速溶茶中茶多酚含量测定操作规程
测定茶多酚含量实验报告
一、实验目的1. 了解茶多酚的化学性质和生理功能。
2. 掌握测定茶多酚含量的实验原理和方法。
3. 通过实验操作，提高对分光光度法等实验技术的熟练程度。
4. 比较不同茶叶样品中茶多酚含量的差异。
二、实验原理茶多酚是茶叶中的主要活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗癌、降血脂、降血压等多种保健功效。
本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚的含量。
该方法基于茶多酚与特定试剂发生显色反应，根据吸光度与茶多酚含量成正比的关系，计算样品中茶多酚的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 绿茶、红茶、乌龙茶等茶叶样品- 茶多酚标准品- 乙醇、氢氧化钠、盐酸、硫酸等试剂- pH7.5磷酸盐缓冲液- 酒石酸亚铁溶液- 水为蒸馏水2. 实验仪器：- 分析天平- 分光光度计- 烧杯、试管、移液管、滴定管等玻璃仪器四、实验步骤1. 标准曲线的绘制：- 准备一系列已知浓度的茶多酚标准溶液。
- 将标准溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。
- 以茶多酚浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 称取一定量的茶叶样品，用乙醇提取茶多酚。
- 将提取液稀释至适当浓度。
- 将稀释后的样品溶液与酒石酸亚铁溶液混合，在特定波长下测定吸光度。
- 根据标准曲线，计算样品中茶多酚的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：- 在特定波长下，茶多酚标准溶液的吸光度与浓度呈线性关系。
- 标准曲线的线性回归方程为：A = 0.033C + 0.005，相关系数R² = 0.996。
2. 样品测定：- 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量分别为：27.6%、24.2%、22.8%。
- 不同茶叶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。
六、实验结论1. 本实验采用分光光度法测定茶叶中茶多酚含量，方法简便、准确、可靠。
2. 绿茶、红茶、乌龙茶样品中茶多酚含量存在显著差异，可能与茶叶品种、产地、加工工艺等因素有关。
茶多酚的测定作业指导书
作业指导书OPERATI NG I NSTRUCTI ONS茶多酚的测定编号：XZJY038-00-2019版本：第一版第0次修改编制: 审核: 批准:实施日期：2019.01.01一、编制目的为规范单位对茶多酚的检测，编写本作业指导书。
二、编制依据GB/T 21733-2008《茶饮料》三、实验原理茶叶中的多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，用分光光度计法测定其含量。
四、仪器和试剂4.1仪器 4.1.1分析天平（感量0.001g）4.1.2分光光度计4.2试剂除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的三级水。
4.2.1酒石酸亚铁溶液：称取硫酸亚铁 0.1g和酒石酸钾钠0.5g，用水溶解并定容至100ml4.2.2 PH7.5磷酸缓冲溶液。
4.2.2.123.87g/L 磷酸氢二钠.4.2.2.29.08g/L 磷酸二氢钾.五、分析步骤 5.1试液制备5.1.1较透明的样液将样液重复摇匀后，备用5.1.2较浑浊的样液称取充分混匀的样液25.00于50ml 容量瓶中，加入95沱醇15ml ，充 分摇匀，放置15min 后，用水定容至刻度。
用慢速定量滤纸过滤，滤液备 用。
5.1.3含碳酸气的样液量取充分混匀的样液100.00g 于250ml 烧杯中，称取其总质量，然后置 于电炉上加热至沸，在微沸状态下加热10min,将二氧化碳气排除。
冷却后, 用水补足其原来的质量。
摇匀后，备用 5.2测定精确称取上述制备的试液1g~5g 于25ml 容量瓶中，加水4ml 、酒石酸亚 铁溶液5ml ，充分摇匀，用PH7.5磷酸缓冲溶液定容至刻度。
用10mm ：匕色 皿，在波长540nm 处，以试剂空白作参比，测定其吸光度。
同时称取等量 的试液于25ml 容量瓶中，加水4ml,用PH7.5磷酸缓冲溶液定容至刻度测 定其吸光度，以试剂空白作参比样品中茶多酚的含量按公式计算式中：X ---- 样品中茶多酚的含量，毫克每千克（mg/kg ） A --- 试液显色后的吸光度 A 2――试液底色的吸光度 K ――稀释倍数m 测定时称取试液的质量，克（g ）允许差：同一样品的两次平行线测定结果之差，不得超过平均值的5%A A 1.957 2 Km 1000。
茶叶茶多酚含量的测定
茶叶茶多酚含量的测定茶叶茶多酚含量的测定方法（以农贸一班2组数据为例）一、以没食子酸含量做标准曲线进行计算：上图中的横坐标为每25ml没食子酸标准液中没食子酸的含量，纵坐标为吸光度值。
样品待测液含量对应关系：25ml待测液中茶多酚含量=10ml1/10=0.2g茶叶中茶多酚总含量的1/100。
