黄鲫胃蛋白酶酶解液体外抗氧化_抑菌作用研究
采用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌肽的抑菌活性
中图分类号 :T 241 S5 .
文献标识码 :A
文章编号 :10 . 32 1)10 1.4 0 18 2 (0 20 .0 40 1
在食 品加工 中,经常利用美拉德反应来提高蛋白质
或 肽 类 的食 品功 能性 和 风 味 性 [7 1】 - 。另 外 ,通 过 美 拉德
菌性 影 响 , 旨在 为 黄鲫 蛋 白抗 菌 肽 的美 拉 德 反应 条 件优 化提 供 参考 。 1 材 料 与 方 法
( 浙江海洋学 院食 品与药学学院 ,浙江 舟 山 3 6 0 ) 1 0 0
摘 要 :以黄鲫蛋 白抗菌肽( HAHp 为底物 ,通过美 拉德 反应 提高其抑菌活性 。以大肠杆菌 为指示菌 ,在 I 0C水 ) O ̄
浴加热条件下 ,比较 HAHp 葡萄糖 、HAHp 蔗 糖、HAH . . . p 麦芽糖和 HAHp 乳糖的美拉德反应物抑菌 活性 ;选 . 用葡萄糖为添加糖 ,测 定 HAHp 葡萄糖 美拉德反应初始 p . H值 、加糖量、加热温度和加热 时间对美拉德 反应物 的 抑菌活性影响 。结果表 明:提高反应 初始 p H值( 于 p .) 大 H60 会降低 HAH p美拉德产物的抑菌活性 ,选择葡萄糖适 宜加入量 ,控制加 热温 度和时 间可 以提 高 HAHp 葡萄糖美拉德 反应物对大肠杆菌 的抑菌活性 。 . 关键词 :黄 鲫蛋 白抗菌肽 ;美 拉德反应 ;抗菌 活性
HAHp l tboers ln r m h a n o 0ri t10 ℃ we' o ae fr er t a tr atvt g isEsh r ha ・ o is e ut gfo c a i ef gfr3 ana 0 l mp r o t ia i cei c i a an t c e i i ec d h n b l a i y c cI oLTh fe to ii a p gu o elv ltmp rtr n dh aigt eo hea t E c eihac la t t o HAHp gu o ee cs fnt n, lc s e e, i l e eauea et n i m nt n i s h rc i oi c vy f - i i -lc s e
酶解鲫鱼蛋白制备生物活性肽的研究
酶解鲫鱼蛋白制备生物活性肽的研究
鲫鱼活性肽是鲫鱼蛋白经蛋白酶水解后生成的一定分子量范围内的多肽混合物,其氨基酸组成和鲫鱼蛋白质基本相同,相比于鲫鱼蛋白质溶解度更高。
鲫鱼多肽易于被人体消化吸收,而且具有多种生理功能,可作为功能性成分在食品体系中加以利用。
本课题对低分子量鲫鱼多肽的制备条件进行优化,通过超滤、离子交换色谱和凝胶过滤层析手段分离后,获得所需分子量大小的混合肽,并对所获得的鲫鱼多肽在体外抑制脂肪酶活性和稳定性等方面进行了研究,旨在为鲫鱼多肽的工业化生产提供理论依据,也为进一步研究开发其营养保健功能提供证据。
具体研究结果如下:采用碱性蛋白酶(2×105U/g)酶解鲫鱼蛋白制备具有体外脂肪酶抑制活性的多肽时,酶解的最优条件是:酶解温度40*℃、pH值11、加酶量100U/mL、酶解时间10h。
通过超滤的方法,得到小于5kDa组分的多肽含量(1.59mg/mL)最高,其脂肪酶抑制率(75.24%)也最高;进一步采用阴离子交换层析(DEAE52)的方法,从小于5kDa的酶解液中分离得出组分C(多肽含量0.42mg/mL),其脂肪酶抑制能力(28.30%)较强;最后采用凝胶过滤层析(SephadexG-25)的方法分离C组分,组分C2(多肽含量0.27mg/mL)表达出最强的脂肪酶抑制能力(达到34.94%),说明了这部分多肽中可能含有抑制脂肪酶作用的分子结构,从而抑制了脂肪分解反应。
本文还研究了鲫鱼活性肽的稳定性,为其在食品及其他行业中应用提供了一定的理论依据:分别测定了鲫鱼活性肽的贮藏稳定性、加热稳定性、酸碱稳定性,数据表明活性肽在-20℃保存5个月后其脂肪酶抑制活性变化不大,说明在低温下肽的活性比较稳定,高温处理也不影响肽生物活性的保持,且其在中性条件下比较
稳定。
不同条件下水解酪蛋白所得到的抗菌肽抑菌效果比较_胡志和
加入 !<’ 浓度为 !$: / <’ 的大肠杆菌菌悬液和 !$<’ 融 水平位置迅速 化并冷却至 )78 左右的无菌营养琼脂, 旋动平皿,使培养基与菌液混合均匀而又不使培养基 荡出平皿或溅到平皿盖上, 并置水平位置室温凝固; 待 培养基凝固后, 将平皿置于 )8 冰箱中 "9, 目的是使琼 脂坚硬, 便于加样。 !( #( #( 7 加 样 在无菌条件 下,用无菌 的外径为 每孔加入 $( $F<’ !$<< 的小试管在琼脂平板上挖洞, 待测样品溶液,水平置于 )8 冰箱中,待样品溶液完 全扩散后 ( 约 !9 ) ,再移至 ":8 恒温培养箱中培养 观察结果, 有抑菌圈出现的样品, 以游标 #)9。#)9 后, 卡尺量其取抑菌环直径, 直径的大小代表其抑菌强度 的大小。 # 结果分析
!营养卫生
食 品 科 学
#$$", %&’( #), *&( # !"!
