药物的含量测定方法与验证1

（一）高效液相色谱法（HPLC）
例题：测得两色谱峰的保留时间tR1＝6.5min，tR2 ＝8.3min，峰宽W1＝1.0min，W2＝1.4min， 则两峰分离度R为：
A.0.22
B.1.2
C.2.5
D.0.75
E.1.5
答案：E
三、色谱分析法
例题：HPLC法与GC法用于药物复方制剂的 分析时，其系统适用性试验系指 A.测定拖尾因子 B.测定回收率 C.测定保留体积 D.测定分离度 E.测定柱的理论板数
二、光谱分析法
2.吸收系数法：（绝对法） C=A/EL 常用百分吸收系数。须对仪器进行严格的校
正和检定。 3.计算分光光度法 适当数字处理，消除干扰成分的影响
例题：紫外分光光度法中，用对照品比较法测
定药物含量时，
A.需已知药物的吸收系数。 B.供试品溶液和对照品溶液的浓度应接近。 C.供试品溶液和对照品溶液应在相同的条件
4.滴定分析：通过“滴定”来实现的，根据 所用标准溶液的浓度和体积计算出待测物质 含量的，这种分析方法称为滴定分析法，这 一过程称为滴定分析。
一、容量分析法（滴定分析法）
例题：滴定分析中，一般利用指示剂的突变来判断化
学计量点的到达，在指示剂变色时停止滴定，这一点
为：
A.化学计量点
B.滴定分析
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 柱效（最小理论塔板数）
n＝5.54（tR/ Wh/2）2
tR（保留时间，min）， Wh/2（半峰宽，cm） 一般大于1000
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 分离度
R＝2（tR2－tR1）/（W1＋W2）
R≥1.5
三、色谱分析法
A. A 250 1 100% 715 5 m
B. A 715 250 1 100% 5m
C. A715 100 250 1 100%
5
m
D.
A 715
1 m
100%
E. A 100 250 1 100%
715 5
m
二、光谱分析法
含量的计算 （2）制剂标示量百分含量计算（自学） 例题： 《中国药典》规定： 维生素B12注射液（规格0.1mg／m1）含量测定如下：精密 量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，混 匀，置lcm石英池中，以蒸馏水为空白，在361±1nm波长处 吸收度为0.593，按百分吸收系数为207计算，维生素B12标 示量%为多少？
几个基本术语
1.化学计量点（等当点）：当滴入的标准溶 液的物质量与待测定组分的物质量恰好符合 化学反应的计量关系时，称化学计量点（等 当点）。
2.滴定终点：在滴定过程中，指示剂正好发 生颜色变化（或电子设备的信号发生变化） 的转变点，称滴定终点。
一、容量分析法（滴定分析法）
3.滴定误差：由于指示剂的变色点不恰好在 化学计量点而引起的误差为滴定误差。
0.1 100% 99.72%
0.3630 1000
例：精密称取青霉素钾供试品0.4021g，
按药典规定用剩余碱量法测定含量。先
加入氢氧化钠液(0.1mol/L)25.00ml，回 滴时消耗0.1015mol/l的盐酸液14.20ml， 空白试验消耗0.1015mol/l的盐酸液 24.68ml。求供试品的含量，每1ml氢氧 化钠液(0.1mol/L)相当于37.25mg的青霉 素钾。
W
例题：非那西丁含量测定：精密称取本品
0.3630g加稀盐酸回流1小时后，放冷，用 亚硝酸钠液（0.1010mol/L）滴定，用去 20.00m1。每1ml亚硝酸钠液（0.1mol/L） 相当于17.92mg的C10H13O2N。计算非那 西丁的含量为？
17.92 20.00 0.1010
非那西丁%
等)可能存在下，采用的方法能准确测定出 被测物的特性。 鉴别反应、杂质检查、含量测定方法，均应 考察其专属性。
第五节 分析方法的验证
（四）检测限 在规定的实验条件下能检出被测组分的最低
浓度或最低量。 当被测组分的量高于检测限时，即可被检出，
但一般不能准确测定。
第五节 分析方法的验证
（五）定量限 分析方法可定量测定样品中被测组分的最低
色谱法：是一种物理或物理化学分离分析方法。 优点：高灵敏度、高选择性、高效能、分析速度快、应用范围广。 应用：各国药典中广泛用作定性鉴别、纯度检查、含量测定。 分类：
