辛伐他汀片的人体相对生物利用度及生物等效性研究

浓度为横坐标，待测物与内标物峰面积比值为纵 坐标，用加权（Ｗ＝１／ｘ２）最小二乘法进行回归运 算，求得直线回归方程：Ｙ＝０．５９６ Ｘ＋０．１６２（ｒ＝ ０．９９７ ４），辛伐他汀在０．２—２０．０ ｎｇ／ｍＬ范围内线 性关系良好，定量下限为Ｏ．２ ｎｇ／ｒｎＬ。 ３．４方法的精密度与提取回收率 考察了辛伐 他汀在０．５、２．０、１６．０ ｎｇ／ｍＬ（低、中、高）３种浓度 水平的血浆提取回收率和批内、批间精密度 （ＲＳＤ）。见表１、表２。由表ｌ、表２可知，符合生 物样品分析要求。
４．２．４．０ ｒａｉｎ。取受试者服药后血浆样品依同法操
１嚣 毒７８００
墨；３
蛊４３００
ｉ３ Ｏ
Ｉ
Ｉ：
Ⅱ
４＿ｕ
●
● ●
ｒ．
●
一冰）ｌ
●
ｕ１．百篮
：
／／。
●
∞如∞加∞如柏如加ｍ
Ｏ
０
ｔ（ｍｌｎ）
Ｂ
ｔ（ｍｉｎ）
１嚣 。
Ｉ
霉７８００
ｉ ６０ ● 三５０ ●
星４３００
（．．
２０
１０
Ⅱ （．．
ｔ（ｍｉｎ）
Ｃ
ｔ（ｍｍ）
（ＤＰ）分别为４５ ｅＶ（辛伐他汀）和８０“（洛伐他
汀）；碰撞能量（ＣＥ）分别为３５ ｅＶ（辛伐他汀）和 ３０ｅＶ（洛伐他汀）；用于定量分析的离子反应分别 为ｍ／ｚ ４４１．４、ｍ／ｚ ３２５．４（辛伐他汀）和ｍ／ｚ
４２７．４、ｍ／ｚ ３２５．４（洛伐他汀），扫描时间为
３００ ｍｓ。
２．５血浆样品的处理 于离心管中精密加入
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｏｎ；ＲｅｌａｔｉＶｅ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ；Ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ
高脂血症是心脑血管疾病的重要高危因素， 在我国的患病率已经达３０％以上…。辛伐他汀是 一种新型强效的半合成降脂药物旧Ｊ，通过抑制内 源性胆固醇的合成而降低低密度脂蛋白（ＬＤＬ）和 极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ），中等程度升高高密度脂 蛋白（ＨＤＬ－Ｃ），降低甘油三酯，从而降低胆固醇。 对高胆固醇、冠心病等有明显的疗效，是治疗高血 脂的首选药物之一。本文建立了人血浆中辛伐他 汀的高效液相色谱一质谱联用的测定方法，考察了 国产和进口辛伐他汀片的人体相对生物利用度及 生物等效性。 ｌ对象和方法
选择健康男性志愿受试者２０名，年龄 （２３．２±１．６９）岁，身高（１７３．３±５．２６）ｃｍ，体重 （６２．６±６．３２）蚝，体质指数１９．２～２３．９。无继往 病史和药物过敏史，精神状态良好，平时很少服 药，不吸烟，不嗜酒。试验前两周内未服用任何药 物。试验前在辽宁中医药大学附属第二医院接受 全面体检（包括血常规、肝、肾功能及心电图检 查），结果均属正常，受试者均符合人体生物等效
别为（１．９５±０．４３）、（１．９０±０．４５）ｈ；Ｃ一分别为（８．４２±２．１３）、（８．４０±１．８９）ｎｇ／ＩｎＬ；ｔｌ／２分别为（５．０２±１．７２）、 （６．５ｌ±２．６２）ｈ；ＡＵＣｏ．ｔ分别为（４１．６±１１．１）、（４０．５±９．７５）ｎｇ／ｍＬ；ＡＵＣｏ．。分另ｑ为（４３．３±１１．６）、（４３．６±１０．１） ｎｇ／ｍＬ。辛伐他汀的相对生物利用度平均为（１０２．６±１３．３）％。进一步采用双单侧检验和（１－２ａ）置信区间法分
１００ ９０
３２５．４
墓７８００
｛５６００
４４１．４
百４０ 名３０
２０ １０
１
．
．１．
２０ ６０ １００１４０１８０２２０２６０３００３４０３８０４２０４６０５００ ｍ／ｚ，ａｒｒｔｕ Ａ