由对应关系进行公式推导：茶叶样品中茶多酚含量（%）=浸提液中茶多酚的含量/（样品质量*干物质含量）浸提液中茶多酚的含量=1ml中茶多酚含量*10ml=10ml稀释液中茶多酚的含量*10*10ml=25ml待测液中茶多酚的含量*10*10ml茶多酚含量（%）=A*V*d/(L*m*m1*(10^6)),稀释因子d应该为10。
同时由于：A=K*X+b,所以此公式应该调整为：茶多酚含量（%）=[(A-b)*V*d/(L*m*m1*(10^6))]*100A----待测液平均吸光度b----标准曲线公式中的常量，本实验为-0.0134V----浸提液体积本实验为10mld----稀释因子，在以没食子酸含量为横坐标的计算方法中，d=10L----标准曲线斜率m----样品质量，本实验为0.2m1----样品干物质含量，本实验为80%详细过程如下：A1=0.885 A2=0.822 A3=0.784平均光度值A=（A1+A2+A3）/3=0.830将A值带入公式:茶多酚含量（%）= [( A-b)*V*d/(L*m*m1*(10^6))]*100,可以求得茶叶样品中茶多酚的含量=13.5%二、以没食子酸浓度作标准曲线上图中的横坐标为没食子酸标准溶液的浓度，纵坐标吸光度A此时的计算公式推导过程为：茶叶样品中茶多酚含量（%）=0.2g茶叶中茶多酚含量/（0.2*干物质含量）0.2g茶叶中茶多酚的含量为=浸提液浓度*10浸提液浓度=10ml稀释液浓度*10010ml稀释液浓度=25ml待测液浓度*25ml/10ml25ml待测液浓度可以由标准曲线公式：A=L*X+b测得。
茶多酚含量测定
植物生理学模块实验指导李玲主编科学出版社茶多酚含量的测定方法（分光光度计法）【实验目的】学习用酒石酸铁比色法测定茶多酚含量的方法，了解茶多酚在植物抗氧化活性中的作用。
【实验原理】茶多酚是一类儿茶素为主体的类黄酮化合物，具有C6—C3—C6碳骨架结构，是一种重要的天然抗氧化性物质。
它是超氧阴离子自由基和羟自由基的强捕获剂，能清除自由基。
本实验介绍用酒石酸铁比色法测定植物组织中的茶多酚含量。
【器材与试剂】1.实验仪器与用具分光光度计、离心机、研钵、水浴锅、移液管、烘箱、具塞三角瓶2.实验试剂0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.8）100μg/ml儿茶素标准液：称取10mg儿茶素，用蒸馏水定容至100m l。
1.5%酒石酸钾铁3.实验材料同抗坏血酸。
【实验操作】1. 称取1g样品，研磨成粉末。
用50ml沸蒸馏水将粉末洗入三角瓶，于沸水浴中浸提20mi n，过滤，滤渣用50m l蒸馏水同样提取一次，合并上清液，5000g离心15mi n，取上清液待用。
2.将儿茶素标准溶液稀释成0、20、40、60、80、100μg/ml，分别吸取1m l，加0.1mol/L 磷酸缓冲液3ml，混匀，加1.5%酒石酸钾铁1m l，用分光光度计测定540nm处的O D值，并绘制浓度-OD标准曲线。
3.取样品提取液1ml，按上述同意方法测定540nm处的OD值。
【实验作业】根据公式，计算植物幼叶和成熟叶中茶多酚的含量，分析原因。
茶多酚含量（μg/g鲜重）=C×（提取液总体积×体积稀释倍数）式中，C为从标准曲线中查得提取液中茶多酚含量（μg/ml）。
【注意事项】提取时间过长，所提的茶多酚会发生氧化反应，转化成其他物质，致使一部分茶多酚丢失。
实验四茶叶中茶多酚含量的测定
实验四茶叶中茶多酚含量的测定——高锰酸钾直接滴定法一、目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作二、原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
三、仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为 1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
四、测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶多酚的检测方法(行业)
茶多酚检验操作规程1、目的：规定茶多酚检验的操作规程。
2、适用范围：适用于茶多酚的检验。
3、职责：检验人员严格按该操作规程执行。
4、内容：4.1 取样4.1.1 取样器：不锈钢长匙。
4.1.2 取样方法：混合缩分法。
4.1.3 取样量：混合缩分后，取符合检测全项目及留样的样品数量。
4.2 操作方法：4.2.1 样品制备：取混合均匀后的样品适量，于自封塑料袋中备用4.2.2 制备好的留样袋上贴上该产品生产批号、名称、留样时间。
4.3 茶多酚含量测定：4.3.1 依据：QB2154—95。
4.3.3 检验方法：分光光度法。
4.3.3 仪器和用具：分析天平、分光光度仪、移液管、比色皿（1cm）。
4.3.4 试剂和溶液：蒸馏水、酒石酸亚铁溶液、PH7.5磷酸盐缓冲液。
4.3.5 酒石酸亚铁溶液的配制：称取硫酸亚铁1.0g、酒石酸钾钠5.0g、加水溶解并溶至1L。
4.3.6 PH7.5磷酸盐缓冲液配制：a液：1/15moL/L磷酸氢二钠溶液：称取23.877g加水溶解并稀至1L。
