H5亚型禽流感免疫抗体卵黄检测技术
禽流感H5亚型灭活苗免疫抗体的检测对比试验
３２０ ６２０
文章编号 ： ０ — ３ １ ２Ｏ ）２ ００ — ２ １ ３ ４３ 一（ ６ ０ — ０６ ０ ０ Ｏ
一
家禽接种禽流感疫苗是预防高致病性禽流感 的 种较为有效的方法 ， 但其前提是注射质量好 、 效果
效果和疫苗抗体 的消长情况 ， 不进行 加强免疫。于
２０ 年 ７ １ ０４ 月 ２日进行首免 ， 每羽免疫注射 ０３ ｌ ．ｍ 禽
亚批 号 ： ０００７ 。 ４３２８
１６ 免 疫程序 ．
５． ５ 曲 ５ ９ ５．２ 加 ． ．０ ５ ５．２ ７ ４ ６．７ ６．０ １ ．６ ８ ６
Ｏ Ｏ Ｏ Ｏ
３ 结 果
３１ 各试验组疫苗免疫后 １ 基本达到免疫效果， ． ４日， Ⅲ 效价大于 ４ （ ２ ， ＞ ４ 免疫持续期达 ４ ｌ ） 个月。
护率未能达到 １ ％， ０ ０ 因此单纯 的首免 ， 对实际生产 是远远不够的 ， 必须根据本场的实际进行加强免疫 ， 才能确保免疫保护率达到 １０ ０ ％。
４２ 提倡进行定时 Ｈ 抗体监测 ， ． Ｉ 通过抗 体监测进
１ 材料 与方 法 １ １ 试验 时间地点 ２ ０ ． ０ ４年 ７月 至 ２０ ０４年 １ 月 ， １
２ 免 疫抗体 效 价检 测
２１ 血清样品制备 ．
在规定时间中， 分别从每组鸡
群随机抽取 ３ Ｏ羽鸡（ 哨兵鸡抽取 ３ 采血 、 羽） 分离血 清， 用于进行抗体的检测 。
２ ２ Ｈ 抗 体 的检 测 方法依 据 ． Ｉ 按 照 Ｇ ／ ８ ３ — Ｂ Ｔ １９ ６
维普资讯
６
福建 畜牧兽医
第 ２ 卷 ８
Байду номын сангаас
第２ 期
龙海市2016年-2018年H5亚型高致病性禽流感免疫抗体监测及分析
摘 要：2016～2018年期间，对本市部分规模养禽场、禽类散养户进行H5亚型高致病性禽流感免疫抗体监测。
结果显示，H5亚型禽流感免疫抗体平均合格率为84.34%，其中规模养禽场免疫抗体合格率为89.84%，禽类散养户免疫抗体合格率为75.27%，均超过农业部规定标准。
此举为及时掌握辖区内H5亚型禽流感流行病学动态，监测免疫效果，分析免疫质量，提出合理防控措施奠定基础。
关键词：高致病性禽流感；H5亚型；免疫抗体；监测；分析近年来，我市家禽产业快速发展，随着禽存栏量的增加，高致病性禽流感防控形势也日益严峻。
为了及时掌握辖区内H5亚型禽流感流行病学动态和免疫效果，分析免疫质量，提出合理防控措施，2016～2018年期间，笔者在每年的5月和11月对本市部分规模养禽场、禽类散养户进行H5亚型高致病性禽流感抗体的血清学采样和检测，现将3年的检测结果报告如下：1 材料和方法1.1 血清样品共选取124个规模场，367个散养户进行采样，详见表1。
每羽家禽均采用翅静脉采血，并记录姓名、地址、禽类品种、日龄、养殖规模、免疫次数、最近免疫时间及使用疫苗的相关资料等。
共采集鸡血1083份，鸭血1905份。
表1 高致病性禽流感监测场点数量（场/户）监测种类鸡鸭规模场散养户规模场散养户2016年126229652017年125429712018年14552869合计3817186205 1.2 试剂（1）禽流感病毒H5亚型血凝抑制试验抗原、阳性血清：购自哈尔滨维科生物技术开发公司；（2）自配pH7.2的PBS （0.1M）溶液；（3）自配阿氏液；（4）1%鸡红细胞：采集3只未进行过任何免疫的成年公鸡血液，与等体积的阿氏液混合。
用pH7.2的PBS（0.1M）洗涤3次后，配制成1%红细胞混悬液，4℃保存备用。
1.3 检测方法及结果判定检测方案按照《高致病性禽流感诊断技术》（G B/ T18936-2003），结果判定根据2016年、2017年、2018年国家动物疫病监测与流行病学调查计划执行，HI抗体效价≥24判定为免疫合格。
重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(Re-6株+Re-7株)免疫抗体监测分析
样 品来 源 ：２ ０ １ ４ 年１ １ 月 ～２ ０ １ ５ 年１ Ｉ Ｎ江 苏 省动 物 疫病 预 防控 （ Ｒ ｅ 一 ７ 株） 全 省平 均免 疫抗 体合 格 率为 ９ ５ ． ９ ５ ％。详 见表 １ 。 ． ２ 不 同类别 鸡 群的 免疫 抗体 合格 率 制 中心在 开 展重 大 动物 疫 病春 防 、秋 防 、 日常 监测 等 工作 中 ，随 ２ 机 抽 检 的鸡 血清 样 品２ ３ ７ ２ 份 ，所 检鸡 群 均 免疫 了 重组 禽 流感 病 毒 共 检 测 各 类养 殖 场 户 共４ ５ １ 个 ，其 中种 鸡 场 １ １ 个 ，Ｒ ｅ 一 ６ 株共
ｌ ｋ ｚ ｚ ｏ 田菇
重组禽流 感病 毒Ｈ ５ 亚型二价灭 活疫苗 （ Ｒ ｅ － ６ 株＋ Ｒ ｅ － ７ 株 ）免疫抗体监测 分析
王相 子 徐 小艳 徐 正军 开 妍 周 伟 陈 昌海
（ 江 苏省动物疫病预防控制 中心 ，江苏南京 ２ １ ０ ０ ３ ６ ）
摘 要 ：为 评 估 我 省 使 用 重 组 禽 流 感 病 毒 Ｈ ５ 亚 型 二价 灭 活 疫 苗 品来 自 全省１ ３ 个 市３ ８ 个县 ８ ２ 个 乡镇 的４ ５ １ 个场 （ 户 ）。
２ ０ １ ４ 年９ 月 开 始 ，我 省 根 据农 业 部 兽 医 局 要 求 ，将 当时 对鸡 其 中Ｈ ５ 亚 型Ｒｅ 一 ６ 株共检测 样品２ ３ ７ ０ 份 ，合格 ２ ２ ９ ５ 份 ，合格率 ９ ６ ． ８ ４ ％，Ｈ ５ 亚型 Ｒ ｅ 一 ７ 株 共 检测 样 品２ ３ ７ ２ 份 ，合格 ２ ２ ７ ６ 份 ，合 格率 群 使 用 的重 组 禽 流 感 病 毒 Ｈ ５ 亚 型 二 价灭 活 疫 苗 （ Ｒ ｅ 一 ６ 株＋ Ｒ ｅ 一 ４
新城疫、禽流感H5亚型(Re-5株)抗体水平监测
病 。禽流 感（ Ｉ Ａ） 则是 由 Ａ 型流感 病 毒引起 的一种 禽
类 急性 、 热性 、 血 性 、 度 接 触 性 传 染 病 ， 仅 给 败 高 不