流动相：气体→气相色谱法 液体→液相色谱法 固定相：固体或液体 气－固色谱法；气－液色谱法；液－固色谱法；液－液色谱法 操作形式：柱色谱法、平板色谱法、电泳法 分离机制：分配、吸附、离子交换、分子排阻及亲合色谱法
T (mg / ml) m a M b
m：滴定液摩尔浓度 a：被测药物摩尔数 b：滴定剂的摩尔数 M：被测药物的毫摩尔质量
一、容量分析法（滴定分析法）
含量的计算： 1.浓度校正因数
实际摩尔浓度 F 规定摩尔浓度
2.百分含量的计算 （1）原料药百分含量计算
V-V0 或
百分含量（%） VTF 100% V0-V
下测定。
D.可以在任何波长处测定。 E.是中国药典规定的方法之一。答案：BCE
二、光谱分析法
含量的计算
（1）原料药百分含量计算
对照法
C对 A供 D V
百分含量（%）
A对
100%
W
吸收系数法
百分含量（%）
A E1%
1cm
1 DV 100
100%
W
例题：对乙酰氨基酚的含量测定方法为：
取本品约40mg，精密称定，置250ml量瓶 中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml溶解后，加 水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml 量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10m1，加水 至刻度，摇匀，照分光光度法，在257nm 的波长处测定吸收度，按C8H9NO2的吸收 系数( E11c%m )为715计算，即得。若样品称样 量为m(g)，测得的吸收度为A，则含量百 分率的计算式为：
算该胶囊中按标示量表示的百分含量。
13.01（25.00
17.94）
0.1025 0.1
3.0780
标示量%
0.15361000
20 100% 94.33%
0.1
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光度法 根据物质分子对波长为200～760nm这一
范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种 定性、定量和结构分析方法。 基本原理 朗伯-比尔定律：A=-lgT=ECL
一、容量分析法（滴定分析法）
按药典规定，精密标定的滴定液（如盐酸及其
浓度）正确表示为
A.盐酸滴定液（0.152mol/L）
B.盐酸滴定液（0.1524mol/L）
C.盐酸滴定液（0.152M/L）
D.0.1524M/L盐酸滴定液
E.0.152mol/L盐酸滴定液
答案：B
一、容量分析法（滴定分析法）
注意：（1）摩尔吸收系数：ε
（2）百分吸收系数，C为1g/100ml
二、光谱分析法
例题：某药物的摩尔吸收系数（ε）很大，则 表示： A.光通过该物质溶液的光程长 B.该物质溶液的浓度很大 C.该物质对某波长的光吸收能力很强 D.该物质对某波长的光透光率很高 E.测定该物质的灵敏度低 答案：C
37.25（24.68 14.20） 0.1015
青霉素钾%
0.1 100% 98.54%
0.40211000
一、容量分析法（滴定分析法）
含量的计算： （2）制剂标示量百分含量的计算
VTF 平均片重
标示量%
W 标示量
100%
例：取司可巴比妥钠胶囊（标示量为0.1g）20粒， 除去胶囊后测得内容物总重为3.0780g，称取 0.1536g，按药典规定用溴量法测定。加入溴液 （0.1 mol/L） 25ml，剩余的溴液用硫代硫酸钠液 （0.1025mol/L）滴定到终点时，用去17.94ml。 空白试验用去硫代硫酸钠液25.00ml。按每1ml 溴 液（0.1mol/L）相当13.01mg的司可巴比妥钠，计
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 1.概述 HPLC：液体作流动相，高压输液，高效固定相，高灵
敏度检测器。 特点：HPLC 有机物80%（GC，有机物20%） 分类：LLC 分配，离子交换色谱
LSC 吸附，离子对色谱 化学键合固定相：极性（正相键合色谱）；非极性
（反相键合色谱）ODS（十八烷基硅烷键合相）
一、容量分析法（滴定分析法）
