。
此后，细菌被观察以确定哪种浓度的药物最能阻止其生长。
这种试验方法具有更高的准确性和更少的人为误差，但需要熟练的技术以确保实验的正确性。
总的来说，细菌的药物敏感试验在确定选定的抗生素能否对治疗感染产生积极疗效方面非常重要。
市场上存在许多适合不同细菌类型的抗生素，因此使用药物敏感试验可以确保治疗方案的有效性。
理解细菌的药物敏感试验原理对识别和治疗感染病毒感染非常重要。
四抗菌药物敏感性试验
四、抗菌药物敏感性试验（一）药敏试验的目的测定病原微生物对化学治疗药物敏感性的试验称为化疗药物敏感性试验（Drug sensitivity test），简称药敏试验。
药敏试验的主要目的是：①用于测定新的抗菌药物或制剂的抗菌谱；②对病灶分离菌进行流行病学调查，主要应用于测定细菌经过多年后敏感性的变化情况和地区特异性；③在临床治疗感染性疾病时，针对病原菌选择合适的首选药物品种。
（二）药敏试验的原理及种类药敏试验是通过培养基培养的细菌确定细菌对药物的敏感性方法。
将被检菌接种在适当的培养基上，然后加上不同种类或不同浓度的抗菌药物（或制剂），观察细菌生长发育的速度和程度。
用药后，细菌在培养基上停止生长并且死亡，抑菌圈清晰，说明细菌对药物敏感，药物表现有较强的杀菌作用；用药后，细菌停止生长，但液体培养基经过一定时间后还可能出现浑浊或固体培养基上的抑菌圈不清晰，说明细菌对药物比较敏感，预示药物对被检细菌只是起抑菌作用。
通常判定一种药物对细菌的杀菌或抑菌作用的强度指标是固体培养基中抑菌圈的大小，但这也不是绝对的，因为抑菌圈的大小与药物对培养基的渗透性是密切相关的。
药敏试验方法较多，但在原理上不外乎是稀释法和扩散法两大类。
而扩散法（包括纸片法、管碟法）通常适用于临床治疗选择药物。
（三）常用培养基制作法1．普通肉汤培养基牛肉浸膏 3.0克蛋白胨 10.0克氯化钠 5.0克蒸馏水 1000毫升放在三角烧瓶中，微温溶解后，调节pH值至7.4~7.6，煮沸10分钟，冷却后的pH值为7.2±0.2。
15磅压力下灭菌15分钟（115℃灭菌30分钟）即得。
本培养基可用作为固体、鉴别、选择等培养基制造的基础原料，大部分细菌都能在其中生长。
1．普通肉汤琼脂培养基照上述普通肉汤培养基的配方及制法，加入15~20克琼脂，加热溶解后，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
3．0.5%葡萄糖肉汤培养基蛋白胨 10克氯化钠 5克葡萄糖 5克牛肉浸膏 3克蒸馏水 1000毫升微温溶解后，调节pH值至弱碱性，煮沸后，加葡萄糖溶解，摇匀，滤清，调节pH值使灭菌后为7.2±0.2，分装，115℃灭菌30分钟，即得。
第4章抗菌药物敏感试验
第4章抗菌药物敏感试验一、需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验1.扩散法（K-B法）（1）原理将含有定量抗菌药物的纸片贴在接种有待检菌的琼脂平板上，该点称为抗菌药源。
药物向周围扩散，形成了随着药源距离增加，琼脂中药物浓度递减的浓度梯度。
在药源周围可抑菌浓度范围内待检菌的生长被抑制，形成无菌生长的透明圈即抑菌圈，其大小可以反映待检菌对测定药物的敏感性，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
（2）实验材料①培养基：采用水解酪蛋白（M-H）琼脂，pH为7.2，琼脂厚度4mm。
对生长条件要求高的细菌，如链球菌属细菌需加入5%脱纤维羊血，嗜血杆菌属细菌需加入1%血红蛋白（含Ⅴ因子）和1%Ⅹ因子复合物。
②抗菌药物纸片：选用直径为6.35mm，吸水量20μl的专用药敏纸片。
制备时取灭菌药敏纸片，经加样或浸泡药物溶液后冷冻干燥，置4℃保存备用，在有效期内使用。
③接种菌液挑取平板上形态相同的菌落4～5个，接种于3～5ml M-H肉汤中，于35℃中培养2～8h。
嗜血杆菌属和链球菌属细菌需用加血肉汤培养过夜。
用生理盐水或肉汤校正菌液至0.5麦氏比浊标准（相当于1.5×109/ml的含菌量）后在15min内接种。
（3）试验方法以无菌棉拭蘸取已制备好的菌液（其浊度为0.5麦氏比浊标准），在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次平板旋转60°，最后沿平板内缘涂抹１周。