b液：1/15moL/L的磷酸二氢钾液：称取经110℃烘干的磷酸二氢钾9.078g，加水溶解1L。
取a液85mL和b液15mL混匀，即待PH7.5缓冲液。
4.3.7 操作方法：4.3.7.1 准确称取样品约100mg，精密称定于100mL容量瓶中，加水溶解后稀至刻度。
4.3.7.2 准确吸取上述试液1mL于25mL容量瓶中，加水4mL，加酒石酸亚铁溶液5mL，充分混匀后，用PH7.5缓冲液稀至刻度。
4.3.7.3以试剂空白液作为参比液，于540mm波长处，测定试液吸光度A。
4.3.8 结果计算：茶多酚含量＝A ×2.884×1001000×W×100％ 4.4 儿茶素中各组成及咖啡碱含量测定：4.4.1 依据：茶多酚中儿茶素、咖啡碱含量高相液谱法4.4.2 方法：面积归一法4.4.3 仪器和用具：（1） P1201高相液相色谱仪、EC2006色谱工作站、100mL 进样器、柱温箱、紫外分光检测器、电子天平。
茶茶多酚测定
茶茶多酚测定茶茶多酚测定Tea—Determination of tea polyphenols contentGB/T8313—2002代替GB/T8313—19871 范围本标准规定了对茶叶中茶多酚测定的原理、仪器和用具、试剂和溶液、操作方法及结果计算方法。
本标准适用于茶叶中茶多酚含量的测定，不适用于茶叶提取物制品中茶多酚的测定。
2 引用标准下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。
本标准出版时，所示版本均为有效。
所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。
GB/T8302—2002 茶取样GB/T8303—2002 茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定GB/T8312—2002 茶咖啡碱测定3 定义本标准采用下列定义。
茶多酚 tea polyphenols茶叶水浸出物中与亚铁离子产生络合反应的酚类化合物。
4 原理茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。
用分光光度法测定其含量。
5 仪器和用具实验室常规仪器及下列各项：5．1 分析天平：感量0.001g。
5．2 分光光度仪。
6 试剂和溶液所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。
6．1 酒石酸亚铁溶液：称取1.0g硫酸亚铁（FeSO4·7H2O）和5.0g酒石酸钾钠（C14H4O6KNa·4H2O），用水溶解并定容至1L（低温保存有效期10天）。
6．2 PH7.5磷酸盐缓冲液6．2．1 1/15mol/L磷酸氢二钠：称取23.9g十二水磷酸氢二钠（Na2HPO4·12H2O），加水溶解后定容至1L。
6．2．2 1/15mol/L磷酸二氢钠：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钠（KH2PO4）9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液85mL和1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液15mL混合均匀。
7 操作方法7．1 取样按GB/T8302的规定。
茶叶中茶多酚的检测方法
茶叶中茶多酚的检测方法，我们必须对茶多酚有一个比较详细的了解茶多酚因为其独特的分子结构，有很强的氧化性以及螯合性，所以能很好的清除人体内的自由基，起到抗氧化、抗衰老的效果；同样也因为其分子结构中的酚羟基，所以茶多酚有很好的螯合性能，能够与蛋白质，金属离子相结合。
据了解，茶多酚能与20多种离子产生络合，与其中10多种产生沉淀，再者，络合产物很多会产生明显的色泽变化。
所以茶多酚的检测方法有很多：1，蛋白质沉淀法：利用与蛋白质的络合沉淀特征检测茶多酚的含量；2，金属例子螯合法：就像GB/T8313-2002茶叶和GB/T21733-2008茶饮料中的检测方法一样，利用多酚羟基与铁离子的螯合变成蓝紫色的特性，在540nm出进行检测；3，氧化法：高锰酸钾与茶多酚的氧化滴定，但是这种方法误差较大，所以目前已经用的很少了；再就是GB/T8313-2008的福林酚法，利用福林酚能将茶多酚氧化然后自己被还原呈蓝色的特征。
目前使用的比较多的就是GB/T8313-2002的酒石酸亚铁法与GB/T8313-2008中的福林酚试剂法！酒石酸亚铁法作为茶多酚检测的经典方法在国内被应用了几十年，采用3.913的经验系数进行茶多酚的检测，但是在“食品添加剂茶多酚”的检测标准中则是以没食子酸作标准曲线，系数2.78。
