改良吸收放散试验证明异种弱血型抗原
ABO疑难血型三步分析法
ABO疑难血型三步分析法在血型分类中没有疑难血型,迄今为止在文献中也查不到“疑难血型”的定义，因为“疑难血型”是1种血型难以检定或判定的“现象”,而不是1种型别。
检定1份标本是否属“疑难血型”，除了标本本身的特殊性外，还与实验室的设备、技术人员的水平、经验等多种因素有关，例如1份ABO亚型标本,在基层医院血库可能因为正定型与反定型不一致而分析不出原因被认为是“疑难血型”,但在血液中心血型参比实验室该问题可能就易于迎刃而解。
在检定血型时,标本如果受多种因素干扰使结果难以判定,便呈现“疑难血型”现象。
一、干扰ABO血型正确判定的因素（一）生理性因素1.年龄老年人(ABO抗原或ABO抗体减弱),6个月前的婴儿(ABO 抗原或ABO抗体不成熟),可能导致ABO血型误定。
2.ABO亚型包括A(B)型、B(A)型,ABO抗原减弱导致细胞定型(正定型)受干扰,或血清中出现不规则抗体干扰血清定型(反定型)。
3.冷凝集素有些健康人血清中含有冷凝集素,且在<4℃才有活性,不干扰ABO血型检定,如果冷凝集素效价升高,或在室温以上反应,致敏自身红细胞可能干扰ABO正定型,存在于血清可能干扰ABO反定型。
4.“先天性”无ABO抗体近年有“先天性”无ABO抗体的个案报告,原因有待研究。
5.双精子授精红细胞呈嵌合体。
6.个体特异性个别人血清中ABO可溶性血型物质过高,ABO正定型红细胞凝集减弱。
（二）实验技术原因1.标本混淆如采错被检者,红细胞和血清非同一人,记录结果与标本编号不对应。
2.静脉输液处采样ABO抗体被输液稀释,干扰ABO反定型。
3.采样不规范用凝血块洗下红细胞检定血型，其中混有凝集程度不一的红细胞；用血浆做ABO反定型,操作过程中纤维蛋白析出凝集试剂红细胞。
4.试剂质量问题或漏加试剂定型试剂过期失效，未达标准，被污染。
操作中未遵循“先加血清后加细胞”的原则，大批量样本试验时漏加试剂血清或试剂红细胞。
5.实验操作不规范被检红细胞未洗涤,非特异性粘附血浆蛋白,或被检红细胞悬液过浓或过稀。
疑难血型鉴定,带你认识一下
疑难血型鉴定,带你认识一下发布时间：2022-11-21T07:36:34.113Z 来源：《中国医学人文》2022年9月9期作者：刘先卉[导读]疑难血型鉴定,带你认识一下刘先卉（自贡市中心血站；四川自贡643000）ABO血型是人类最早发现也是对输血安全影响最大的血型系统。
当发现ABO正反定型不一致时如何查找原因并正确鉴定，患者血型就显得尤为重要。
对ABO正反定型不符的标本进行疑难血型鉴定，探讨其原因与解决办法。
测ABO血型，正反定型不符者需进一步做吸收放散试验、唾液血型物质测定、抗体筛选、亚型检测等试验。
可能会出现额外抗原，出现额外抗体，弱抗原或弱抗体等，所以多种原因可干扰血型测定结果。
应采用正确的辅助方法检测ABO血型，提高血型鉴定的准确性与输血安全性。
一、出现额外抗原1、抗原发生改变：如类B，是一种获得性暂时性抗原。
解决方法：①观察细胞与抗-A及抗-B的凝集强度，与抗-A的反应要比与抗-B反应强。
②用受检者红细胞与自身血清做试验，血清中的抗-B不凝集自身红细胞上的类B抗原。
③检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质。
④核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
2、多凝集现象：红细胞被绝大多数人的正常血清凝集。
可用37℃生理盐水洗涤红细胞、使用非人血清来源的标准定型血清进行正定型。
3、非抗-A及抗-B的抗体成分与相应抗原形成复合体吸附在红细胞表面，引起正定型非特异性凝集。
如抗血清添加剂、抗EDTA 抗体等。
可将红细胞洗涤再进行正定型。
4、自身免疫性溶血性贫血：红细胞表面存在致敏自身抗体，包括冷凝集素和温抗体的作用。
红细胞用45℃生理盐水洗涤去除自身抗体，反定型在37℃进行，并做自身对照。
二、出现额外抗体1、蛋白或血浆不正常引起的缗钱状凝集：血清蛋白浓度异常，球蛋白浓度由于疾病而升高,纤维蛋白原浓度升高等。
应了解患者临床诊断、加适量生理盐水看凝集是否消失或洗涤红细胞、稀释反定型血清。
吸收放散试验
精选ppt
3
吸收放散试验的要的特异性抗体，达到获取单一特 异性抗体的目的。
