微生物检验手册(中文)
临床微生物检验采集手册
微生物标本采集
第一章微生物样本采集及要求
1.患者准备(采集前)
1.1.采集标本前,采样人员根据检验申请单检验项目的要求,确认采样计
划并进行适当的准备工作,包括核对医嘱、打印条形码、选择合适的标
本容器、粘贴条形码及指导患者做好采样前的准备工作等。
1.2.样本采集依检验项目的申请,检验申请单提供的信息包括:
●a) 患者姓名;
●b) 患者性别;
●c) 患者年龄或出生日期;
●d) 患者唯一性标识,如病历号;
●e) 就诊病区和病房;
●f) 检验申请者姓名;
●g) 检验申请者科室;
●h) 标本类型;
●i) 标本采集部位;
●j) 检验项目;
●k) 标本采集日期和时间;
●l) 临床诊断和主要临床表现;
●n) 患者和检验申请者的联系电话。
1.3.认真核对患者、标本容器和检验申请是否一致,严防出现差错。
1.4.住院患者
1.4.1.申请单开具:分泌物、脓液、关节液、痰液等开“细菌涂片+培
养”,尿液标本开“尿培养及菌落计数”,血培养开“无菌体液
细菌培养”(血培养需要开一对,也就是两个医嘱),怀疑厌氧
菌开“厌氧菌涂片+培养”。
1.4.
2.检验人员接种标本后,当日报告涂片结果(尿液标本不涂片),
以接收标本之日起3-5天报告培养结果,如有特殊情况需要延长
检测时间,将与临床沟通。
1.4.3.如样本培养阳性,需要后续检测,则由检验人员开具“细菌鉴定
+药敏”并扣除相应费用。
1.5.门诊患者
1.5.1.申请单开具:分泌物、脓液、关节液、痰液等开“细菌涂片+培
养”,尿液标本开“尿培养及菌落计数”,血培养开“无菌体液
细菌培养”(血培养需要开一对,也就是两个医嘱),怀疑厌氧
微生物鉴定与检测技术手册
微生物鉴定与检测技术手册
随着全球化和社会发展,人们对食品、医疗、生态等方面的安全性
和质量要求也越来越高。而微生物是影响人类健康和生产的重要因素
之一,因此,微生物检测和鉴定技术的准确性和可靠性显得尤为重要。本手册旨在介绍微生物鉴定和检测技术的基本原理、样品采集和处理
方法、常见微生物检测方法及应用等内容,帮助读者快速了解微生物
检测相关知识并提高检测准确性。
一、微生物检测的基本原理
微生物检测的基本原理是利用生长培养和分离方法,通过对微生物
的形态、生理和生化特性进行鉴定和分类。在生物学中,微生物不仅
包括细菌,还包括真菌、病毒、寄生虫、藻类等生物。这些微生物的
特性差异很大,需要根据不同的特性选择合适的检测方法。
微生物检测的流程一般包括样品采集、处理、分离、鉴定、计数等
环节。其中,样品的采集和处理直接影响到后续的检测结果,因此非
常重要。
二、样品采集和处理方法
微生物检测的样品种类很多,包括食品、环境、医疗用品、农业产
品等。各种样品的采集和处理方法也有所不同。以下是常见样品的采
集和处理方法:
1.食品样品
食品样品的采集应该尽量避免污染,采集时应使用无菌器具和方法
进行。不同种类的食品需要使用不同的样品采集方法,例如:肉类、
水产等,应当用器皿采集,而蔬菜水果等可以直接取表面样品。
通常情况下,可将样品剪碎后在无菌条件下制成悬浮液,然后进行
稀释、分装、处理等环节。
2.环境样品
环境样品的采集需要选择合适抽样器材和方法。例如,对于空气样品,通常使用普通和可降落粒子采样器采集,对于水体,可以使用多
孔吸附体进行采集。
微生物检验作业指导书
亲水性的样品:取10g加到90ml灭菌生理盐水中,充分振荡混匀,静置15min用其上清液做1:10的稀释液。
疏水性的样品:称取10g放到灭菌的研钵中,加10ml灭菌液体石蜡研磨成粘稠状,再加10ml灭菌吐温80,研磨待溶解后加70ml灭菌生理盐水在40℃-44℃水浴中充分混合,制成1:10稀释液。
5.5灭菌吐温80的制备
用三角瓶分装化学纯吐温80, 121℃(0.1-0.15 mpa)高压灭菌20min。
5.6灭菌移液枪头
将移液枪头置于带孔盒内,用牛皮包扎并用棉签并用121℃(0.1-0.15 mpa)高压灭菌20min。
5.7灭菌平皿
用牛皮包扎平皿,并用121℃(0.1-0.15 mpa)高压灭菌20min,棉绳固定。
将检验结果登记于《微生物检验原始记录》中,并出具检验报告。
10.相关文件
