小吞噬实验
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(3)掌握好细菌与中性粒细胞的作用时间。
中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。
(4)取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要 求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。
吞 噬 示 意 图
吞噬过程
细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片 染色，即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未 被消化掉的细菌。
检测中性粒细胞吞噬细菌的能力，可作为辅 助判断机体非特异性免疫力的指标之一。
检测指标：
1. 吞噬百分率＝
100个细胞中吞噬有细菌的细胞数 × 100%
中性粒细胞产生伪足包围异物——吞噬体或吞噬泡；
吞噬——呼吸爆发——产生大量过氧化物及超氧化物 等毒性效应分子——杀死吞噬的细菌等异物；
同时，中性粒细胞本身也死亡， 成为脓细胞。
中性粒细胞：
A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用； B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如III型超敏反应），引 起机体免疫病理损伤。
油镜观察
首先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染 色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细
胞胞浆染成淡红色（淡兰色）。
计算吞噬百分率和吞噬指数
实验结果
• 油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡兰色，核 分叶、紫红深染，白葡菌呈兰色。可见 中性粒细胞胞浆内吞噬有很多白葡菌。
注意事项
(1)人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过高过低均 会使其吞噬能力减低。 (2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。
实验方法
(1)仔细消毒后，每个班取5ml静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。
(2)每个组(2~3人)取4滴抗凝血于EP管内，再加入100ul备好的白 色葡萄球菌菌液，充分混匀后，置37℃水浴30min，中途混匀1次。 (3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取50ul“全血-白色葡萄球菌混 合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片推片，制成血涂片。
寿命短.平均数小时
[实验原理]
• 血液中的多形核白细胞是一种小吞噬细胞，其细 胞浆内含有多种酶类，对侵入体内的细菌具有强 大的吞噬和消化功能，是机体非特异性免疫的重 要组成部分。
• 意义：在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超 敏反应和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程， 因此，测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反 映机体的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指 标。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血涂片上 染色1min 再加等量的
PH6.8 PBS与染液混合，染色10~15min
用蒸馏水冲洗
（平持玻片，在一端加水，使染料“漂走” ） 自然干燥
显微镜油镜原理
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数
接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 表示显微镜辨析物体（两端）两点之 间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。
实验一 中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数法
一、实验内容
1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 2. 微量比色测定——实验基本技能练习
二、目的与要求
1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。
2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功 能”试验的原理、方法及用途。
1. 小吞噬细胞
• 来 源： 中性粒细胞 • 存在部位： 血液 、 炎症部位（全身） • 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。 • 功 能：主要吞噬化脓菌 • 反应时间及寿命：反应时间快,数分钟到几小时，
[实验原理]
中性粒细胞——来源于骨髓造血干细胞； 占白细胞总数的60%~70%； 生命周期短，不能分裂，靠“造血”补充； 胞核呈多叶状；胞质内有多种颗粒；
内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁 蛋白、碱性磷酸酶等。
中性粒细胞特有，巨噬细胞没有这种酶， 为中性粒细胞在细胞化学上的标志。
百度文库
中性粒细胞通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，吞 噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物；
100 人吞噬百分率正常参考值：62%~76%
2. 吞噬指数＝
100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 100
人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72
实验材料
(1)显微镜、香柏油、小试管、EP管、载玻片、酒精 棉球、吸管、水浴箱等。
(2)肝素抗凝试管、瑞氏染液、双蒸水。
(3)菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时内汤培养物 ，经Mc Farland比浊法调整浓度至6～9×109/mL， 加热100℃ 15分钟杀死细菌，置4℃保存备用。
• 油镜使用的原理
1. 香柏油的折射率与玻璃接 近，提高了视野的照明度。
2 . 提高了显微镜的分辨率
显微镜油镜的使用方法
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标