平板置室温干燥3～5min，后用无菌镊子或专用纸片分配器将含药纸片贴于琼脂表面。
纸片应贴得均匀，各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm。
直径为90mm的平板可贴6张纸片。
纸片贴牢后应避免再移动。
平板室温放置15min后倒置于35℃培养箱中培养16～18h后读取结果。
（4）结果解释平板置黑色背景上，从背面量取包括纸片直径在内的抑菌圈直径，单位为mm。
培养基中如果加有血液须打开皿盖从正面测量抑圈菌。
抗菌药物敏感性试验执行标准
抗菌药物敏感性试验执行标准抗菌药物敏感性试验是临床微生物学中非常重要的一项实验，它可以帮助医生选择最有效的抗菌药物来治疗感染性疾病。
执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。
下面将介绍抗菌药物敏感性试验执行标准的相关内容。
首先，进行抗菌药物敏感性试验前，需要准备好所需的培养基、试验材料和各种试剂。
同时，要做好实验室的消毒和无菌操作，以确保试验的准确性和可靠性。
在进行试验时，需要按照严格的操作规程进行。
首先，要准备好待测菌株的悬浮液，然后按照一定比例将其接种到含有不同浓度抗菌药物的琼脂平板上。
接种后，要在恒温培养箱中进行培养，培养时间一般为16-18小时。
培养结束后，需要观察菌落的生长情况，并进行相关的数据记录和分析。
根据菌落的生长情况和抗菌药物的浓度，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性。
在记录和分析数据时，要注意细致入微，确保数据的准确性和可靠性。
在执行标准中，对试验结果的解释和判定也非常重要。
根据试验结果，可以判断出菌株对抗菌药物的敏感性、耐药性或者中间敏感性。
这些判定对于临床治疗具有指导意义，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。
此外，在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除。
比如，培养条件、试剂质量、操作技术等都可能对试验结果产生影响，需要在试验过程中进行严格的控制和调节。
总的来说，抗菌药物敏感性试验执行标准的严格性和准确性对于试验结果的可靠性至关重要。
在实验过程中，需要严格按照操作规程进行，确保试验过程的准确性和可靠性。
同时，对试验结果的解释和判定也非常重要，可以帮助医生选择最合适的抗菌药物来治疗感染性疾病。
在执行标准中，还需要对试验过程中可能出现的干扰因素进行控制和排除，以确保试验结果的准确性和可靠性。
细菌药敏鉴定实验报告
细菌药敏鉴定实验报告1. 引言细菌药敏鉴定是一项用于判断细菌对不同抗生素的敏感性的实验技术。
在医疗领域，了解细菌的药敏性能够帮助医生选择适当的药物治疗感染疾病。
本实验旨在通过药敏试验方法对不同细菌株的耐药性进行评估。
2. 实验步骤2.1 细菌培养首先，我们选择了多种不同的细菌菌株，包括XX菌、YY菌和ZZ菌。
分别从它们的冻存液中接种于含有50ml营养琼脂培养基的培养皿中，并在恒温恒湿条件下（37C，24小时）培养。
2.2 制备抗生素试验板我们选取了多种常见的抗生素药物，包括A、B、C和D。
首先，按照厂家说明书的建议，将抗生素药物溶解于生理盐水中，制备出不同浓度的抗生素药液。
接下来，将含有琼脂和50ml培养基的琼脂平板抗生素试验板均匀涂布抗生素药液，使得每个试验格均匀含有相应浓度的抗生素。
2.3 细菌接种与观察将已经培养好的细菌菌株用微量匀色刷接种于刚制备好的抗生素试验板上。
利用垫片按压细菌，使其均匀分布于试验板上。
将接种完成的试验板放入培养箱中，以37C恒温恒湿条件下培养24小时。
观察培养结果，记录每个试验格的细菌生长情况，包括有无菌落，菌落的形状和大小。
2.4 分析结果根据观察到的细菌培养结果，可以初步判断细菌对不同抗生素的敏感性。
3. 结果与讨论对观察结果进行整理和分析后，我们发现不同细菌对抗生素的敏感性存在差异。
以XX菌为例，我们观察到在抗生素A的试验格上出现了菌落生长，而在抗生素B、C和D的试验格上没有菌落生长。
这表明XX菌对抗生素A具有抗性，而对抗生素B、C和D敏感。
对于YY菌和ZZ菌的实验结果，我们发现它们对不同抗生素的敏感性也存在差异。
具体结果请见附表1。
