怎样选择色谱柱
气相色谱柱选择的技巧 色谱柱常见问题解决方法
气相色谱柱选择的技巧色谱柱常见问题解决方法气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。
一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪器。
气相色谱柱选择的技巧：一般，初次使用气相色谱仪的伙伴对色谱柱不知怎样合理配置色谱柱，总希望柱子越多越好，盲目购置很多柱子或固定液、担体等，结果有很多闲置造成挥霍。
现在向大家推举一些值得考虑的阅历。
一般准备几个柱子就基本可以解决各类气相色谱分析工作的要求，可优先选择固定液分别为SE—30（或者OV—101）、OV—17、PEG—20M、DEGS、FFAP，的柱子各一个。
对于填充柱，担体可选白色担体、红色担体（包括未酸洗、酸洗、硅烷化）、GDX系列（或者Porapak系列），三种，基本可以解决工作中绝大部分项目。
对柱子长短的选择：由于辨别率与柱长的平方根成正比。
柱子长，则提高辨别率。
一般来说：15m的短柱用于快速分别较简单的样品，也适于快速成分析；30m的色谱柱是常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上成；50m、60m或更长的色谱柱用于分别比较多而杂的样品。
对于口径的选择：柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。
小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。
0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。
分别多而杂样品较好。
0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。
0.53mm：具有仿佛于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是紧要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。
中科国环环境讨论中心专家认为，对于一般用户，可选30米或50米长的毛细管，口径选0.32mm较为便利。
agilent色谱柱的分类与选择
agilent色谱柱的分类与选择
Agilent的色谱柱可以根据其功能和分离机制进行分类。
常见的Agilent色谱柱分类及选择如下：
1. 相对极性柱：这类柱适用于非极性物质或具有较低极性的化合物的分离，如挥发性有机化合物。
常见的相对极性柱包括HP-5，HP-1和HP-35等。
2. 极性柱：这类柱适用于极性化合物的分离，如酸、碱、酮和醇等。
常见的极性柱包括DB-5MS，DB-Wax和DB-17等。
3. 离子交换柱：这类柱通常用于离子分析或离子交换色谱，用于分离离子化合物。
常见的离子交换柱包括IonPac和BioIon等。
4. 手性柱：这类柱用于手性化合物的分离，如药物中的非对映体。
常见的手性柱包括Chiralcel等。
5. 多种机制柱：这类柱结合了多种分离机制，适用于复杂样品的分析。
常见的多种机制柱包括HP-INNOWax和HP-88等。
对于选择Agilent色谱柱，一般需要考虑样品性质，分离需求，分析目标等因素。
同时，还需考虑色谱柱尺寸、填充物类型和分离机制等参数。
在选择时可以咨询
Agilent或其他专业人士，以获得更准确的建议。
液相色谱柱的选择
液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱;正相柱大多以硅胶为柱,或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质,在其表面键合非极性的十八烷基官能团ODS 称为C18柱,其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等;另外还有离子交换柱,GPC柱,聚合物填料柱等;本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定,应用广泛,可使用多种溶剂;但硅胶为基质的填料,使用时一定要注意流动相的PH范围;一般的C18柱PH值范围都在2-8,流动相的PH值小于2时,会导致键合相的水解；当PH 值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解;一旦发生上述情况,色谱柱人口处会塌陷;同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同;如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时,建议选择PH范围大的柱子,例如戴安公司的Acclaim柱PH2-9或Zorbax的PH2-11.5的柱子;2．填料的端基封尾或称封口把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾,可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了,有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了,组分的保留时间重现性就好;如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物,最好选用填料经端基封尾的色谱柱;3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子,Acclaim反相柱填料高纯,金属含量极低,完全封尾;PH2-9范围内兼容,低流失,高柱效;尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱,是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱,具极低的硅羟基活性,能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用;对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形,与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性;下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考;在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行出厂测试所使用的条件是最佳条件,只有这样,测得的结果才有可比性;但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同;1、样品的前处理a、最好使用流动相溶解样品;b、使用预处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质;c、使用0.45μm的过滤膜过滤除去