本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看 清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的 油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用 擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。
中性粒细胞对细菌的吞噬是一个非常迅速的过程，吞噬5min 时吞噬率达45%，10min时接近80%，20min 即达平台。
(4)取“细菌－全血”涂片时，要混匀后再取；制作血涂片要 求推出尾部，过厚或过薄，均不利观察。
吞 噬 示 意 图
吞噬过程
细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 ——小吞噬实验
将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片 染色，即能观察到被吞噬到中性粒细胞内但还未 被消化掉的细菌。
检测中性粒细胞吞噬细菌的能力，可作为辅 助判断机体非特异性免疫力的指标之一。
检测指标：
1. 吞噬百分率＝
100个细胞中吞噬有细菌的细胞数 × 100%
中性粒细胞产生伪足包围异物——吞噬体或吞噬泡；
吞噬——呼吸爆发——产生大量过氧化物及超氧化物 等毒性效应分子——杀死吞噬的细菌等异物；
同时，中性粒细胞本身也死亡， 成为脓细胞。
中性粒细胞：
A.在抗化脓性细菌感染中起重要防御作用； B.引起感染部位急性炎症反应； C.参与超敏反应（如III型超敏反应），引 起机体免疫病理损伤。
油镜观察
首先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染 色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细
胞胞浆染成淡红色（淡兰色）。
计算吞噬百分率和吞噬指数
实验结果
• 油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡兰色，核 分叶、紫红深染，白葡菌呈兰色。可见 中性粒细胞胞浆内吞噬有很多白葡菌。
注意事项
(1)人类白细胞的吞噬活性在37℃时最好，温度过高过低均 会使其吞噬能力减低。 (2)个体差异、年龄、健康状况的不同，其吞噬能力亦不同。
实验方法
(1)仔细消毒后，每个班取5ml静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。
(2)每个组(2~3人)取4滴抗凝血于EP管内，再加入100ul备好的白 色葡萄球菌菌液，充分混匀后，置37℃水浴30min，中途混匀1次。 (3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取50ul“全血-白色葡萄球菌混 合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片推片，制成血涂片。
寿命短.平均数小时
[实验原理]
• 血液中的多形核白细胞是一种小吞噬细胞，其细 胞浆内含有多种酶类，对侵入体内的细菌具有强 大的吞噬和消化功能，是机体非特异性免疫的重 要组成部分。
• 意义：在某些情况下，小吞噬细胞也参与某些超 敏反应和自身免疫疾病的组织损伤和炎症过程， 因此，测定小吞噬细胞的功能可在一定程度上反 映机体的免疫状态，也可作为判定疗效的一种指 标。
(4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色。
瑞氏染色
瑞氏染液数滴覆盖血涂片上 染色1min 再加等量的
PH6.8 PBS与染液混合，染色10~15min
用蒸馏水冲洗
（平持玻片，在一端加水，使染料“漂走” ） 自然干燥
显微镜油镜原理
显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数
接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 表示显微镜辨析物体（两端）两点之 间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。
实验一 中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数法
一、实验内容
1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 2. 微量比色测定——实验基本技能练习
二、目的与要求
1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。
2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功 能”试验的原理、方法及用途。
1. 小吞噬细胞
• 来 源： 中性粒细胞 • 存在部位： 血液 、 炎症部位（全身） • 功能基础：溶酶体，过氧化物酶及杀菌物质。 • 功 能：主要吞噬化脓菌 • 反应时间及寿命：反应时间快,数分钟到几小时，
[实验原理]
中性粒细胞——来源于骨髓造血干细胞； 占白细胞总数的60%~70%； 生命周期短，不能分裂，靠“造血”补充； 胞核呈多叶状；胞质内有多种颗粒；
内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁 蛋白、碱性磷酸酶等。
中性粒细胞特有，巨噬细胞没有这种酶， 为中性粒细胞在细胞化学上的标志。
百度文库
中性粒细胞通过趋化、调理、吞入和杀菌等步骤，吞 噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物；
100 人吞噬百分率正常参考值：62%~76%
2. 吞噬指数＝
100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 100
人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72
实验材料
(1)显微镜、香柏油、小试管、EP管、载玻片、酒精 棉球、吸管、水浴箱等。
(2)肝素抗凝试管、瑞氏染液、双蒸水。
(3)菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时内汤培养物 ，经Mc Farland比浊法调整浓度至6～9×109/mL， 加热100℃ 15分钟杀死细菌，置4℃保存备用。
• 油镜使用的原理
1. 香柏油的折射率与玻璃接 近，提高了视野的照明度。
2 . 提高了显微镜的分辨率
显微镜油镜的使用方法
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标
本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看 清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的 油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用 擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。