１００ ９０
查；８
３２５．４
｛；８
百４０ ■３０
｝８
４２７．５
．．．Ｉ．．
２０ ６０ １００１４０１８０２２０２６０３００３４０３８０４２０４６０５００ ｍ／ｚ．ａｍｕ Ｂ
图１辛伐他汀和内标洛伐他汀［Ｍ＋№］＋的产物离子全扫描质谱图
注：Ａ．辛伐他汀．Ｂ－洛伐他汀
３．２专属性分别取６名受试者的空白血浆５００
止，除不加内标外，其他按“２．５”项下操作，进样 ３０止，得色谱图２Ａ；将一定浓度的标准溶液和内 标溶液加入空白血浆中，依同法操作，得色谱图
２Ｂ。辛伐他汀和内标洛伐他汀的保留时间分别为
·药学研究·
辛伐他汀片的人体相对生物利用度及生物等效性研究
刘 茜，唐丹，赵辉，尚宏伟，吴松芝，杜红文，李晓翠
［摘要］ 目的建立人体血浆中辛伐他汀片的ＬＣ—ＭＳ／ＭＳ测定方法，通过研究辛伐他汀片在健康男性
志愿者体内的药代动力学行为，评价其相对生物利用度及生物等效性。方法对２０名健康男性志愿者采用开
放、随机、交叉、单剂量给药方式．单剂量口服辛伐他汀片４０ ｍｇ后．用ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ测定血浆中的药物浓度。结果 口服含辛伐他汀４０ ｍｇ的受试制荆（规格：１０ ｍｇ）和参比制剂（规格：２０ ｍｇ）后，血中药代动力学参数：Ｔ一分
析，受试制刑ＡＵＣ０．。的９０％置信区间为参比制刑相应参数的９６．７％一１０７．Ｉ％。结论本方法简便、快速。辛伐 他汀片的相对生物制度高．与参比制荆相比在体内具有生物等效性。
［关键词］ 辛伐他汀片；相对生物利用度；生物等效性
Ｒｅｌａｔｉｖｅ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｃｅ ｏｆ ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｏｎ ＬⅣ）（ｉ，ＴＡＮＧ Ｄａｎ，ｚＨＡ０晰。
收稿日期：２００９—０４—２３ 作者单位：沈阳药科大学药物分析实验室，沈阳１１００１６
性试验的要求，并于试验前签署知情同意书。 ２药物及仪器 ２．１试验药品受试制剂：辛伐他汀片（山西鑫 煜制药有限公司，规格：１０ ｍｇ，批号：０７０９０５）；参 比制剂：辛伐他汀片（杭州默沙东制药有限公司， 规格：２０ ｍｇ，批号：０７２１６）；辛伐他汀对照品（含 量：９３．３％；批号：１００６０１－２００３０１）、内标洛伐他汀 对照品（含量：１００．Ｏ％；批号：１００６００－２００５０２）由中 国药品生物制品检定所提供；甲醇、乙腈为色谱纯 （迪马公司），乙醚、二氯甲烷为色谱纯（天津市康 科德科技有限公司），磷酸为分析纯（天津市大茂 化学试剂厂），空白血浆由沈阳军区总医院提供。 ２．２仪器Ａｇｉｌｅｎｔ １１００液相系统（美国Ａｇｉｌｅｎｔ 公司），ＡＰｌ２０００型三重四极杆串联质谱仪（美国 Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司），Ａｎａｌｙｓｔ １．４．１软件（美 国Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司），ＢＳ １２４Ｓ型Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ 电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司），雷 勃尔ＬＧｌ０－２．４Ａ离心机（北京雷勃尔离心机有限 公司），ＢＳ １２４Ｓ型Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ电子天平（北京赛多 利斯仪器系统有限公司）。 ２．３ 色谱条件 分析柱：Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ—Ｃ。ｓ柱
