HPLC测定苦杏仁饮片中苦杏仁苷的含量

测得苦杏仁苷含量 ( )
6. 35
6. 30
6. 33
5. 51
5. 53
5. 50
1. 52
1. 54
1. 51
2. 12
2. 15
2. 13
X( ) 6. 33 5. 51 1. 52 2. 13
4 小结与讨论 4. 1 供试品溶液制备条件的选择 参照文献报道和预试验 结果 ,以少量正己烷为分散溶剂 ,用甲醇 、80 乙醇作溶剂 , 对超声和回流提取进行了比较试验 。结果表明 ,正己烷 2甲
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表 1
回收率试验结果
样品重 ( g)
0. 106 28
样品中苦杏 仁苷 (mg)
6. 719
加入苦杏 仁苷 (mg)
6. 512
测得苦杏 仁苷 (mg)
13. 184
回收率 ( ) 99. 28
平均回收率 ( )
RSD ( )
0. 101 84
6. 438
6. 512
12. 932
99. 72
0. 104 22
3. 1 检测波长的选择 取对照品溶液适量 ,以流动相稀释 后作为样品溶液 ,以流动相为参比 ,用紫外分光光度计 ,在波 长 190～400 nm 波长范围内扫描测定 ,苦杏仁苷最大吸收波 长为 210 nm ,故选定检测波长为 210 nm。检测波长选择见 图 1。
图 1 波长选择 UV光谱 A HPLC2UV 扫描图 B 紫外分光光度计 2UV 扫描图 3. 2 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷干燥 24 h 的苦杏仁苷对照品 14. 64 mg,置 100 mL量瓶中 ,加甲醇溶解 并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得 (0. 146 4 mg/mL ) 。 3. 3 供试品溶液制备 取苦杏仁粉末 0. 2 g,精密称定 ,置 100 mL量瓶中 ,精密加正己烷 2 mL ,密塞 ,轻轻振摇使样品 充分分散后 ,加入甲醇 95 mL ,超声处理 30 m in,放冷至室 温 ,加甲醇 至 刻 度 , 摇 匀 , 滤 过 , 弃 去 初 滤 液 , 取 继 滤 液 用 0. 45μm微孔滤膜滤过 ,作为供试品溶液 。 3. 4 系统适用性试验 在上述色谱条件下 ,分别精密吸取 对照品溶液和供试品溶液各 10 μL ,注入液相色谱仪 ,测定 。 结果表明 ,供试品中苦杏仁苷峰与其相邻峰的分离度大于
4 500。因此 ,用该分析条件测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量是 可行的 。对照品和供试品的 HPLC图见图 2、图 3。
0. 999 9。结果表明 ,在上述色谱条件下 ,在 0. 292 8～2. 342 4 μg范围内 ,苦杏仁苷进样量与峰面积呈良好的线性关系 。
3. 6 精密度试验 在上述色谱条件下 ,精密吸取对照品溶 液 10μL ,注入液相色谱仪 ,平行测定 5次 ,对照品峰面积的
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仁苷的平均含量为 6. 32 , RSD = 0. 49 ( n = 5) ,说明该方
法的重复性良好 。
3. 9 回收率试验 采用加样回收法试验 。取已知苦杏仁苷
含量的苦杏仁粉末 (河北 , 389# ,含苦杏仁苷 6. 322 ) 0. 1 g,
精密称定 ,精密加入正己烷 2 mL ,轻轻振摇 ,使样品充分分
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1. 5,苦杏仁苷峰达到基线分离 ,且保留时间适中 ( 10 m in) ; 仁苷的峰面积 ,以进样量 (μg)为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,
在该色谱条件下 ,色谱柱的理论板数以苦杏仁苷峰计算为 绘制标准曲线 。其回归方程为 Y = 948 691X + 2 326, r =
试品溶液 。在上述色谱条件下 ,分别精密吸取对照品溶液和 供试品溶液 10 μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,并计算各样品中 苦杏仁苷的含量 。样品测定结果见表 2。 表 2 苦杏仁饮片中苦杏仁苷的测定结果 ( n = 3)
饮片名称 苦杏仁 (河北 ) 苦杏仁 (河北 ) 市售 炒苦杏仁 ( 1# ) 市售 炒苦杏仁 ( 2# )
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HPLC测定苦杏仁饮片中苦杏仁苷的含量
杨书斌 , 刘 青 , 孙立立 , 石典花 (山东省中医药研究院 ,山东 济南 250014)

RSD = 0. 60 , RT的 RSD = 0. 33 ,结果表明精密度良好 。
3. 7 稳定性试验 在上述色谱条件下 ,精密吸取供试品溶 液 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,然后于 4, 8, 12, 24 h各测
定一次 ,结果表明 ,供试品溶液在 24 h内测定结果稳定 ,供
试品中苦杏仁苷峰面积的 RSD = 0. 10 ( n = 5) 。
3. 8 重复性试验 取苦杏仁 5 g,研细 ,混匀 ,取上述粉末
图 2 苦杏仁苷对照品的 HPLC图
0. 2 g,精密称定 ,共称取 5份 ,照供试品溶液制备项下操作 , 制成供试品溶液 。在上述色谱条件下 ,分别精密吸取对照品 溶液和供试品溶液各 10μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,计算苦
杏仁中苦杏仁苷的含量 。结果表明 , 5次测得苦杏仁中苦杏
散 ,然后精密加入一定量的苦杏仁苷对照品 ,照样品含量测
定方法测定 ,计算回收率 。
图 3 供试品的 HPLC图
3. 5 线性关系考察 在上述色谱条件下 ,分别精密吸取对 照 品溶液 2, 4, 8, 12, 16μL ,分别注入液相色谱仪 ,测定苦杏
试验结果表明 ,苦杏仁苷平均回收率为 99. 26 , RSD 为 0. 98 ( n = 5) 。说明该方法测定结果准确 。回收率试验结 果见表 1。
参考文献 :
[ 1 ] 江苏新医学院编. 中药大辞典 [M ]. 上海 : 上海科技出版社 , 1977: 110021101.