《霉菌培养箱操作规程》
《细菌培养箱操作规程》
《高压蒸汽灭菌锅操作规程》
1Biblioteka Baidu.表单
《微生物检验原始记录》
4.仪器及所用器皿
4. 1高压蒸汽灭菌锅。
4. 2电子称。
4. 3酒精灯。
4. 4移液枪。
4. 5恒温培养箱。
4. 6带玻璃珠的三角瓶。
4. 7灭菌试管。
4. 8灭菌平皿:直径9cm。
微生物实验技术操作手册
微生物实验技术操作手册
一、实验介绍
微生物实验技术操作手册旨在为研究人员提供详细的实验步骤和操作指南,以确保实验的准确性和可重复性。本手册涵盖了微生物实验的基本原理、实验材料和设备的准备、实验步骤以及结果分析等内容。通过遵循本手册的操作指南,研究人员可以顺利进行微生物实验,并获得可靠的实验结果。
二、实验材料和设备准备
1. 实验材料:
- 微生物培养基:根据实验需要选择适当的培养基,如LB培养基、TSB培养基等。
- 微生物菌种:根据实验目的选择所需的微生物菌种。
- 试剂:如抗生素、染料等。
- 培养皿、试管、移液器等实验器材。
2. 实验设备:
- 培养箱:用于控制培养温度。
- 离心机:用于离心培养物。
- 恒温振荡器:用于培养物的摇床培养。
- 显微镜:用于观察微生物的形态和结构。
三、实验步骤
1. 准备工作:
- 消毒操作台和实验器材:使用适当的消毒剂对操作台和实验器材进行消毒处理,以确保实验环境的无菌。
- 培养基制备:按照培养基配方准备培养基,并进行高压灭菌处理。
- 微生物菌种制备:选择适当的菌种进行预培养,以获得足够的菌量。
2. 培养操作:
- 接种:将预培养的菌种接种到含有适当培养基的培养皿或试管中。
- 培养条件控制:根据菌种的生长要求,设置适当的培养温度、pH值和培养时间。
- 培养物观察:使用显微镜观察培养物的生长情况,并记录相关数据。
3. 实验操作:
- 抗生素敏感性实验:将不同浓度的抗生素添加到含菌培养基中,观察菌落的生长情况,以确定菌株对抗生素的敏感性。
- 染色实验:使用适当的染料对微生物进行染色,观察染色后的微生物形态和结构。
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
对于药品微生物学检验,应当严格按照以下指南进行:
一、抽样
1.使用清洁的,无明显异味的样品容器,建议使用无菌容器。
2.样品抽取程序应遵守衛生規定,应使用清洁的器械进行采样,避免物质污染。
3.抽取的样品应在适当的温度下迅速送检,尽量避免发霉变质。
二、检测方法的选择
1.根据不同的检测目的,采用不同的检测方法,例如有害微生物的检测一般采用传统
的培养裂解法,耐药性微生物的检测一般采用APTEST等测试系统。
2.根据不同种类的药品所含成分多少,可采用抗性指数评估或者分子生物学检测法,
检测药品中可能存在的耐药性型微生物或者毒力增强的菌株。
3.根据抽样结果、药品添加剂类型及添加剂含量等,可根据《药典》中规定的极限值
或安全限值,筛选有可能存在的有害微生物,而后进行产品质量检查,保证药品的质量安全。
三、确定检测指标
1.根据实际情况,确定包括常见有害微生物,尤其是抗药性菌在内的相应检测指标,
以便检查是否符合药典要求或产品规格。
2.根据药典要求或产品规格,确定需要检测的菌株特性,耐药性特性,毒力相关指标,以及检测方法所要求的指标等。
四、验证检测方法
1.根据检测需要的特性,对检测方法进行验证,检测效果要求明确,把控灵活,满足
正确性、精确性、特异性以及重复性等要求。
2.检测方法的验证要完整,保证检测数据的可信度。采用不同的抗性菌种,耐药性菌株,有害微生物,测试不同检测系统所得结果,进行比较分析,对所选方法进行评价。
微生物实验室标准操作程序质量手册
微生物实验室标准操作程序质量手册实验操作者:XXXXXXXX
执行日期:X年X月X日
启用日期:XX年X月X日
标准操作程序文件
01 试剂贮存和配制区工作制度
02 标本处理区工作制度
03 细菌自动分析区工作制度
04 试剂贮存和配制区标准操作程序
05 标本处理区标准操作程序
06 细菌自动分析区标准操作程序
07 紫外消毒标准操作程序
08 消毒液配制使用标准操作程序
09 普通冰箱使用标准操作程序
10 超低温冰箱标准操作规程