同样的茶多酚检测，为什么会有不同的系数呢，很多人或许会疑惑？！但实际上3.913的的系数是以茶叶的乙酸乙酯分离物作为标定物质作标准曲线的，因为乙酸乙酯分离物中不仅仅包括了多酚类物质，还包括了一些其他内涵成分，所以检测结果会偏大，目前主要用于饮料行业中，而2.78的系数则主要用在植物提取物茶多酚领域，其主要区别在于采用的标定物不一致！当然酒石酸亚铁法也有自身的缺点：茶多酚是一种复合物，并非单一组分，其中包括了儿茶素，黄酮类，花青素等等，不同的组分与铁离子络合颜色并非完全一致，所以对于一般成分比较复杂的植物多酚并不适用！再来谈谈福林酚法：福林酚法主要利用福林酚的强氧化性，与多酚反应变蓝，在765nm处进行检测，当然了，福林酚还用于蛋白质的检测中，正是因为这点，所以福林酚并不能有效区分茶多酚，一些还原性氨基酸，植物中非多酚类酚性物质，抗坏血酸等等，这也是它的局限性。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高猛酸钾直接滴定法目白勺：学握高猛酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含址的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水.在用濮红作指示剂的悄况下•样液屮能被鬲钮酸钾氣化的物质基本上都属丁茶多册物质。
根据消耗1汕汕的高猛酸钾相当干茶多酚的换愆系数，可计鄴茶多酚的含SL仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500=L 口瓷皿。
试剂：1、$濮红洛液：称取候红lg加入少虽水搅匀后.再慢慢加入相对密度为的浓硫酸50mL.冷却后用蒸懈水定容至1000=L.如果濮红不纯.可下法磺化处理是：称取離红lg.加浓硫酸50mL.在SOX?烘箱或水浴屮加热碳化4、6h.用蒸惘水定容至1000=L.过濾后贮于榇色瓶中.%草酸溶液：准确称取草酸，用蒸係水溶解后定容至lOOOmLo 「3、高猛酸钾标准溶液：称取AR的高猛酸钾，用蒸懈水溶解后定容至lOOOmLo准确吸取%草酸溶液10mL,放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸懈水50mL,再加入相对密度为的浓硫酸10mL,摇匀，在70^80°C水浴中保温5 分钟，取出后用高镭酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高镭酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品期，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸饰水80mL,在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，蒸馆水放入白200ml.测定：取2,摇匀。
100mL冷至室温，最后用蒸饰水定容至. 瓷皿中，加入牖定红溶液5mL,再加入供测试液5mL,开动磁力搅拌器，用已标定的高镒酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高猛酸钾毫升数。
同时做空白测定。
五、结果计算式中：X—茶多酚的含量，% , B—空白消耗的高猛酸钾毫升数，mL A—样品消耗的高镭酸钾毫升数，mL 3—高镭酸钾的浓度，% , m—样品的质量g, VI—测定用供测试液的体积，mL , V2--供测试液的体积，mL 酒石酸铁比色法原理：茶叶中多酚类物质占茶嫩梢干重的20%〜35%,由约30种以上的酚类物质所组成，通称茶多酚。
速溶茶理化检测操作规程
茶叶中水浸出物测定操作规程1目的为了规范检测的操作过程，确保检测结果的正确与可靠性，特制定此操作规程。
2 范围本规程适用于茶叶中水浸出物的测定。
本规程等效采用中华人民共和国国家标准GB/T8305-2002（《茶-水浸出物测定》）。
3 原理用沸水萃取茶叶中的可溶性物质,再经过滤、蒸发至干,称量残留物。
4 仪器和用具4.1 样品容器：可用玻璃样品瓶或金属样盒。
清洁、干燥、密闭；用不与样品起反应的材料制成；大小以能装满磨碎样品为宜。
4.2 鼓风电热恒温干燥箱：温控103±2℃4.3 恒温水浴锅4.4 具盖蒸发皿：直径60mm,高50mm,容量80mL4.5 干燥器:内盛有效干燥剂4.6 分析天平：感量0.0001g4.7 容量瓶：500mL4.8 锥形瓶：500mL4.9 电子天平:感量0.1g5 操作方法5.1试样制备5.1.1 紧压茶以外的各类茶：先用磨碎机将少量试样磨碎，弃去，再磨碎其余部分。
如果水分含量太高，必须将样品预先干燥（烘温不超过100℃为宜）。
待试样冷却后，再进行磨碎。
将磨碎样品转入预先干燥的容器中，并立即密封。
5.1.2 紧压茶：在不同形状(砖、块、饼)的紧压茶表面,分别取不少于5处的采样点,用台钻或电钻钻洞取样、混匀,按1.1的规定制备式样5.2试液的制备称取3g（准确至0.0001g）磨碎试样于500mL锥形瓶中，加沸蒸馏水450mL，立即移入100℃沸水恒温水浴锅中，浸提45min（每隔10min摇动一次）。
浸提完毕后立即趁热用200目筛网过滤于500mL的烧杯中。
残渣用少量热蒸馏水洗涤2～3次，并将滤液滤入上述烧杯中，冷却后用蒸馏水定溶至500mL，摇匀。
用一层定量滤纸过滤，先过滤少许滤液用来清洗250mL的烧杯，再过滤于250mL 的烧杯中。
5.3测定准确吸取上述试液50mL,注入已知质量的具盖蒸发皿中，在沸水浴上小心蒸干，然后移入103±2℃的恒温干燥箱内烘3小时。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶多酚的含量测定