4. 克服自身抗体的干扰 ，如用自身红细胞吸收血清中 的自身抗体，解决配血困难。
5. 鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体
精选ppt
4
吸收放散试验的应用
6. 在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来鉴定产生直 抗阳性的红细胞
吸收放散试验
精选ppt
1
吸收试验原理：抗原与抗体的结合是特异性的，因 此具有抗体活性的血清加入相应抗原后，抗体的活 性下降或消失，这种作用称为吸收试验。
放散试验原理：抗原与抗体的结合是可逆的，在物 理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离 下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验 称为放散试验。
7. 制备少量的单特异性抗体 8. 从病人红细胞上去除抗体，制备可用于自身吸收或
鉴定血型及交叉配血次侧试验中使用的红细胞 9. 证实被不完全抗D抗体遮断的新生儿红细胞的血型
精选ppt
5
根据三项试验结果判断ABO新生儿溶血病 （排除O细胞阳性情况）
直抗试验
－
＋ － － ＋ ＋ － ＋
游离试验
－
－ ＋ － － ＋ ＋ ＋
精选ppt
2
吸收放散试验的应用
1. 用于间接证明红细胞上的血型抗原及其强度，解决 红细胞定型困难的问题。常用于ABO亚型的鉴定、 全凝集或多凝集红细胞的定型以及某种原因引起红 细胞血型抗原或抗体减弱时的定型。
2. 可鉴定抗体特性，探明是单一抗体、混合抗体或复 合抗体，是何种免疫球蛋白，是否为凝集素。
释放试验
结论
－
不能证实为由血型免 疫性抗体引起的HDN
－
可以证实为HDN
吸收放散试验标准操作规程
吸收放散试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面可能存在的弱血型抗原、鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体，辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。
(二)检验原理抗体与相应抗原在适合条件下可以发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如果改变某些物理条件时，抗体可以从结合的红细胞上解脱下来。
表达弱血型抗原(A或B等)的红细胞与相应抗体反应不出现凝集现象，但可以吸收相应的抗体，被吸收的抗体在适当条件下可以放散出来，与具有对应正常抗原的红细胞发生反应，检测和鉴定该放散出来的抗体，可以证明相应抗原的存在，也可以将混合抗体得到分离。
(三)适用范围1.弱血型抗原的鉴定(本操作规程主要选取弱A／B抗原鉴定制定相应试验流程)。
2.混合血型抗体的分离与鉴定。
3.新生儿溶血病的诊断。
(四)设备性能参数参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材B600-A型离心机、KA-2200台式离心机、电热恒温水浴箱、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂生理盐水、抗A和抗B标准血清(经过筛选后)、抗人球蛋白试剂(市售单克隆或多克隆)、3％反定试剂红细胞。
(六)标本要求抗凝全血经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟后压积红细胞应≥2ml。
(七)校准步骤参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书中校准要求执行。
(八)操作程序1.吸收试验(1)生理盐水洗涤lml压积红细胞至少3遍，最后1次洗涤后，尽量弃去试管中红细胞沉淀上的所有上清盐水。
(2)如怀疑是弱A(或弱B)抗原红细胞，在洗涤后的红细胞中加入lml抗A(或抗B)血清。
(3)将红细胞与抗体试剂充分混匀，在4℃条件下孵育2小时，期间不时轻摇试管，混合红细胞与抗体血清。
(4)使用B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，将所有上清(抗A或抗B试剂)转移到另一支试管中。