11 洁净工作台使用操作规程
12 VITEK32型自动分析系统标准操作程序
13 移液器使用标准操作程序
14 高速离心机操作标准操作程序
15 冰箱维护和保养标准操作程序
16 电热恒温水浴箱操作程序
17 洁净工作台维护和保养程序
18 可移动紫外消毒车使用操作程序
19 加样器校准标准操作程序
20 离心机维护保养操作程序
21 温度计校准程序
22 试剂的质检操作程序
23_微生物实验室岗位职责(暂行)
24 临床标本的保存程序
25 临床检验及收费程序
26 微生物检验收收费价格
27 普通培养阴性操作程序
28 真菌培养阴性操作程序
29 苛养菌培养阴性操作程序
30 抗酸杆菌培养阴性操作程序
31 支原体培养检验操作程序
标本处理区工作制度
进入本区需穿工作服、工作鞋。
本区只能进行:临床标本的保存,标本接种、培养、及其菌株检验前处理、菌悬液制备、染色标本检查、非上机鉴定与药敏试验操作等危险操作,其它操作不得在此区进行.
在整个本区的实验操作过程中,操作者必须戴手套、口罩和帽子,严格按照操作规程进行。工作结束后必须立即对工作区进行清洁或消毒.
微生物检验手册(中文)
1、实验材料
2、试剂
氯化钠(Sigma)
平板计数琼脂PCA(DIFCO)
3次超纯水
3、试剂配制方法
(1)0.85%NaCl (250 ㎖)
(2)Plate Count Agar (100 ㎖)
Plate Count Agar(DIFCO) 2.35 g3次超纯水100 ㎖,121 ℃15分钟灭菌。
(3) 0.85% NaCl (100 ㎖)
4、实验步骤
所有微生物实验中,除均质在无菌室进行,其余的操作都要在超净工作台内。
(1)无菌操作取25g或25ml样品,加入225 ㎖灭菌生理盐水;均质2分钟。
(2)取1㎖样液加入到9 ㎖生理盐水试管中。
(3)依次做10倍梯度稀释。
(4)从合适的梯度中取1 ㎖加到无菌平板中(做2个平板),加入20 ㎖平板计数琼脂,混匀。
(5)冷凝后放到35±1℃培养箱中培养24~48h。
(6)菌落计数
★菌落总数试验方法
↓
↓
4.菌落计数(所有菌落定量实验都采取这种方法)
韩国方法中要求每个平板中30-300内的计数
参照GB/T 4789.2-2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定
定性实验:
1. 实验材料
2. 试剂
3. 试剂配制方法
(1) 0.85% NaCl (250 ㎖)
(2) Brilliant Green Lactose Broth (100㎖
)
(3) EMB Agar (DIFCO) (100㎖ ) NaCl Brilliant Green Lactose Broth (DIFCO) EMB Agar (DIFCO) 营养琼脂 (DIFCO) 3次超纯水
革兰氏染色试剂条 (MERCK)
微生物检验(完整版)
微生物检验(完整版)
名解
微生物:是一群个体微小结构简单肉眼不能看见的微小生物的总称
种:亲缘关系较近的微生物群体在进化发育阶段上有一定的共同形态和生理特征微生物学:生物学的一个分支是研究微生物在一定条件下的形态结构生理生化遗传变异特性及微生物的进化分类生态等生命活动规律以及微生物之间与人类动植物自然界互相关系的一门科学
抗生素:是由某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质
细菌素:是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质
条件致病菌:正常菌群在宿主体内具有相对稳定性一般不致病
消毒:指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法
灭菌:指杀灭物体上所有的微生物的方法
防腐:指防止或抑制微生物生长繁殖的方法
无菌:指没有货的微生物的存在
质粒:是细菌染色体外的遗传物质也是环状闭合的双联DNA分子比染色体小存在于细胞质中可自主复制
突变:是指细菌遗传物质的机构发生突然而稳定的改变所致的变异现象可遗传给后代基因转移:外源性物质由供体菌转入受体细胞内的过程