茶多酚的含量测定高锰酸钾直接滴定法目的：掌握高锰酸钾直接滴定法测定茶叶中茶多酚含量的原理及操作原理茶叶中茶多酚易溶于热水，在用靛红作指示剂的情况下，样液中能被高锰酸钾氧化的物质基本上都属于茶多酚物质。
根据消耗1mL 0.318g/mL的高锰酸钾相当于5.82mg茶多酚的换算系数，可计算茶多酚的含量。
仪器与试剂仪器：分析天平、电动磁力搅拌器、电热水浴锅、500mL白瓷皿。
试剂：1、0.1%靛红溶液：称取靛红1g加入少量水搅匀后，再慢慢加入相对密度为1.84的浓硫酸50mL，冷却后用蒸馏水定容至1000mL，如果靛红不纯，可下法磺化处理是：称取靛红1g，加浓硫酸50mL，在80℃烘箱或水浴中加热磺化4~6h，用蒸馏水定容至1000mL，过滤后贮于棕色瓶中。
2、0.630%草酸溶液：准确称取草酸6.3034g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
3、高锰酸钾标准溶液：称取AR的高锰酸钾1.27g，用蒸馏水溶解后定容至1000mL。
准确吸取0.630%草酸溶液10mL，放入250ml锥形瓶中（平行3份），加入蒸馏水50mL，再加入相对密度为1.84的浓硫酸10mL，摇匀，在70~80℃水浴中保温5分钟，取出后用高锰酸钾进行滴定。
开始慢滴，待红色消失后再滴第二滴，以后可逐渐加快，边滴边摇，待溶液出现淡红色保持1分钟不变即为终点。
计算高锰酸钾溶液的百分比浓度。
测定步骤1、供测试液的准备：准确称取茶叶磨碎样品1g，放在250mL锥形瓶中，加入沸蒸馏水80mL，在沸水浴中浸提30分钟，然后抽滤、洗涤，滤液倒入100mL容量瓶中，冷至室温，最后用蒸馏水定容至100mL，摇匀。
2、测定：取200ml蒸馏水放入白瓷皿中，加入0.1%靛红溶液5mL，再加入供测试液5mL，开动磁力搅拌器，用已标定的高锰酸钾溶液边搅拌边滴定，滴定速度以1滴/s为宜，接近终点时应慢滴。
直到溶液由深蓝色转变为亮黄色为止，记下消耗的高锰酸钾毫升数。
茶叶中茶多酚类物质的提取与含量测定
茶叶中茶多酚类物质提取与含量测定系别：牛物医药工稈系班级：食品科学与工程一、目的要求1、了解茶叶中茶多酚及茶多酚的组成及性状；2、掌握溶剂提取法提取茶多酚的原理及方法；3、掌握萃取法分离有机溶剂中的茶多酚的操作方法；二、茶多酚总述1、组成:茶多酚是茶叶中酚类及其衍生物的总称，因此常称为多酚类。
其主要成分是黄烷醇类、羟基-4-黄烷醇类、花色甘类、黄酮醇类和黄酮类。
这些化合物都具有2-苯基苯并吡喃的基本结构，故统称为类黄酮物质。
茶叶中绿原酸、鸡鈉酸、咖啡酸等酚酸类化合物也是茶多酚的组分之一。
在茶多酚各组分之一黄烷醇类为主，黄烷醇类优异儿茶素类物质为主。
2、性状：茶多酚是介于淡黄色至茶褐色之间的无定型粉末，味涩，略有吸湿性，易溶于水，可溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、乙酸乙酯，微溶于油脂，不溶于氯仿及苯等有机溶剂。
茶多酚具有较好的耐酸性，在pH<7时较稳定，在pH>7时则不稳定且氧化变色加快，呈红色。
3.茶多酚的提取方法茶多酚提取工艺效果较好的是有机溶剂萃取法、离子沉淀提取法、树脂吸附分离法、超临界二氧化碳萃取法，其次是超声波浸提法、层析法、膜技术。
4.贮存方法：贮存于阴凉通风干燥环境，并与有毒、有气味的物品隔离，避免直接与三价铁离子及碱性物质接触。
三、实验原理有机溶剂萃取法：有机溶剂萃取法是传统的提取工艺。
是利用茶叶中不同化合物在不同溶剂中的溶解度不同进行提取分离。
在粗茶叶萃取溶液中，除含有茶多酚以外，还含有咖啡碱、酯质、色素、植物多糖、有机酸、以及悬浮物，且茶多酚含量仅为25%- 40%，所以大多数工艺用乙酸乙酯、氯仿等有机溶剂反复萃取的方法进一步除杂、纯化、精制。
茶水用氯仿萃取可得到水层和有机层，咖啡碱存在于有机层，而茶多酚则存在于水层中，根据萃取及过滤原理，将有机层和水层分别进行浓缩、萃取，即可得到相应粗产物。
溶剂萃取法一般的工艺路线图所示溶剂萃取法一般的工艺路线本法的优点是：稳定、可靠；缺点是：有效成分的含量和提取 率较低，通过以上工艺获得的茶多酚含量通常仅能达到 50%- 65%四、 仪器和药品仪器：天平；分析天平；铁架台；抽滤装置；超级恒温水浴槽； 长颈漏斗一个；滤纸若干张；分液漏斗一个；100毫升的烧杯（三个）； 玻璃棒一个；药品：1. 乙醇水溶液（50%）；2. 干茶叶原料；3. 氯仿（分析纯）；4. Na2So4溶液馏水，五、 实验步骤1、 温度设定:打开超级恒温水浴电源开关，使温度达到 90 °CI 茶叶 I —— | |乙醇2、称量：称取30克干茶叶，放在100毫升小烧杯中。
茶 茶多酚的检测方法
表号:R-0110-002-1A
名称
4.2.2 测定
茶 茶多酚测定
文件编号:
准确称取上述（4.2.1）试液 1g 左右（精确至 0.001g），注入 25ml 的容量瓶中，加 水 4ml 和酒石酸亚铁溶液（3.1）5ml，充分混合，再加 pH7.5 磷酸缓冲液（3.2）定容至 刻度，用 10mm 比色杯，在波长 540nm 处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度（A）。 5 结果计算 5.1 计算方法和公式 茶叶中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算：