根据实验结果，我们可以根据细菌对抗生素的敏感性来选择合适的抗生素进行治疗。
例如，对于感染XX菌的患者，我们可以选择抗生素A进行治疗，而应避免使用抗生素B、C和D。
4. 结论通过本次细菌药敏鉴定实验，我们成功评估了不同细菌对抗生素的敏感性。
细菌药敏试验报告
细菌药敏试验报告试验目的：本次试验旨在了解不同细菌对不同抗生素的敏感性情况，为制定治疗方案提供参考。
试验原理：通过对不同品种的细菌进行耐药性测试，可以确定其对各类抗生素的敏感性情况。
常用的药敏试验方法包括扩散法、碟扩散法、荧光染色法等。
本次试验采用了碟扩散法，将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面，观察形成的菌落周围的抑制圆来判断细菌对该抗生素的敏感性情况。
试验过程：1.准备工作：制备不同浓度的抗生素和培养基。
2.取样：将不同类型的细菌分别提取复制，并用增殖培养基培养。
3.打药敏试验：将抗生素置于小型圆形纸片上，贴于培养基表面。
4.观察结果：观察形成的菌落周围的抑制圆来判断该细菌对该抗生素的敏感性。
试验结果：根据本次试验结果，不同类型的细菌对不同抗生素的敏感性情况如下：菌种青霉素红霉素头孢菌素氯霉素大环内酯金黄色葡萄球菌敏感中度敏感抗性抗性中度敏感肺炎链球菌敏感中度敏感中度敏感抗性中度敏感大肠杆菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感沙门氏菌中度敏感抗性抗性敏感中度敏感结论：根据上述结果，我们可以得出以下结论：1.在治疗金黄色葡萄球菌时，不推荐使用头孢菌素或氯霉素，应优先考虑青霉素或红霉素。
2.肺炎链球菌对头孢菌素和氯霉素的反应不如青霉素，建议优先使用青霉素。
3.大肠杆菌和沙门氏菌对许多常见抗生素耐药，建议在治疗时注意综合考虑，选择适当的治疗方案。
提示：为保证试验结果准确可靠，建议在试验过程中注意以下事项：1.使用无菌器皿和工具，以免污染培养基和细菌样本。
2.制备完善、严格控制抗生素的浓度，避免因药效差致使结果不准确。
3.在选择抗生素和制定治疗方案时，应根据不同的病原菌和临床情况综合考虑。
体外抗菌药物抑菌试验(亦称细菌对药物的敏感试验-简称药...
❖ 敏感(S)：表示细菌可被常规剂量的药物在体内达到 的浓度所抑制或杀灭。
❖ 中度敏感(MS)：表示细菌可被该药物大剂量的浓度 所抑制或在药物生理性浓集的部位被抑制。
只有少数药物可报告中度敏感，如氨苄青霉素测肠 球菌。
❖ 中介度(1)：是为防止因技术因素失控导致结果误差 而设置的“缓冲域”因其临床意义难以确定，故不 应向临床医师报告。而应重做稀释法根据MIC结果 做出判断。
优缺点
❖ 稀释法是直接定量地检测抗菌药物在体 外对病原菌的抑制或杀灭浓度，有利于 临床根据MIC、药物代谢等拟定合理的 治疗方案，是目前厌氧菌的最佳测定方 法，琼脂稀释法还易于发现污染或耐药 突变菌。稀释法是新药开发，体外药敏 试验常用的经典参照标准，但操作相对 比较烦琐。
❖ 标准菌株的抑菌圈应落在表中所示的预期范 围内。如果超出该范围，应视为失控，须及 时查找原因，予以纠正。
❖ 培养基的质量、药敏纸片的质量、接种菌量、 试验操作质量、孵育条件、抑菌圈测量工具 的精度、质控菌株的药敏特性等均能影响结 果的准确性。
（二）肉汤稀释法 及琼脂稀释法
❖ 原理 是用水解酪蛋白肉汤(MH)或水解酪 蛋白琼脂（MHA）培养基作为稀释剂。 按《美国委员会临床实验室标准》作分 步倍比稀释抗菌药物，定量加入被检菌 株。经培养后观察抗菌药物的最小抑菌 浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
❖ 根据本国国情，卫生部临床检验中心还制订了关于 临床微生物实验室室内质控要求。临床具体工作须 参照遵守。
❖ 原理 是将定量抗菌药物纸片贴在涂有细菌的 琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散， 其浓度逐渐递减，使纸片周围的敏感细菌受 到抑制生长，形成抑菌圈，测量抑菌圈的直 径来判定细菌对药物的敏感程度。此法简单 易行、价格便宜、药物选择灵活，适用对生 长快的细菌进行药敏试验。
细菌对抗菌药物的敏感试验(实验)
5．质量控制
采用标准菌株与测试菌在同一条件下做药敏试验。 标准菌株的抑菌圈应落在预期范围内。如果超出该范围， 则不应发出报告，及时检查原因，予以纠正。