基因重组:供体菌的基因进入受体菌细胞并在其中自行复制与表达或矛受体菌DNA整合在一起的过程
病毒:是一类个体微小结构简单只含一种核酸只能在活的易感细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物
复制周期:病毒的增殖被人为分成吸附穿入脱壳生物合成装配成熟与释放七个步骤的完整过程
缺陷病毒:是指因病毒基因组不完整或因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒顿挫感染:病毒进入宿主细胞若细胞缺乏病毒复制所需的酶能量和必要成分等则病毒无法合成自身成分不能够装配和释放子代病毒的现象
微生物操作手册
微生物实验室操作指导书目录
(一)安全守则
(二)检验总则
(三)基本技术要求
(四)食品平板菌落计数
(五)食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法
(六)沙门氏菌检验
(七)金黄色葡萄球菌检验
(八)霉菌计数
(九)革兰氏染色
(十)空气中微生物的检验
(十一)水中微生物的检验
(十二)食品接触面的微生物检验
(十三)蔬菜农残的快速检测
审核:编制:
(一)安全守则
1进入实验室工作衣、帽、鞋必须穿戴整齐。
2在进行高压、干燥、消毒等工作时,工作人员不得擅自离开现场,认真观察温度、时间,蒸馏易挥发、易燃液体时,不准直接加热,应置水浴锅上进行。
3严禁用口直接吸取药品和菌液,按无菌操作进行,如发生菌液、病原体溅出容器外时,应立即用有效消毒剂进行彻底消毒,安全处理后方能离开现场。
4工作完毕,两手用清水肥皂洗净,必要时可用(杀菌剂)新洁尔灭、过氧乙酸液浸泡手,然后用水冲洗,工作服应经常清洗,保持整洁,必要时高压消毒。
5实验完毕,及时清理现场和实验用具,对染菌带毒物品,进行消毒灭菌处理,并填写日常工作记录。
6每日下班,认真检查水、相关电源是否关闭和正在使用的设备运转是否正常,并认真记录。下班前关好门窗,方可离去。
(二)检验总则
1主题内容与适用范围
本文规定了微生物检验一般规则。
本文适用于食品中微生物学检验的采样、检验及结果报告。
2样品的采集
2.1采样目的
确保采集的样品能代表全部被检验的物质,使检验分析更具代表性。
2.2采样原则
2.2.1采集的样品要有代表性,采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查,检查是否有污染源存在,同时能反映全部被检食品的组成、质量和卫生状况。
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验手册
药品微生物学检验是药物质量控制的重要组成部分,其目的是检
测药品中的微生物数量、性质和种类,以确保药品的安全性、有效性
和质量。因此,药品微生物学检验手册是药品质量检验中十分重要的
工具书。
药品微生物学检验手册包括以下内容:首先,它介绍了药品微生
物学检验的基本概念及检验步骤。其次,它详细地介绍了如何收集、
处理和记录样品,以及如何使用合适的仪器和仪器进行检验和质量控制,包括显微镜、萤石、紫外线分光光度计等。此外,手册对药品相
关的微生物规定进行了描述,以供参考。最后,手册还提供了一份详
细的样品采样分析表,以及一份关于检验结果的误差表,以帮助检验
人员更好地处理检验过程中的质量问题。
药品微生物学检验手册为药品质量检验提供了重要信息,可以帮
助检验者迅速准确地完成各项质量检验任务,确保药物质量的安全性、有效性和质量。
微生物检验的书
微生物检验的书
微生物检验方面可以参考以下书籍:
《微生物检验手册》: 全面介绍了微生物检验的基本原理、操作技术
和临床应用。
《临床微生物学检验》: 详细介绍了临床微生物学检验的基本理论、
操作技术、临床常见病原微生物的检验方法以及病原菌的耐药监测等。《微生物学检验》: 介绍了微生物学检验相关的基础理论、应用技术
和方法,包括细菌、病毒、真菌等微生物的生物学特性、诊断技术和
防治方法,也包括了临床微生物检验的质量控制与实验室安全防护措施。
《微生物鉴定实用手册》:详细介绍了微生物鉴定的各种技术和方法,包括生理生化反应、血清学鉴定、16S rDNA序列分析、分子生物学鉴
