微生物检测资料

柯赫法则：

1、在每一相同病例中都出现这种微生物；

2 、要从寄主分离出这样的微生物并在培养基中培养出来；

3、用这种微生物的纯培养接种健康而敏感的寄主，同样的疾病会重复发生；

4 、从试验发病的寄主中能再度分离培养出这种微生物

金黄色葡萄球菌引起急性肠胃炎；沙门氏菌引起伤寒、霍乱；溶血性链球菌引起猩红热；

志贺氏菌引起菌痢。肉毒梭菌致死率可达30%—60%，产生的毒素是自然界毒性最强的蛋白质，也可用来治疗障碍性疾病

微生物检测：就是应用微生物学的理论、方法和技术，对食品或药品在研制、生产、保藏过程中进行质量检测和安全性评价的专业技术学科。主要研究外界环境和食品或药品中微生物的种类、数量、性质、活动规律及其对人和动物健康的影响。

微生物检验意义是衡量食品和药品卫生质量的重要指标之一，是判定被检食品或药品能否食用或药用的科学依据之一。是判断食品和药品加工原料、生产环境卫生情况及对成品被污染的程度作出正确的评价，为卫生管理工作提供科学依据。微生物检验贯彻“预防为主”的卫生方针，有效的防止或减少食物中、药品毒害、人兽共患病的发生。保障人民身体健康。

提高产品质量，避免经济损失。

微生物检测对象

(1)食品(2)化妆品(3)药品(4)一次性用品及其他生活用品(5)应施检疫的出口动物产品(6)环境(7)有关国际条约或其他法律、法规规定的强制性卫生检验的进出口商品

二、微生物检测技术的发展

迫切需求灵敏度更高、特异性更强、简便快捷的微生物检测技术和方法，建立和完善适应国际贸易的各类产品微生物检测技术和体系迫在眉睫。

传统检验技术

显微技术，实验室中常用的有普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜和电子显微镜等。利用血细胞计数器在显微镜下直接计数是一种常见的微生物计总数的方法。

革兰氏染色技术：是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。

培养计数法：平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后,其中的微生物充分分散成单个细胞,取一定量的稀释样液涂在平板上,经过培养,由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。

现代微生物检测技术

现状趋势：都致力于快速、简便、特异、敏感、低耗且实用的检测技术和方法的研究

研究的技术手段产生了很大的变革：已由培养水平逐步向分子水平迈进；近年来兴起的基因芯片技术及自动微生物检测系统，将从根本上改变微生物的检测方法；气相色谱法、气质联用等现代仪器分析法也应用于微生物检测中。

微生物检验的质量控制措施：

(1)应严格按照国家规定对试验仪器、设设备、器具进行定期的检定、维护和保养。

(2)严格控制培养基、试剂、染色及诊断血清的质量

(3)确保菌株的良好保存，标准菌株和从样品中分离出的菌株，其保存方法有多种，最理想的为真空冷冻干燥法，但这种方法的操作技术难度大，花费高，需特殊设备，一般

单位不易做到。常规琼脂斜面保存法常因传代次数多，易污染，易变异。近年来卵黄液普通安瓿熔封法超低温保存菌种

（4）检验方法的选择，检验方法是微生物实验室质量保证的重要步骤,必须统一、准确可靠。优先采用国家规定的标准检验方法或国际标准、行业标准、地方标准规定的检验方法,无上述标准时，经协商也可采用企业标准。确定试验和实验室标准，用阴性、阳性标准菌株做确证试验，特别在做微生物生化试验和免疫试验时一定要设立阴性、阳性对照组。

（5）建立实验室工作失败报告、内审制度，记录整个试验过程中的错误信息，通过管理评审，制定整改措施，及时整改；定期参加质控评比，不断提高试验技术水平；及时更新程序性文件，完善实验室质量保证体系。

(6)检验报告和原始记录的质量控制检验报告书是检测的最终产品，经单位技术负责人签发即产生法律效力。检验报告、检验原始记录都应规范填写，认真审核。收样人、检测人、复核、审查、签发人应人人把关，各负其责，保证质量体系的有效运行。

第二章微生物检验的基本程序

一、检验前准备

1. 准备好所需的各种仪器

2. 准备好所需的各种玻璃器皿

3. 准备好所需的各种试剂、药品、培养基

4. 无菌室灭菌

5. 检验人员的工作衣、帽、鞋、口罩等灭菌后备用

二、样品的采集

●在产品的检验中，样品的采集和处理是任何检验工作中最重要的组成部分。

●关系到结果的准确性和检验机关决策的正确性。

●采集的样品必须具有代表性，即所取的样品能够代表产品的所有成分。

样品的种类：大样：一整批样品，中样：从样品各部分取得的混合样

小样（检样）:分析用的样品。

微生物限度检验对象的特性：不确定性；分布的不均匀性；活体特征

抽样量：指从全批产品（或全过程）抽取的单位包装。

检验量：是指检验用量，是抽样量各包装的混合样品的一部分。

检验量与抽样量是两种不同的范畴的量，抽样量大于检验量。

国际食品卫生规范委员会 ICMSF

二级抽样（病原体）：

由n、c和m组成

●n是从一批被检查食品中抽取样品的数量，取样数；c是样品检测值超过指标值m

的最大可接受抽样单位数，如果超过该值，则拒绝接受该批产品；m是每克样品中相关细菌的合格菌数限量，即指标值

三级抽样（指示菌）

有一个额外的参数，附加指标值M，用于区分可接受的临界值和不可接受的值

在任何一个样品中，大于或等于M的值都是不可接受的

根据被检测到的微生物的浓度，三级抽样方案将食品分成三级

若计数小于m，则可接受；若计数大于m，小于M ，则处于可接受的临界处

若计数大于M ，则不可接受

三、样品的送检