畜牧 业 造成 了巨大 的损 失 ， 而且 给 人 民身 体健 康 带 来严 重 威胁 。我 国政府 将 其列 为一 类 动物 疫 病 ， 家 禽一 旦感 染 高致 病性 禽流感 病 毒 ， 死亡 率 为 １ ０ ０ ％。 ２１ ０ ０年 以来 总体 来 说 我 国家 禽 的禽 流感 防 控
新 城疫 以 高热 、 吸 困难 、 痢 、 经 紊 乱 、 呼 下 神 黏 膜 和浆膜 出血 为特 征 。目前 出现 的鸡新 城疫 发病 率
一
技 术开 发公 司批 号分别 为 ２ １ ０ 、０ ０ ３ ０ １ ２ ２ １０ 。
２方 法
２ １血 样 的 处 理 ．
般 在 １ ％～ ５ ， 亡 率 在 １ ％～ ５ ， 蛋 鸡 产 ０ ２％ 死 ５ ３％ 产
毒 的侵 袭 ，必 须
采取 紧急 防制措施 。对于禽 流感 首免 Ｅ龄 ， 试 验 ｔ 有
表 明 ， Ｅ龄时 雏鸡 的母 源抗 体 较 高 ，０ 日龄 的母 １ ｌ ２
奠定 基础 。
１材 料
１ １仪 器 ．
Ｐ Ｓ配 成 ０５ １ ＶＶ）红 细胞 悬 液 ，￣保 存 备 Ｂ ． ％～ ％（ ／ ４Ｃ 用 。 免疫 状态 不 明的鸡 ， 至少洗 涤 ５次 ， 次离 对 应 每
心 后 都 要 将 红 细 胞 上 层 的 灰 白色层 ｆ 白细胞 、 小 血
板等 ） 除 。 吸
凝抑 制试 验 抗 原 、 阳性 血清 均产 自哈尔 滨 维科 生 物
严 格 按 照 禽 流感 微 量 红 细 胞凝 集 抑 制 试 验 操
禽流感实验室检测技术方案
禽流感实验室检测技术方案禽流感，这个让无数人闻之色变的词汇，已经成为我们生活中无法回避的一部分。
如何快速、准确地检测出禽流感病毒，成为了当务之急。
今天，就让我来为大家详细介绍一下禽流感实验室检测技术方案。
我们需要明确检测的目标。
禽流感病毒有多种亚型，我们要检测的是哪些亚型，需要根据实际情况来确定。
一般来说，H5和H7亚型的禽流感病毒对我国养殖业和公共卫生安全威胁较大，因此，我们将重点检测这两种亚型。
我们要选择合适的检测方法。
目前，实验室检测禽流感病毒的主要方法有病毒分离、血清学检测和分子生物学检测。
病毒分离是传统的检测方法，准确性较高，但操作复杂，耗时较长。
血清学检测通过检测抗体来判断病毒感染情况，速度快，但准确性相对较低。
分子生物学检测，尤其是实时荧光定量PCR技术，具有高灵敏度、高特异性、快速简便等优点，成为近年来禽流感病毒检测的主流方法。
下面，我将详细介绍实时荧光定量PCR技术在禽流感实验室检测中的应用。
一、实验材料1.样本：采集疑似感染禽流感的家禽咽喉拭子、泄殖腔拭子等。
2.试剂：实时荧光定量PCR试剂盒、病毒提取试剂盒等。
3.仪器：实时荧光定量PCR仪、离心机、恒温箱等。
二、实验步骤1.样本处理：将采集的拭子样本放入病毒提取试剂盒中，按照说明书操作，提取病毒RNA。
2.模板制备：将提取的病毒RNA与实时荧光定量PCR试剂盒中的缓冲液、酶混合，进行模板制备。
4.结果分析：观察实时荧光定量PCR仪上的扩增曲线和溶解曲线，判断样本是否为阳性。
三、注意事项1.实验过程中要严格遵循无菌操作原则，防止样本污染。
2.实验室人员要具备一定的分子生物学实验技能，确保实验顺利进行。
3.实验结果要及时记录，并与临床诊断相结合，为疫情防控提供有力支持。
通过实时荧光定量PCR技术，我们可以快速、准确地检测出禽流感病毒，为我国养殖业和公共卫生安全保驾护航。
当然，实验室检测只是禽流感防控工作的一部分，我们还需要加强疫情监测、疫苗接种、生物安全等措施，共同抵御禽流感病毒的侵袭。
鸭血清中H5亚型禽流感抗体检测方法的研究
鸭血清中H5亚型禽流感抗体检测方法的研究范红英【摘要】我国对禽类禽流感抗体的检测方法大部分都采用血凝抑制试验.检测部门在进行鸭血清检测的监控中发现,严重的非特异性凝集现象会造成检测结果的误判.针对这一问题,该研究对16份鸭血清采用2种不同的血清处理方法并设置3个不同温度进行检测分析.结果发现,当环境温度为25℃,采用血清灭活处理,可以有效祛除鸭血清中非特异性凝集因子,检测出的抗体效价跟对照相比,差异性不显著(t检验P>0.05).因此,采用研究推荐的最佳试验条件,可确保检测结果的准确性,为鸭血清禽流感病毒抗体的检测提供依据.【期刊名称】《惠州学院学报》【年(卷),期】2018(038)003【总页数】5页(P57-60,82)【关键词】鸭血清;血凝抑制;抗体效价;非特异性凝集因子【作者】范红英【作者单位】惠州学院生命科学学院,广东惠州 516007【正文语种】中文【中图分类】S852.65禽流感（Avian Influenza，AI），是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）引起的一种禽类急性传染病［1］.禽流感病毒是一种甲型流感病毒，根据其对禽类发病情况不同，分为高致病性、中致病性、低致病性三个级别.目前发现可以直接感染人的禽流感病毒亚型以H5、H7两种亚型比较普遍，由这两种亚型引起的疫情严重危害了家禽养殖业.水禽是AIV的天然宿主，也是禽流感病毒的天然贮藏库，几乎所有亚型的禽流感病毒都可以在水禽中分离到［2］.世界卫生组织将高致病性禽流感列为A类动物疫病，我国也将其列为一类动物疫病［3］.血凝试验（HA）与血凝抑制试验（HI）作为检测部门常用的检测方法，是检测血清抗体水平的技术之一［4-5］，但在实际应用中容易受到一些因素的干扰，包括试验的环境温度、抗原-抗体的作用时间、稀释液PBS的pH等等外界的影响因素［6-9］等.研究发现，试验环境温度较高应用血凝抑制试验检测出禽流感的抗体效价相对较高，稀释液PBS的pH过高或者过低都会对试验检测抗体效价造成影响.抗体的效价随着抗原-抗体的作用时间的增加而增高［10］.除此之外，血清中的非特异性凝集因子也对水禽类病毒检测影响较大，造成的错判率达30%以上［8，11-12］.通过红细胞吸附法［13］、鸭血球直接测定法、生物化学试剂去除法［14］进行血凝抑制试验，均有明显去除非特异性凝集因子的效果.