定等方法。
此外,《微生物学检验标准操作规程》、《现代临床微生物学诊断技术》等也是不错的选择。请注意,要结合自身需求选择合适的书籍。
微生物检验规范
微生物检验规范版号
页次
发布日期
1 目的
对环境、物品或人员的微生物污染量进行监测,以减少因物品或人员对产品的污染。
2 范围
适用于控制区内环境、物品和人员微生物污染的监控。
3工作方法
3.1 微生物限量要求
物品名称要求检测频次备注
操作人员手部细菌总数应≤300个/每只手。1次/季
工位器具细菌总数应≤10个/cm2。1次/季
工作服细菌总数应≤10个/cm2。1次/季
工作台面细菌总数应≤10个/cm2。1次/季
沉降菌总数应≤10个/皿。1次/周
环境
浮游菌应≤500个/m2 沉降菌超标时
产品初始污染菌管道内腔≤10cfu/件次1次/月
3.2 手部细菌总数检测方法
3.2.1 采样数及方法
随机抽取10双手,将被检人五指并拢,将浸有灭菌生理盐水的棉签在右手指曲面,从指尖、甲沟到指根处往返涂抹10次后,将棉签放入10ml灭菌生理盐水的试管中。
3.2.2 检验方法和结果计算
将采样管摇匀,取1ml放入灭菌平皿内,用普通琼脂培养基作倾注培养,置35℃培养箱中培养24小时,观察结果,求出平均菌落数。
菌数/每只手=平均菌数×10
3.3 工作服、工位器具和工作台面细菌总数检测方法
3.3.1 采样方法
将经灭菌的内径为5cm×5cm的灭菌规格板放在被检物体表面,用一浸有灭菌生理盐水的棉签在其内涂抹10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入10mL灭菌生理盐水的采样管内即得试验样品。
3.3.2 采样数量:共取10只物品。
微生物检验规范版号
页次
发布日期
3.3.3 检验方法和结果计算
将每支采样管摇匀,取1ml放入灭菌平皿内,用普通琼脂培养基作倾注培养,置35℃培养箱中培养24小时,观察结果,按下式求出平均菌落数。
微生物检验指导书
文件更改记录
为了确保本公司生产的产品及外购产品的微生物符合本公司的要求,使投放市场的产品符合国家卫生标准和消费者的需要,结合我公司的实际情况,特制定本规范。
2.范围:
本公司车间微生物控制、原料、半成品、成品。
3.定义:
(无)
4.职责:
品管部:负责车间环境、人员、水质、设备及原料、半成品、成品的微生物检验,并进行不合格产品的处理跟踪,负责及时将车间卫生指标、原料、半成品、成品的微生物控制信息反馈给工厂,防止不合格半成品进入下一道程序及不合格成品流入市场,负责对文件的整理及各种报表的统计。
5 检验流程:
6.1 灭菌
6.1.1 根据当天《工厂日生产计划》确定当天的检验项目和样品数量,对所需要的器皿(包括稀释用的生理盐水、取水及半成品的烧杯、移液管、培养皿、取样用的药匙)和培养基(卵磷脂-土温80营养琼脂培养基、孟加拉红培养基、乳糖胆盐培养基、SCDLP培养基、BP培养基、十六烷培养基等)进行高温高压灭菌;该项准备工作一般在上午八点到十点进行
6.2 采样
6.2.1 车间卫生
6.2.1.1 空气指标:采用空气沉降法分别对二次更衣室、灌装间、普通储膏间、净化储膏间、消毒包材暂存间、缓冲间、制作间、大料间、小料间、配料间进行测定。测定时间一般为周二、四、六10:30-11:00及15:00-15:30进行。其中制作间、大小料间、二次更衣室的微生物指标仅作卫生质量控制的参考。
6.2.1.2 去离子水:备无菌烧杯用无菌操作对制作间的8个出水口及品管部实验室和研究所实验室去离子水进行采样;采样时间一般为周一、三、五14:00-14:30进行。
USP微生物限度检查 中文
USP微生物限度检查中文
61)微生物限度检测(MICROBIAL LIMIT TESTS)
此章提供方法来检测可能存在的好氧微生物其他制药过程中可能出现的微生物的数量,包括原材料和成品中的。如果经过验证确认可以得到相同或更好的检测结论,也允许采用自动化的检测方法。在样品检测过程中须进行无菌操作。若无特别说明,则“培养(incubate)”一词指在30—35℃的培养箱内培养24至48小时;“生长(growth)”一词用于专门的判定,说明“存在和可能存在活的微生物”。