微粒杂质;2、流动相的配制液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分离的目的,因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有一定的溶解能力,保证样品组分不会沉淀在柱中或长时间保留在柱中;b、流动相与样品不产生化学反应c、流动相的黏度要尽量小,以便得到好的分离效果；降低柱压降,延长泵的使用寿命可运用提高温度的方法降低流动相的黏度;d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应;如使用UV检测器,最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制;e、流动相沸点不要太低,否则容易产生气泡,导致实验无法进行;f、在流动相配制好后,一定要进行脱气;除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测,还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用;3、流动相流速的选择因柱效是柱中流动相线性流速的函数,使用不同的流速可得到不同的柱效;对于一根特定的色谱柱,要追求最佳柱效,最好使用最佳流速;对内径为4.6mm的色谱柱,流速一般选择1ml／min,对于内径为4.0mm柱,流速0.8ml／min为佳;当选用最佳流速时,分析时间可能延长;可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间如使用反相柱时,可适当增加甲醇或乙腈的含量;注意：a．含水流动相最好在实验前配制,尤其是夏天使用缓冲溶液作为流动相不要过夜;最好加入叠氮化钠,防止细菌生长;b．流动相要求使用0.45μm滤膜过滤,除去微粒杂质;c．使用HPLC级溶剂配制流动相,使用合适的流动相可延长色谱柱的使用寿命,提高柱性能;三．色谱柱的维护1.色谱柱的平衡反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的;新柱应先使用10－20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱;请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶;每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿",而且您的色谱柱的寿命也会变得更长操作步骤：a.平衡开始时将流速缓慢地提高,用流动相平衡色谱柱直到获得稳定的基线缓冲盐或离子对试剂流速如果较低,则需要较长的时间来平衡b.如果使用的流动相中含有缓冲盐,应注意用纯水"过渡"即每天分析开始前必须先用纯水冲洗30分钟以上再用缓冲盐流动相平衡；分析结束后必须先用纯水冲洗30分钟以上除去缓冲盐之后再用甲醇冲洗30分钟保护柱子;2．色谱柱的再生长期使用的色谱柱,往往柱效会下降柱子的理论塔板数减低;可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生;建议用来冲洗柱子的溶剂体积色谱柱尺寸柱体积所用溶剂的体积125-4mm1.6ml30ml250-4 mm3.2ml60ml250-10mm20ml400ml选择再生方法：极性固定相如Si,NH2,DIOL基色谱填料的再生：正庚烷→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水非极性固定相如反相色谱填料RP－18,RP－8,CN等的再生：水→乙腈→氯仿或异丙醇→乙腈→水注意：a.在对NH2改性的色谱柱进行再生时,由于NH2可能以铵根离子的形式存在,因此应该在水洗后用0.1M 的氨水冲洗,然后再用水冲洗至碱溶液完全流出;b.0.05M稀硫酸可以用来清洗已污染的色谱柱,如果简单的用有机溶剂/水的处理不能够完全洗去硅胶表面吸附的杂质,在水洗后加用0.05M稀硫酸冲洗非常有效;3.色谱柱的维护a．使用预柱保护分析柱硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度b．大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2－7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围c．避免流动相组成及极性的剧烈变化d．流动相使用前必须经脱气和过滤处理e．如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中f．氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀;怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中,分离效果好坏的一个重要指标是色谱填的选择;但是色谱填料的选择范围很宽,因此,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解;一.硅胶基质填料1·正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶Silica以及其他具有极性官能团胺基团,如NH2,APS和氰基团CN,CPS的键合相填料;由于硅胶表面的硅轻基SiOH或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组份的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱;正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正己烷Hexane、氯仿Choroform、二氯甲烷MethyleneCloride等;2,反相色谱反相色谱用的填料常是以硅胶为基质,表面键合有极性相对较弱官能团的键合相;反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水、缓冲掖与甲醇、乙情等的混合物;样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组份最先被冲洗出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留;常用的反相填料有:C18ODS、C8MOS、C4Butyl、C6H,Phenyl等;二·聚合物填料聚合物填料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸醋等,其主要优点是在pH值为1一14均可使用;相对于硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效;现有的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低;三、其它无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