我国地域宽广，水系丰富，尤其是珠三角地区水禽养殖业最为发达，采用血凝试验和血凝抑制试验快速、准确、简便的检测抗体水平，对禽流感的预防监测工作非常重要.研究通过对影响鸭血清中H5亚型禽流感病毒血凝与血凝抑制试验的因素分析，目的是在检测鸭血清禽流感病毒抗体时，能够降低非特异凝集现象，提高检测结果的准确性，因此对鸭禽流感病毒抗体水平的监测工作具有非常重要的现实意义.1 材料与方法1.1 实验材料16份禽流感H5亚型阳性鸭血清（已经注射过H5亚型禽流感疫苗），均采自惠州市某鸭养殖场.1.2 鸭血清处理1.2.1 鸭血清的抽取采用翅下静脉采血，从鸭场中选取16个样本，每样本抽取5 mL新鲜鸭血，1000 r/min离心4 min后，抽取上清液于16个Eppendorf管中.1.2.2 鸭血清的分装和保存将抽取的每份鸭血清样本平均分装在3个Eppendorf管中，并且保存于4℃，待检.1.2.3 用鸡红细胞泥吸附法处理鸭血清从冰箱中取出16份不同的鸭血清，一段时间后，让鸭血清完全解冻.按照红细胞泥和血清1：20的比例，加入红细胞泥后，静置30 min，1200 r/min离心10 min，抽取出上清液于Eppendorf管中，待检.1.2.4 鸭血清灭活处理从冰箱中取出16份不同的鸭血清，一段时间后，让鸭血清完全解冻.将血清置于56℃的水浴锅中，水浴30 min，冷却至室温，待检.1.3 血凝与血凝抑制试验1.3.1 测定抗原效价按照技术规范GDFB249-2004微量血液凝集试验（HA）方法进行测定.1.3.2 抗原工作浓度的配制用PBS配制4个血凝单位的抗原浓度作为工作浓度（4个血凝单位抗原浓度=抗原效价×4）.1.3.3 回归试验（校正实验）抗原换为配制好的4个血凝单位抗原，按照技术规范GDFB249-2004微量血液凝集试验（HA）方法进行.若第1、2、3孔的红细胞完全凝集，第4孔的红细胞开始出现沉淀，第五孔红细胞的完全沉淀，如果出现以上结果，则表明所配4个血凝单位的抗原浓度准确.1.3.4 抗体效价测定依照技术规范GDFB249-2004进行血凝抑制试验.血凝抑制试验分3个试验组：第1组待检血清为未经处理的鸭血清；第2组待检血清为用鸡红细胞泥吸附方法处理的血清；第3组待检血清为灭活的血清.出现完全抑制红细胞凝集的血清最大稀释度倍数M，用log2M值来表示为被检血清中的抗体效价.判定结果时将微量板做45°竖立，当反应板中孔底部的红细胞无法流泪似地流下时，立即判定被检血清抗体效价.记录经过灭活、用红细胞吸附处理和未经处理在不同试验环境温度下被检血清的抗体效价和祛除非特异性凝集因子的情况，并列表比较.1.5 数据处理使用SPSS Statistics v20.0软件对数据进行相关分析、方差分析和样品配对t检验.相关性判断标准：R＞0表示正相关，R＜0表示负相关；差异显著性判断标准为：P＞0.05表示差异不显著，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著.2 结果与分析2.1 鸭血清中非特异性凝集因子祛除效果由表1可知，用红细胞泥处理鸭血请后的检测试验中，非特异性凝集现象明显减少，高浓度和低浓度血清试验中均没有发现非特异性凝集现象，说明此法对鸭血清中非特异性凝集因子的祛除效果非常好.然而在血清不做任何处理和血清灭活处理两个条件下，每个高浓度血清样品在3个试验温度都出现了非特异性凝集现象.以血清不做任何处理条件下的非特异性凝集更加明显，每个样品平均有1.5个以上的孔出现了非特异性凝集现象.在低浓度血清灭活后的检测中，3个试验温度下都没有出现非特异性凝集现象.相对于对照组，血清灭活再进行血凝抑制试验检测H5亚型禽流感病毒抗体时，非特异性凝集现象减少，低浓度血清下几乎没有非特异性凝集.虽然高浓度血清下，非特异性凝集依然存在，但对检测结果的判定不造成影响.由此可以说明血清用红细胞泥处理和灭活处理后进行血凝抑制试验检测H5亚型禽流感病毒抗体时，检测结果的判定不会受到非特异性凝集现象的干扰.但是，这两种处理方法是否会影响结果准确性，需要对结果进一步进行生物统计学分析.表1 不同处理下非特异性凝集的祛除效果注：A：高浓度血清（稀释倍数为8倍以下）平均每个样品出现非特异性凝集现象的孔数；B：低浓度血清（稀释倍数64倍以上）平均每个样品出现非特异性凝集现象的孔数项目处理方法血清灭活血清用红细胞泥处理4℃25℃37℃A B血清不做处理（对照）4℃1.50 0.25 25℃1.50 0.75 37℃1.69 0 4℃1.25 0 25℃1.38 0 37℃1.13 0 0 0 0 0 0 02.2 血凝抑制试验检测结果的生物统计学分析对血凝抑制试验检测出的抗体效价采用生物统计学分析.对16个样品在3个不同试验温度下的检测结果采用SPSS进行相关分析，见表2.结果显示，不同的血清处理方法，检测出的抗体效价和试验温度的相关系数都为正数，说明试验温度和检测出的抗体效价呈正相关关系，即试验温度越高，检测出的抗体效价越高.可见，试验温度会对检测结果造成影响.这种影响显不显著，则需要再进一步进行分析.表2 3个不同试验温度下检测结果的相关性分析注：R表示抗体效价和试验温度的相关系数.R血清用红细胞泥处理0.040血清不做任何处理（对照）0.623血清灭活0.293由于禽类体内的抗体水平是固定的，不同条件下的检测可能会有不同的误差，对所检测的抗体效价影响越不显著，说明检测出来的结果越准确.采用SPSS对检测出的鸭血清中H5禽流感病毒抗体效价进行方差分析，结果如表3所示.可以看出，试验环境温度对所检测抗体效价的影响极显著（P＜0.01），说明试验环境温度的改变会严重影响抗体的效价.表3中还显示，试验环境温度与血清处理的方法之间的互相作用对所检测的抗体效价的影响达到了极显著的水平（P＜0.01），说明试验环境温度的改变和血清处理方法的共同作用对检测出的抗体效价影响也很大.然而，血清的处理方法对抗体效价的影响则不太显著（P≈0.05），说明血清的处理方法对检测结果存在影响，但不是十分明显.因此，在实际的检测中，应该注意用血清的处理方法来选择控制合适的试验环境温度.