2种放散试验方法对于新生儿ABO溶血病检测的临床效果评价论文
Ｙａｎ
Ｑｉｎ，Ｃｈｅｎ Ｊｉａｎ，Ｚｈａｏ Ｈｏｎｇ
Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｋｅｙ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ（Ｓｉｃｈｕａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｒｔｈ
Ｄｅｆｅｃｔｓ ａｎｄ Ｒｅｌａｔｅｄ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ｏｆ
Ｗｏｍｅｎ ａｎｄ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ），Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｗｅｓｔ
ｗｈｉｃｈ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ ４５．９％（８９／１９４）ｏｆ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅｒｍａｌ ｅｌｕｔｉｏｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ｒａｔｅｓ
ｉｎ
ｔｈｅｓｅ ２ ｍｅｔｈｏｄｓ ｗａｓ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌｌｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ（ｊｃ２＝５．４６，Ｐ＜Ｏ．０５）．Ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｆｏｒ ｎｅｏｎａｔａｌ ＡＢＯ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ ９２．３％（７２／７８），ｗｈｉｃｈ ｗａｓ
ｔｅｓｔ
ａｎｄ ｉｍｐｒｏｖｅｄ ｔｈｅｒｍａｌ ｅｌｕｔｉｏｎ
ｔｅｓｔ
ｗｅｒｅ
ｂｏｔｈ ｗｉｔｈ
ｔｅｓｔ
ｈｉｇｈ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ ｆｏｒ ｎｅｏｎａｔａｌ ＡＢＯ ｈｅｍｏｌｙｔｉｃ ｄｉｓｅａｓｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｆｒｏｚｅｎ ｅｌｕｔｉｏｎ ｉｓ ｈｉｇｈｅｒ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｉｓ ｐｒｏｊｅｃｔ．
（ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ，Ｉｇ）检测卡（批号：２１０３４２，西班牙
Ｔｏ ｃｏｍｐａｒｅ ｔｈｅ ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｆｒｏｚｅｎ ｅｌｕｔｉｏｎ
输血科ABO疑难血型鉴定标准操作规程
输血科ABO疑难血型鉴定标准操作规程1.目的为规范ABO疑难血型鉴定操作，保证临床输血安全有效，依据《输血实验室管理程序》4.1.7（1）条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于医疗机构输血科对ABO血型鉴定正反定型不相符，常规方法不能确定ABO血型的进一步确认试验。
3.职责医疗机构输血科技术人员负责ABO疑难血型鉴定。
4.原理ABo血型鉴定正反定型不相符时，通过采用单克隆抗-A、抗-B、抗-Ai、抗-AB、抗-H试剂与受检者红细胞反应监测ABH抗原，A、B、。
型试剂红细胞及自身红细胞与受检者血清（血浆）反应监测血型抗体，红细胞洗后放散试验监测弱A、弱B抗原，凝集抑制试验监测唾液ABH血型物质，血清（血浆）吸收试验排除ABO血型以外的抗体对鉴定的影响，从而获得确定受检者ABO血型的依据，确定ABo血型。
5.检测环境条件室温应控制在18-27βC,湿度应保持30%—70%。