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3. 81 。药典法是通过银量滴定法测定苦杏仁苷的酶解产物 氢氰酸 ,间接测定苦杏仁中苦杏仁苷的含量 ,操作繁琐 ,耗时 长 ,重复性较差 。测得苦杏仁苷结果偏低的主要原因是酶解 不完全 ,其次 ,随水蒸汽蒸馏出氢氰酸为气体 ,易挥发损失 , 也是导致测定结果偏低的原因之一 。 4. 5 HPLC法测定苦杏仁中苦杏仁苷的优点 研究确定的 HPLC法测定苦杏仁饮片中苦杏仁苷的含量 ,操作简便 ,测定 结果准确 ,重复性好 ,可有效地控制苦杏仁饮片的质量 。
6. 589
6. 512
13. 001
98. 46
99. 26
0. 98
0. 108 62
6. 867
6. 512
13. 420
100. 63
0. 104 10
6. 581
6. 512
12. 978
98. 23
3. 10 样品的测定 取苦杏仁饮片 5 g,研细 ,混匀 。取上述 粉末 0. 2 g,精密称定 ,照供试品溶液制备项下操作 ,制成供
收稿日期 : 2005204226 基金项目 :国家科技攻关计划项目 :苦杏仁饮片炮制工艺及质量标准规范化研究 ,编号 : 2001BA701A55212。 作者简介 :杨书斌 (1943～) ,男 ,山东宁津人 ,研究员 ,从事中药化学 、中药炮制和中药新药研究 ,电话 : 0531282949826。
醇超声 30 m in提取测得苦杏仁苷含量最高 。 4. 2 供试品溶液中固体样品的体积 在供试品溶液制备 中 ,超声后用甲醇补充减失的重量 ,摇匀 ,其体积与量瓶标示 线一致 ,说明未溶解的样品固体物所占体积很小 ,其体积变 化可忽略不计 。 4. 3 加少量正己烷使样品分散的依据 苦杏仁加与不加正 己烷分散测得苦杏仁苷含量的结果一致 ;而 苦杏仁和炒苦 杏仁研细后成团块状 ,若不加正己烷测得苦杏仁苷含量偏 低 ,且重复性差 。 4. 4 HPLC法与药典法 (银量法 )比较 用本法和 2000年版 中国药典一部苦杏仁 [含量测定 ]项下方法 ,对同一批样品进 行测定 。结果表明 , HPLC法测得的苦杏仁苷含量高于药典 法 ,且重复性好 。HPLC法测得苦杏仁苷平均含量 6. 32 , RSD = 0. 49 ; 药 典 法 测 得 平 均 含 量 为 5. 08 , RSD =
供试样品 :苦杏仁 (河北 , 389# ) , 苦杏仁 (自制 ) ,炒苦 杏仁 1# (济南燕子山西路药店 ) 、炒苦杏仁 2# (济南三九药 店 )。 2 色谱条件
色谱柱 : L ichrospher C18 ( 4. 6 mm ×150 mm , 5 μm ,江苏 汉邦科技有限公司 ) 。流动相 :甲醇 2乙腈 2水 ( 9 ∶9∶82) ;流 速 : 1. 0 mL /m in;柱温 :室温 ;检测波长 : 210 nm。理论板数按 苦杏仁苷峰计应不低于 4 000。 3 试验方法与结果
仪器 : W aters 600型高效液相色谱仪 , 996光电二极管阵 列检测器 , M32工作站 , 7725 j手动进样器 。UV 2265FW 紫外 可见光分光光度计 (岛津 ) 。