表3 鸭血清中H5禽流感病毒抗体效价的方差分析变异来源A×B环境温度（A）处理方法（B）误差总计校正的总计平方和34.917 30.292 4.625 106.833 10854.000 141.750 df F P F0.05F0.014 2 2 11.357 19.706 3.0090.000**0.000**0.053 2.42 3.05 3.05 3.45 4.76 4.76 139 144 143均方8.729 15.146 2.312 0.769目前，由农业部行业标准NY/T7692004可知，血凝试验的环境为25℃，即为室温条件下，检测出的抗原效价的准确性较高，禽流感抗体水平的评判标准也是在试验环境温度为25℃的条件下制定的.所以，技术规范GDFB249-2004中的规定，检测禽流感抗体效价在室温下，血清不做任何处理进行检测.本研究采取了不同试验环境温度和对血清不同处理方法进行血凝抑制试验对鸭血清H5亚型禽流感病毒抗体进行检测，改变了规定的条件，则需要对其检测结果的准确性进行判断.因此，采用SPSS对检测结果分别与试验温度为25℃血清不做任何处理进行配对样本t检验对比，见表4.由表4可见，血清灭活处理在3种试验环境温度下，与25℃下血清不做任何处理的检测结果差异性不显著（P＞0.05），说明血清灭活处理在3种试验环境温度下对血凝抑制试验所检测出来的抗体效价的准确性影响很小，这些条件在进行鸭血清的血凝抑制试验中均可采用.因此，可以对血清灭活后再进行血凝抑制试验检测H5亚型禽流感病毒抗体水平.然而，4℃下血清用红细胞泥处理与25℃下血清不做任何处理的结果差异显著（P ＜0.05），25℃、37℃下血清用红细胞泥处理与25℃下血清不作任何处理的结果为极显著水平（P=0.01）.由此可见，用红细胞泥吸附血清后检测出的抗体效价和25℃下血清不做任何处理检测出的抗体效价的差异性很大，这种处理方法会对检测结果的准确性造成影响.因此，在实际进行检测时，为了确保检测结果的准确性，不建议采用红细胞泥吸附血清处理后再进行检测.表4 血清灭活处理和红细胞泥吸附处理与对照结果的t检验血清灭活4℃25℃37℃用红细胞吸附4℃25℃37℃25℃下血清不做任何处理（对照）0.8760.3470.0830.0390.0100.0103 结论与讨论鸭血清中H5亚型禽流感病毒抗体检测进行的血凝试验是依据在试验中鸡的红细胞发生凝集作用，但是会被鸭血清中抗体所抑制而沉淀下去，通过抑制的情况大小来判定被检血清中抗体的效价［15-16］.然而，水禽的血清中通常含有一种或者多种非特异性凝集因子，当被检的水禽动物血清中非特异性凝集因子存在时，将会影响鸡红细胞在血凝抑制中凝集，直接影响动物检验检疫的准确性和权威性，给国内外动物贸易和疫病的预防带来不良影响［17-18］.本研究采用了3种不同的试验温度和2种不同的血清处理方法，结果发现，2种血清不同的处理中，血清灭活处理后，鸭血清中的非特异性凝集因子有所减少，在低浓度血清下进行检测，几乎没有发现非特异性凝集现象.虽然在高浓度血清下，非特异性凝集依然存在，但是这对结果的判定不会造成影响.说明灭活血清后，可以减少一些非特性因子，降低在检测工作中的误判.用红细胞泥吸附处理后，对鸭血清中的特异性凝集因子祛除效果非常好，高浓度的血清下进行检测，也没有发现有非特异性凝集反应.但是，用红细胞泥吸附后再进行检测，3个不同试验温度下的检测结果与25℃下血清不做任何处理的结果都有显著性差异，甚至极显著差异.因此，在确保检测结果的前提下，对于红细胞泥处理鸭血清这种方法是否能够真正在检测中推广，仍需进一步深入研究完善.本次研究还发现，在高的试验温度和低的试验温度下，非特异性凝集因子引起的凝集反应较少，可以减少检测中非特异凝集引起的误判.但是，试验环境温度对抗体效价的影响极显著（P＜0.01），环境温度对检测的结果影响比较大.根据相关研究发现，血凝抑制试验检测出的抗体效价跟试验环境温度有关，试验环境温度越高，所测出的效价越高［11］.而且，当温度过低，出结果慢，温度过高，出结果过快［5］.影响结果的判断，从而影响准确性.并且，在实际检测中，25℃就是室温温度，操作上比较方便控制，在一些基础条件比较落后的兽医站和没有恒温箱下都可以进行检测.因此，试验环境温度为25℃是比较合适的温度.虽然用红细胞泥吸附后对非特异性凝集因子的祛除效果最好，但是检测出抗体效价不准确.而血清灭活处理后对抗体的效价不会造成影响，与25℃下血清不做任何处理检测出的结果差异不大.所以，试验环境温度为25℃下且血清灭活后，可以作为进行鸭血清血凝抑制试验的合适条件，该条件下检测出的抗体效价跟不做处理检测出的结果相比较，两者差异性不显著（P＞0.05），检测出来的结果具有可靠性. 因此，在实际检测中，可以先对血清进行灭活处理后，再在25℃的环境温度下进行抗体水平的检测，能够正确的对禽流感病毒抗体水平进行准确地监控，且血清的灭活操作简单、时间短，对于条件较差的兽医站也可以实现.因此，这种方法对监测鸭血清H5亚型禽流感病毒抗体水平具有重要的现实意义和实用价值，可为检测部门提供参考，对其他水禽的H5亚型禽流感病毒抗体水平检测也具有重要意义［19］.参考文献：【相关文献】［1］李芬.禽流感［J］. 科技与产业，2004（3）：2.［2］张毅，王幼明，王芳，等.我国禽流感研究进展及成就［J］.微生物学通报，2014（3）：497-503.［3］甘孟侯.禽流感［M］.北京：北京农业大学出版社，1995.［4］朱凤云，罗平恒. 浅谈血凝试验（HA）和血凝抑制试验（HI）影响因素及应用［J］. 上海畜牧兽医通讯，2012（6）：43.［5］黄秋英.血凝和血凝抑制试验中的常见问题及解决方法［J］.中国畜禽种业，2014（1）：43. ［6］陈康木，卢运战.影响禽流感血凝和血凝抑制试验的因素及对策［J］.畜牧与饲料科学，2011（4）：109-110.［7］吕晓娟.对影响禽流感血凝和血抑制试验因素的探讨［J］.当代畜禽养殖业，2014（11）：9-10.［8］黄文忠. 鸡新城疫血凝抑制试验（HI）的影响因素［J］.中国家禽，2000（5）：29.［9］钟蕴珠，肖国雄.影响禽流感血凝-血凝抑制试验的主要因素［J］.