6.步骤与方法6.1收集受检者临床资料当执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》鉴定ABO血型出现正反定型不相符，并已排除试剂及操作因素时，应调查受检者的疾病史、输血史、药物治疗情况、组织或器官移植史、孕产史及以前的血型记录，分析可能影响ABO血型鉴定的临床资料。
6.2根据受检者正反定型的反应结果及临床资料，初步分析引起正反定型不符的可能原因。
6.2.1当正定型红细胞与抗-A和（或）抗-B物凝集，而反定型未检出预期的凝集反应时，应首先确实是否因红细胞表达弱A和（或）弱B,与抗-A和（或）抗-B不凝集。
经吸收放散等试验确认红细胞不表达A和（或）B抗原后，可考虑是否为低免疫球蛋白血症、免疫抑制等致血型抗体异常。
当反定型检出了与正定型不相符的凝集时（如反定型与0型试剂红细胞凝集）6.2.2应考虑血清（血浆）中是否存在红细胞不规则抗体。
6.2.3出生3个月内的婴儿ABO血型鉴定只做正定型，不做反定型，具体执行《试管法鉴定ABO和RhD血型标准操作规程》。
放散试验标准操作规程(sop)
放散试验标准操作规程一、目的：为规范红细胞放散试验的技术操作，保证结果的准确性，从而辅助血型的鉴定以及保证交叉配血的正确进行。
二、适用范围：输血科负责进行红细胞放散试验来检测血型弱表达抗原及抗体特异性等试验的技术人员。
三、原理：红细胞血型抗原和抗体的结合是可逆的，通过改变某些物理条件就可使结合在红细胞血型抗原上的抗体分离出来，即放散。
再通过检测放散液中的抗体，可鉴定其特异性或者间接鉴定红细胞抗原。
四、步骤和方法：<1>热放散试验1、将已进行吸收试验的压积红细胞用生理盐水洗涤4次，每次将洗涤后生理盐水除尽，最后一次洗液留作对照。
2、加入与压积红细胞等容量的生理盐水，充分混匀后56℃轻摇10min（15—30s摇动一次），56℃保温1300g离心3min，立即取上清液即放散液备用。
<2>乙醚放散试验1、将已进行吸收试验的压积红细胞用生理盐水洗涤4次，每次将洗涤后生理盐水除尽，最后一次洗液留作对照。
2、加入与压积红细胞等容量的生理盐水后再加入2倍于压积红细胞体积容量的分析纯乙醚，密封后用力颠倒摇动1min，小心放气减压置于37℃30min，每10min摇动1次后以1000g 离心5min。
3、离心后分成3层，最上层是乙醚，中层是红细胞基质，下层是深红色放散液（含血红蛋白）。
留取下层放散液置于37℃水浴中30min挥发残存乙醚备用。
4、根据试验目的检测放散液中抗体，与最后一次洗液做对照（洗液中应检不出任何抗体）。
<3>结果判断：若最后一次洗液未检出抗体，而放散液中检出相应抗体，则试验为阳性，表明红细胞表达目标抗原或者血清中存在相应抗体。
反之为阴性。
五、注意事项：1、如最后一次洗液中可检出抗体，表明红细胞洗涤不充分，应继续洗涤。
2、放散液中抗体易变性，故尽快进行鉴定。
如果放散液需要保存，改用不规则抗体筛选阴性的AB型血清或6%牛血清白蛋白。
3、放散试验方法较多，热放散法是最简便和实用的方法。
实验3 吸收放散试验、效价
注意事项
1.更换滴管，防止干扰。
2.防止前带现象，看结果从高稀释度开始
3.试剂细胞。 4.稀释液体积越小，产生误差越大。
作 业
IgG抗体效价如何进行检测？
吸收试验
待 检 红 细 胞
已知 效价 的抗 A和 抗B 血清
滴定
吸收液
已知抗原 的红细胞 比较吸收 前后血清中 抗体效价
间接判定待检 红细胞血型 及其亚型种类 红细胞上 有无相应 抗原及其强度
放散试验
器材:小试管、滴管、试管架、记号笔、
冰箱、离心机、56℃水浴箱
试剂:
1．抗-A及抗-B分型血清
2．3%-5%A型及B型试剂红细胞
3．生理盐水
标本: 静脉血
操
作(已做好)
1. 冷吸收：受检红细胞洗涤3次，末次洗涤除
尽盐水，取1份压积红细胞加3份人源抗-A/抗-B 分型血清混合，置4℃ 30-60min，每隔10min将
试管振摇1次，充分冷吸收 (最好4℃过夜)。（
最好加做一个Ｏ细胞－－－阴性对照） 2.洗涤：离心去除上清液，以4℃冷盐水洗涤 红细胞3次，留取压积红细胞。
2.加样：从2号开始各管分别加生理盐水0.05ml； 1、 2管各加血清加血清0.05ml。 3.倍比稀释：将2号管混匀，从中吸出0.05ml移入第 3管，混匀；再从第3管吸出0.05ml移入第4管，以
此类推，至最后一管，吸出0.05ml弃去。