途;如,石墨化碳黑正逐渐成为反向色谱柱填料;这种填料的分离不同于硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性;该柱填料一般比烷基键合相硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强;石墨化碳可用于分离某些几何异构体,由于在HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用;氧化铝也可以用于HPLC;氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可以在PH高达12的流动相中使用;但由于氧化铝与碱性化合物的作用也很强,应用范围受到一定限制,所以未能广泛应用;新型色谱氧化锆基质填料也可用于HPLC;商品化的只有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH1-14,温度可达100℃;由于氧化锆填料是最近几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行之中;怎样选择填料粒度目前,商品化的色谱填料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3和5um填料进行;填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压;粒度越小,柱压越大,柱压的增加限制了粒度小于3um的填料应用;在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度,但不是唯一的因素;如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选用更小的粒度的填料是很有用的;3um填料填充柱的柱效比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而,3um的色谱柱的背压却是5um的2倍;与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选用更短的色谱柱,即相同的塔板数或分离能力,但是柱长更短,以缩短分析时间;另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力;。
如何选择合适的色谱柱
如何选择合适的色谱柱选择合适的色谱柱是进行色谱分析的关键之一、下面将从样品特性、目标分析物、色谱类型、颗粒大小、树脂类型和价格等几个方面来介绍如何选择合适的色谱柱。
首先，了解样品的特性对于选择色谱柱非常重要。
需要考虑样品的溶剂极性、稳定性、蒸汽压、分子量、毒性等因素。
不同的样品特性需要使用不同类型的色谱柱来进行分析。
例如，对于挥发性组分的分析，可以选择毛细管气相色谱（GC）柱；对于溶解度较差的非极性化合物的分析，可以选择反相高效液相色谱（RP-HPLC）柱。
其次，需明确目标分析物的特性。
需要了解目标分析物的极性、分子量、疏水性等性质。
根据目标分析物的特性，选择合适的色谱柱。
例如，对于极性有机物的分析，可以选择亲水性的反相柱；对于非极性物质，可以选择亲油性的正向相柱。
再次，要根据色谱类型来选择色谱柱。
目前常用的色谱类型有气相色谱、液相色谱和离子色谱等。
选择合适的色谱柱需要根据具体的分析要求。
例如，气相色谱常用于挥发性或热稳定的化合物的分析，而液相色谱适用于大多数化合物的分离和分析。
然后，注意颗粒大小对于分离效果的影响。
颗粒大小决定了柱的保留能力和分离能力。
粗颗粒的柱具有较高的保留能力，适用于复杂样品的分离，但分离效果较差；而细颗粒的柱保留能力较低，适用于简单样品的分析，分离效果较好。
根据分析要求，选择合适的颗粒大小。
此外，树脂类型也是选择色谱柱的关键。
常用的树脂类型有聚合物、硅胶、碳氢和聚酰亚胺等。
不同的树脂具有不同的亲水性和亲油性，可以根据分析需求选择适合的树脂类型。
例如，对于极性分子的分析，可以选择亲水性树脂，而对于非极性分子的分析，可以选择亲油性树脂。
最后，还需要考虑价格因素。
不同品牌和型号的色谱柱价格有所不同。
需要根据实验室的预算来选择适合的色谱柱。
同时，还要考虑色谱柱的使用寿命和稳定性等因素，选择性价比较高的色谱柱。
综上所述，选择合适的色谱柱需要考虑样品特性、目标分析物、色谱类型、颗粒大小、树脂类型和价格等因素。
正确选购色谱柱需要注意哪些方便
正确选购色谱柱需要注意哪些方便色谱柱是气相色谱、液相色谱等分析仪器的核心部件，其性能直接影响到分析结果的准确性和可靠性。
因此，在选购色谱柱时，需要关注以下几个方面的注意事项：1、确定分析目的和样品类型首先，需要明确分析的目的和样品类型，以便选择合适的色谱柱。
例如，假如需要进行环境监测、食品安全、药物分析等领域的分析，可以选择相应的专用色谱柱；假如需要进行石油、化工、制药等行业的分析，可以选择相应的行业专用色谱柱。
2、选择合适的固定相固定相是色谱柱的核心部分，其性能直接影响到色谱柱的分别效果和稳定性。
常见的固定相有硅胶、氧化铝、聚合物等。
硅胶固定相具有较好的耐高温性和化学稳定性，适用于各种类型的样品分析；氧化铝固定相具有较高的选择性和分别度，适用于多而杂样品的分析；聚合物固定相具有良好的亲水性和选择性，适用于生物样品、食品等亲水性样品的分析。
3、选择合适的柱尺寸和内径色谱柱的尺寸和内径直接影响到色谱柱的分别效果和分析速度。
一般来说，柱尺寸越大，分别效果越好，但分析时间越长；柱内径越小，分别效果越好，但分析时间越长。
因此，需要依据实际需求选择合适的柱尺寸和内径。
4、选择合适的柱温柱温对色谱柱的分别效果和分析速度有很大影响。
一般来说，柱温越高，分别效果越好，但分析时间越长；柱温越低，分别效果越差，但分析时间越短。
因此，需要依据实际需求选择合适的柱温。
同时，还需要考虑色谱柱的热稳定性，以确保在高温下仍能保持良好的分别效果。
5、选择合适的流动相流动相是推动样品在色谱柱中移动的动力，其性能直接影响到色谱柱的分别效果和分析速度。
常见的流动相应有甲醇、乙腈、水等。
在选择流动相时，需要考虑其与固定相的兼容性、极性、粘度等因素，以确保在实际应用中能够获得良好的分别效果。
6、考虑色谱柱的品牌和价格市场上有很多不同品牌和型号的色谱柱，价格差别较大。
在选择色谱柱时，需要综合考虑品牌、价格、性能等因素，选择性价比较高的产品。
如何选择合适的气相色谱柱？
如何选择合适的气相色谱柱？选择合适的气相色谱柱需要考虑以下几个关键因素：1. 固定相类型- 非极性柱：适用于分析非极性和弱极性化合物，如聚二甲基硅氧烷（PDMS）柱。
- 极性柱：适合分离极性化合物，如聚乙二醇（PEG）柱。
- 中等极性柱：用于分析极性适中的物质，如氰丙基苯基聚硅氧烷柱。
2. 柱长- 短柱（10 - 15 米）：适用于快速分析简单混合物，分离效果相对较弱。
- 中长柱（25 - 30 米）：能提供较好的分离效果，适用于中等复杂的混合物。
- 长柱（50 - 60 米）：对于复杂混合物或需要高分离度的情况，如同分异构体的分离。