广东畜牧兽医科技，2013，38（6）：50-51.［10］刘俊青. 禽流感血凝抑制试验（HI）的影响因素分析［J］.畜禽业，2014（8）：10-12. ［11］孙荣华，杨雪，崔雯，等.影响H5亚型禽流感血凝抑制抗体效价的因素分析［J］.中国家禽，2009，31（13）：55-57.［12］贾英科，周蓉，王雪，等.鸽子血清非特异性凝集因子消除试验的研究［J］.天津农学院学报，2003，10（4）：21-24.［13］仇桂玲，邓银燕.禽流感血凝抑制试验中鸡红细胞吸附鸭血清非特异性凝集因子方法的建立［J］.南方农业，2015（15）：3-11.［14］麻秋霞，胡海涛，王耀邦.血凝抑制试验中两种鸭血清非特异性凝集因子去除方法的效果比较［J］.浙江畜牧兽医，2016，41（2）：8-9.［15］李凯航，薛霞，邓波.鸭血清禽流感血凝抑制试验中非特异性因子去除方法研究［J］.黑龙江畜牧兽医，2009（9）：95-96.［16］GORMAN O T，BEAN W J，WEBSTER R G.Evolutionary Processes in Influenza Viruses：Divergence，Rapid Evolution，and Stasis［J］.Current Topics inMicrobiology&Immunology，1992（176）：75.［17］张桂贤.新城疫、禽流感H5亚型（Re-5株）抗体水平监测［J］.今日畜牧医，2012（4）：38-39.［18］李清竹.祛除禽流感HI试验中鹅血清非特异反应现象的研究［J］.现代畜牧兽医，2012（7）：63-64.［19］贾英科，高梅秀，王海利，等.鹦鹉血清非特异性凝集因子消除试验研究［J］.西北农林科技大学学报：自然科学版，2004，32（9）：66-68.。
蛋鸡h5亚型禽流感免疫及免疫抗体监测
200（下转第195页）蛋鸡H5亚型禽流感免疫及免疫抗体监测李敬云（卢龙县陈官屯动物防疫站，河北卢龙 066400）摘 要：禽流感是目前严重危害我国养禽业的主要疫病，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必报的动物疫病。
根据禽流感病毒致病性的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感和低致病性禽流感。
目前禽流感呈世界性分布，以其高死亡率、传播速度快，给养禽业造成毁灭性的打击。
近年国内报道有由H7血清型引起的高致病性禽流感。
高致病性禽流感是我国重点防控的动物疫病，是农业部实施强制免疫的重大动物疫病之一。
但是，疫苗的免疫效果受到很多因素的影响，因此，及时开展免疫效果监测，评估免疫保护率，在临床上具有重要的意义。
通过本篇文章，提醒广大养禽户对禽流感及其免疫、免疫监测有充分的认识，在生产实践中建立科学的适应本鸡场生产需要的高致病性禽流感免疫程序，减少了鸡场不合理的接种禽流感疫苗，避免高致病性禽流感在本地鸡场的发生流行，保证了畜牧业生产安全和人民群众的健康与生命安全。
关键词：禽流感；免疫；免疫监测1 禽流感的概况禽流感（Avian Influenza，AI）是目前严重危害我国养禽业的主要疫病，世界动物卫生组织（OIE）将其列为必报的动物疫病。
根据禽流感病毒致病性的不同，可以将禽流感分为高致病性禽流感、低致病性禽流感和物质并行禽流感。
最早于1878年于意大利发现，呈世界性分布，以其高死亡率、传播速度快，给养禽业造成毁灭性的打击。
禽流感由A型流感病毒（AIV）引起的一种禽类急性传染性疾病。
禽类感染后表现为呼吸道症状、食欲减少、急性高度致死性的全身性疾病等多种症候。
禽流感不仅能引起鸡、鸭、鹅等禽类发病、死亡，而且能引起哺乳动物和人发病、死亡，严重地威胁人类的健康和生命。
1.1 禽流感病毒流感病毒属正粘病毒科，流感病毒属。
目前已知的有15种特异的HA亚型和9种特异的NA亚型。
禽流感病毒对外界环境的抵抗力不强，对高温、紫外线、各种消毒药敏感，容易被杀死。
六盘水市规模养殖场H5亚型禽流感免疫抗体检测及免疫效果分析
样品抗体合格率 ， Ａ场为 １ ０ ０ ％， Ｂ场为 ２ ． ４ ４ ％， ｃ场
为１ ０ ０ ％， Ｄ场为 １ ０ ０ ％， Ｅ场 为 ４ ０ ％， Ｆ场 为 ０ ， Ｇ场 为 １ ０ ％， Ｈ场 为 １ ０ ０ ％， Ｉ 场为 ８ ５ ． １ ９ ％。
Ｅ场 ４ ０份 、 Ｆ场 ２ ９份 、 Ｇ场 ３ ０份 ， 共 ９ ９份 ： 钟 山 区
抽 取血 清 Ｈ场 ３ ０份 、 Ｉ 场２ ７份 ， 共５ ７份 。 １ ． ２ 诊 断试剂 Ｈ ５亚 型 禽 流 感 血 凝 抑 制 试 验 抗 ２ ． ２ ９个规 模养 殖场 Ｈ５亚 型禽 流感 免 疫 抗体 水 平 情 况见表 ２ 。从 表 ２可 以看 出 ， 抽 检 的 规 模 场 血 清 原、 标 准 阳性 血 清 （ 均 由贵 州 省 动 物 疫 病 预 防控 制 中心发 放 ， 试 验抗 原批 号 ２ ０ １ ４ ０ ０ ２ ， 阳性 血 清 批 号 ２ ０ １ ５ ０ ０ １ ） ， 严格 按 照说 明书并 在 有效 期 内使用 。
贵州 畜 牧兽 医
２ ０ １ ７年
第４ ｌ 卷
第 １ 期
・ １ ５・
上 盘水市规模养殖场 Ｈ ５ 亚型禽流感 免疫抗体检测及免疫效果分析
彭郁霖 ，宋 敏 ， 周 标 ， 李 晓林 ， 张 熠
（ １ ． 贵州省六盘水市动物疫病预 防控 中心 ， 贵州 六盘水 ５ ５ ３ ０ ０ ０ ； ２ ． 贵州六枝特区动物疫病预 防控 中心 ， 贵州 六 枝 ５ ５ ３ ４ ０ ０ ）
摘要 ：为动态了解掌握六盘水市辖 区内规模 养殖场 Ｈ５ 亚 型禽 流感 免疫效果 ， 试 验随机抽 取 ９个规模 养殖场采集鸡 血清
卵黄替代血清检测蛋鸡H_(5)、H_(7)免疫抗体试验
与 禽业技术|资源育繁卵黄替代血清检测蛋鸡出、H7免疫抗体试验厉磊 秦燕刘维红王冠东邵春雷王雷之(山东省临沂市畜牧发展促进中心276000)摘要：用卵黄和血清样本监测巴、H 7亚型禽流感抗体，对两种结果进行相关性试验。