学科学院天津东方卫生材料厂 + ;营养琼脂 , 化学纯 + , 天津市珠江卫生材料厂 + ; , 天津商 大肠杆菌 ( !" #$%&) 学院微生物教研室保藏。 !( # 主要方法 !( #( ! 抗菌肽的制备 首先,将颗粒状的牛乳酪蛋白研磨成粉末,配制 成所需浓度的溶液, 然后, 用 !$- , . / 0 + 的 *123 溶 放入 )78 水浴锅中温浴至 液缓慢调整溶液的 43 5 6, 溶液温度达到 )78 后, 向酪蛋白溶液中加入新鲜配制 的胰蛋白酶溶液,在 )78 条件下酶解 #9。酶解过程 中, 由于肽键断裂而不断有羧基释放, 体系的 43 值不 断下降,所以,酶解时要不断加入 !$- 的 *123 以维 持体系的 43 值在 : ; 6 的范围之内。同时, 由于本实 验要确定不同水解度条件下,酶解液的抑菌活性,所 以,在酶解的过程中,将在预设计的 6 个时间点分别 取 7<’ 酶解液, 并立刻将其在 6$8 下加热 "<=>, 然后 快速冷却至室温,目的是灭去酶活。 酶解结束后,将 酶解液样品立即放入冰箱保存 ( 不超过 !?)或马上进 行抑菌实验。 水解度计算公式: @3 5 ( A B %) /( C B %2 ) / 6( # B !$$A 5 #( 7<&’ / D <’) %—消耗的氢氧化钠体积( C—酪蛋白底物浓度( E / <’) %2 —体系体积( <’) 6( #—每 E 酪蛋白中所含肽键数( <<&’ / E) !( #( # !( #( #( ! !( #( #( # !( #( #( " !( #( #( ) 抗菌活性测定 活化菌种 制备菌悬液 测菌浓度 倾注平板 取洁净无菌的平皿 " 个,分别
鲫鱼酶解液化技术的研究
鲫鱼酶解液化技术的研究
李莹;周剑忠;黄开红;黄自苏
【期刊名称】《中国食品工业》
【年(卷),期】2008(000)005
【摘要】对鲫鱼酶解液化技术进行了研究.通过正交试验表明复合蛋白酶的最佳酶解工艺:加酶量(E/S):10g·kg-1,酶解温度55℃,pH值5.5,酶解时间5h,此条件下酶解液中氨基态氮含量达到0.0586 g·kg-1;风味蛋白酶的最佳酶解工艺:加酶量
(E/S)10 g·kg-1,酶解温度50℃,pH值7.0,酶解时间6 h,此条件下酶解液中氨基态氮含量达到0.0692 g·kg-1.在酶解底物相同的情况下,风味蛋白酶的酶解速度较复合蛋白酶快,酶解液颜色较好,酶解液苦味均基本脱除.双酶分段酶解比单独采用风味蛋白酶酶解的氨基态氮含量略高.
【总页数】2页(P40-41)
【作者】李莹;周剑忠;黄开红;黄自苏
【作者单位】江苏省农业科学院农产品加工研究所;江苏省农业科学院农产品加工研究所;江苏省农业科学院农产品加工研究所;江苏省农业科学院农产品加工研究所【正文语种】中文
【中图分类】TS2
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小麦蛋白酶解物的分离及其体外抗菌作用的研究
文 章 编 号 :17 — 6 6f 0 0 1— 0 4 0 6 1 94 2 1 ) 0 0 — 3 1
小 麦 蛋 白酶 解 物 的分 离及 其体 外 抗 茵 作 用 的研 究
周世 成 刘 国琴 ,李 琳 ,何粉 霞 , 一 一 ,李 萍
(. I业大学 粮油食 品学院 ,河南 郑州 1 河南l 4 0 5 ;2华南理T大学 轻 T与食品学院 ,广东 广州 5 0 4 ) 502 . 16 0
经 过 反相 高 效 液相 色谱 鉴 定 ,得 到 4个 多肽 组分 。 关 键 词 :小 麦 面筋 蛋 白 ;抗 菌肽 ;分 离 中 图分 类 号 :T 2 9 S 3 文献 标 志 码 :A d 0 99js.6 19 4 J 3 i 2 0
a tb ce ila tvt,flo d y Se a x G-2 g lc o ao rph ,i s ca sfe nt o o p ne s nt ir ba e t ni a tra ciiy olwe h ph de 5 e hrm tg a y t ls i d i o furc m o nt,a i c o ilt s i i m
Ab ta t I h sp p r w e t l tn p oen i h d oy e yAla a ep oe s , e t l tn p o en h d oy ae sp o e s d b sr c: n t i a e , h a u e rt i y r lz d b c l s rt a e wh a u e r ti y r l s tsi r c s e y g s g u r f r t n e h d x G一 5 g l c r mao r p y a d p a e hg ef r n e l u d c r mao rp y i t l r e ,a d t e h a h ai ,S p a e 2 e h o t ga h n h s i h p r ma c i i h o tg a h s e, s d n h i o o q e ih b t n i i o i s de . h e ut h w ta f rutai rt n t e moe u a ih f y r ls tsi Da s o o d n i io n vt s t id T e rs l s o t t l f t i , h lc l r i r u s h ae r lao weg t d oy ae n 5 k h w ag o oh
酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究
酪蛋白酶解物体外抗氧化作用的研究胡文琴;王恬;霍永久;张金霞【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2004(025)004【摘要】采用正交试验设计,以羟自由基清除率为衡量指标,筛选三种蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件.试验结果表明,木瓜蛋白酶最佳酶解条件为pH7.5,酶浓度8%,温度45℃,反应时间90min,羟自由基清除率为71.28%,与同浓度维生素C、维生素E的清除率差异均不显著(p>0.05);枯草杆菌蛋白酶(As1.398)最佳酶解条件为pH7.0,酶浓度2%,温度50℃,反应时间90min,羟自由基清除率为68.60%;胃蛋白酶最佳酶解条件为:pH1.4,酶浓度6%,温度37℃,反应时间30min,羟自由基清除率为66.53%.试验发现,不同的酪蛋白酶解物都有抗脂质过氧化作用,最大抑制率为59.28%.【总页数】5页(P158-162)【作者】胡文琴;王恬;霍永久;张金霞【作者单位】南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095;南京农业大学动物科技学院,江苏,南京,210095【正文语种】中文【中图分类】R151.2【相关文献】1.牛乳酪蛋白酶解物的分离纯化及抗菌肽乳基料的制备研究 [J], 熊清权;李志成;童伟;郑晓莹;苏晋文;葛武鹏;任娇2.山羊乳酪蛋白酶解物制备及体外抗氧化活性研究 [J], 李志成;蒋爱民;熊清权;童伟;郑晓莹3.酪蛋白酶解物中抗菌肽的抑菌性及稳定性研究 [J], 杜军;袁永俊;侯恩娟;戴斌;胡丽丽;杨攀4.κ-酪蛋白酶解物对双歧杆菌的促生长效果研究 [J], 汤茜;李楠;成雪;毛学英;滕国新5.大米蛋白胃蛋白酶酶解物体外抗氧化作用的研究 [J], 王改琴;朱秋凤;张莉莉;王恬因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄鲫蛋白抗菌肽的制备及抗菌作用等生物活性研究
金属离子对黄鲫蛋白抗菌肽(HAHp)抑菌作用影响
金属离子K+、Na+、Ca2+和Mg2+不影响HAHp的抑菌活性,浓度大于 2.5 mmol/L的Fe2+和Zn2+会降低HAHp的抑菌活性,Fe3+的存在不利 于抑菌活性保持.