ｅｌｉｔｅ ｔａｂｌｅｔ ａｎｄ ｔｅｓｔ ｔａｂｌｅｔ ｗｅｒｅ埘ｖｅｉｌ ｔ０ ２０ ｈｅａｌｔｈｙ ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ ｉｎ ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ ｃｒｏｓｓ－ＯＶｅＴ ｓｔｕｄｙ．Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ
ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｐｌａｓｍａ ＷａＳ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ＬＣ．ＭＳ／ＭＳ．ＲｅｓｕｌＩｓ Ａｆｔｅｒ ｔｅｓｔ ａｎｄ ｒｅｆｅｆｅｎｃｅ ｔａｂｌｅｔｓ Ｗａｓ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ。Ｔｈｅ
万方数据
·４１４·
３．３标准曲线与定量下限取空白血浆５００止，
分别加入辛伐他汀标准系列溶液５０¨Ｌ，制成相当 于辛伐他汀血浆浓度为０．２、０．５、１．０、２．０、５．０、 １０．Ｏ、２０．０ ｎｇ／ｍＬ的样品。除不加５０ Ｌ甲醇外， 按“血浆样品处理”项下依法操作，每一浓度进行
双样本分析，进样３０止，记录色谱图。以待测物
．图２血浆中辛伐他汀及内标洛伐他汀的典型ＭＲＭ色谱图
注：Ａ：空白血浆；Ｂ：空白血浆加入辛伐他汀（２．０ ｎｇ／ｍＬ）和洛伐他汀（２．０ ｎｇ／ｍＬ）；Ｃ：受试者ＸＦＨＵＰＡ单剂量口服受试制剂０．５ ｈ后的血
浆样品色谱图。Ｉ一辛伐他汀；Ⅱ·洛伐他汀
作，得色谱图２ｃ。结果表明，空白血浆中内源性物 质不干扰辛伐他汀和内标洛伐他汀测定。
３．７人体内药动学研究２０名健康志愿者单次 １：３服辛伐他汀的受试制剂和参比制剂后的平均药一 时曲线，见图３，主要药动学参数见表６。
表２ ＬＣ－ＭＳ／ＭＳ法测定血浆样品中 辛伐他汀的提取回收率（％）
３．５稳定性考察考察了辛伐他汀浓度为０．５、 ２．０、１６．０ ｒｉｇ／ｍＥ的血浆样品在２０℃下放置２０ ｄ 的稳定性，以及血浆样品经过２次冷冻一解冻循环 的稳定性，辛伐他汀血浆样品经液－液萃取处理后 室温放置２４ ｈ的稳定性。见表３。结果表明，辛 伐他汀血浆样品稳定性良好。
表１ ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法测定血浆样品中辛伐他汀的 精密度与准确度（ｎｇ／ｍＬ．ｎ－－－６）
wenku.baidu.com
种方法处理后的峰面积比值分别为８９．８％、 ８７．６％和８８．２％，基质效应考察实验结果表明，本 法基质效应可忽略不计。
表４血浆样品冻融２次稳定性考察结果（ｎｇ／ｍＬ）
表５模拟血浆样品窒温放置２４ ｈ稳定性 考察结果（ｎｅ，／ｍＬ）
（４０．５ ４－９．７５）ｎｇ／ｍＥ；ＡＵＣｏ．。：（４３．３±１１．６）ａｎｄ（４３．６±１０．１）ｎｇ／ｍＬ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ，
ａｃｃｕｔｅ．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｄｔｉｖｅ ａｎｄ