对180-190日龄蛋鸡免疫重组禽流感(H 5+H 7)三价灭活疫苗，免疫后对固定鸡群采样(血清和鸡蛋)，进行免疫抗体监测。
结果表明，免疫28d 后，卵黄和血清HI 抗体效价呈正相关性，差异不显著。
表明用卵黄替代血清检测蛋鸡高致病性禽流感免疫抗体是一种简单、有效的方法。
关键词：卵黄；血清；H s 、H 7亚型禽流感；免疫抗体临沂市是畜牧业大市，其中蛋鸡养殖是部分农民发家致富 的重要手段。
禽流感是由A 型禽流感病毒引起的一种高度接触 性、急性传染病。
H s 、H 7亚型高致病性禽流感给养禽业造成的经济损失巨大，被我国列为一类动物疫病。
2004年，我国开始 对H 5亚型高致病性禽流感实施强制免疫政策，2017年又对H 7 亚型实行强制免疫。
如何评价疫苗免疫效果尤为重要。
每年本市根据省兽医主管部门(省畜牧兽医局)动物疫病监测计划下 达本行政区域的动物疫病监测计划。
鸡高致病性禽流感免疫效果的监测，需要按一定比例采样，抽取鸡血析岀血清后，做血凝和血凝抑制试验来判定结果。
采取鸡血需要专业技术人员操作，并且需要采取必要的防护隔离措施，消耗大量的人力、物 力。
并且捉鸡、采血使鸡产生较大的应激反应，对蛋鸡产蛋有一定的影响。
母鸡以特定抗原免疫后，能产生相对应的特应性 抗体，抗体除存在于血清中外，还可以储存于卵黄中，称为卵黄抗体。
因此，卵黄抗体与血清抗体应存在一定的相关性，若 能收集蛋样检测卵黄抗体，则可以减少鸡群采血应激|1],而且操作更为方便。
鉴于此，本中心于2019年10-12月，选择了 部分蛋鸡场进行高致病性禽流感免疫注射和抗体水平检测， 并对血清抗体效价和卵黄抗体效价进行了比较分析，为生产实践中产蛋鸡卵黄抗体检测H s 、H 7亚型禽流感免疫抗体提供依据。
H5亚型高致病性禽流感免疫抗体检测结果研究
㊀" 年免疫抗体检测结果 鸡抗体合格 ５ ７ ９份， 抗体合格率 ８ ０ ． ４ ％。鸭抗体合格 １ ７ ０
份， 抗体合格率 ７ ０ ． ８ ％。
㊀" 年免疫抗体检测结果 鸡抗体合格 ４ ２ １份， 抗体合格率 ８ ２ ． １ ％。鸭抗体合格 ９ ４
收稿日期： ２ ０ １ ７－ １ １－ ３ １
１ ］ 过油乳剂全病毒灭活疫苗来控制疫情 ［ 。灭活疫苗具备免疫
份， 抗体合格率 ７ ２ ． ３ ％。
㊀分析与讨论
㊀分析 （ １ ） 鸡的免疫抗体水平比鸭的要高， 原因是鸡的饲养时间
长， 规模场都二免， 肉鸭饲养时间短， 农户在整个养殖过程中只 进行一次免疫， 结果表明二免合格率高于一免。 （ ２ ） 活禽市场的家禽免疫抗体也低于养殖户的， 原因是到 销售环节的家禽距离免疫时间过长， 免疫抗体随着时间推移， 抗体水平有所降低。 （ ３ ） 无论是鸡或者鸭的免疫抗体合格率在逐年增加， 最后 全部达到整体合格率 ７ ０ ％以上， 通过每年对免疫抗体不合格或 者抗体率低的原因分析， 最后给出一个合理的免疫程序， 以达 到７ ０ ％以上的免疫抗体水平。
２ ０ １ ７年第 １ ２期（ 总致病性禽流感免疫抗体检测结果研究
陈莹娟
（ 宁明县动物疫病预防控制中心，广西 宁明 ５ ３ ２ ５ ０ ０ ）
摘㊀要： 当高致病性禽流感大面积发生时， 需要通过接种疫苗来建立起相应的隔离带， 进而有效的控制疫情。文章主要 ０ １ ３－ ２ ０ １ ６年数据， 对Ｈ ５亚型高致病性禽流感免疫抗体检测的方法， 结果进行分析， 旨在通过研 针对广西宁明县， 选择 ２ 究为今后更好的开展工作奠定基础。 关键词：高致病性禽流感；Ｈ ５亚型免疫抗体；检测结果 中图分类号： Ｓ ８ ５ ２ ． ４ ㊀㊀㊀㊀㊀文献标识码： Ｂ ㊀㊀㊀㊀㊀Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． １ ９ ５ ６ ７ ／ ｊ ． ｃ ｎ ｋ ｉ ． １ ０ ０ ８－ ０ ４ １ ４ ． ２ ０ １ ７ ． １ ２ ． ０ ０ ７ ㊀㊀疫苗接种是大面积发生禽流感时的有效控制措施之一。 比如在巴基斯坦和墨西哥发生了高致病性禽流感之后均使用
实时荧光PCR技术快速鉴别检测H5、H9、H7亚型禽流感灭活疫苗的研究
利用 K>6L(%. G$17%1J 上公布的 68= ;6 基因序列， 软件进行比对， 找到其保守区， 根据 !.)*$. MNO.$// 分别设计 ;9、 PQ: 软件， ;<、 ;5 亚型特异性引物和 （ 上 游 引 物） 、 （下 游 引 RG7 探 针， ;9 亚 型： !9S !9P 物） 、 （RG7 探针） ； !92 ;< 亚型： !<S、 !<P、 !<2； ;5 亚 型： 引物和探针由上海基康生物技术 !5S、 !5P、 !52， 有限公司合成， 探针 9T 端标记的荧光报告 基 团 是 +6R， 2T 端标记的荧光淬灭基团是 RG7。以下是引 物和探针序列： !9S： 9T’ """66"66?666G6GG6G"?6"66?6 ’2T !9P：9T’ ?G66?"""""6"6G?6""666’2T !92：9T’ ?6""66""66G66G6?"’2T !<S：9T’ "?6""66?"66"666"?""6"6G66 ’2T !<P：9T’ ?GG"6?G?G?"6"6GG66"6 ’2T !<2：9T’ ?G?6G6"6"G"?66"6G6 ’2T !5S：9T’ ???"6?6"??"?GG""6??G"6 ’2T !5P：9T’ "G"6?G???""6??"??"6"6 ’2T
细胞源H5亚型禽流感病毒灭活疫苗免疫效果试验
２ ０ １ ５ ０ １ ７ ） ， 由哈 尔 滨 维 科 生 物 技 术 开 发 公 司 生 产 。 鸡 红细胞 采 自本 中心饲 养 的 ３羽 Ｓ Ｐ Ｆ公鸡 血 液 ， 经 离 心洗 涤后制 备 １ ％ 鸡红 细胞 悬液 。 １ ． ４ 免 疫程 序 参 考疫 苗说 明 ， 鸡群 １ ４ ３龄首 免 ， １ 每羽 ０ ． ３ ｍ Ｌ； ３ ０ 日二 免 ， 每羽 ０ ． ５ ｍ Ｌ； １ １ ０ 日龄 三 免， 每羽 ０ ． ５ ｍＬ ； 颈 部 皮 下 注 射 。于 免 疫 前 （ １ ４ ３ １ 龄） 、 首免后 ２ ８ ｄ （ ４ ２ ３龄 ） １ 、 ６ ０ ｄ （ ７ ４ ３龄 ） １ 、 ９ ０ ｄ （ １ ０ ４日龄 ） 抽 取血 样 ， 分离血 清 ， 一３ ６ ￣ Ｃ保存 备检 。 １ ． ５ 抗 体检 测 根 据 国家 标 准 《 高 致 病 性 禽 流 感