ATCC25923 金黄色葡萄球菌 ATCC25922 大肠埃希菌 ATCC27853 铜绿假单胞菌 ATCC29212 或 33186 粪肠球菌
金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验结果判断
无菌棉签 涂布
MH琼脂表面
室温 5min
贴含药纸片 35℃ 观察 16～18h 结果
操作注意事项：
菌液应在15分钟内接种完毕 接种后，平板放置时间不要超过5min 注意纸片距离
＞15mm ＞24mm
3．结果解释 测量抑菌圈直径，参照CLSI的标准解释结果。
20mm
4.影响纸片法药敏结果的因素 ①培养基质量 成分、pH、深度、硬度和表面 湿度等。 ②药敏纸片的质量 含药量和保存方式。 ③接种菌量 ④操作质量 接种后贴药片的时间；培养温度 和时间；抑菌圈测量工具的精度
大肠埃希菌抗菌药物敏感性试验结果判断
抗菌药物敏感性试验
成都医1.掌握纸片扩散法（K-B法）原理、操作 方法、结果的判读及其临床意义。
2.掌握纸片扩散法的质量控制。
实验内容 纸片琼脂扩散法（K-B法）
实验器材
1. 菌种： 金黄色葡萄球菌ATCC25923、 大肠埃希菌ATCC25922
（幼龄菌，1.5×108/ml） 2. 培养基：水解酪蛋白琼脂（MH琼脂）平板，1个/人 3. 抗菌纸片：青霉素（PEN）、红霉素(ERY)、庆大
霉素（GEN） 4. 其它：无菌生理盐水、无菌棉签、镊子、 接种环、
刻度尺（自带）、0.5 麦氏比浊管（相当于 1.5×108CFU/ml）
细菌对药物的敏感试验
细菌对药物的敏感试验●考点临床常用抗菌药物◇ 需氧菌和兼性厌氧菌的体外抗菌药物敏感试验◇ 厌氧菌体外药敏试验方法◇ 结核分枝杆菌体外药敏试验方法◇ 真菌体外药敏试验方法◇ 耐药菌株的监测临床常用抗菌药物简介一、抗菌药物的种类及作用机制1.青霉素类青霉素与青霉素结合蛋白（PBP）结合，抑制细菌细胞壁合成（1）天然青霉素种类：青霉素G、青霉素V作用于不产青霉素酶G+球菌、G-球菌、厌氧菌（2）耐青霉素酶青霉素种类：甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林作用于产青霉素酶的葡萄球菌（3）广谱青霉素1）氨基组青霉素：氨苄西林、阿莫西林作用于青霉素敏感的细菌、大部分大肠埃希菌、奇异变形杆菌、流感嗜血杆菌等G-杆菌2）羧基组青霉素：羧苄西林、替卡西林作用于产β-内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌3）脲基组青霉素：美洛西林、阿洛西林、哌拉西林作用于产β-内酰胺酶肠杆菌科细菌和假单胞菌2.头孢菌素类头孢菌素与青霉素结合蛋白结合，发挥抑菌和杀菌效果G+球菌：一代＞二代＞三代G-杆菌：三代＞二代＞一代第四代头孢菌素作用几乎相同，具有抗假单胞菌的作用（1）第一代头孢菌素：有头孢噻啶、头孢噻吩、头孢氨苄、头孢唑林、头孢拉定、头孢吡硫、头孢羟氨苄。
（2）第二代头孢菌素：有头孢孟多、头孢呋辛、头孢尼西、头孢雷特、头孢克洛、头孢丙烯、氯碳头孢。
（3）第三代头孢菌素：有头孢噻肟、头孢曲松、头孢唑肟、头孢哌酮、头孢克肟、头孢布烯、头孢地尼、头孢泊肟酯。
（4）第四代头孢菌素：有头孢匹罗、头孢噻利、头孢吡肟和头孢吡普。
3.其他β-内酰胺类单环类氨曲南和卡芦莫南对G-作用强，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血杆菌、铜绿假单胞菌对G+和厌氧菌无作用拉氧头孢类抗菌谱广，杀菌作用强，对产β-内酰胺的G-有很强的抗菌作用，对产酶的金黄色葡萄球菌也具有一定的抗菌活性。
头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑。
对G+有较好的抗菌活性，对厌氧菌有高度抗菌活性，但对非发酵菌无效。
微生物药敏实验报告
微生物药敏实验报告本实验旨在检测微生物对不同抗菌药物的敏感性，以指导临床合理用药，提高治疗效果。
药敏实验是通过测量抗菌药物在体外对微生物的抑制作用，评估药物对病原菌的抗菌活性。
本实验采用纸片扩散法，将含有不同抗菌药物的药敏纸片放置在培养基上，观察细菌生长情况，计算抑菌圈直径，从而判断细菌对药物的敏感性。