第三章 黄鲫蛋白抗菌肽的分离纯化
抗菌肽的分离纯化及鉴定研究国内外统一的方法是 根据混合物分子量大小及所带电荷数不同,采用分子筛凝胶过滤法进行初步 的分离纯化处理,然后采用高效液相(HPLC)或反相高效液相(RP-HPLC) 法得到纯组分或半纯组分。 在反相高效色谱分离中,固定相极性低于流动相,根据样品疏水性的强弱 实现分离。这里采用的是C18反相色谱分离。 具体分离条件为:样品先用流动相 A 溶解,经 0.22 μm 过滤除杂,上样量 1.0 mL。 流动相 A:5%乙腈(含 0.1%三氟乙酸)
工艺及优化
响应面分析实验: 在单因素实验基础上,以大肠杆菌为指示菌,抑菌圈直径 为响应值,选择胃蛋白酶/底物,pH,反应时间和水/底物4个变 量,进行响应面试验。
黄鲫蛋白抗菌肽的蛋白提取率、可溶性肽含量及水解度 黄鲫蛋白抗菌肽的分子量分布 氨基酸组成分析 黄鲫蛋白抗菌肽的抗菌谱和抗菌效力
黄鲫食品功能性研究是在不同PH条件下测定其溶解性、乳化性和发 泡性。抑菌影响因素方面主要探讨了金属离子对黄鲫蛋白抗菌 肽抑菌作用的影响
在pH值2~12范围内,他的溶解性都在80%以上,说明该抗菌肽 具有广泛的适用范围
乳化性
发泡性
在 pH 值 2~12具有一定乳化性和泡沫形成能力,其中乳化能力随着 pH 值的增大 而逐渐增强,而乳化稳定性则是 pH6 时达到最高。HAHp 在偏碱性条件下的发泡 性和泡持性强于酸性条件下的发泡性和泡持性,该抗菌肽的 pH 大于 8 时,发泡 性和泡持性大于 60%。
采用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌肽的抑菌活性
采用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌肽的抑菌活性李婷;江晓婉;叶青;于妍;宋茹【摘要】In this study, the activity of antibacterial peptides derived from half-fin anchovy (HAHp) was improved through the Maillard reaction. The Maillard reaction products (MRPs) of HAHp-glucose, HAHp-saccharose, HAHp-maltobiose and HAHp-lactobiose resulting from heating for 30 min at 100 ℃ were compared for their antibacterial activity against Escherichia coll. The effects of initial pH, glucose level, temperature and heating time on the anti-Escherichia coli activity of HAHp-glucose MRPs were explored. The results showed that higher initial pH (above 6.0)provided lower antibacterial activity against Escherichia coil The appropriate level of glucose addition, temperature and heating time could increase the anti-Escherichia coli activity of HAHp-glucose MRPs.%以黄鲫蛋白抗菌肽(HAHp)为底物,通过美拉德反应提高其抑菌活性。
麦糟蛋白的胃肠酶水解液的体外抗氧化活性分析
麦糟蛋白的胃肠酶水解液的体外抗氧化活性分析
饶胜其;方维明;张亚
【期刊名称】《扬州大学烹饪学报》
【年(卷),期】2013(030)003
【摘要】采用胃肠消化酶对麦糟提取蛋白进行胃肠消化模拟实验,研究发现其胃蛋白酶水解液、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶复合酶水解液以及胰酶水解液均具有较强的抗氧化活性.其中,胰酶水解液的总还原能力、DPPH·清除率和脂质过氧化抑制率最高,分别为2.33、39.7%、30.1%;胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶复合酶水解液的超氧阴离子清除率、羟自由基清除率最高,分别为42.0%、53.0%.研究结果表明麦糟蛋白的胃肠酶水解液适合用于抗氧化肽的制备.
【总页数】4页(P28-31)
【作者】饶胜其;方维明;张亚
【作者单位】扬州大学食品科学与工程学院,江苏扬州225127;扬州大学食品科学与工程学院,江苏扬州225127;扬州大学食品科学与工程学院,江苏扬州225127【正文语种】中文
【中图分类】TS201.2
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1.啤酒麦糟制备蛋白饲料过程中蛋白质的转化 [J], 刘力;刘超纲;余世袁
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云芝液体深层发酵产胃蛋白酶抑制剂的研究的开题报告
云芝液体深层发酵产胃蛋白酶抑制剂的研究的开题报告开题报告一、研究背景胃蛋白酶是一种重要的消化酶,在人体消化过程中起着至关重要的作用。
当胃蛋白酶水平升高时,会导致消化不良、胃肠道疾病等问题。
因此,寻找一种能够抑制胃蛋白酶水平的天然产物,具有重要的理论意义和应用价值。
云芝是一种常见的药食两用真菌,具有抗菌、抗氧化、抗炎等多种药理作用。
此外,云芝还具有多糖和多种生物活性物质,因此被广泛应用于药物工业和食品工业。
本研究旨在深入研究云芝的生物活性成分,探究其对胃蛋白酶的抑制作用,并为其在药物和食品工业中的应用提供有力支持。
二、研究目的本研究的主要目的是探究云芝液体深层发酵产生的胃蛋白酶抑制剂。
具体来说,研究将从以下三个方面展开:1. 提取云芝液体深层发酵产生的生物活性成分,对其进行物质组成和结构分析;2. 探究提取物对胃蛋白酶的抑制效果,确定其最佳抑制浓度;3. 控制提取物的生产条件,优化其制备过程,提高产品质量。