3. 内径- 小内径（0.1 - 0.25 毫米）：适用于样品量少、需要高灵敏度和高分离度的分析。
- 常规内径（0.25 - 0.32 毫米）：应用广泛，能满足大多数常规分析需求。
- 大内径（0.53 毫米）：适用于大体积进样或分析浓度较高的样品。
4. 膜厚- 薄液膜（0.1 - 0.25 微米）：适合分析低沸点、小分子化合物，出峰快。
- 厚液膜（0.5 - 5 微米）：用于保留挥发性较差的化合物，提高检测灵敏度。
5. 样品性质- 了解样品的极性、沸点范围、分子量等。
极性样品选择极性柱，高沸点样品选择厚液膜柱。
6. 分析目的- 定性分析：更注重分离度，可能选择长柱和膜厚适中的柱子。
- 定量分析：考虑灵敏度和重复性，选择与样品匹配的柱子。
7. 温度限制- 确保所选柱子能承受分析过程中的最高和最低温度。
8. 预算- 不同类型和规格的柱子价格有所差异，需根据预算进行选择。
例如，分析挥发性有机化合物（VOCs）混合物时，如果需要快速分离且样品较简单，可能会选择短的、小内径、薄液膜的非极性柱；而分析复杂的天然产物提取物时，可能需要长的、常规内径、厚液膜的中等极性柱。
综合考虑以上因素，可以选择到适合具体分析需求的气相色谱柱。
色谱柱分类与选择-内部培训资料
目 录
• 色谱柱的分类 • 选择色谱柱的考虑因素 • 常见色谱柱品牌与特点 • 色谱柱使用与维护 • 色谱柱的常见问题与解决方案
01 色谱柱的分类
按固定相分类
01
02
03
04
硅胶柱
硅胶是常用的色谱柱固定相， 具有高纯度、高活性和高稳定 性，广泛用于各种分离要求。
氧化铝柱
2. 更换填料
如果色谱柱的填料塌陷或堵塞严重，可能需要更换新的填 料。
3. 减小进样量
减少进样量可以减少强保留物质在色谱柱上的积累。
4. 增加流动相的流速
提高流动相的流速可以减少填料塌陷和颗粒堵塞的可能性 。
分离度下降
总结词
分离度下降通常由色谱柱老化、流动相不匹配 或样品中的干扰物质引起。
01
1. 更换色谱柱
1. 更换填料
如果色谱柱的填料塌陷或堵塞严重，可能需要更换新的填 料。
2. 调整流动相
通过调整流动相的组成或比例，可以提高柱效。
3. 清洁色谱柱
使用适当的溶剂冲洗色谱柱，以清除堵塞的颗粒和杂质。
4. 控制温度
在适当的范围内控制色谱柱温度可以提高柱效。
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2. 调整流动相
通过调整流动相的组成或比例，可以改善峰形。
3. 检查检测器设置
确保检测器设置正确，以获得良好的峰形。
4. 更换色谱柱
如果色谱柱性能不稳定，可能需要更换新的色谱柱。
柱效降低
总结词
柱效降低通常由填料塌陷、颗粒堵塞或流动相不匹配引起 。
详细描述
柱效是色谱柱的重要参数，它反映了目标物在色谱柱上的 保留能力和分离效果。为了解决柱效降低的问题，可以采 取以下措施
高效液相色谱柱的选择
高效液相色谱柱的选择液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障的排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。
一般的C18柱PH值范围都在2~8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。
2．填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。
PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。
尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O 链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。
（下图是Acclaim极性封尾C16柱和市售极性封尾一流色谱柱分离酸性化合物谱图的比较）二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，最好进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
色谱柱的选择技巧与原则
色谱柱选择
参照标准
各种担体，名目繁多。
在常用硅藻土担体中：
红色担体（如6201、201），可用于非极性或弱极性物质的分离。
白色担体（如101）可用于极性物质或碱性物质。
釉化红色担体（如301）可用于中等极性物质。
硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。
分离酸性物质，如酚类，要用酸洗处理的担体。
分离碱性物质，如乙醇胺，要用碱洗处理的担体。
有些特殊的情况下要用特殊的担体，如氟担体分离异氰酸酯类。
但是在普通的常量分析中，对担体可以不必过份讲究，甚至如耐火砖粉粒，玻璃珠砂和海沙也可以使用。
气相色谱柱的选择方法色谱柱是如何工作的
气相色谱柱的选择方法色谱柱是如何工作的气相色谱柱的分别效果紧要取决于其固定相，柱长度，柱内径,液膜厚度这几个因素，从原理上讲，这几个因素相同的柱子，其分别效果是完全一样的。
1）柱长度的选择分气相色谱柱的分别效果紧要取决于其固定相，柱长度，柱内径，液膜厚度这几个因素，从原理上讲，这几个因素相同的柱子，其分别效果是完全一样的。
1）柱长度的选择辨别率与柱长的平方根成正比。
在其他条件不变的情况下，为取得加倍的辨别率需有4倍的柱长。
较短的柱子适于较简单的样品，尤其是由那些在结构、极性和挥发性上相差较大的组分构成的样品。
一般来说：15m的短柱用于快速分别较简单的样品，也适于扫描分析；30m的色谱柱是常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上完成；50m、60m或更长的色谱柱用于分别比较多而杂的样品。
应当注意，柱长加添分析时间也加添。
2）柱内径的选择柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。
小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。
0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。
分别多而杂样品较好。
O.32mm：柱效稍低于O.25mm的色谱柱，但柱容量约高6096。
0.53mm：具有仿佛于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是紧要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。
3）液膜厚度的选择液膜厚度影响柱子的保留特性和柱容量。
厚度加添，保留也加添。
O.1→2m：薄液膜厚度的毛细管柱比厚液膜的毛细管柱洗脱组分快，所需柱温度低，且高温下柱流失较小，适用高沸点的化合物的分析。
0.25〜0.5m：常用的液膜厚度。
厚液膜：对分析低沸点的化合物较为有利。
4）固定相的选择不同的固定相对不同的分析物的影响不同，依据相像相溶原理,性质越相近，固定相对其的流动阻力越大，其保留时间越长.色谱柱就是通过这个原理将不同性质的混合物相互分开的。
