反相高效液相色谱法测定食品中水溶性维生素的含量

反相高效液相色谱法测定食品中水溶性维

生素的含量

分析洲第16卷第3期1997.525

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反相高效液相色谱法测定食品中

水溶性维生素的含量

李来生张江华功午

(南昌大学应用化学研究所南昌330047j

摘要采坍反相色l蒋时洲宜传?溶性维生求(vtir_]c,,Bl,B2剜Bt2的古培.PC8一IO/S2504【4.0

25010)牡.0】I..艘铵一l_盹蒲漩(pH:45,青04%己胺)+甲醇(75+25)为流曲丰日.流速1

nalJminuY2_54呲I】l12…l1_j瑚r岛好汁离.己酰苯胺为内标物.苹果及强化奶粉中维生索平均收率井别为

925f)%一I(∞%干Ⅱ9500%～】∞80%.该法拇怍简便,迅谜可靠,测试费用低一

业=

水溶性堆生素是维持凡体正常生理代谢的一类重要化台物.有关其测定方j击较多,其中有}硼Lc法小1

报道但个别检测为主,食品中系列测定方法偏少,现在普遍栗用的离子对色谱法需耗鞍贵的己烷磺酸盐等

离子对试剂,且对色谱柱和高压泵甫…定的腐蚀作用,

本文采用选扦性较高的c8吲定棚,价格便宜的甲醇一水为流动栩.通过改变pH值等色谱条件,短时间内实

现了上述6种维生素的分离浚法平衡时间短,测定迅速,实用性强.

1实验材料与方法

11主要仪器与试剂

日本岛津I￡一6A液相色谱仪,酸度计等

甲醇(AR)用前重蒸次:维生素对照品均符中国药典(1990版)规定;淀粉酶(杭l州大学生物制品厂

产):其它试剂均为分析纯

果蔬及强化奶粉样品购于集贸市场.

1.2色谱条件

色谱拄:PC8—10/s25O4(40『¨mx2501111"131,日本岛津产;流动相:0.1mol/L甲酸铵一甲酸(DH=4.5,舍o.4%

二己胺)+甲醇(75+25),1tv,]g'mJn;柱温3【);【254nm:【)04AUFS.

1.3标准液配镧c避光操作)

准确称取下靖(mg)的标准品:VitaminC13帅,Vitamin12.25,Vitanfin20.15,VitaminBL8.65

Vha~nB211.15,Vitamin111,20,己酰苯胺6

用0.1mol/LHCI溶解并定容至

50ml-作储备被,VitaminC改用

3%偏磷酸溶解:依次等鼙移取

各组分储备ji蔓5,10,20,1'00,500,

10(30于10mL棕色餐瓶中,用

水定容(每个容量瓶预先分别加

内标储备液1'00l正),得六组标准

液,分别进样测定标准品及强

化奶粉样品色谱圈见图1和圈

2c

1.4样品前处理

05l00,

nt~dtt

圉j标样色谱圈圈2强化奶粉色谱图

1~tattmaC;2,VilaminB5;3Vilam/n;4.viIBj;

5Vitatn~n;6内杯;7.~PaminB12.

分析测试第16卷第3期(1997)

14.1果蔬称取样品lO～15E,加1mL内标液投40mL偏磷酸一醋酸混合液(含3%偏磷酸,8%醋酸),避光

捣碎匀浆30rain,用NaOH溶液小心阔IH=4.5,冷至5O℃以下,加淀粉酶2OOmg混匀,45～卯℃温热45mln离

心,取清液用水定容至1D0mL,采用超滤膜(O22,美国密滤膜公司产)除蛋白质后进样.

14.2强化奶粉c游离维生素)取奶粉8g加水加"lII,内标1mL及偏磷酸一醋酸混合渡lOI11L,搅拌10min

加5%三氟己酸2on1ll振荡后静置.离心,清液用NaOH溶液小心两I=45,用水定容至100mL,用超滤膜两

次除蛋白质后进样.

15回收率试验

精密称取等帚样品两份.其中一份添加已知量标准品,按样品处理后进样,并重复测定,根据差值计算回收

率和相对标准偏差.参见表3.

21线性回归方程

2结果与讨论

以组分对内标的z(浓度比)l垃(面积比)作圈,线性回归方程如表1.

表1线性回归方程

*以2倍于噪音推算最低检出浓度(进样10IL].

2.2部分果蔬及强化奶粉(游离态】维生素含量

结果见表2:

表2样品测试结果(tt=3,×10)

第16卷第3期(1997)分析测试

24讨论

241固定相爱流动相的选择水溶性维生素的水溶液是离子段分子的混台体系.实验发现c8柱对其分离

有较高的选择性.C18拄烷链长,憎水性强,对VitamanC,等小分子作用弱,保留时问短,儿乎同时被洗脱,而

埘较大的分子Vitamin岛,Btz保留过长,峰平不易捡出.c8拄烷链短,作用力适中,使性质差别较大的维生素都

能得到良好分离故采用c8{丰.

考察多种缓冲体系,发现01mol/LHC003H4一HCOOH较适台,其它体系中Vitamin,B6.BI儿乎分不升:

醋酸盐缓冲液需大量泳醋酸,本底干扰较大.甲醇以25%为佳,低于20%时VitaminB2,B,2不易洗脱.Vitamin11}

拖尾,高于30%时组分洗脱较快,VitaminC,,B6不易分开:

2.42pH值对分离的影响从图3可看出,pH<35,Vitamin与Vitamin分离不好;pH>5,Vitaminc,B6,

难分开;pH<3酸度较大对色谱桂不利;pH>5VitaminBI2,B1.B2在碱性或中性条件下会分解.选用pH:

4.5,在该条件下分离效果较好,且各种维生素能共存.

2.4.3样品前处理问题探讨维生素多以结台恋形

式存在于食品巾.提取过程包括使其游离的过程.果

蔬中碳水化台物含量高.根据前人已有的方法,改进

为先酸解再酶解,最后用0.22.tan超滤膜彻底去除蛋

白质和酶体.偏磷酸一醋酸列VitaminC有保护作用,

叉是酸解提取剂用碱中和时应搅拌,冷却,缓滴防

止局部过浓,减少维生素的碱分解:pH=4.5,45～

50℃有利于充分发挥淀粉酶的活性.奶粉通常以除

蛋白质为主,三氯乙酸为沉淀剂时沉淀明锃不完全,

且用镀丈,本底有干扰,其沉淀蛋白质速度过快,包夹

游离维生素,导致测定结果偏低:改用三氟乙酸,用

量少.干扰小.沉淀效率高,固其沉淀蛋白质有一个过

程,故包夹损失少.

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