4.加悬红：每管各加0.05ml，混匀。 5.观察结果：3000r／min离心15秒，直接观察结果。
操
作
3.放散：加等容积生理盐水，置56℃水浴中10min（ 前1min用手振摇后，56℃环境静置9min）。立刻
1000g离心3min（离心时套管内放温水，温度保持
吸收放散试验标准操作规程
吸收放散试验标准操作规程(一)检验目的检测红细胞表面可能存在的弱血型抗原、鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体，辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。
(二)检验原理抗体与相应抗原在适合条件下可以发生凝集或致敏，但这种结合是可逆的，如果改变某些物理条件时，抗体可以从结合的红细胞上解脱下来。
表达弱血型抗原(A或B等)的红细胞与相应抗体反应不出现凝集现象，但可以吸收相应的抗体，被吸收的抗体在适当条件下可以放散出来，与具有对应正常抗原的红细胞发生反应，检测和鉴定该放散出来的抗体，可以证明相应抗原的存在，也可以将混合抗体得到分离。
(三)适用范围1.弱血型抗原的鉴定(本操作规程主要选取弱A／B抗原鉴定制定相应试验流程)。
2.混合血型抗体的分离与鉴定。
3.新生儿溶血病的诊断。
(四)设备性能参数参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书。
(五)器材与试剂1.器材B600-A型离心机、KA-2200台式离心机、电热恒温水浴箱、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔。
2.试剂生理盐水、抗A和抗B标准血清(经过筛选后)、抗人球蛋白试剂(市售单克隆或多克隆)、3％反定试剂红细胞。
(六)标本要求抗凝全血经B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟后压积红细胞应≥2ml。
(七)校准步骤参见KA-2200血清学专用离心机、B600-A型离心机、电热恒温水浴箱使用说明书中校准要求执行。
(八)操作程序1.吸收试验(1)生理盐水洗涤lml压积红细胞至少3遍，最后1次洗涤后，尽量弃去试管中红细胞沉淀上的所有上清盐水。
(2)如怀疑是弱A(或弱B)抗原红细胞，在洗涤后的红细胞中加入lml抗A(或抗B)血清。
(3)将红细胞与抗体试剂充分混匀，在4℃条件下孵育2小时，期间不时轻摇试管，混合红细胞与抗体血清。
(4)使用B600-A型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，将所有上清(抗A或抗B试剂)转移到另一支试管中。
吸收放散试验在输血科的应用
吸收放散试验在输血科的应用吸收放散试验的是应用特异性抗原与抗体的结合是可逆的这一原理，用于检测红细胞表面存在的弱血型抗原，鉴定分离血清中可能存在的混合抗体，辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定。
对于临床输血工作具有重要临床意义。
现在介绍一下吸收放散试验的基本原理，临床应用，操作技术及注意事项。
一、吸收放散试验的原理：吸收试验的原理抗原与抗体的结合是特异性的，含有抗体活性的血清加加入相应抗原红细胞后，抗体的活性下降或消失，这种作用称为吸收试验。
对一未知抗体可以用已知抗原进行吸收，吸收后抗体活性下降或消失，说明未知抗体中含有与已知抗原相对应的抗体。
当被检血清中含有多种抗体时，可用已知抗原分别吸收用于鉴定抗体的特异性。
放散试验的原理抗原与抗体的结合是可逆的，在物理条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验。
二、吸收放散试验的临床应用1.鉴定新生儿溶血病致敏患儿红细胞上的抗体2.在溶血性贫血和可疑输血反应中，鉴定DAT阳性红细胞抗体3.检测红细胞表面存在的弱血型抗原4.鉴定、分离血清中可能存在的混合抗体5.辅助红细胞血型及混合抗体特异性的鉴定6.从DAT阳性红细胞上去除抗体7.制备可用于自身吸收或鉴定血型的红细胞等三、吸收试验方法1.吸收试验的准备：1）.生理盐水洗涤压积红细胞至少3遍，最后一次洗涤后，彻底倾去上清液2）.根据待检红细胞的特性（如怀疑是弱A抗原红细胞，则加入1ml抗A；如怀疑是弱B抗原红细胞，则加入1ml抗B）将抗血清加入洗涤过的压积红细胞中2.吸收试验的操作：1）冷吸收：一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞，加一份被检血清，混匀后置4℃冰箱吸收1~2小时(ABO、MN、P血型系统等) 2）温吸收：一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞，加一份被检血清，混匀后置37℃水浴箱中吸收1小时(Rh血型系统等) 3）离心，去除所有上清试剂，将红细胞转移到另一干净试管中。