目前 ， 鸡 胚 培养 是 国 内疫 苗 生 产企 业 生 产 动物 用 流感 病毒疫 苗 的主要 工 艺手段 。细胞悬 浮 培养是 种 比较 新 型 的流 感 疫 苗 培 养 技 术 ｊ 。为 了解 细
一
诊断技术》 （ Ｇ Ｂ ／ Ｔ １ ８ ９ ３ ６ － ２ ０ ０ ３ ） 中血凝和血凝抑制方
摘要 ： 为探索细胞悬浮培养法生产 Ｈ ５ 亚型禽流感灭活疫苗的应用效果， 试验选用 １ ０日龄四明香鸡 １ ０ ０
羽， 随机分为 Ａ组与 Ｂ组 ， 每组 ５ ０羽 ， 分 别采用 由细胞 悬浮培养 法工艺 生产 和传统鸡 胚繁殖 工艺 生产 的 Ｈ ５ 亚型禽流感疫苗免疫鸡群 ， 并于首免前 、 首免后 ２ ８ ｄ 、 ６ ０ ｄ 、 ９ ０ ｄ抽 取血样对 鸡群开展禽 流感 免疫抗 体水平监 测 。结果表 明， 使用两种疫苗均能诱导产生较高 的 Ｈ Ｉ 抗体水平 ， 达 到防控禽 流感 的 目的。
H5亚型禽流感免疫抗体检测及分析
参考文献: [1] 王士荣,陈静,马慧玲,等.山东省 2016 年 H5 亚型禽流感抗体监测与分
禽流感是禽类的一种烈性传染病袁 世界卫生组织将其列为 A 类动物疫病袁 我国将其列为一类动物疫病 [1]遥 禽流感病毒属 于正黏病毒科流感病毒属袁 根据致病性的高低分为高致病性尧 低致病性和无致病性袁 高致病性禽流感多为 H5 和 H7 亚型流感 病毒引起 [2]遥 疫苗免疫是预防和控制禽流感的有效途径之一袁 为防治高致病性禽流感的发生和流行袁 国家实行强制免疫的防 控策略遥 为了准确掌握蒙阴县 H5 亚型禽流感强制免疫效果袁 抽取全县部分禽场和散养户进行抗体水平检测遥 1 材料与方法 1.1 样品来源
规模养殖场的免疫抗体合格率明显高于散养户袁 因为规模 养殖场管理制度规范袁 有专业的免疫队伍尧 文化水平相对较 高尧 操作比较熟练尧 免疫群体集中袁 一定程度上提高了免疫水 平遥 而散养户家禽以散养为主袁 且每年春秋两季防疫时间与农 民春收秋收时间相冲突袁 农村防疫员年龄偏大尧 文化水平参差 不齐遥 有些农村散养户对强制免疫工作有抵制情绪遥 以上因素 导致散养户免疫密度低袁 从而影响免疫抗体监测合格率遥 3.3 建设专业化农村防疫员队伍
交流
H5 亚型禽流感免疫抗体检测及分析
樊信明 1,2 刘杏 1,2
渊1袁 山东省蒙阴县畜牧兽医局 276200曰 2袁 山东省蒙阴县畜牧发展促进中心 276200冤
摘要院 为了准确尧 科学的掌握蒙阴县 H5 亚型禽流感强制免疫效果袁 了解家禽免疫水平袁 及时发现强制免疫工作中存在的问 题袁 根据免疫抗体检测水平进行科学评估防疫工作遥 将 2017耀2018 年家禽 H5 亚型禽流感强制免疫抗体监测结果进行分析遥 关键词院 H5 亚型禽流感曰 强制免疫抗体曰 分析
H5、H7亚型禽流感和新城疫监测计划(最新)
H5、H7亚型禽流感和新城疫监测计划一、监测范围对象：鸡、鸭、鹅和其它家禽及野生禽鸟。
环节：重点对种禽场、规模禽场、活禽交易市场、候鸟密集活动区和边境地区家禽进行监测。
二、监测要求本监测计划动物采样要求全部采集本地饲养动物。
（一）日常监测1.县区级监测X区、X区、X区、X区、X区和五县在辖区内活禽市场或养殖场进行采样监测，每季度第一个月需自行采集和检测家禽（鸡40份，水禽20份）血清60份，所有血清样品检测H5、H7亚型禽流感抗体，鸡血清样品增加新城疫抗体的检测。
2.市级监测（1）活禽市场监测：每季度第一个月监测辖区1个活禽市场棉拭子样品80份（其中鸡30份、水禽20份、其他禽类10份，环境样品20份）。
棉拭子样品检测H5、H7亚型禽流感病原，鸡棉拭子和环境样品检测H5、H7亚型禽流感病原、新城疫病原。
（2）家禽规模场监测：每半年（分别在5月份、9月份）监测辖区规模场（3个鸡场和3个水禽场）数量不少于6个，每个规模场每次采集家禽血清和棉拭子样品各30份。
全年监测规模场家禽血清和棉拭子样品各360份。
家禽血清检测H5、H7亚型禽流感免疫抗体，家禽棉拭子检测H5、H7亚型禽流感病原。
（二）种禽场监测1.市级种禽场监测（1）监测地点：X市范围内。
（2）监测时间、数量由自治区动物疫病预防控制中心另行通知。
（三）集中监测1.监测时间：每年春秋两季开展集中监测工作。
分别于6月底和11月底前完成。
监测H5、H7亚型禽流感、新城疫免疫抗体。
2.监测数量（1）县集中监测具体监测方案由各县制定并组织实施，范围应尽量覆盖所辖乡镇。
（2）市集中监测每次集中监测不少于8个养殖场（户），2个活禽市场，每个场（点）至少采集血清样品20份。
具体方案另行下达。
三、采样要求采集的血清与棉拭子须一一对应，采集的棉拭子应及时放入装有1ml保存液的2ml离心管中，如样品在24小时内检测则置4℃短暂保存，无需冻结；否则，样品应冷冻保存或运输。
H5型高致病性禽流感免疫抗体监测及分析
２ ０ ￣２ ０ ０ ５ ０ ７年 上半 年 期 间 ， 为分 析 免 疫 质 量 ， 及 时掌握 流行病 学 动 态 和免 疫 效果 ， 我们 对 Ｈ５型 高致 病性禽 流感抗 体 的血 清学监 测进行 连续性 的采
样 和检测 ， 现将 近 两年 的实验室检 测结果 报告如 下 。
场 ； 个 养鹅 场免疫合 格 ； 个 养鸽场 免疫合 格 。 ２ １
源抗体具 有一定 的保护作 用 ， 过早 免疫 ， 源抗 体 中 母 和 了疫苗 抗原 ， 免疫 效 果并 不 好 。二是 首 免 日龄太 早 ， 只发育不完 全 ， 鸡 对疫 苗应 答 较差 ，０日龄前 免 １ 疫 其 他疫 苗较 多 ， 导致 免 疫无 应 答 或者 应 答 效果 较 差， 直接 影响禽 流感 疫 苗 的免 疫效 果 。 目前 多 数报 道认 为 ， 雏鸡 的最 佳首 免疫 时 间应 在 ２周左 右进行 。 ３ ２ 从结果 中可 以看 出蛋鸭 的免疫效 果很确 实 ， ． 免 疫合 格率可 以达到 １ ０／ ０ 。本文 中的 肉鸭 血样 是 在 ９ ５