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色谱柱的分类与选择
色谱柱的分类与选择色谱柱是色谱仪器中最为重要的部分，它能够将被测物质分离、纯化、鉴定。
而色谱柱的分类与选择也会影响色谱仪器的精准性与效率。
一般来说，色谱柱可以分为活性柱、吸附柱、固相提取柱和超声波分离柱四大类。
活性柱：活性柱是最常用的一种色谱柱，也叫作有机柱，它以有机亲水性的润湿剂为填充物，如：C18、SiO2等。
活性柱的填充物表面在水中具有正电荷，能够将非电荷的水溶性物质吸附，使其分离出来。
吸附柱：吸附柱是活性柱的衍生品，它以无机粒子或有机亲水性润湿剂为填充物。
与活性柱相比，吸附柱的填充物表面不具有电荷，而是通过“吸附”的原理将有机溶液中的物质进行分离。
吸附柱可以用来分离非电荷的水溶性物质，也可以用来分离有机物质。
固相提取柱：固相提取柱是一种新型的色谱柱，它采用固体萃取剂作为填充物，它能够将有机物质从固态物质中分离出来，如石油类、脂肪类、树脂类、植物油类等。
超声波分离柱：超声波分离柱是最新开发的一种色谱柱，它利用超声波的能量进行物质的分离，是一种高效的色谱技术。
一般来说，不同的色谱柱都有各自的特点，根据实际情况，应根据所测物质的性质和分离难度，选择合适的色谱柱。
首先，应根据被测物质的性质，确定所需要的类型，如果是有机物质，则应选择活性柱或者吸附柱；如果是固体物质，则可以采用固相提取柱；如果是水溶性物质，可以采用超声波分离柱。
其次，应根据所测物质的分离难度，选择合适的色谱柱。
对于有机物质，可以采用活性柱或者吸附柱，但在活性柱和吸附柱之间，应根据所测物质的分离难度，选择合适的色谱柱，如果分离难度较高，则应采用吸附柱，如果分离难度较低，则可以采用活性柱。
最后，在选择色谱柱时，应注意其尺寸、粒径、表面积、抗氧化能力等方面，以保证色谱柱的使用性能。
总之，色谱柱的分类与选择是影响色谱仪器的精准性与效率的重要因素，应根据所测物质的性质与分离难度，选择合适的色谱柱，并在选择时，注意色谱柱的尺寸、粒径、表面积、抗氧化能力等方面，以保证色谱柱的使用性能。
液相色谱柱的选择
液相色谱柱的选择Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998液相色谱柱的选择、使用、维护和常见故障及排除液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。
正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合-CN,-NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料主要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。
另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。
本文重点介绍反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1．柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。
但硅胶为基质的填料，使用时一定要注意流动相的PH范围。
一般的C18柱PH值范围都在2-8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；经常使用缓冲液固定相要降解。
一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。
同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。
如果流动相PH较高或经常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH 2-9或Zorbax的PH 2-11. 5的柱子。
2．填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基采用封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分离；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。
如果待分析的样品属酸性或碱性的化合物，最好选用填料经端基封尾的色谱柱。
3．戴安公司Acclaim柱子介绍—极性封尾C16固定相柱戴安公司有28种类型的柱子，Acclaim反相柱填料高纯，金属含量极低，完全封尾。
PH 2-9范围内兼容，低流失，高柱效。
尤其是2003年推出的Acclaim极性封尾C16柱，是最先商品化的磺酰氨-O链接键的色谱柱，具极低的硅羟基活性，能在极性溶剂甚至100%水的条件下长期使用。
对酸性和碱性化合物有极为尖锐的好的色谱峰形，与现有的一流色谱柱相比有更好的立体选择性。
安捷伦气相色谱柱选择指南
安捷伦气相色谱柱选择指南安捷伦是一家领先的科学仪器制造商，其生产的气相色谱柱质量优异，被广泛应用于化学、药学、环境科学等领域。
选择合适的气相色谱柱对于确保分析结果的准确性和可靠性至关重要。
本文将从三个方面为您介绍安捷伦气相色谱柱的选择指南。
一、样品特性在选择气相色谱柱之前，首先需要了解待分析样品的特性。
常见的样品特性包括：挥发性、极性、化学稳定性等。
根据样品的挥发性，可以选择非极性柱或极性柱；根据样品的极性，可以选择相应极性柱；根据样品的化学稳定性，可以选择耐化合物腐蚀的柱材。
在目标分析物与其他杂质相对较少的情况下，可以选择通用柱进行分析。
如果样品中存在复杂的混合物，可以考虑选择具有更高分辨率和选择性的专用柱。
二、应用领域不同的应用领域对气相色谱柱的要求有所不同。
安捷伦提供了多个系列的气相色谱柱，包括PDMS、PLOT、DB、HT、HP等系列。
PDMS系列适用于挥发性化合物的分析，如石油化工、环境科学等领域；PLOT系列适用于分析气体或液体样品中的极性和非极性化合物，如食品、饮料、环境空气等领域；DB系列适用于一般样品的分析，具有较好的分辨率和选择性；HT系列适用于高温分析，具有优异的耐温性能；HP系列适用于高压气相色谱，适用于复杂样品的分析。
选择适合应用领域的柱系列可以提高分析效率和准确性。
三、操作条件在选择安捷伦气相色谱柱时，还需要考虑操作条件。
常见的操作条件包括柱温、流速、载气选择等。
柱温对于分离效果和分析时间具有重要影响。
一般情况下，分析温度应保持在柱的适用温度范围内，过高或过低的柱温可能导致柱效变差。
流速在一定范围内可以影响分离效果和分析时间。
在选择载气时，需要考虑其惰性和适用范围。
通常使用的载气有氢气、氦气和氮气，其中氢气具有更高的分离效果，但相对较危险，氮气常用于常规分析。
总结来说，选择适合的气相色谱柱需要根据样品特性、应用领域和操作条件来综合考虑。
安捷伦提供了多个系列的气相色谱柱，以满足不同需求。
选择气相色谱柱要考虑的性能 色谱柱操作规程