吸收放散试验
放散试验原理
抗原与抗体的结合是可逆的。在物理条件 改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下 来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试 验称为放散试验
吸收试验的方法
冷吸收
一份盐水洗涤的已知抗原的压积红细胞 加一份被检血清，混匀后置 4℃ 冰箱吸 收1~2小时 （ABO、MN、P系统等）
热吸收 混匀后置37℃水浴箱中吸收（Rh系统等）
其优点是适用于一般化验室，缺点是放散 液中含有较多游离白蛋白。
热放散试验方法
将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤3-4 次，最后一次尽量压积红细胞和吸取红细胞上 层的生理盐水。
在压积红细胞中加等量生理盐水（也可用AB 血清或6%白蛋白），置 56℃水浴箱中7~8分 钟，期间摇动数次。
取出后立即高速离心，3000 转/分2分钟；取 上清液（樱红色的上清液即为放散液），与已 知红细胞试验。按不同试验要求做试验，将放 散液作为抗体使用。
放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体复
合物上分离下来
乙醚放散试验
主要应用于温自身抗体（IgG）或同种抗体 引起的直抗阳性，以及用于分离IgG抗体混合物
其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫 血，鉴定Rh抗体效果最好，不宜用于 ABO 抗 体鉴定
乙醚放散试验方法
取经洗涤3次的受检压积红细胞1份加1份生理盐水，
酸放散
放散试验的应用
鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体 在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来
鉴定产生直抗阳性的红细胞 制备少量的单特异性抗体 从病人红细胞上去除抗体，制备可用于
自身吸收或鉴定血型及交叉配血次测试 验中使用的红细胞
吸收试验（absorption test）
抗原与抗体的结合是特异性的，因此具有抗体活 性的血清加入相应抗原后，抗体的活性下降或消失， 这种作用称为吸收试验
吸收放散法在ABO疑难血型鉴定中的应用
１ ４ 流 式细胞 术 检 测 抗 体 方 法 吸取 样 本 １ ２的 ． 、
血 清 和该样 本放 散液 各 ５ ｌ分 别加 入 标准 红 细 胞 ０ ， ５ ｌ４℃孵 育 ｌ ｒ每 隔 １ ｉ ０ ， ｈ， ５ ｎ振摇 一次 ； ａ ｒ 生理盐 水
疑难血 型是 保 障 输 血 安全 的最 重 要 的环 节 。 目前 ，
绝大多 数实验 室 并 没有 开 展 基 因鉴 定 ＡＢ 血 型 的 Ｏ 技 术工作 ， 于 ＡＢ 对 Ｏ疑难 血 型的鉴 定仍 然依 赖 于血 清 学 的 方法 ， 而吸 收 放散 法 是 免 疫血 清 学 实 验 中非 常 重要 的技术 手段 。
次 ， Ｐ Ｓ 至 总 量 为 ３０ｔ， 加 Ｂ ０ Ｌ 以标 准 红 细 胞 加 入 １ Ｆ ＴＣ标 记 的羊 抗 人 ＩＭ 为 阴性 对 照 ， 流式 细 胞 Ｉ ｇ 用 仪检 测 。
２ ， 生 ， 偿 献 血 后 ， 样 经 血 （ ， ２ 学 无 血
蛋 白试 验 为 阴性 ， 样 本 的 放散 液 与 Ａ 或 Ｂ标 准 细胞 发 生 凝 集 ， ４倒 正反 定 型相 符 。流 式 细 胞 术 检 测 显 示
放 散 液 中抗 体 的 含 量 高 于待 测血 清 。结 论 吸 收 放 散 法 能 够 起 到 浓 缩 抗 体 的作 用 ， 可 以 用 于检 测 抗 既 原 ， 可 以用 于检 测 抗 体 。 灵 活 运 用 吸 收放 散 法 ， 够 准 确 鉴 定 Ａ１ 血 型 。 也 能 ３ ０