三、研究方法1. 云芝液体深层发酵实验;2. 根据实验结果,采用超声波辅助萃取技术提取产物;3. 生物活性成分的分离纯化,利用现代色谱技术(包括高效液相色谱、气相色谱、质谱分析等)对产物进行物质组成和结构分析;4. 通过在不同浓度下对胃蛋白酶的抑制实验,研究提取物对胃蛋白酶的抑制效果;5. 采用响应面试验,优化提取物的制备条件。
四、研究预期成果1. 得到云芝液体深层发酵产生的胃蛋白酶抑制剂,并证明其存在的科学价值;2. 形成一套完整的提取与制备胃蛋白酶抑制剂的方法;3. 提供有力支持为云芝在药物和食品工业的应用提供有力支持;五、研究时间表本研究预计在2021年1月至2022年12月期间完成,具体时间安排如下:1. 2021年1月-2021年4月:文献阅读、研究背景和研究目的的确定;2. 2021年5月-2021年9月:实验方案设计,集中进行实验;3. 2021年10月-2022年5月:提取物的生物活性成分的分离纯化及结构鉴定;4. 2022年6月-2022年10月:实验结果分析、提取物制备工艺的优化,研究论文的撰写及修正;5. 2022年10月-2022年12月:研究报告撰写、答辩等。
胃蛋白酶酶解改善大豆分离蛋白乳化特性的研究
胃蛋白酶酶解改善大豆分离蛋白乳化特性的研究胃蛋白酶食品与发酵工业FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES胃蛋白酶酶解改善大豆分离蛋白乳化特性的研究源博恩,罗东辉,赵谋明,崔春(华南理工大学轻工与食品学院,广东广州,510640)*摘要采用胃蛋白酶对大豆分离蛋白进行适度酶解,通过控制酶解时间得到系列酶解改性产物,系统研究了酶解改性产物的溶解性以及常温放置、冷藏处理和冷藏解冻处理对其乳化特性的变化趋势。
结果显示,可以显著提高蛋白的溶解性,酶解5h为优选条件;酶解处理同时可以明显改善蛋白的乳化特性,常温放置的乳状液,其平均粒径随着蛋白酶解时间延长呈现先增大后减少趋势,而蛋白抗冻融乳化能力则随着酶解时间延长而逐步提高。
关键词大豆分离蛋白,胃蛋白酶,溶解性,粒度分布,乳化特性大豆分离蛋白主要由伴球蛋白(7S)和球蛋白(11S)组成。
7S是由非共价键稳定的三聚体糖蛋白,含有、和三类亚基,具有较好的分子柔性和乳化特性。
11S是由二硫键连接酸性亚基和碱性亚基而成的六聚体,具有致密紧凑的结构,分子量较大,迁移灵活性和表面疏水性较低,从而直接影响其溶解性和乳化性,是限制大豆蛋白在食品工业及相关产业应用的关键因素。
酶解处理可以改变蛋白的电荷分布,表面疏水性和分子量,并且反应高效、温和、安全,是改善蛋白功能特性的重要手段,罗东辉[1]试剂试剂。
1 2 仪器和设备UV2300分光可见分光光度计,上海天美科学仪器有限公司;pHS 25数显pH计,上海精密科学仪器有限公司;APV 1000高压均质机,丹麦APV公司;Mastersizer2000粒度分布仪,英国MalvernInstru mentsLtd。
1 3 试验方法1 3 1 胃蛋白酶酶解大豆分离蛋白将大豆分离蛋白配制成质量分数为10%的溶液并调节pH到2 0,分成6份,加热到37 ,加入胃蛋白酶(酶!蛋白质量=1!1000),反应时间分别为10min、30min、1h、2h、5h、15h,反应结束后调节pH到7 0,随即喷雾干燥得改性大豆分离蛋白。
小黄鱼蛋白酶解液抗氧化活性研究
An t i o x i d a t i v e Ac t i v i t y o f En z y ma t i c Hy d r o l y s a t e f r o m Li t t l e Ye l l o w Cr o a k e r Pr o t e i n
/
¨: 《 : l I j 、l 《 H: I J l 技术 ・ 农 产 品 程
小黄鱼蛋 白酶解液抗氧化活性研 究
纪 莹 张 国增
( 大 连 民族 学 院 生命 科 学 学 院 ,辽 宁 大 连 1 1 6 6 0 0 )
【 摘要 】本文以小黄花鱼为原料,利用蛋白酶解技术对小黄鱼蛋白进行酶解,分别选取 4 组水解度不同的
食 品及 生 物 体 系 中抗 氧 化 剂 的 活性 取 决 于 很 多
如 系统 的 多 相 性 和 不 均 一 陛 、脂 质 底 物 类 型 ( 包 括 他
的理 化 状 态 及 不饱 和 程 度 ) ,引 发剂 的类 型 、特 别 的过 渡 金 属 、其 他 成 分 及 他 们 之 问 可 能 的 相 互 作 。 鉴 下
Abs t r a c t : An t i o x i d a t i r e p r o p e r t i e s o f p r o t e i n h y d r o l y s a | e s p r e p a r e d f r o m s ma l l y e l l o w c r o a k e r( P s e n d o s c i t wn Ⅱ p o 1 ) a c t i s )w e r e s t u d i e d . Hy d r o l y s i s p r o d n e t i n d i f e r e n t DH c o n d i t i o n s w e r e c h o s e t o d e l e r mi n e t h e i r c a p a b i l i t y o f c l e a r i n g
酶水解鲫鱼蛋白质及产物抗氧化活性初探
酶水解鲫鱼蛋白质及产物抗氧化活性初探
顾林;孙婧
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2007(028)010
【摘要】本实验主要研究了碱性蛋白酶对鲫鱼的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶浓度、底物浓度、水解温度、时间、pH对鲫鱼蛋白质水解度的影响,同时用DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基法和改进的邻苯三酚法测定分析水解液的抗氧化活性.结果表明:酶解条件为[E]为4%,[S]为10%,pH8.0,时间为4h,温度为50℃时可以获得较高水解度,同时水解液对DPPH自由基和超氧阴离子自由基(O2-·)具有较高清除率.