选择气相色谱柱要考虑的性能色谱柱操作规程气相色谱柱除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数，是一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪气相色谱柱除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数，是一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪器。
广泛应用于石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面。
选择气相色谱柱时要考虑到以下性能：1、柱长气相色谱柱柱长会影响到柱效、保留（分析时间）和载气压力。
假如不知道较佳长度，优先使用25—30米长的色谱柱；10—15米的色谱柱特别适用于分别含有很简单分别溶质的样品或含溶质较少的样品；50—60米长的色谱柱适合分别含有很多组分的多而杂样品，但是长的色谱柱的分析时间较长、费用也较高。
2、内径0.15和0.18mm内径的色谱柱特别适用于泵容量低的GC/MS系统。
内径较小的色谱柱具有的柱容量最小，并需要最高的柱头压；当需要较高的样品容量时，使用0.32mm内径的色谱柱。
与0.25mm内径的色谱柱相比，它们对于不分流进样或大体积（>2？L）进样时早流出的溶质有更佳的分别度；只有在仪器配备大口径直接进样器并需要较高的柱效时，才使用0.45mm内径的色谱柱。
特别适用于高载气流速的情况，比如吹扫—捕集、顶空进样器和阀进样的应用。
3、膜厚色谱柱液膜厚度影响保留、分别度、流失、惰性和柱容量。
0.18—0.32mm内径的色谱柱平均或标准膜厚为0.18—0.25？m，可用于大多数分析；0.45—0.53mm内径的色谱柱平均或标准膜厚为0.8—1.5？m薄液膜色谱柱用于降低高沸点、高分子量溶质的保留（如，类固醇、甘油三酯）。
厚液膜色谱柱惰性更好，柱容量更大，用于保留和分别挥发性溶质（如，轻质溶剂、气体）。
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液相色谱柱选择方法
液相色谱柱选择方法一、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的简单思路1.确定分离目的确定你的应用是否要求高分离度、短分析时间、高灵敏度、长柱寿命，低的操纵本钱等等。
2.评估分析物的化学性质评估分析物的化学性质..诸如化学结构、溶解性、稳定性等等。
3.选择合适的色谱柱了解色谱填料的物理和化学性质。
二、液相色谱柱选择方法|液相色谱柱选择的条件A填料基质1.硅胶基质：纯度高本钱低，强度大，化学修饰轻易，但pH值范围有限。
大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定，但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
2.聚合物基质：应用pH值范围宽，温度稳定(高温可以达到80度以上)，机械强度小。
B颗粒外形大多现代HPLC填料都是球形颗粒，但有时是不规则的颗粒。
球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。
C颗粒粒径粒径越小柱效越高、分离度越高，但同时会导致较高柱压降。
选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。
D含碳量含碳量指的是硅胶表面键合相的比例，与比表面积和键合覆盖度等有关。
高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间，用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性，用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。
一般C18的含碳量在7-19%不等。
E孔径和比表面积HPLC吸附介质是多孔的颗粒，尽大多数的反应表面于孔内。
因此，分子必须进进孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。
孔径小比表面积大，反之亦然。
比表面积大，增加样品与键合相之间的反应，增加保存,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小，平衡时间快，适合梯度分析。
F孔容和机械强度孔容，又称“孔体积”。
指单位颗粒的空隙体积大小。
它能很好的反应填料的机械强度。
孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。
如何选用适合的色谱柱
在气象色谱法分析中，对于不同性质的样品，如何选用适合的色谱柱在气象色谱法分析中，对于不同性质的样品首先考虑的是选择什么样的检测器，其次才考虑选择什么样的色谱柱。
一、气相色谱检测器的分类和工作原理及应用范围：通用型检测器：对绝大多数物质够有响应；选择型检测器：只对某些物质有响应；对其它物质无响应或很小。
根据检测器的输出信号与组分含量间的关系不同，可分为：浓度型检测器：测量载气中组分浓度的瞬间变化，检测器的响应值与组分在载气中的浓度成正比，与单位时间内组分进入检测器的质量无关。
质量型检测器：测量载气中某组分进入检测器的质量流速变化，即检测器的响应值与单位时间内进人检测器某组分的质量成正比目前已有几十种检测器，其中最常用的是热导池检测器、电子捕获检测器（浓度型）；火焰离子化检测器、火焰光度检测器（质量型）和氮磷检测器等。
二、色谱柱的分类HP-1－二甲基聚硅氧烷柱说明：这是最常用的非极性键合固定相，HP-1（二甲基聚硅氧烷），具有极好的热稳定性并且在高温下流失很小，具有低的检测限相似的固定相：DB-1,Rtx-1,SPB-1,CP Sil 5CB,MDN-1,DB-1h.t.,AT-1 007-1 恒温/程序升温温度范围：-60至325/350℃,-60至300/320℃ 0.53内径，-60至260/280℃>2.0mm液膜应用：胺类、烃类、农药、多氯联苯、酚类、含硫化合物HP-1 25m, 0.20mm, 0.33um HP-1 30m, 0.32mm, 0.25umHP-1 15m, 0.25mm, 0.25um HP-1 30m, 0.32mm, 1.0umHP-1 30m, 0.25mm, 0.25um HP-1 60m, 0.32mm, 0.25umHP-1 60m, 0.25mm, 0.25um HP-1 15m, 0.53mm, 1.5umHP-1 30m, 0.53mm, 2.65umHP-35-二苯基-65%-二甲基硅氧烷共聚物说明：HP-35柱是用苯基取代甲基的聚硅氧烷固定相柱。
怎样选择色谱柱
怎样选择色谱柱现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。
但是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团(NH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。