如果符合重复性（5.2）的要求，则取两次测定的算术平均值作为结果。 5.2 重复性 同一样品的两次测定值之差，每 100g 试样不得超过 0.5g。 备注：本方法参考 GB 8313《茶 茶多酚测定》
生效日期
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序
A 文件标准用纸
表号:R-0110-002-1A
A 1.957 2 B 100 1000 b M m 式中：X——样品中茶多酚的含量，％； A——试样液的吸光度； M——试样质量,g； m——试样干物质含量百分率，％； B——试样液总质量，g； b——测定用试样液重量，g； 1.957——用 10mm 比色皿，当吸光度等于 0.50 时，1 g 茶汤中茶多酚的含量相当于 1.957 mg。 X
茶 茶多酚测定
文件类别： 文件编号： 撰写单位： 版 本:
作业指导书
第 1 版
发行日期： 机密等级: 合计页数: □ 机密 共 2 页 名称
1 原理
茶 茶多酚测定
文件编号:
茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。 2 仪器和用具 实验室常规仪器及下列各项： 2.1 分析天平：感量 0.0001g。 2.2 分光光度仪。 3 试剂和溶液 所用试剂应为分析纯（AR），水为蒸馏水。 3.1 酒石酸亚铁溶液： 称取 1g（准确至 0.0001g）硫酸亚铁（GB 664-77）和 5g（准确至 0.0001g）酒石酸 钾钠（GB 1288-81），用水溶解并定容至 1L（溶液应避光，低温保存，有效期一个月）。 3.2 pH7.5 磷酸盐缓冲液： 3.2.1 1/15M 磷酸氢二钠： 称取 23.377g 磷酸氢二钠（GB 1263-77），加水溶解后定容至 1L。 3.2.2 1/15M 磷酸二氢钾： 称取 9.078g 磷酸二氢钾（GB 1274-77），加水溶解后定容至 1L。 取上述 1/15M 的磷酸氢二钾溶液 85ml 和 1/15M 的磷酸二氢钾溶液 15ml 混合均匀。 4 操作方法 4.1 取样 按“茶叶原料验收规范”（文件编号„„„„ ）要求进行取样。 4.2 测定步骤 4.2.1 试液的制备 称取待测茶样（4.1）约 5 克，精确到 0.001 克，置于 500ml 烧杯中，加入 500ml 70 ±2℃蒸馏水，于 70±2℃水浴中加热 60 分钟，期间每 5 分钟搅拌约 15 秒，以脱脂棉过 滤，茶渣及脱脂棉以少量水进行淋洗，稀释至 500g，精确到 0.1g。 生效日期 页 次 1/2 页 序 A 文件标准用纸
实验一 茶多酚总量的测定
实验一茶多酚总量的测定一实验目的茶多酚是茶叶中多元酚物质的总量，具有苦涩味，对茶汤的滋味和茶叶的保健功能有非常重要的影响。
药理学研究表明，茶多酚对心血管系统疾病、癌症等具有一定的防治效果。
因此，检测茶多酚总量对评价茶叶品质具有非常重要的作用，同时对于茶叶深加工产品如茶饮料、茶叶提取物、速溶茶等的品质评判也有重要作用。
福林酚法由于采用没食子酸为标准品，因而其适用范围较宽，不仅可以用于茶叶，而且还可适用于茶叶提取物、茶叶深加工制品等。
而酒石酸亚铁法由于采用经验系数1.957，因而仅适用于茶叶中多酚总量测定，而不适于茶叶提取物制品等其他产品中多酚总量测定。
二实验原理本实验引用国家标准方法《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》（GB/T 8313-2008）中的“方法二茶叶中茶多酚的检测”的方法。
茶叶磨碎样中茶多酚用70%的甲醇在70℃水浴上提取，福林酚试剂（主要成分为磷钨酸和磷钼酸）在碱性条件下氧化茶多酚中-OH基团并显蓝色，最大吸收波长为765 nm，用没食子酸作校正标准，根据标准曲线定量茶多酚。
三实验材料、仪器与试剂1 实验材料：均匀磨碎茶样。
2 仪器：电子天平（感量分别为0.000 1g和0.01g）、分光光度计、恒温水浴锅、低速离心机、移液管、容量瓶（10、100、250、500mL）、10mL离心管、10mL具塞刻度试管。
3 10%福林酚（Folin-Ciocalteu）试剂：将25mL福林酚试剂转移到250mL容量瓶中，用水定容并摇匀，避光储存，现配现用。
4 Na2CO3溶液：按质量浓度7.5%配置，即称取37.50g Na2CO3，加适量水溶解，转移到500mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀。
该试剂在室温下可保存30天。
5 没食子酸标准储备溶液：按1mg/mL（1 000 μg/mL）的浓度现配，即称取0.110g没食子酸（GA，相对分子质量188.14）于100mL容量瓶中溶解，并定容至刻度，摇匀，避光保存。
实验三茶叶中茶多酚含量的测定
实验三 茶叶中茶多酚含量的测定一、实验目的：1、了解茶叶品质的检测与鉴定方法2、学习茶叶中茶多酚含量的测定方法二、实验原理茶叶磨碎样中的茶多酚用70%的甲醇在70°C 的水浴上提取，福林酚试剂氧化茶多酚中-OH 其团并显蓝色，最大吸收波长为765 nm ，用没食子酸作校正标准定量茶多酚。
三、实验材料1、供试样品 普洱茶、绿茶、白茶。