细菌接种：将待测细菌接种于固体培养基上，用无菌棉签均匀涂抹。
药敏纸片放置：选择合适药敏纸片，用无菌镊子将其放置在培养基上，间距至少24mm。
培养：将培养皿置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
结果分析：根据抑菌圈直径判断细菌对药物的敏感性，如敏感、中介或耐药。
青霉素、阿莫西林、头孢拉定对细菌具有较好的抗菌活性，可作为首选药物。
环丙沙星具有较强的抗菌作用，可作为备选药物。
红霉素、四环素、庆大霉素和克林霉素的抗菌效果较弱，可作为辅助治疗药物。
克林霉素和复方磺胺甲噁唑对细菌不敏感，应避免使用。
根据药敏实验结果，建议使用青霉素、阿莫西林、头孢拉定和环丙沙星治疗该细菌感染。
在使用过程中，应注意观察患者反应情况，及时调整用药方案。
同时，应进行定期药敏实验复查，以避免耐药性的产生。
微生物在自然界中广泛存在，而临床微生物鉴定与药敏试验对于诊断和治疗感染性疾病具有重要意义。
本文将介绍临床微生物鉴定的方法和药敏试验的基本原理及其在感染性疾病治疗中的重要性。
临床微生物鉴定是指通过一系列实验方法对临床标本中分离出的微生物进行种类鉴别和抗菌药物敏感性的测定。
这有助于医生正确选择抗菌药物，提高感染性疾病的治疗效果。
细菌鉴定是通过对细菌的形态、染色特性、生化反应、血清学试验等进行测定，以确定细菌的种类。
例如，革兰染色可以将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌，而血清学试验则可以用于鉴定链球菌、肺炎球菌等。
病毒鉴定是通过病毒的分离培养、抗原抗体检测、分子生物学等方法确定病毒的种类。
例如，分离培养可以用于检测水痘-带状疱疹病毒，而抗原抗体检测可以用于检测乙型肝炎病毒等。
细菌对抗菌药物的敏感试验
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细菌对抗菌药物的敏感试验
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 2、抑制蛋白质的转录或合成
l 由于真核生物和原核生物核糖体的差异， 真核生物的核糖体主要是80 S，由60 S和 40 S两个亚基组成，而原核生物的核糖体 是70 S，主要由30 S和50 S两个亚基组成。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 2 、靶位的改变
l 由于抗菌药作用的靶位(如核糖体和核蛋 白)发生突变或被细菌产生的某种酶修饰 而使抗菌药物无法发挥作用，以及抗菌药 的作用靶位(如青霉素结合蛋白和DNA回 旋酶)结构发生改变而使之与抗生素的亲 和力下降，这种耐药机制在细菌耐药中普 遍存在。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 结果观察：含最小药物量仍呈明显不混 浊的一管所含的药物浓度即为该抗菌药 物 对 试 验 菌 株 的 最 小 抑 菌 浓 度 （ MIC ） 。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
2、血药浓度（血清中抗菌药 物的浓度）
l 在使用各类抗菌药物时，常常会遇到 的一个重要问题，就是血药浓度。例如： 口服抗菌药物总是经肠道逐渐吸收入血 的。因此，血液中的药物浓度是从无到 有随时间的延长逐渐增高的。即使静脉 注射抗菌药物，因存在着首过效应（第 一关卡效应）和肾脏的排泄作用，血药 浓度也是随着注射的次数而逐渐增高的。
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细菌对抗菌药物的敏感试验
l 三、细菌耐药性产生的机理
l 细菌的耐药性机理主要有生化机理和基因 机理两个方面：
l (一）、生化机理：
l 1、细菌产生破坏药物结构的酶
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识为了规范我国常见细菌药物敏感性试验报告，提高药物敏感性试验的准确性和可比性，中国专家共识制定了以下规范：一、试验方法1.菌株标定：使用国际通用菌株，如美国疾病控制与预防中心（CDC）或世界卫生组织（WHO）推荐的标准现场菌株。
2.分离培养：分离菌株需按照净菌操作规范进行，利用适当的培养基进行分离培养，并排除混合菌群的干扰。