【总页数】5页(P184-188)
【作者】顾林;孙婧
【作者单位】扬州大学食品科学与工程学院,江苏,扬州,225001;扬州大学食品科学与工程学院,江苏,扬州,225001
【正文语种】中文
【中图分类】TS254.1
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非酶热反应对黄鲫蛋白抗菌肽的抗菌性和风味特性影响
Ke r s y wo d :h l fn a c o y; a t a t r e t e ;n n e z ma c r a t n;a t a tra c vt ; f v rc a a trsi afi h v - n n i c i p p d s o - n y t e c o b e a l i i i n b ce l a t i i i i y l o h c eitc a r
E f c f n e z m ai e m a a t n o eAn i a t r l t i n lv r a a t r t f l- fe t o No — n y t Th r l c Re c i n t t ce a i t a d F a o o h b i Ac v y Ch r ce i i o ff s c Ha r o An h v t a tr l e f e c o yA i c ei p d s n b aP i
A s a t I i s d , a -nac oyat atr et e ( P) r sbet nez mac at nwi uoe bt c: nt s t y hl f h v i c i ppi sHA swe jc dt n —ny t c o t g c s, r h u f n i nb ea l d eu e oo ir i e hl
mats n dlco e rse t ey a trl a o e eau eo 1 1℃ a dtea t a tra c vt a dfa o etr o n n l ea a ts, p c v l, t s iz t ntmp rtr f 2 o e i a e ii n h n i ce l a t i n l v rfau f o - b i i y e
黄鳍金枪鱼头蛋白酶解液对小鼠免疫功能的调节作用
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蔡本利;洪鹏志;杨萍;饶子亮
【期刊名称】《天然产物研究与开发》
【年(卷),期】2007(019)005
【摘要】以金枪鱼头为原料,经酶解得到蛋白酶解液;以环磷酰胺造小鼠免疫功能低下模型,同时灌胃金枪鱼头蛋白酶解液,观察小鼠免疫脏器指数,巨噬细胞吞噬功能,ConA刺激的淋巴细胞增殖和溶血空斑细胞形成能力.结果显示金枪鱼头蛋白酶解液能显著增强免疫抑制状态下的小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力和胸腺、脾脏指数;明显提高免疫抑制状态小鼠的脾淋巴细胞转化能力及抗体细胞形成能力.说明金枪鱼头蛋白酶解液对环磷酰胺造成的免疫功能低下小鼠的非特异性免疫和特异性免疫功能都有正向调节作用.
【总页数】5页(P791-795)
【作者】蔡本利;洪鹏志;杨萍;饶子亮
【作者单位】广东海洋大学食品科技学院,湛江,524025;广东海洋大学食品科技学院,湛江,524025;广东海洋大学食品科技学院,湛江,524025;广东省医学实验动物中心,南海,528248
【正文语种】中文
【中图分类】R151.3
【相关文献】
1.膜分离金枪鱼头蛋白酶解液的效果研究 [J], 纪丽娜;杨萍;梁生
2.黄鳍金枪鱼头蛋白酶解液及其分级组分对小鼠免疫功能的影响 [J], 杨萍;蔡本利;洪鹏志;饶子亮;章超桦
3.黄蘑多糖Fb对小鼠免疫功能的调节作用 [J], 马岩;马颖哲;张家颖;李晓梅
4.黄鳍金枪鱼头蛋白酶解液及分级组分对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响 [J], 杨萍;蔡本利;洪鹏志
5.酶解法从黄鳍金枪鱼鱼头中提取鱼油的研究 [J], 刘书成;章超桦;洪鹏志;吉宏武因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
鱼类免疫增强剂的种类及研究进展(二)
气温38℃环境中,给草鱼精饲料中添 加1.5%腐质酸,结果表明,试验组鱼 成活率比对照组提高了27.5%,而且 鱼的肠炎、烂鳃病发病率分别降低了 90.4%和89.7%。 9.海带 海带中富碘和海藻多糖,具有免 疫增强和抗应激作用,能提高动物对 环境的适应能力。周世朗(1998)报 道,海带可以提高鱼、虾的抗热应激 能力和抗低溶氧能力等,从而提高 鱼、虾的成活率以及生长性能。 10.螺旋藻(Spirulima ) 据伯良(1999)报道,在对虾苗 的饲料中添加 0.5% ~ 3.0% 的螺旋藻 粉,可有效提高虾苗的增重率,降低 对常见病的易感性,提高成活率;亲 虾饲料中添加螺旋藻粉,可明显提高 受精卵的孵化率和抗热应激能力;海 水网箱养殖的真鲷、灰斑鱼等,病害 常常难以控制,鱼因受疾病的应激, 成活率往往较低,如果在鱼的饲料中 添加螺旋藻粉,不但会大大提高鱼对 疾病的应激抵抗能力,提高成活率, 而且有利于鱼体体色改善,提高商品 鱼的品质。 11.甜菜碱 甜菜碱又名甘氨酸三甲基内酯, 是目前研究和应用范围较广的一种生 物碱。一些研究表明,甜菜碱有调节 淡水鱼、虾类体内渗透压的作用,可 抵抗水中盐水浓度对渗透压的应激; 此外,一些研究表明,甜菜碱还有诱 食和促生长作用,甜菜碱作为甲基的 供体,不但可以促进脂肪代谢,还表 现出稳定维生素、提高饲料利用率的 作用。 其机理是,当组织细胞渗透压发 生明显变化时,甜菜碱能被细胞吸 收,防止细胞的水分流失及盐类的进 入,并提高细胞膜IV2-K泵功能,维
(2007)在异育银鲫上也获得相同结 果,推荐的酵母核苷酸适宜添加量亦 为344mg/kg。周兴华等(2009)在锦 鲤幼鱼上的研究再次支持了上述研究 结果,通过对锦鲤幼鱼的增重率、特 定生长率、饲料与机体组成等指标的 观测,认为锦鲤幼鱼饲料中适宜添加 酵母苷酸的量为387mg/kg。 7.大蒜 大蒜属温性和类似抗生素的饲料 添加剂。大蒜含有大蒜素、钙、铁、 镁、硒、锗等营养物质,在鱼、虾饲 料中添加1%~2%的大蒜粉,可增强 鱼、虾抗寒应激能力,而且可以提高 鱼、虾的肉质,预防多种疾病发生。 8.腐质酸 腐质酸是天然的“绿色”动物饲 料添加剂。其在动物体内具有增强免 疫功能,促进动物生长、抗炎、抗溃 疡、促进肠道微生态平衡、抗环境污 染、抗感染的应激功能。中国科学院 海洋研究所(1997),在对虾育苗水 体中添加10g/m 的腐质酸,可解除重 金属(Cn、Zn)对对虾的毒害,从而 提高对虾受精卵孵化率50.3%和幼虾 成活率64.1%。张长舒等(1999)在
中西药联用对柱状黄杆菌体外抑菌作用研究
中西药联用对柱状黄杆菌体外抑菌作用研究摘要:柱状病的病原是柱状黄杆菌,柱状黄杆菌可以感染草鱼、鲤鱼、斑点叉尾鮰、银龙鱼、虫纹鳕鲈等鱼类,几乎所有的淡水鱼类都易感。