【 键 词 】 ＡＢ 疑 难 血 型 正 反 定 型 不 符 吸 收 放 散 法 关 ０
临床输血 工作 中的一项 主要 工 作任 务就 是鉴 定 ＡＢ Ｏ血 型 ， 样本 一般 来 源 于无偿 献 血 人群 和临 床 其 需要输 血 的患 者 。 因此 ， 准确 鉴 定血 型尤 其是 ＡＢ Ｏ
吸收放散实验
1.吸收试验
[原理]：当受检者加入已知效价的抗A及抗B血清后，若红细胞上有相应的抗原，便吸收血清中的抗体。
再以已知抗原的红细胞来滴定，比较吸收前后抗血清中抗体的效价，便可证明受检红细胞上有无相应抗原以及强度，间接判定受检红细胞的血型及其亚型的种类。
[试剂]：1：抗A及抗B分型血清。
2：2%A型及B型试剂红细胞。
3：受检红细胞
[操作]
1:将受检红细胞用盐水洗涤3次，末次洗涤后，将盐水倒尽。
取压实红细胞1份，于等量抗A血清混合；另取1份与等量抗B血清混合。
放置4℃冰箱中至少1h，每10min将试管摇动1次，使红细胞充分吸收抗体，然后离心，上层血清即为吸收液。
2:排列10mm x 60mm小试管4排，每排5支，每管各加生理盐水0.2ml；第2,、4两排第1管分别各加未吸收抗A及抗B血清0.2ml。
然后，分别作2~32的倍量稀释。
3:第1、2两排各加2%A型红细胞生理盐水悬液0.2ml。
4:将试管振摇使红细胞充分混匀，放置室温1h（或1000r/min离心1min），观察凝集反应。
5:结果判定：吸收后，抗A效价较未吸收抗A效价显著降低或消失者为A型；吸收后抗B效价较未吸收抗B效价显著降低或消失者为B型；如吸收后抗及抗B效价都显著降低或消失者为AB型；吸收后抗A及抗B效价都无明显差异者为O型。
如试验的目的是鉴定A亚型，则按受检者红细胞的吸收强度，A1>A2.>A3>Ax>Am规律来判定。
B亚型的鉴定与此相似。
[附注]
:1。
不同方法筛查RhD弱表达变异体
不同方法筛查RhD弱表达变异体宋任浩;魏世锦;李荣秀;张香改【摘要】目的研究不同检验方法在RhD弱表达变异体中的应用范围及相互之间的关系.方法应用酶介质法和间接抗球蛋白试验(indirect antiglobulin test,IAT)在盐水凝集法初筛出的RhD阴性个体中进一步筛查弱D/部分D,然后在IAT确认的RhD阴性个体中采用吸收放散试验筛查DEL型.结果 278例RhD阴性个体酶介质法和IAT分别筛查出13和15例弱D/部分D,吸收放散试验筛查出64例DEL型.结论在这几种RhD弱表达变异体筛查方法中,盐水凝集法不能筛查RhD弱表达变异体,只能筛查正常表达的RhD抗原;酶介质法和IAT可以筛查弱D/部分D,酶介质法比IAT少检出两例(P>0.05),但得出酶介质法不如IAT敏感的结论尚早,有待于大样本的进一步研究;在IAT确认的RhD阴性个体中,若采用更为敏感的吸收放散试验,仍有部分个体RhD抗原检测为阳性.%Objective To study the field of application of different testm ethods of RhD variants of weak expression and the correlation between the different testm ethods.Methhods First,screening out the cases of RhD negative individuals by saline agglutination ,then ,further screened weak D/PartD by enzyme medith method and indirect antiglobulin test,finally ,screened type DEL by absorption elution lest in the RhD negative individuals by IAT.Results 278 cases of RhD negative individuals screened out by saline agglutination ,13 and 15 cases of weak D / PartD was screened out