3.药物板制备：选择具有代表性的抗生素及其浓度范围，制备适量的药物板。
4.存储及保存：培养板需在恒温箱中保存，并在试验开始前存储在2-8℃的冰箱中。
二、结果解读1.报告细菌学结果：提供菌株的学名、鉴定依据、菌群数量及药敏试验结果。
2.敏感性解读：根据各药物浓度和试验结果，按照国际通用标准（如CLI和M-100）对菌株的药敏性进行分类，包括敏感、中间及耐药。
3.报告最低抑菌浓度（MIC）：对于抗生素敏感的菌株，提供所测得的最低抑菌浓度。
三、结果报告1.报告表格：以表格形式列出各药物对菌株的敏感性，包括敏感、中间及耐药等分类。
如有需要，可以附加备注信息。
2.核心信息：报告应包括细菌学结果、药物敏感性解析和MIC值等核心信息。
信息应准确、清晰，并以醒目字体标识。
四、质量控制1.质控菌株：除了临床分离菌株外，试验中应加入质控菌株，以确保试验的准确性和可靠性。
2.质控结果：试验中质控菌株的敏感性应与预期一致，否则应重新进行质控并核查试验步骤。
五、报告标准1.简洁明了：报告应简明扼要地呈现试验结果，避免冗长的叙述，使报告易于理解。
2.排版整齐：保持报告的排版整洁，字体大小适中，图表清晰易读，避免文字交叠和重叠的情况。
3.专业术语：报告中的专业术语应准确使用，且易于理解。
如有必要，可加入术语解释或相关说明。
六、报告解读1.专家评审：对于复杂或存在争议的报告，可以请专家进行评审，并提供专家意见。
2.对照标准：报告解读应参照相关国际标准，如CLI或M-100，以保证结果的准确性和可比性。
药物敏感试验
药物敏感试验96孔板法1.适用范围本实验通过检测细菌对抗菌药物的敏感性，筛选最有疗效的药物。
2.仪器设备50ml容量瓶、10ml移液管、橡胶吸头、细菌瓶、96孔板、广口瓶、高速蜗旋仪、高速离心机、分析天枰、恒温振荡器（室温至60℃，30-50转/分钟）、恒温培养箱（室温到70℃）、培养皿、微量移液器（1000μl、100μl、10μl）、八排微量移液器（100μl）、及其配套枪头、OD值测量仪、微型振荡器。
3.试剂液体培养基（MH肉汤、LB培养基）、磷酸缓冲液、灭菌蒸馏水、灭菌去离子水、0.1mol/L HCL。
4.实验材料15%金霉素、10%抗敌素、相关各地区致病菌液。
5.试剂的配置(1)MH肉汤MH肉汤21.0g蒸馏水1000ml（2）LB培养基蛋白胨10g酵母浸粉5g氯化钠5g蒸馏水1000ml（3）磷酸缓冲液Nacl 80gKcl 2gNa2H PO4`12 29gK2HPO4 2g去离子水1000ml用磷酸缓冲液（磷酸缓冲液：水=9:1）调节PH至7.0。
（4）15%金霉素药样制备15%金霉素0.0512g0.1mol/L HCL 3000-5000μl加去离子水定容至50ml10%抗敌素药样制备10%抗敌素0.0512g加去离子水溶解，定容50ml离心，1000转5分钟，取上清液放至4℃冰箱保存。
6.实验操作步骤（1）菌种复苏各地相关菌种用平板划线（37℃恒温培养12~16小时）使其在平板培养基上生长。
（2）菌的扩增从平板上获取菌加入液体培养基，用恒温振荡器培养（37℃）12小时，备用。
（3）用八排微量移液器向96孔板中依次加入100μlMH肉汤。
（4）用100μl微量移液器向96孔板第一纵排分别加入药样上清液（每种药样加2孔）。
（5）倍比稀释用八排微量移液器从第一纵排吸取100μl混合液体，反复吸取8~10次，使吸入的混合液体液面相平后加入第二纵排反复吸取10次，依次法进行加至第十纵排。
细菌对抗菌药物的敏感介绍
细菌对抗菌药物的敏感介绍
最常用的药敏试验是WHO推举的Kirby-Bauer纸片集中法(K-B法)。
该法将药敏试验抑菌环大小分为四个等级，即：敏感、中度敏感、中介度、耐药。
由于中介度介于敏感和耐药之间，所以不予报告，故化验单上只报告敏感、中度敏感或耐药。
此外药敏试验还可采纳琼脂稀释法、液体稀释法和微量稀释法，以定量测定抗生素对细菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC) o 通常化验单报告MIC o
临床意义：
1.敏感：表示被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的该抗菌药物治愈，禁忌症除外。