2、主要试剂 甲醇，无水碳酸钠，福林酚，没食子酸，蒸馏水。
3、仪器设备 恒温水浴锅；电子天平；离心机；分光光度计四、实验方法1、准确称取0.2 g 已磨碎试样，置10 ml 离心管中，加入5 ml 70%甲醇，放入水浴锅（70°C ）中，浸提10 min ，冷却后，于4000 r/min 转速下离心10 min ，转移上清液至10 ml 离心管中。
2、待测液：取浸提液1 ml 定容至100 mL ，备测。
以表1浓度测定没食子酸标准液系列的吸光度，以其为纵坐标，浓度为横坐标绘制没食子酸的标准曲线。
表1 没食子酸标准曲线浓度管号 1 2 3 4 5 610 µg/mL 没食子酸标准液 0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 标准没食子酸含量µg 0 10 20 30 40 50 吸光度（A ）取待测液10 ml ，分别置于25 ml 带塞比色管中，各加入5.0 ml R 10%福林酚试剂，揺匀，反应3～8 min ，加入4.0 ml 7.5%无水碳酸钠溶液加水定容至刻度，摇匀，放置60 min 后于波长765 nm 处测定吸光度A ，以吸光度为纵坐标，没食子酸含量（µg ）为横坐标，制得标准曲线。
五、结果与分析按以下公式计算茶多酚含量：100m 10m L d V A )%(16⨯⨯⨯⨯⨯⨯=茶多酚含式中：A ——样品测试吸光度；V ——样品提取液体积（10 mL ）；d ——稀释因子（1 mL 稀释成100 mL ，稀释因子为100）；L ——没食子酸标准曲线的斜率；ｍ——样品干物质含量（%）；ｍ1——样品质量，单位为克（g ）。
茶饮料中茶多酚含量的测定注意事项
茶饮料中茶多酚含量的测定注意事项1、试剂选择和准备：①、选择适合的试剂，如甲醇、乙醇、丙酮等有机溶剂，以提取茶叶中的多酚类物质。
②、在使用有机溶剂时，需要特别注意安全，避免直接接触皮肤或吸入蒸汽。
2、测定方法选择：①、茶叶中茶多酚含量的测定实验需要选择合适的测定方法，如高锰酸钾直接滴定法或其他适当的化学分析方法。
②、总酚含量测定：常用的有效方法有尔斯反应、菲林试剂法、努利试剂法、硫酸及硫酸钾法等。
选择合适的直接方法进行测定，需根据实验室的仪器设备和实际情况进行选择。
③、高效液相色谱法测定：高效液相色谱法是目前测定茶多酚含量最常用的方法之一，具有快速、灵敏、准确等优点。
需配备相应的仪器设备，并进行方法学的验证和准确性测试。
3、样品处理与制备：①、样品的工作选择：应选取新、质量良好的亚铁普洱茶进行测定，以保证测定结果的式中准确性。
②、样品的体积处理：将普洱茶样品打碎并去掉杂质后，使用冷水或冷开水浸泡，浸泡时间需充分，一般为0.5-2小时，以保证茶叶中茶多酚的色杯释放。
4、严格控制实验条件：①、在测定茶饮料中茶多酚的含量时，应严格按照实验要求进行，包括标准品的配制、稀释和仪器的校准等步骤。
标准曲线的制备应覆盖茶多酚的浓度范围，并确保标准品的纯度和稳定性。
②、度控制：在测定茶多酚含量时，实验室的规定环境度应控制在适宜围内，避免度过高或过低对实验结果产生影响。
③、pH值控制：样品提取液的pH值对测定结果有一定影响，常用的茶多酚提取液的pH值为4-6，可通过添加适量的酸或碱来进行调节。
④、反应时间控制：不同的测定方法对茶多酚的反应时间有一定要求，需仔细控制反应时间，以保证实验结果的准确性。
5、进行重复实验：①、为了确保结果的可靠性，通常选择3次实验并取平均值。
在完成实验后，应对实验数据进行统计处理和分析，计算茶多酚的含量，并进行结果的评估和报告。
②、实验重复性：为了保证测定结果的准确性和可靠性，应进行多次实验测定，计算平均值，并计算实验数据的标准偏差。
企标中茶多酚含量的测定
附 录 A（规范性附录）A1茶多酚的含量测定1.1 原理 茶多酚与酒石酸铁可生成紫褐色络合物，其颜色的深浅与茶多酚的含量成正比。
儿茶素系茶多酚的主体成分，如儿茶素、没食子儿茶素、没食子酸酯、儿茶素没食子酸酯等，以没食子酸乙酯制作标准曲线，由标准曲线查得的量乘以茶多酚换算系数，计算出样品中茶多酚含量。
1.2 仪器和试剂1.2.1 仪器 721分光光度计。
1.2.2 试剂1.2.2.1酒石酸铁溶液称取硫酸亚铁1.0g ，酒石酸钾钠5.0g ，加水溶解并定容至1L 。
1.2.2.2 pH7.5磷酸盐缓冲溶液a 液1/15mol/L 磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠23.877g ，加水溶解并稀释至1L 。
b 液1/15mol/L 磷酸二氢钾溶液：称取110℃烘干2h 的磷酸二氢钾9.078g ，加水溶解并稀释至1L 。
取a 液85ml 、b 液15ml 混匀即得。
1.2.2.3没食子酸乙酯标准溶液取没食子酸乙酯在100℃干燥1h ，用水定容配制成100mL 中含没食子酸乙酯50mg 浓度的标准溶液。
1.3 操作步骤1.3.1 标准曲线的绘制精密吸取0.5mg/ml 没食子酸乙酯标准溶液0.0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml （相当于含没食子酸乙酯0.00，0.05，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50mg ）于10ml 具塞比色管中，加酒石酸铁溶液2ml ，加pH7.5磷酸盐缓冲液至5ml ，各加水至10ml 刻度，以1cm 比色皿，在535nm 处测定吸光度，绘制标准曲线。