常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。
二、聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～14均可使用。
相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
三、其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。
由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的用途。
如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。
这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。
氧化铝也可用于HPLC，氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。
色谱柱规格的选择
要选择一根合适的商用毛细管柱，主要需要考虑以下几个因素：固定相、内径、柱长、膜厚。
下面分别就这些因素加以讨论。
1、固定相色谱理论上讲，选择固定相首选遵循相似性原则，即：用非极性固定相分析非极性物质，用极性固定相分析极性物质，用含芳香基团的固定相分析芳香族化合物。
在填充柱时代，这个想法是非常正确的，因为那个时候，分离度是首先需要把握的关键因素，分不开，就没办法想其它。
它的理由在于塔板理论的推论，即：组分在固定相中有越大的溶解度，同样的溶解度差异就会产生越大的分离度。
但是在毛细管色谱时代，分离度不再始终是分析的首选问题。
毛细管具有几十万块塔板，如此大的柱效率，以至于不再需要充分考虑分离问题了。
这个时候，样品兼容性、使用温度、稳定性、柱流失情况等，都可能成为选择的主要理由。
例如分析甲醇乙醇丙醇等低级醇类，正常应选择wax类高极性色谱柱。
但是在杂质较少的情况下，选择DB-1这样的非极性柱具有更高的灵活性和使用寿命。
具体选择主要依据以下规则：1）、因为非极性毛细管柱具有明显的稳定性、高使用温度、良好的色谱峰型等有利因素，因此易分离物质应首先选用极性小的色谱柱。
2）、分析氢键型物质用氢键型PEG柱更佳。
3）、轻烃或永久气体用Plot柱更佳。
4）、高苯基固定相对芳香族物质保留能力更强。
但是分析二甲苯等芳烃异构体，首选Wax类强极性色谱柱。
2、内径毛细管柱理论塔板高度与内径成正比。
因此相同长度的毛细管，内径越小柱效率越高。
但内径越小，通常意味着柱容量的减小，在分析低含量组分时，对检测器灵敏度和进样口分流能力的要求越高。
因此在选择内经的时候，首先考虑的是样品分析难点在于分离还是检测。
对于分离困难的样品，首选较小口径的色谱柱；对于含量过低检测困难的样品，首选较大口径的色谱柱。
在没有分析难点的情况下，选择小口径毛细管柱可以缩短柱长，减小分析时间。
下面一张谱图，可以看到不同口径毛细管柱的分离效果。
下面一张表格，是不同口径毛细管柱理论塔板数的参考数据。
何选择适合的色谱柱
何选择适合的色谱柱何选择适合的色谱柱选择色谱柱时需要首先考虑的是分离规模1、根据分离规模确定色谱柱大致的规格表1按分离规模分类的高效液相色谱柱微型柱毛细管柱纳米柱柱径/mm>105～102～50.8～2.00.05～0.52、从分析物的物理化学性质抓起，找到大致的色谱柱类型选柱前应当详尽掌控分析物的分子量（或分子量范围）、溶解性、与否离解等信息，然后根据这些性质找出最合适的色谱柱类型。
表2液相色谱分离模式的选择量溶解性拆分模式色谱柱附注溶于正己正相吸附色呋喃gpcsilica2000正相键合色氰基柱、氨基柱谱溶于甲醇/水c18、c8、ph或plrp(反填料孔径通反相色谱常为100å二者聚合物色谱柱)非离子型反相色谱c18、c8、ph或plrp水溶性离子遏制色c18、c8、ph或plrp五音离子型离子对色谱c18、c8、ph或plrp色谱法色ax、cx脂溶性gpcgfc反华相色谱c18、c8、c4或plrp填料孔径通在反相色谱c18、c8、c4或plrp常为300å色谱法ax、cx大于蛋白2000水溶性多肽、质离子型对于色谱柱类型的选择有一些特殊说明：1.反相柱是使用最广泛的色谱柱，而ods又是反相柱中使用最广泛的，据统计目前使用的色谱柱中超过一半是ods柱；由于ods柱的技术最成熟，所以具有高性能、长寿命等特点，所以选择时优先选择ods柱；2.对于反相柱，通常来讲，碳链越长，对化合物的保留越强，分离效果也越好，但选择短碳链的键合相可以节约分析时间；3.反华相色谱柱可以对非极性、强极性、中等极性以及部分弱极性化合物展开拆分，就是应用领域最广泛的色谱柱；反相色谱柱以“分配促进作用”留存分析物，主要以分析物在两看中的溶解性展开挑选，有时无法对同分异构体和结构类似物展开拆分；4.部分离解性较差的化合物，可以通过向流动二者重新加入酸、碱、盐的形式并使分子以某种平衡并且留存性弱的形式存有，然后用反相柱展开分析，这种分析方法包含“离子遏制色谱”和“离子对色谱”；5.plrp就是以聚苯乙烯-二乙烯基苯为填料的色谱柱，为反相柱，奏水性与c18相似，但不具备次级相互作用，分析碱性化合物时不能出现甩尾。
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怎样选择色谱柱
现代高效液相色谱中，分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择。
但
是色谱填料的选择范围很宽，要做合适的选择，必须对此有一定的认识和了解。
1、正相色谱
正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica），以及其他具有极性官能团，如胺基团
(NH2,APS)和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他团的极性较强，因此，分离的次序是依据样品
中的各组份的极性大小，即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱。
正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如：正乙烷（Hexane）,氯仿（Chloroform）,二氯甲烷（Methylene Chloride）等。
2、反相色谱
反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。
反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。
样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有
更强的保留。
常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B）、C6H5（Phenyl）等。
二、聚合物填料
聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等，其主要优点是在PH值为1～
