细胞培养基本技术全面知识普及演示文稿

需配制的溶液
平衡盐溶液（PBS或D-Hank’s等） 胰酶ห้องสมุดไป่ตู้ 培养基
溶液除菌方式
高压蒸汽灭菌：平衡盐溶液
过滤除菌：不能高压的溶液，如培养基、 胰酶等
培养基
培养基（培养液）是维持体外细胞生存和生长的溶液，分天然培养基 和合成培养基。
天然培养基：
天然培养基有血清、血浆、和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。
3. 样品均一性：来源于同一组织同一种细胞。 4.经济、规模和机械化
细胞培养的局限性
人工模拟体内环境的技术已经很高, 但人工 所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相 同。缺乏体内的系统作用、失去神经体液 的调节和细胞相互间的影响。 当细胞被置于体外培养后, 生活在缺乏动态 平衡的环境中，必然发生变化。
④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分
血清质量好坏是实验成败的关键。
常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血 清、马血清等，其中以胎牛血清质量最好。
无机盐和其它一些辅助物质。
优点：标准化生产，组分和含量相对固定。
成本低
缺点： 缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需
要。
人工合成培养基只能维持细胞生存，
要想使细胞生长和繁殖，还需补充一定量 的天然培养基（如血清）。
血清中含有：
①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子 ； ③激素；
细胞培养基本技术 全面知识普及演示
文稿
内容
细胞培养的理论背景
设备与器材准备、溶液配制 无菌技术 原代培养 传代培养 细胞计数与生长曲线 冻存、复苏与运送 常见问题及对策
细胞培养的概念
20世纪初才创立的一种研究动物细胞行为 的方法。
细胞培养是指从体内组织取出细胞模拟体 内出现环境，在无菌、适当温度及酸碱度 和一定营养条件下，使其生长繁殖，并维 持其结构和功能的一种培养技术。
细胞培养的应用
1. 药物研究与开发 (1) 新药筛选 (2) 疫苗研究与开发 (3) 基因工程药物研究与开发 (4) 细胞工程药物研究与开发 2. 基础研究 (1) 药物作用机理 (2) 基因功能 (3) 疾病发生机理 3. 生物制药 (1) 疫苗生产 (2) 基因工程药物生产 (3) 诊断用和药用单克隆抗体生产 (4) 细胞工程药物生产
小时以除去脏物、铅、砷等物。 刷洗、烘干：泡盐酸12小时后立即用自来水冲洗，再用洗
涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。 泡酸、清洗：用酸液浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器皿
用自来水冲洗10次，最后蒸馏水冲洗3-5次。 烘干、包装：移液管和滴管的尾端
要塞入棉花。 高压灭菌 烘干备用
使用后的玻璃器皿的清洗灭菌
刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿立即用清水刷洗干净 自来水浸泡过夜，泡酸前用自来水冲洗干净，烘干。 泡酸、清洗：烘干后泡入酸液，12小时后从酸缸内捞出器
皿立即用自来水冲洗10次（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃 上难以清洗），过蒸馏水3次。 烘干、包装 高压灭菌 烘干备用
金属器皿
金属器皿不能泡酸，洗消时可先用洗涤剂 刷洗，后用自来水冲干净，然后用75％酒 精擦拭，再用自来水，然后用蒸馏水冲洗， 再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装 好，高压灭菌，再烘干备用。
概念：原代与传代
原代培养 取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长 的细胞在传代之前称为原代培养。
传代： 细胞在培养器皿中生长一定时间后，被分 开接种到新的培养器皿中。
培养细胞的生长方式
贴壁生长： 必须贴附于支持物表面才能生长。见于各种实
体组织来源细胞、上皮细胞。 悬浮生长：
于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物 表面。见于各种造血系统肿瘤细胞。
优点：营养成分丰富，培养效果好
缺点：来源受限。
成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析。
易发生支原体污染
合成培养基
合成培养基是根据细胞生存所需物质的种类和数量，
用人工方法模拟合成的。目前已设计出许多种培养基，如 TC199、MEM、RPMI-1640、 DMEM等。
合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、
橡胶和塑料
刷洗、烘干：使用后立即用清水刷洗干净 自来水浸泡过夜，泡酸前用自来水冲洗干净烘干。 泡入5％盐酸过夜。 自来水冲洗10次，过蒸馏水3次 烘干 高压蒸汽灭菌 烘干备用
滴管胶头可用75％酒精浸泡5分钟，紫外线照射消 毒。
水、溶液、培养基
水：超纯水。 至少为三蒸水或去离子水。
液氮罐
培养瓶、培养皿
实验器材的清洗和灭菌
清洗的重要性
1. 除化学污染：盐、油污、蛋白质、重金属等 2. 使培养瓶内表面带负电荷，供细胞附着。
不要让污染了的器皿变干！！
灭菌的重要性
除去微生物污染
酸液配方
新的玻璃器皿的清洗灭菌
自来水刷洗，除去灰尘。 烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5％稀盐酸中12
细胞培养成功的关键
1. 实验材料的清洗、灭菌。 2. 无菌操作 3. 勤劳
内容
细胞培养的理论背景
设备与器材准备、溶液配制
无菌技术 原代培养 传代培养 细胞计数与生长曲线 冻存、复苏与运送 常见问题及对策
实验设备与器材
CO2培养箱 超净工作台
倒置显微镜
滤器
电动移液器
超纯水仪
细胞培养的应用
细胞培养的优点
1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构 、生命活动 2.可控制：可选择特定的研究细胞种类、性质、阶段 可控制调节条件：物理、化学、生物等因素 可采用各种研究技术、记录方法： 倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细 胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位 素标记等。
贴壁细胞
贴壁细胞
贴壁细胞
贴壁细胞
悬浮细胞
细胞培养的环境
1、无污染环境：化学污染、微生物污染 2、温度环境：37℃。偏离这一温度范围，细胞的正
常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温 的耐受力较对高温强， 3、气体环境： 95%空气加5%二氧化碳 4、酸度环境：大多数细胞的适宜PH 为7.2-7.4，细 胞耐酸性比耐碱性大一些。 5、 细胞培养基：合成培养基、天然培养基。