1.3.2 样品测定精密称取经均匀的固体样品0.2—2.0g 于50ml 烧杯中，加入约30ml 沸水溶解，冷却至室温，洗涤并移入100ml 容量瓶中，用滤纸过滤，弃去最初滤液约20ml 后收集余下滤液作供试液。
依据样品中茶多酚含量吸取0.2—3.0ml 供试液于10ml 具塞比色管中，自加入酒加酸铁溶液开始按标准曲线的绘制项下同样操作。
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速溶茶中茶多酚含量测定操作规程
1目的
为了规范检测的操作过程，确保检测结果的正确与可靠性，特制定此操作规程。
2 范围
本规程适用于速溶茶中茶多酚含量的测定，本规程等效采用中华人民共和国国家标准。
3 原理
速溶茶是茶叶高浓缩生产的一种饮料制品，因此速溶茶中的多酚类物质同茶叶多酚类物质一样也能与亚铁离子形成紫蓝色络合物，从而用分光光度法测定其含量。
4 仪器和用具
4.1 分析天平：感量0.0001g
4.2 分光光度仪
4.3 25 mL的容量瓶
4.4 1mL的移液管
4.5 250mL的烧杯
4.6 电子天平：感量0.1g
5 试剂和溶液所用试剂应为分析纯(AR)，水为蒸馏水。
5.1 酒石酸亚铁溶液: 称取1g (准确至0.0001g) 硫酸亚铁和5g(准确至 0.0001g)酒石酸钾钠，用水溶解并定容至1L(溶液应避光，低温保存，有效期一个月)。
5.2 pH7.5磷酸盐缓冲液:
5.2.1 1/15 mol/L磷酸氢二钠：称取23.9 g磷酸氢二钠，
加水溶解后定容至1L。
5.2.2 1/15 mol/L磷酸二氢钾：称取经110℃烘干2小时
的磷酸二氢钾9.08g，加水溶解后定容至1L。
取上述1/15 mol/L的磷酸氢二钠溶液85 mL和1/15 mol/L的磷酸二氢钾溶液15 mL混合均匀。
6 操作方法
称取0.5g的速溶茶粉试样，于250mL烧杯中，加入少量水（本实验水均为纯净水或蒸馏水，根据试样的特性，溶解时加入25℃的水或热水），待试样充分溶解后，定溶至250mL，
充分混合均匀。
准确吸取上述试液1mL，注入25mL的容量瓶中，加水4mL 和酒石酸亚铁溶液5mL，待充分混合后，再加pH7.5的缓冲液(4.2)至刻度，用10mm比色杯，在波长540nm处，以试剂空白溶液作参比，测定吸光度(A)。
7 结果计算
计算方法和公式
速溶茶中茶多酚的含量，以干态质量百分率表示，按下式计算:
A×1.957×2L1
茶多酚(％)＝──────×─────×100
100 L2×M×m
式中: L1--试液的总量（mL）
L2--测定时的用液量（mL）
M--试样的质量（g）
m--试样干物质含量百分率（％）
A--试样的吸光度
8 结果报告试验报告应包括下列内容：
8.1 使用的方法
8.2 测定的结果(取小数点后一位)
8.3本规程中未规定的或另加的操作
8.4试样的产品名称、规格、批号。
8.5 试验日期，操作人员
9 为了检测结果更加精确，应注意以下事项：
9.1酒石酸亚铁溶液在配制时，应用室温下的蒸馏水进行溶
解，不能用沸水或高于室温的蒸馏水。
9.2 配制好的酒石酸亚铁溶液尽量放在低温、避光的下保
存，并在该溶液瓶上标明配制时间和溶液名称。
9.3 磷酸二氢钾必须是经110℃烘干2小时后，放在干燥器
中冷却至室温，再称取9.08g。
磷酸氢二钠溶液瓶与磷酸二氢钾溶液瓶上也要标明配制时间和溶液名称。
9.4 在吸取(6.3.1)试液时，移液管垂直向下，其刻度应与
人的视线保持在同一水平面上，试液的凹液面与移液管刻度相切，让试液自然滴入容量瓶中，直到试液不再自
然滴入为止。
切勿用口或吸液球将移液管中的试液全部吹入容量瓶中，以免造成结果偏差。
9.5 加水和酒石酸亚铁溶液，一定待试剂充分混合后，才加
pH7.5的缓冲液，当试液面临近刻度时，用胶头滴管准确定溶至刻度，使试液的凹液面与容量瓶刻度相切。
9.6 对于多个并已经定溶好的容量瓶，尽量使用每个容量瓶
配套的玻璃塞，进行震荡，摇匀。
摇匀后，大约静置1分钟左右，进行检测。
若只有一个玻璃塞，当摇匀一个容量瓶后，必须洗干净且用干燥的纸巾将玻璃塞擦拭干净才能摇匀另一个容量瓶中的试剂，以免交叉混合，造成结果偏差。
9.7 在进行测定时，分光光度仪需大约30分钟提前预热，
使分光光度仪运行稳定，再根据分光光度仪使用方法进行检测。
9.8 在以试剂空白溶液作参比时，用干净并且干燥的纸巾将
比色杯四边擦拭干净，再做以试剂空白溶液的两个比色杯不得有相差。
若有相差，用六偏磷酸钠试剂进行比色
杯清洗，直至无相差为止。
当测定完同一组样品后，再测定另一组样品时，仍需用装有空白溶液比色杯，进行仪器调整。
9.9 测定完后，比色杯应立即清洗，并浸泡与干净的蒸馏水
中，以待下次检测时用。
9.10检测采用对比实验，取已确认的样品做比对，来确定结果的准确性。
9.11同一个样品的不同的时间检测，检测结果相差大于0.5%
时，应检查试剂的有效性，所用来作对比的以前样品
的溶解性，水分含量，分光光度仪的稳定性及试液的
取量等方面的影响因素，综合评定检测结果的正确性，若存在某方面的缺陷，应重新检测。