14均可使用。
相对与硅胶基质的C18填料，这类填料具有更强的疏水性；大孔的聚合物填料对蛋白
质等样品的分离非常有效。
现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料，色谱柱柱效较低。
三、其他无机填料
其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化。
由于其特殊的性质，一般仅限于特殊的
用途。
如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料。
这种填料的分离不同与硅胶基质烷基
键合相，石墨化碳的表面即是保留的基础，不再需其它的表面改性，该柱填料一般比烷基
键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强，石墨化碳可用于分离某些几何导构体，又由
于HPLC流动相中不会被溶解，这类柱可在任何PH与温度下使用。
氧化铝也可用于HPLC，
氧化铝微粒刚性强，可制成稳定的色谱柱柱床，其优点是可在PH高达12的流动相中使用。
但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强，应用范围受到一定的限制，所以未能广泛应用，
新型氧化锆填料也可用于HPLC，商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱，应
用PH范围1～14，温度可达100℃。
由于氧化锆填料几年才开始研究，加之面临的实验难
度，其重要用途与优势尚在进行中。
怎样选择填料粒度
目前，商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售，而目前分析分离主要用3um、
5um和10um填料，填料的粒度主要影响填充柱的两个参数，即柱效和背压。
粒度越小，填
充柱的柱效越高；小于3um的填料应用，在相同选择性条件下，提高柱效可提高分离度，
但不是唯一的因素。
如果固定相选择是正确，但是分离度不够，那么选择更小粒度的填料
是很有用的，3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%；然而，
3um的色相谱的背压却是5um的2倍。
与此同时，柱效提高意味着在相同条件下可以选择更
短的色谱柱，以缩短分析时间，另外，可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使
用温度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色谱柱的压力。
一、如何保证良好的柱性能与柱寿命
◆认证阅读色谱柱使用说明书；
◆使用填充良好的色谱柱；
◆尽量减少压力波动，避免机械及热冲击；
◆使用保护柱及在线过滤器；
◆经常以强溶剂冲洗色谱柱；
◆充分过滤样品及流动相，尽量避免杂质微粒与强保留成分；
◆用稳定的固定相（C18最稳定）；
◆在中等PH值操作（6~8），用有机缓冲溶液；
◆色谱柱使用温度最好小于40℃；
◆硅胶基质的的色谱柱，应保持流动相的PH值范围在3.0~8.0；
◆在水流动相与缓冲溶液中加200ppm的叠氮钠；
◆流动相中含有缓冲溶液，应注意应95∶5的水及有机溶剂过渡，有机溶剂不能低于5%；
◆过夜或贮存时，冲洗掉盐和缓冲液，用纯有机溶剂流动相保存（乙晴最好）。
HPLC固定相及应用范围
二、如何解决色谱柱使用过程中出现的问题
1.保留值与分离度重现性不好原因分析
1.色谱柱本身填装问题，筛板堵塞或填料塌陷；
2.柱头有污染；
3样品超载；
4样品溶剂不合适；
5.柱外效应；
6化学或二次保留（硅羟基）效应；
7缓冲容量不足或不合适；
8重金属污染。
3.如何解决峰形拖尾的问题
A．与化学有关的拖尾问题
1．流动相中，加入30mM的三乙胺（用与碱性化合物）或醋酸胺（用与酸性化合物），未
知化合物加醋酸三乙胺；
2．如仍然拖尾，将三乙胺换为二甲基辛胺（或醋酸二甲基辛胺）；
3．降低进样量至<1ug。
B．与色谱柱有关的拖尾问题
1．如柱头处有强保留的样品组分积聚，反相柱可用20倍柱体积的96%的二碌甲烷与4%甲
醇，加1%氢氧化铵混合液冲洗，正向柱可用甲醇冲洗。
2．使用保护柱
C．与HPLC 系统有关的峰拖尾和峰加宽
1．进样体积过大，（通常≤25uL）；
2．进样阀与色谱柱及检测器之间的管路体积过大（最佳连接管应<20cm，内径为0.007″）；
3．检测器流通池的体积过大。
4．如何储存色谱柱
1．防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200ppm的叠氮钠以抑制细菌成长（一定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。
2．尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴最好）中，避免在缓冲溶液中保存。
3．使用缓冲溶液后的色谱柱，应用15～20倍柱体积的不含缓冲剂的同种水—有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。
4．避免用纯净水冲洗键合致密的C18柱。
5．将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。
如何选择保护柱
怎样选择保护柱，但又不能影响分离分析？这是色谱工作者经常提出的一个问题。
通常，在选择保护柱之前首先要考虑的是样品是否清洁。
对于大部分
分析工作者来说，一只1cm长的保护柱，那么就应选择2cm或3cm长的保护柱。
保护柱越长，自然所装填的色谱填料就越多，则其越能避免污染物进入分析色谱柱的机会。
当然，随着保护柱的长度加长，样品的保留时间会比使用短保护柱长。
一般来说，保护柱的内径与分析色谱柱的内径相同或相当即可。
保护柱的填料装填方式也很重要。
目前有薄膜装填法的保护柱，使用过程很简单方便，而且可以在实验室中进行干装。
但是，其最大的缺点是不经济，特别是针对中国的具体情况，一次性使用相对费用较高。
另外，薄膜装填法的保护柱所装填的色谱填料有限，只能提供有限的保护作用；不过也因为所装填的色谱料较少，保护柱的长度也较短，所以对分析样品的保留时间的影响也很小。
另一种保护柱结构其实质是缩短了的色谱分析拄，设计方式上有直连式、手紧式或整体式。
整体式设计是由色谱的生产厂商直接安装在色谱分析柱上的，必须与色谱分析柱一同订货，可以非常方便地使用，但不能够被修改。
直连式结构设计可在任何时候有色谱工作者来安装连接，可以与任何品牌的色谱分析柱连接使用，而且还可以根据样品的相关情况选择不同的保护柱长度。
手上紧即可。
另外从保护柱结构又分为是否可以更换保护柱柱芯。
可以降低保护柱的使用成本。
大多数人是根据色谱分析柱的填料选择保护柱的填料，正常情况下可以选择与分析色谱柱一样的色谱填料。
但是，根据实际的分析工作，也可不必与分析色谱柱的填料完全相匹配。
对于选择保护柱的原则是：在满足分析分离要求的前提条件下，尽可能的选择较短的保护柱结构，尽可能选择对分离样品小一些保留性的填料。