2.中度敏感：表示被测菌株可以通过提高剂量被抑制或在药物被生理性浓集的部位被抑制，如β -内酰胺类药物。
3.中介度：这一范围只是抑菌环直径介于敏感和耐药之间的“缓冲域”，以防止由微小的技术因素失控所导致的较大的结果解释错误。
抑菌环落入中介度范围，意义不明确，假如没有其他可替代的药物，应重复做药敏试验，或以稀释法测定MIC。
4.耐药：被测菌不能被常用剂量所达到组织内或血液中的抗生素所抑制。
5.最低抑菌浓度：抑制被测菌的最低药物浓度。
6.最低杀菌浓度：抗菌药物杀灭细菌所需的最低浓度。
细菌药敏试验的金标准
细菌药敏试验金标准一、细菌种属鉴定细菌种属鉴定是药敏试验的基础。
通过细菌种属鉴定，可以确定感染的病原菌种类，从而为选择合适的抗菌药物提供依据。
常用的细菌种属鉴定方法包括形态学、生化反应、血清学试验等。
二、细菌药物敏感试验细菌药物敏感试验是药敏试验的核心。
通过测定病原菌对各种抗菌药物的敏感程度，可以判断哪种药物对病原菌最有效，哪种药物对病原菌不敏感。
常用的细菌药物敏感试验方法包括纸片扩散法、稀释法、E试验等。
三、抗菌药物治疗方案根据细菌种属鉴定和细菌药物敏感试验的结果，可以制定针对性的抗菌药物治疗方案。
治疗方案应包括选用哪种抗菌药物、用药剂量、给药途径、用药时间等内容。
同时，还应考虑患者的个体差异、病情严重程度等因素。
四、治疗效果评估治疗效果评估是药敏试验的重要环节。
通过评估抗菌药物治疗效果，可以判断治疗方案是否有效，是否需要调整用药方案。
常用的治疗效果评估指标包括体温、血象、病原菌清除率等。
五、耐药性监测耐药性监测是药敏试验的重要任务。
通过监测病原菌的耐药性，可以了解病原菌对各种抗菌药物的敏感程度，从而为临床用药提供依据。
耐药性监测可以帮助医生及时调整用药方案，避免使用无效的药物。
六、预防接种建议预防接种建议是药敏试验的重要应用之一。
通过了解病原菌的感染特点、传播途径等，可以制定针对性的预防接种建议，有效控制病原菌的传播。
七、交叉感染控制交叉感染控制是药敏试验的重要任务之一。
通过药敏试验可以了解病原菌的感染特点，从而为交叉感染的预防和控制提供依据。
交叉感染控制包括隔离措施、消毒措施等。
八、医院感染控制医院感染控制是药敏试验的重要应用之一。
通过药敏试验可以了解医院感染的病原菌种类及耐药性情况，从而为医院感染的控制提供依据。
医院感染控制包括清洁消毒措施、隔离措施、抗菌药物的合理使用等。
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近年来，由于抗生素、磺胺等抗菌药物广泛应用，导致了耐药菌株不断出现。
测定细菌对药物的敏感程度，对于临床治疗中选择用药，避免滥用药、及时有效地控制感染以及细菌鉴定，具有重要意义。
细菌敏感度的测定方法很多，世界卫生组织推荐的方法为Kirby-Bauer 纸片法，该方法具有操作简便、易于掌握、且重视性好的优点，本法是将含药纸片贴敷在接种细菌的琼脂平板上，利用含药纸片在琼脂上的扩散作用来测定细菌对药物的敏感性。
K-B纸片法的原理是建立在抗菌药物抑菌环直径大小与细菌的最小抑菌浓度（MIC）之间呈负相关的基础上，即抑菌环直径越大，则MIC越小。
结果判定：按抑菌环直径大小报告敏感、中度敏感或耐药。
敏感：是指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治疗。
中度敏感：是指通过提高种抗菌药物的剂量或在该药浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染可被治愈。
这类药物毒性较小，剂量可以加大。
β-内酰胺类药物可出现中度敏感。
耐药：是指被测菌株所引起的感染不能用常规剂量的抗菌药物所治愈。
中介度：这一范围是“缓冲域”是由试验的误差造成的不作为报告形式。
如确需明确的敏感度，应重复实验或做稀释法，抑菌环为中介度的药物不可提高剂量。
最低抑菌浓度（MID）：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。
以针形接种器沾取菌液加至药盒各孔，35℃培养过夜，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的（清亮孔），即为MIC。
最低杀菌浓度（MBC）：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。