准备实验 (Preparatory Testing)
本章涉及实验结果的有效性取决于:提供的被检测样品本身在实验条件下,被充分证明不会抑制可能存在的微生物的生长。因此,在准备样品时,需要正规的实验操作和符合要求的实验条件,接种稀释样品到含有以下(微生物)培养物的培养基:金黄色(奥里斯)葡萄球菌(Staphylococcus aureus),大肠埃希氏菌(Escherichia coli), 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 和沙门氏菌(Salmonella)。方法如下:将用肉汤培养基培养24小时后的(微生物)不小于10-3稀释的微生物培养物,加1 ml(微生物)培养液到磷酸(盐)缓冲液(pH 7.2),液体大豆酪蛋白消化物培养基(Fluid Soybean-Casein Digest Medium),或者液体乳糖培养基(Fluid Lactose Medium)。相应培养基培养失败则需要采取以下方法更改检测程序:(1)增加稀释液体积,检测样品加入量仍维持不变;或者
微生物实验手册范本
微生物实验室规则与安全
微生物学实验室规则
医学微生物学实验的对象大多为病原微生物,具有传染性,因此要求进入实验室后必须严格遵守以下实验室规则:
1.进入实验室应穿白大衣,离室时脱下,反折放回原处,不必要的物品不得带入实验室,必须带入的书籍和文具等应放在指定的非操作区,以免受到污染。无
菌操作时必须戴口罩,并不得开电风扇。
2.实验室内禁止饮食、抽烟,不得高声谈笑或随便走动。
3.各种实验物品应按指定地点存放,用过的器材必须放入消毒缸内,禁止随意
放于桌上及冲入水槽。
4.须送温箱培养的物品,应做好标记后送到指定地点。
5.实验过程中发生差错或意外事故时,禁止隐瞒或自作主张不按规定处理,应立即报告老师进行正确的处理。如有传染性的材料污染桌面、地面等,应立即用0.2%~0.5% “84”消毒液浸泡污染部位,作用5~10min后方可抹去。如手被活菌污染也应使用上述消毒液浸泡5~10min后,再以自来水反复冲洗干净。6.爱护室内仪器设备,严格按操作规则使用。节约使用实验材料,不慎损坏了
器材等,应主动报告老师进行处理。
7实验完毕,应物归原处并将桌面整理清洁,实验室打扫干净。最后以0.2%~0.
5% “84”消毒液浸泡手5min,洗净后方可离开实验室。
实验一器皿包扎及消毒与灭菌
一、实验目的
1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的包扎方法。
2、了解干热灭菌、紫外线灭菌、微孔滤膜过滤除菌和高压蒸汽灭菌的原理和应用范围。
3、掌握高压蒸汽灭菌的操作技术。
二、实验原理
(1)实验室中使用的玻璃器皿简介
微生物学实验所用的玻璃器皿,大多要进行消毒、灭菌和(将“和”改为“才能”)用来培养微生物,因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃,才能承受高温和短暂灼烧而不致破坏;玻璃器皿的游离碱含量要少,否则会影响培养基的酸碱度;对玻璃器皿的形状和包装方法的要求,以能防止污染杂菌为准;洗涤玻璃器皿的方法不当也会影响实验的结果。目前微生物学实验室中,有些玻璃器皿(如培养皿、吸管等)已被一次性塑料制品所代替,但玻璃器皿仍是重要的实验室用具。
微生物检测手册
ENCLOSURE 1
ASEPTIC LINE L790
HUANG GANG
GUIDE LINES FOR MICROBIOLOGICAL SAMPLING
AND ANALYSIS
微生物取样和分析指导手册
(注:此文件以英文为准,中文翻释只供参考)
Coding of the samples
试样的编码
All the samples must be labelled as follows:
所有的试样都应按下面的格式标记:
“TEST POSITION / DATE / NAME”
“测试位置/日期/名称”
∙TEST POSITION: see drawing 4-39443/14. Record the position and the number of the test to be performed.