感染初期鳍条顶端、吻端,皮肤鳃丝末端生长繁殖,形成黄白色点状病灶,随着病情发展,鳍条蛀烂,向基部溃烂,鳃丝溃烂。
以柱状黄杆菌为研究对象,进行了中西药单方及复方制剂的体外抑制试验。
关键词:中西药;柱状黄杆菌;体外抑菌;作用1材料方法1.1菌株柱状黄杆菌分离于发病虫纹鳕鲈Murraycod(Maccullochellapeeliipeelii);恩诺沙星、复方磺胺二甲氧嘧啶、氟苯尼考购于北京渔经公司;黄柏、黄芩、金银花、板蓝根、苦参、大黄、鱼腥草、五倍子、穿心莲、黄芪、大青叶、连翘购自甘肃省卓尼县九峰生态药业有限责任公司。
1.2方法1.2.1药品制取药物母液的制取:称取市场上选购的药物50mg,溶于50mL杀菌水,彻底融解后0.22μm滤膜过虑除菌,制取成1000mg/L的药水,4℃储存备用。
中草药材的制取:称取10g药品,添加杀菌水100mL泡浸1h,煎制0.5h,不时开展拌和,药水用尼龙沙布过虑,滤渣再度煎制、过虑,合拼药水后,水浴萃取至50mL,药水浓度值即为200mg/mL,5000rpm离心,取上清,0.22μm滤膜过虑除菌。
配置好的药品分装于1.5mL杀菌离心管中,-20℃储存备用。
1.2.1药品的初筛选用纸片蔓延法,参考杭州天和微生物菌种有限公司具体操作指南开展,黄杆菌选用Shieh培养基。
匀称涂布实验菌液(1.0×108CFU/mL)于平板上,将空缺药敏纸片平贴于平板上(4片/平板),每个空缺纸滴加5μL药水,28℃培养48h,用精度1mm尺子测量抑菌环的直径,并纪录结果。
1.2.2药品的最少抑菌浓度值测定根据基本挑选结果,挑选出具备优良抗菌效果的药品,明确最少抑菌浓度值。
在1.5mL离心管中开展,第一管添加900μL液态培养基,第2至12管各自添加500μL培养基,第一管加上100μL液态,充足混和并吸出500μL第二管添加L,先后稀释液两次,直到最后一管。
基于黄鲫蛋白肽制备南美白对虾多酚氧化酶复合生物抑制剂的研究
基于黄鲫蛋白肽制备南美白对虾多酚氧化酶复合生物抑制剂的研究张敏珍;邹小雨;宋茹【期刊名称】《食品安全质量检测学报》【年(卷),期】2024(15)8【摘要】目的以黄鲫蛋白肽(half-fin anchovy hydrolysate peptides,HAHp)为基料复配抗坏血酸和茶多酚制备南美白对虾多酚氧化酶(polyphenol oxidase, PPO)复合生物抑制剂(composite biological inhibitor, CBI)。
方法以南美白对虾PPO抑制率为检测指标,分别研究HAHp、抗坏血酸、茶多酚、柠檬酸和乙二胺四乙酸二钠盐(ethylenediaminetetraacetic acid disodium salt, EDTA-2Na)单独抑制PPO活性,选取HAHp、抗坏血酸和茶多酚进行三因素三水平正交优化实验优化CBI配方组成,通过酶促动力学研究CBI对南美白对虾PPO的抑制模式。
结果HAHp、抗坏血酸、茶多酚、柠檬酸和EDTA-2Na对南美白对虾PPO都有一定的抑制作用,且有一定的剂量依赖性,但单一抑制剂对PPO的抑制作用有限。
HAHp 与天然抗氧化剂抗坏血酸和茶多酚复配,经(L933)正交实验优化CBI的最佳配方为:0.7%HAHp、0.02%抗坏血酸和0.20%茶多酚。
经测定CBI对南美白对虾PPO 抑制率达到94.71%±0.46%,酶促动力学结果表明CBI是一种混合型抑制剂,通过降低南美白对虾PPO对底物亲和力实现抑制PPO活力。
结论以HAHp为基料复配抗坏血酸和茶多酚制备的CBI能够有效地抑制南美白对虾PPO活性,有望开发成一种防虾黑变的天然抑制剂,为南美白对虾天然保鲜剂的研究奠定了理论基础。
【总页数】8页(P122-129)【作者】张敏珍;邹小雨;宋茹【作者单位】浙江海洋大学食品与药学学院【正文语种】中文【中图分类】TS2【相关文献】1.黄鲫蛋白抗菌肽—葡萄糖美拉德反应物的抑菌性实验研究2.复合菌共生发酵法酶解甘薯蛋白制备生物活性肽的研究3.南美白对虾血蓝蛋白对酚氧化酶活性的影响4.玉米醇溶蛋白肽-丁香酚纳米复合粒子稳定的皮克林乳液的制备及性质5.基于生物信息学稻米半胱氨酸蛋白酶抑制剂来源生物活性肽的虚拟筛选及分子对接研究因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
黄鲫胃蛋白酶酶解液体外抗氧化_抑菌作用研究_宋茹
黄鲫胃蛋白酶酶解液体外抗氧化、抑菌作用研究宋 茹1,2,汪东风2,谢 超1,王 铣1(1. 浙江海洋学院食品与药学学院,浙江 舟山 316004;2.中国海洋大学食品科学与工程学院,山东 青岛 266003)摘 要:采用胃蛋白酶水解黄鲫,测定酶解液的蛋白提取率、可溶性肽含量、水解度及氨基酸组成,并对酶解液体外抗氧化和抑菌作用进行研究。
结果表明:黄鲫胃蛋白酶酶解液的蛋白提取率、可溶性肽提取率、水解度分别为 (110.28±4.81)%、(81.78±0.04)%和 (18.12±0.39)%,黄鲫胃蛋白酶酶解液的人体必需氨基酸相对含量可达37.91%。
黄鲫胃蛋白酶酶解液具有很强的抗氧化能力,清除羟自由基和DPPH 自由基的ED 50分别为4.55μg/mL 和4.46μg/mL ,还原力随着黄鲫胃蛋白酶酶解液质量浓度的增加而增大,在3.4μg/mL 和13.6μg/mL 低、中质量浓度时螯合金属离子能力与EDTA 接近。
体外抑菌实验显示:黄鲫胃蛋白酶酶解液具有广谱抑菌性,对大肠杆菌的抑菌效力分别与 13.21~15.44mcg/mL 的氨苄青霉素和 325.00~340.00U/mL 的硫酸链霉素相当 (P >0.05)。
关键词:黄鲫;胃蛋白酶;酶解液;抗氧化作用;抑菌作用in vitro Antioxidant and Antibacterial Activities of Pepsin Hydrolysate of Half-fin Anchovy (Setipinna taty )SONG Ru 1,2,WANG Dong-feng 2,XIE Chao 1,WANG Xian 1(1. College of Food Science and Pharmacy, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316004, China ;2. College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)Abstract :Half-fin anchovy (Setipinna taty ) homogenate was hydrolysated by pepsin. Protein yield, contents of soluble peptides and degree of hydrolysis were analyzed and in vitro antioxidant and antibacterial activities of the hydrolysates were also evaluated.Results showed protein extract rate, soluble