表 １ 血 凝 抑 制 试 验 结 果
种类
蛋 鸡
采 样 场 数 （ ） 检 测 数 合 格 数 次
１２ ０ ２ ６ ３８ ２ ０ ２９
合 格 率 ／ ） （
９． ９ ３ ２
１ 材 料 与方 法
１ １ 材 料 ．
肉鸡
蛋 鸭
２ ５
１ ４
５６ ５
２２ ９
４９ １
２１ ６
７．６ ５ ３
８ ．８ ９ ３
肉鸭
鹅 鸽 子
８
２ １
１５ ７
３ ６ １ ３
１１ ０
H5型高致病性禽流感免疫抗体监测及免疫效果分析
安徽农业科学, Journal of Anhui Agri. Sci. 2007, 35( 30) : 9537, 9540
禽流感是一种由 A 型流感病毒引起的多种家禽及野鸟 的高度接触性传染病, 又名欧洲鸡瘟、真性鸡瘟, 被 OIE 列为 A 类传染病, 我国也将其列为一类传染病。2005~ 2007 年上 半年期间, 为分析免疫质量, 及时掌握流行病学动态和免疫 效果, 笔者对H5 型高致病性禽流感抗体的血清学监测进行 连续性的采样和检测, 现将近 2 年的实验室检测结果报道 如下。 1 材料与方法 1. 1 材料 阿氏( Alsevers) 液配制, 1% 鸡红细 胞悬液制 备[ 1- 2] ;H5 型禽流感抗原, 由中国农业科学院哈尔滨兽医研 究所提供, 批号: 2005040503, 20051113。 1. 2 采样 1. 2. 1 采样选择。共对 127 个养鸡场、22 个养鸭场、2 个养 鹅场、1 个鸽子场采样。 1. 2. 2 采样要求。每个养殖场的家禽均采用翅静脉采取血 液, 并记录地址、日龄、养殖规模、免疫次数、最近免疫时间、 品种及使用疫苗的相关资料。 1. 2. 3 采集内容。共采集鸡血 2 924 份、鸭血467 份、鹅血 36 份、鸽血 13 份, 每个样品采血量 1. 5~ 2. 0 ml。 1. 3 检测方法 血凝抑制试验: 采集血液后, 及时分离出血 清, 并参照5高致病性禽流感诊断技术6( GB/T 18936-2003) 和 禽流感微量红细胞凝集抑制试验( SN/ T 1182. 2-2004) [ 2] 的规 定, 采用血凝抑制试验, 集中对血清样品进行实验室检测, 并 作系统分析。 1. 4 结果判定 血凝试验结果判定按标准判断, 血清的血 凝抑制滴度 \24( 1B16) , 判断为免疫合格。 2 结果与分析
高致病性禽流感H5亚型免疫抗体监测与分析
养户 每户不少 于 ５ ； 份 采集 ３ 个集 贸市场活 禽血清 ， 每场不
少于 ２ ０份 。
１１ 主要试剂 ．． ２
液（ 自配 ） 。
Ｈ ５亚型禽流感标 准抗 原 ， 准阴性 、 标 阳性
血清 ，由中国农 业科学 院哈尔滨 兽医研究所 生产 ，Ｂ Ｐ Ｓ缓 冲
１ 方 法及 步骤 ． ２
１ ． 采血送 检 ．１ ２
采送样 由各镇畜牧 兽医站负责 ， 收到血样
２２ ２ ０ ．． ０ ７年的监测户 数以及样 品数较往 年少 ，但我们 都 ３
后， 待血液 自然凝 固后 （ Ａ） ．２ ２ Ｈ 和血 凝 抑 制 （ ） 验 ＨＩ试
禽专业户 以及 散养户 ８ ６户 ， 品总数 ５ ４ 份 ， 中合格数 ２ 样 ０８ 其 ４４ ， ０ ４份 不合格数 １０ 。 ０ ４份 合计 合格 率为 ８ ． 详见表 １ ０１ ％。 。 ２１ ２ ０ ．． ０ ６年检 测结果 ２ 全 年共检 测各规 模化 养殖场 、 养 禽专业户 以及散 养户 ８ ２户 ， 品总数 ４ １ ， 中合格数 ２ 样 ４ ９份 其 ３５ 份 ， ７ ９ 不合格数 ６ ０份。合计合格率为 ８ ． ６ ５１ ％。详见表 ２ 。 ２１ ２０ ．． ０ ７年 检测结 果 ３ 垒 年共检 测各 规模化 养殖场 、 养 禽专业户 以及散养户 ６ ７户 ， 品总数 ３ ４ ， ２ 样 ５ ６份 其中合格数 ３０ ， １５份 不合格数 ４ １ 份。合计合格率为 ８ ．％。详 见表 ３ ７ ６ 。
本 、 挝 、 国 、 南 、 国 等 亚洲 ９ 国 家 相继 暴 发 由 Ｈ 老 韩 越 泰 个 ５亚
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H5亚型禽流感免疫抗体卵黄检测技术
应用推广实施工作
根据《河北省禽蛋H5亚型禽流感免疫抗体卵黄检测技术应用推广实施方案》和《邯郸市蛋禽H5亚型禽流感免疫抗体卵黄检测技术应用推广方案》的要求，我县认真组织实施，现将工作情况总结如下：
一、参加培训做好技术推广宣传
为了主动完成检测任务，每每都要到养禽场去采血，养殖户害怕采血会影响采食、产蛋下降等，抵触情绪很大，往往采一次样品要做好多思想工作，养殖户自己送样时也因为采血技术不好，采的血样量小达不到检测要求，后来我们自己学习了卵黄检测技术，但技术不成熟，现在通过市级培训完善了我们的操作技术，《卵黄检测技术规程》也可以规范我们的操作步骤，。
我们组织全站人员认真学习规程，一步步对照，查找自己做的不足的地方，把需要矫正的地方列出明细贴在墙上，同时不断向养殖户宣讲该技术的采样操作要求及优点。
二、认真学习卵黄检测技术规程，开展技术大练兵
首先要熟练掌握禽蛋抽取卵黄技术，先由熟练操作者示范，每一位化验员都要练习，练习到一针就能抽出卵黄为止。
我们没有萃取设备，氯仿也易挥发，所以我们采用卵黄稀释法检测，对于健康禽，让养殖户随机采集免疫21天后的新鲜禽蛋。
对禽蛋进行表面清洗消毒后，用带有
16号针头的一毫升注射器直接抽取卵黄0.5毫升，用0.5毫升的PBS液稀释后，再按HI实验操作规程在一次性反应板上操作，采用倾斜反应板反面读数，对有抗体的样品滴度加1。
三、日常检测中的应用
今年我们禽流感样品日常检测的80%已经使用禽蛋检测，共检测禽蛋样品1600份，按规定规范填写了各项检测记录并建档保存。
以后将进一步提高我们的操作技术及对结果进行科学分析的能力。
2014年11月30日。