ｒｅｌａｔｉｖｅ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ｉｓ ｈｉｇｈ ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｓｔ ｔａｂｌｅｔ Ｗａｓ ｂｉｏｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔａｂｌｅｔ．
（１５０ ｍｍ ｘ４．６ ｍｎ３，５岬，美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司），保
万方数据
护柱（４咖×３．０ ｍｍ，美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司）。流动
相：甲醇．乙腈：９０：１０（ｖ／ｖ）；流速：６３０ ＬＶｍｉｎ；柱 温：３０ ｏＣ；进样量：３０。
２．４质谱条件离子源为电喷雾电离源（Ｔｕｒｂｏ
ｉｏｎｓｐｒｙ）；正离子方式检测；离子源气体１（ＧＡＳｌ）： ５５ ｐｓｉ；离子源气体２（ＧＡＳ２）：６０ ｐｓｉ；气帘气：２０ ｐｓｉ；碰撞气：５ ｐｓｉ；离子源电压：５ ５００ Ｖ；温度： ５０＇ｔ２；扫描方式为多反应监测（ＭＲＭ），去簇电压
ｍａｉｎ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ，Ｔ蛐：（１．９５±０．４３）ａｎｄ（１．９０±０．４５）ｈ；Ｃ咖：
（８．４２±２．１３）ａｎｄ（８．４０ ４－１．８９）ｒｉｇ／ｍＬ；ｔＩ／２：（５．０２±１．７２）ａｎｄ（６．５１±２．６２）ｈ；ＡＵＣｏ．１：（４１．６±１１．１）ａｎｄ
５００斗Ｌ血浆，５０ Ｌ甲醇、５０止内标溶液（洛伐他 汀２０．０ ｎｇ／ｍＬ）和５０止磷酸溶液（０．５ ｍｏＶＬ），
涡旋混合１ ｍｉｎ；加入５ ｍＬ乙醚一二氯甲烷（４：ｌ， ｖ／ｖ），涡旋混合５ ｍｉｎ，离心１０ ｍｉｎ（６ ０００ ｒ／ｎｕｎ）， 分取上层有机相于另一试管中，于４０℃氮气流下
吹干，残留物加１５０止流动相溶解，涡旋混合，取
ＳＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ—ｗｅｉ，ＷＵ Ｓｏｎｇ—ｚ１１ｉ，ＤＵ Ｈｏｎｇ·ｗｅｎ，ＬＩ Ｘｉａｏ－ｃｕｉ（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｓｈｅｎｙａｎｇ １１００１６．Ｃｈｉｎａ）
ｆ Ａｂｓｔｒａｃｔ｝ ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ＬＣ．ＭＳ／ＭＳ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔ１１ｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｐｌａｓ· ｍｓ，ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｂｉｏｅｘｌｕｉｖａｌｅｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｏｒａｌ ｄｏｓｅ ｏｆ ４０ ｍｇ ｓｉｍｖａｓｔａｔｉｏｎ ｒｅｆｅｒ－
３０ ＩｌＬ进行ＬＣ—ＭＳ／ＭＳ分析。 ２．６统计学分析采用ＤＡＳ统计计算软件，数据
以ｘ±ｓ表示。 ３ 结果 ３．１ 色谱和质谱行为辛伐他汀和洛伐他汀在
１器 霉７８００
笔６０ 三５０
盏４３３
ｑ ４．５
．溉
２０
１０
Ａ
ＴＩＳ正离子电离方式下，均有较好的质谱响应，主 要生成加合离子［Ｍ＋Ｎａ］＋峰，分别为ｍ／ｚ ４４１．４、４２７．４。选择性对［Ｍ＋Ｎａ］＋离子进行产 物离子全扫描分析，辛伐他汀和洛伐他汀生成的 主要碎片离子均为ｍ／ｚ ３２５．４（见图１），将其作为 定量分析时监测的产物离子。