∙测试位置:参阅图纸4--39443/14。记录所做测试的位置和编号。
∙DATE: the date of the test (day/month/year)
∙日期:测试的日期(天/月/年)
∙NAME: the name of the operator performing the test
∙名称:所做测试的名称
Example: 3-RA1-28/03/2001-Name of the operator
例: 3RA1-28/03/2001-测试名称
Position 3- rinser exit scroll base frame -28/03/2001-Name of the operator
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1、实验材料
2、试剂
氯化钠(Sigma)
平板计数琼脂PCA(DIFCO)
3次超纯水
3、试剂配制方法
(1)0.85%NaCl (250 ㎖)
(2)Plate Count Agar (100 ㎖)
Plate Count Agar(DIFCO) 2.35 g3次超纯水100 ㎖,121 ℃15分钟灭菌。
(3) 0.85% NaCl (100 ㎖)
4、实验步骤
所有微生物实验中,除均质在无菌室进行,其余的操作都要在超净工作台内。
(1)无菌操作取25g或25ml样品,加入225 ㎖灭菌生理盐水;均质2分钟。
(2)取1㎖样液加入到9 ㎖生理盐水试管中。
(3)依次做10倍梯度稀释。
(4)从合适的梯度中取1 ㎖加到无菌平板中(做2个平板),加入20 ㎖平板计数琼脂,混匀。
(5)冷凝后放到35±1℃培养箱中培养24~48h。
(6)菌落计数
★菌落总数试验方法
↓
↓
4.菌落计数(所有菌落定量实验都采取这种方法)
韩国方法中要求每个平板中30-300内的计数
参照GB/T 4789.2-2003 食品卫生微生物学检验菌落总数测定
定性实验:
1. 实验材料
2. 试剂
3. 试剂配制方法
(1) 0.85% NaCl (250 ㎖)
(2) Brilliant Green Lactose Broth (100㎖
)
(3) EMB Agar (DIFCO) (100㎖ ) NaCl Brilliant Green Lactose Broth (DIFCO) EMB Agar (DIFCO) 营养琼脂 (DIFCO) 3次超纯水
革兰氏染色试剂条 (MERCK)
(4) Nutrient Agar (DIFCO) (100㎖ )
4. 实验步骤
(1) 无菌操作取 25 g 样品,加入225ml 灭菌生理盐水,均质 2 分钟。 (2) 取 1ml 样液加到 10ml BGLB (2 管,带小导管) 中。
(3)把试管放到35±1℃ 中培养 24~48h ;取产酸产气的试管在 EMB 平板上划线。 (4)把EMB 平板放到 35±1 ℃培养箱中培养 24±2h 。
(5)挑取有金属光泽的菌落划线到营养琼脂上, 35±1 ℃培养 24h 。 (6)将菌落革兰氏染色并镜检;用API 20E 做生化鉴定。
大肠菌群定性实验:
↓
↓35±1 ℃, 24~48h
↓35±1
℃, 24±2 h
↓35±1 ℃, 24 h
定量实验
★3M 方法测大肠菌群总数
↓
(6) 分析方法
①试剂及培养基
②培养基配制方法
1) 磷酸缓冲液(800㎖配制)
2) Mannitol-Egg Yolk-Polymyxin agar (1L 配制)
3) Polymyxin B stock配制方法( 200㎖配制)
③实验法
-定性分析法
↓
↓30℃, 24 小时培养
↓
↓
- 定量分析法
↓
↓
↓30℃, 24 小时培养
↓
↓
↓