peptides contents, degree of hydrolysis of half-fin anchovy pepsin hydrolysate were (110±4.81)%, (81.78±0.04)% and (18.12±0.39)%, respectively. The relative contents of essential amino acids in half-fin anchovy hydrolysate (HAH) reached 37.91%. HAH showed strong radical scavenging activity against hydroxyl and DPPH radicals with the ED 50 values of 4.55μg/mL and 4.46 μg/mL, respectively. The reducing power increased with rising concentration and the metal chelating ability was equivalent to that of EDTA at the 3.4μg/mL or 13.6 μg/mL. HAH displayed broad antibacterial spectra in vitro and the antibacterial effecacy against Escherichia coli was equal to 13.21-15.44 mcg/mL of ampicillin of and 325.00-340.00 U/mL of streptomycin sulfate (P >0.05).Key words :half-fin anchovy (Setipinna taty );pepsin ;hydrolysates ;antioxidant activity ;antibacterial activity 中图分类号:TS254.1 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2010)03-0127-05收稿日期:2009-07-31基金项目:舟山市科技计划项目(Y20082086)作者简介:宋茹(1976—),女,讲师,博士研究生,研究方向为食品加工与检验。
胃蛋白酶胰蛋白酶水解酪蛋白的研究
胃蛋白酶胰蛋白酶水解酪蛋白的研究
王芃
【期刊名称】《食品研究与开发》
【年(卷),期】2010(031)007
【摘要】主要研究胃蛋白酶、胰蛋白酶水解酪蛋白的过程.首先通过正交试验研究了胃蛋白和胰蛋白酶水解酪蛋白的最佳条件,分别为酶浓度0.15%、温度55℃、pH7.5、底物浓度6%和酶浓度1%、温度55℃、pH=1.6、底物浓度1%.然后对于胃蛋白酶胰蛋白酶组合水解进行研究,最后通过层析分离和液相色谱初步验证了水解产物含有β-啡肽-7等生物活性多肤.
【总页数】5页(P143-147)
【作者】王芃
【作者单位】天津现代职业技术学院,天津,300222
【正文语种】中文
【相关文献】
1.胰蛋白酶水解酪蛋白生产CPP水解工艺条件的研究 [J], 牟光庆;曹冬梅;巩军;张丽萍
2.胃蛋白酶中性蛋白酶水解酪蛋白的研究 [J], 王立晖;卢楠;李培骏
3.胃蛋白酶水解酪蛋白生成β-酪啡肽-7的研究 [J], 王立晖;袁永俊;孙勇民;李培俊
4.胰蛋白酶水解法生产酪蛋白源活性肽的条件研究 [J], 周根来;方希修;方波
5.酪蛋白的胰蛋白酶水解物分离及其抗氧化性研究 [J], 秦娟娟; 何超群; 刘金龙; 李晶; 杨继涛; 杨敏
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黄鲫胃蛋白酶酶解液体外抗氧化、抑菌作用研究宋 茹1,2,汪东风2,谢 超1,王 铣1(1. 浙江海洋学院食品与药学学院,浙江 舟山 316004;2.中国海洋大学食品科学与工程学院,山东 青岛 266003)摘 要:采用胃蛋白酶水解黄鲫,测定酶解液的蛋白提取率、可溶性肽含量、水解度及氨基酸组成,并对酶解液体外抗氧化和抑菌作用进行研究。
结果表明:黄鲫胃蛋白酶酶解液的蛋白提取率、可溶性肽提取率、水解度分别为 (110.28±4.81)%、(81.78±0.04)%和 (18.12±0.39)%,黄鲫胃蛋白酶酶解液的人体必需氨基酸相对含量可达37.91%。
黄鲫胃蛋白酶酶解液具有很强的抗氧化能力,清除羟自由基和DPPH 自由基的ED 50分别为4.55μg/mL 和4.46μg/mL ,还原力随着黄鲫胃蛋白酶酶解液质量浓度的增加而增大,在3.4μg/mL 和13.6μg/mL 低、中质量浓度时螯合金属离子能力与EDTA 接近。
体外抑菌实验显示:黄鲫胃蛋白酶酶解液具有广谱抑菌性,对大肠杆菌的抑菌效力分别与 13.21~15.44mcg/mL 的氨苄青霉素和 325.00~340.00U/mL 的硫酸链霉素相当 (P >0.05)。
关键词:黄鲫;胃蛋白酶;酶解液;抗氧化作用;抑菌作用in vitro Antioxidant and Antibacterial Activities of Pepsin Hydrolysate of Half-fin Anchovy (Setipinna taty )SONG Ru 1,2,WANG Dong-feng 2,XIE Chao 1,WANG Xian 1(1. College of Food Science and Pharmacy, Zhejiang Ocean University, Zhoushan 316004, China ;2. College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)Abstract :Half-fin anchovy (Setipinna taty ) homogenate was hydrolysated by pepsin. Protein yield, contents of soluble peptides and degree of hydrolysis were analyzed and in vitro antioxidant and antibacterial activities of the hydrolysates were also evaluated.Results showed protein extract rate, soluble peptides contents, degree of hydrolysis of half-fin anchovy pepsin hydrolysate were (110±4.81)%, (81.78±0.04)% and (18.12±0.39)%, respectively. The relative contents of essential amino acids in half-fin anchovy hydrolysate (HAH) reached 37.91%. HAH showed strong radical scavenging