将已知浓度的滴定液由滴定管滴加到被测药 物的溶液中，至滴定液与被测药物反应完全 （通过适当方法指示），然后根据滴定液的 浓度和被消耗的体积，按化学计量关系计算 出被测药物的含量
简便，准确，快速，耐用性高 专属性差（适用于主成分含量较高的试样分
析。如化学原料药的含量测定）
氰基； 流动相：甲醇；水；乙腈…（不同配比） 进样量：数ml； 室温：柱温； 检测器：紫外； 色谱图：20min； 系统适用性试验；
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 5.系统适应性试验 四个指标 理论板数 n 分离度 R 重复性（精密度） RSD 2.0% 拖尾因子： T应在0.95-1.05
C.滴定等当点
D.滴定终点
E.滴定误差
答案：D
一、容量分析法（滴定分析法）
滴定分析法
酸碱滴定 氧化还原滴定 配位滴定 沉淀滴定 非水滴定
碘量法
溴量法 铈量法 亚硝酸钠法
一、容量分析法（滴定分析法）
滴定度：每1ml规定浓度的滴定液所相当的被测 药物的质量。通常用毫克（mg）表示。 aA+bB→cC+dD
第五节 分析方法的验证
重复性、中间精密度及重现性 1.重复性：在相同条件下，由一个分析人员测
定所得结果的精密度。
2.中间精密度：在同一个实验室，不同时间由 不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。
3.重现性：在不同实验室由不同分析人员测定 结果的精密度。
第五节 分析方法的验证
（三）专属性 是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料
第四章 药物的含量测定方法与验证
右江民族医学院 药物化学与药物分析教研室
概述
药物定量分析是指准确测定药品有效成分或 指示性成分的含量，是评价药品质量、判断 药物优劣的重要手段
化学分析法：重量分析，滴定分析 仪器分析法：专属性高（分离能力强） 验证内容：八个方面
第一节 定量分析方法的分类与特点
答案：ADE
第五节 分析方法的验证
一、分析方法验证的内容 （一）准确度 该分析方法所得测定结果与真实值或参考值
接近程度。一般用回收率表示。 回收率 =（测定量）/加入量×100%
第五节 分析方法的验证
（二）精密度 在规定的测试条件下，同一个均匀样品，经多次测
定结果之间的接近程度。 表示方法 1. 偏差(d) d = 测得值-平均值=Xi-X 2. 标准偏差（SD） SD=[(∑Xi – X)2/(n-1)]1/2 3. 相对标准差(RSD)也称变异系数(CV) RSD=SD/X ×100%
B.保留时间
C.相对保留值
D.峰高
E.峰面积
答案：DE
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 3.高效液相色谱仪
1）贮液瓶 2）高压输液泵 3）色谱柱（分离系统） 4）检测器（紫外检测器最为常用） 5）数据处理系统
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 4.一般要求 固定相：硅胶；化学键合硅胶；ODS C18、C8、氨基、
二、光谱分Βιβλιοθήκη Baidu法
（二）荧光分析法
某些物质受到光照射时，除吸收某种波长的光 之外还会发射出比原来所吸收的光的波长更长 的光；当激发光停止照射后，这种光线也随之 消失，这种光称为荧光。
从样品池出来的荧光是各方向发射的，在与激 发光光源排成直角的方向测荧光强度可以避免 透射的激发光的干扰。
三、色谱分析法
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC） 2.基本原理 塔板理论；Van Deemter 速率理论 色谱峰：峰高、峰面积→定量 峰位（保留值）→定性 区域宽度（峰宽）→衡量柱效
三、色谱分析法
（一）高效液相色谱法（HPLC）
例题：在气相色谱法中，与含量成正比的是色 谱峰的：
A.保留体积
二、光谱分析法
（一）紫外-可见分光度法 仪器校正和检定（148页） 测定法 （1）在规定波长附近测试几点的A值（±2nm） （2）以A值最大波长为测定波长
注：A值以0.3-0.7为宜
二、光谱分析法
应用 1.对照品比较法： C样＝C对A样/A对 同种物质，同台仪器，同一波长测，故 E、
L相等