经48小时35℃培养后，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的（清亮孔），即为MBC。
由于纸片法影响因素多，很难控制精度，现大多数医院采用MIC测定盒。
MIC由经典二倍肉汤稀释演化而来，具有终点判断精确，重复性好，操作简便等优点。
此方法采用病美国DYNATECH接种器，更具科学性。
使用国产“华士达微生物自动分析仪”所做的定量药敏（MIC）试验，报告自动由打印机印出，附印出抗菌素对受试菌的MIC外，还可提供各种药物的用量，给药途径（口服、肌注、静滴）及血和尿中可能达到的药物浓度一览表，供临床医师参考。
纸片法抑菌环直径及其相当的MIC（表16-4）。
表16-4 抑菌环直径标准及其相当的MIC（不包括嗜血杆菌和淋球菌）
1990.4.NCCLS
▲中介度：含意为模棱两可或不定。
表16-5 嗜血杆菌抑菌环解释标准及相应MIC分界点
a.此值为与抑菌环相应的MIC 近似值。
b.“中介度”如予报告，其含意为模棱两可，
不定或接近轻敏，如药物能在感染部位浓集可用于治疗。
表16-6 淋球菌抑菌环解释标准及相应的MIC 1990.4.NCCLS
近年来，由于抗生素、磺胺等抗菌药物广泛应用，导致了耐药菌株不断出现。
测定细菌对药物的敏感程度，对于临床治疗中选择用药，避免滥用药、及时有效地控制感染以及细菌鉴定，具有重要意义。
细菌敏感度的测定方法很多，世界卫生组织推荐的方法为Kirby-Bauer 纸片法，该方法具有操作简便、易于掌握、且重视性好的优点，本法是将含药纸片贴敷在接种细菌的琼脂平板上，利用含药纸片在琼脂上的扩散作用来测定细菌
对药物的敏感性。
K-B纸片法的原理是建立在抗菌药物抑菌环直径大小与细菌的最小抑菌浓度（MIC）之间呈负相关的基础上，即抑菌环直径越大，则MIC越小。
结果判定：按抑菌环直径大小报告敏感、中度敏感或耐药。
敏感：是指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治疗。
中度敏感：是指通过提高种抗菌药物的剂量或在该药浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染可被治愈。
这类药物毒性较小，剂量可以加大。
β-内酰胺类药物可出现中度敏感。
耐药：是指被测菌株所引起的感染不能用常规剂量的抗菌药物所治愈。
中介度：这一范围是“缓冲域”是由试验的误差造成的不作为报告形式。
如确需明确的敏感度，应重复实验或做稀释法，抑菌环为中介度的药物不可提高剂量。
最低抑菌浓度（MID）：抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。
以针形接种器沾取菌液加至药盒各孔，35℃培养过夜，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的（清亮孔），即为MIC。
最低杀菌浓度（MBC）：抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。
经48小时35℃培养后，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的（清亮孔），即为MBC。
由于纸片法影响因素多，很难控制精度，现大多数医院采用MIC测定盒。
MIC由经典二倍肉汤稀释演化而来，具有终点判断精确，重复性好，操作简便等优点。
此方法采用病美国DYNATECH接种器，更具科学性。
使用国产“华士达微生物自动分析仪”所做的定量药敏（MIC）试验，报告自动由打印机印出，附印出抗菌素对受试菌的MIC外，还可提供各种药物的用量，给药途径（口服、肌注、静滴）及血和尿中可能达到的药物浓度一览表，供临床医师参考。
纸片法抑菌环直径及其相当的MIC（表16-4）。
表16-4 抑菌环直径标准及其相当的MIC（不包括嗜血杆菌和淋球菌）
1990.4.NCCLS
▲中介度：含意为模棱两可或不定。
表16-5 嗜血杆菌抑菌环解释标准及相应MIC分界点
a.此值为与抑菌环相应的MIC近似值。
b.“中介度”如予报告，其含意为模棱两可，不定或接近轻敏，如药物能在感染部位浓集可用于治疗。
表16-6 淋球菌抑菌环解释标准及相应的MIC 1990.4.NCCLS。