activity against hydroxyl and DPPH radicals with the ED 50 values of 4.55μg/mL and 4.46 μg/mL, respectively. The reducing power increased with rising concentration and the metal chelating ability was equivalent to that of EDTA at the 3.4μg/mL or 13.6 μg/mL. HAH displayed broad antibacterial spectra in vitro and the antibacterial effecacy against Escherichia coli was equal to 13.21-15.44 mcg/mL of ampicillin of and 325.00-340.00 U/mL of streptomycin sulfate (P >0.05).Key words :half-fin anchovy (Setipinna taty );pepsin ;hydrolysates ;antioxidant activity ;antibacterial activity 中图分类号:TS254.1 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2010)03-0127-05收稿日期:2009-07-31基金项目:舟山市科技计划项目(Y20082086)作者简介:宋茹(1976—),女,讲师,博士研究生,研究方向为食品加工与检验。
E-mail :happysong545@黄鲫(Setipinna taty )属鳀科,黄鲫属,在我国南海、东海、黄海、渤海海域可常年捕获,且产量较大[1]。
但其个体小且肉薄、刺多,目前主要是加工成干制品。
国内外学者通过酶解方式从加工利用率低的海水鱼及废弃物中获得大量的生物活性物质,如:具有抗氧化作用的太平洋鳕鱼蛋白酶解液、金枪鱼骨蛋白肽[2-3],牡蛎蛋白抗菌肽[4],海鲷鳞血管紧张素抑制肽[5]等。
有关黄鲫蛋白酶酶解液生物活性的研究还未见报道,本研究在前期实验基础上对黄鲫胃蛋白酶酶解液的体外抗氧化作用和抑菌作用进行研究,旨在为黄鲫蛋白酶酶解液中活性物质的进一步分离纯化和鉴定提供参考。
1材料与方法1.1材料与试剂黄鲫购于舟山南珍水产市场。
大肠杆菌(E s c h e r i c h i a c o l i )、荧光假单孢菌(Ps eud omo nas f luo res cen s )、普通变形菌(Pr ot eu s vulgaris )、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa )、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus )、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis )、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium )、八叠球菌(Sarcina)、藤黄八叠球菌(Sarcina lutea)为浙江海洋学院食品与药学学院、医学院食品实验室保存菌种。
胃蛋白酶、牛血清白蛋白、氨苄青霉素、硫酸链霉素、1,1-二苯基-2-苦基肼(DPPH)为生化试剂;二丁基羟基甲苯(BHT)食品级;其余试剂均为分析纯。
1.2仪器与设备BS110S 型电子分析天平北京赛多利斯分析天平有限公司;DS-1型高速组织捣碎机上海标本模型厂;PP-20型pH计德国赛多利斯公司;HHS型电热恒温水浴锅海博迅实业有限公司医疗设备厂;EYELA N-10001旋转蒸发仪上海爱朗仪器有限公司;LDZX-40BI 型立式自动电热压力蒸汽灭菌器上海申安医疗器械厂;KDN-04C型数控消化炉上海新嘉电子有限公司;HWS型智能生化培养箱宁波江南仪器厂;SW-CJ-1F型单人双面净化工作台苏州净化设备有限公司;Himae CF 16 RX型多功能离心机;UV-1200UV型紫外-可见分光光度计;PICO TAG氨基酸分析仪美国Waters公司。
1.3方法1.3.1黄鲫胃蛋白酶酶解液(HAH)制备黄鲫去内脏后洗净,组织捣碎机捣碎,按照一定比例加入去离子水混合,混合浆液用酸调节p H值到2.0,37℃保温10min,加入适量胃蛋白酶并搅拌均匀。
酶解过程中的前30min每隔15min加入少量盐酸或碱保持pH值在2.0。
反应结束后,95~100℃加热10min钝化灭酶。
混合液经低温(4℃)7000r/min离心10min,弃去上层油膜和底部残渣,留中间酶解液再经过滤可得澄清液体,-20℃保藏备用。
1.3.2蛋白提取率(NR)测定黄鲫经胃蛋白酶水解后,记录水解离心后上清液的总体积,然后取5mL水解液,用凯氏定氮法[6]分别测定上清液中蛋白含量及原料中总蛋白含量。
上清液中总蛋白质含量蛋白提取率/%=———————————×100原料中总蛋白质含量1.3.3可溶性肽含量测定采用三氯乙酸(TCA)沉淀法。
取水解后上清液5mL 于离心管中,加入5mL浓度为15%TCA液,摇匀并静置30min后,8000r/min 离心15min,凯氏定氮法测定5mL 酶解液总蛋白质及离心后上清液蛋白质含量。
TCA沉淀后上清液中总蛋白质含量可溶性肽含量/%=——————————————×100酶解液总蛋白质含量1.3.4水解度(DH)测定采用茚三酮比色法[6]测定上清液中游离氨基态氮量,凯氏定氮法测定原料总氮量。
上清液中游离氨基态氮总量水解液/%=——————————————×100原料总氮量1.3.5氨基酸组成分析取一定量黄鲫胃蛋白酶酶解液,加入6mol/L HCl 充氮气后,热融密封,110℃烘箱中水解24h,脱酸后,用水定容至适量浓度,用氨基酸分析仪测定。
1.3.6体外抗氧化能力测定1.3.6.1体外清除羟自由基和DPPH自由基体外清除羟自由基方法参照文献[7]略加修改。
取0.75mmol/L 邻二氮菲1mL于试管中,依次加入pH7.40的PBS缓冲液2mL,样品1mL,充分混匀后,加入0.75mmol/L 的硫酸亚铁1mL,混匀,加0.12%的H2O21mL,37℃保温90min,蒸馏水调零,536nm波长处测其吸光度,计作A s;用1mL蒸馏水代替1mL H2O2测其吸光度,记为A b;用1mL的蒸馏水代替1mL样品测其吸光度,记为A p。
A s-A p羟自由基清除率/%=—————×100A b-A p体外清除DPPH自由基测定方法参照文献[8]略加修改。
1.5mL样品同1.5mL 99.5% 乙醇混合,加上375μL 0.02% DPPH自由基的99.5%乙醇液,剧烈混合,室温暗室下放置60min,99.5%乙醇调零,测定517nm波长处吸光度,记作A样品;用1.5mL 蒸馏水代替1.5mL样品,其余条件同样品测定,记作A对照;用375μL乙醇代替375μL 的0.02% DPPH乙醇液,其余条件同样品测定吸光度,记作A空白。