by enzyme medith method and IAT respectively ,the 67 cases oftype DEL by absorption elution test.Conclusion in the severalm ethods, RhD variants of weak expression were notscreened out by saline agglutination ,RhD antigen ofnormal expression only ;weak D/Prat D could be screened out by enzyme medium method and IAT ,with enzyme medium method was less 2 cases than with IAT ,the differences in sensitivity between enzyme medium method and IAT need further study for the large sample.In some confirmed RhD-negative individuals with IAT ,by the use of a more sensitive absorption elution test,RhD antigens were still detected.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2011(015)009【总页数】3页(P1513-1515)【关键词】方法;筛查;RhD弱表达变异体【作者】宋任浩;魏世锦;李荣秀;张香改【作者单位】河北省血液中心,河北,石家庄050071;河北省柏乡县人民医院;河北省计划生育科学研究院;河北省计划生育科学研究院【正文语种】中文【中图分类】R457.1+1人类红细胞Rh血型发现于20世纪40年代,是人类红细胞血型系统中最具多态性者[1]。
血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因及措施
血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因及措施钟胜英【摘要】目的对血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因和处理措施进行探讨.方法抽取2014年1月~2016年12月间,拟输血患者中ABO血型正反定型不符者18例作为研究对象,对其进一步展开吸收放散试验、抗体筛查、唾液血型物质测定、亚型检测,经ABO疑难血型3步分析法对不符的原因进行分析及鉴定.结果本次18例ABO血型正反定型不符者中,有2例为人为因素造成,另外16例的原因包括有生理因素、自身抗体因素、血浆蛋白异常、不规则抗体以及血液疾病等因素,其中不规则抗体因素所占比例最高(P<0.05).结论造成ABO血型正反定型不符的原因较多,在临床血型鉴定中应引起重视,积极采取有针对性的确诊试验,展开鉴定分析,ABO血型鉴定时选择正确辅助手段,进而提高血型鉴定准确性,以保证输血的安全性、有效性.【期刊名称】《中国医药科学》【年(卷),期】2017(007)009【总页数】4页(P133-136)【关键词】血型鉴定;ABO血型正反定型不符;输血安全;疑难血型;影响因素【作者】钟胜英【作者单位】广东省兴宁市人民医院,广东兴宁 514500【正文语种】中文【中图分类】R446.6在实际临床工作中，ABO血型属于输血、器官移植过程中所应用到的一种非常重要的血型系统，确定受血者与供血者之间的ABO血型正确，是有效保证临床输血安全的一个非常重要的前提，也是基本原则。
如果受血者或供血者二者中一方的ABO血型发生误定，失误的输注了异型血，发生严重溶血性输血反应的可能性就会达到增加，对该患者的生命安全构成了严重的威胁[1]。
在发现ABO的正反定型存在不符情况的时候，如何能够迅速准确的找到原因，并及时正确的对血型进行鉴定的临床意义重大，应引起人们的重视[2-3]。
本次研究对血型鉴定中出现ABO血型正反定型不符的原因和处理措施进行探讨，现将过程及结果报道如下。
1.1 一般资料研究中资料来源于2014年1月～2016年12月间拟输血患者中ABO血型正反定型不符者，共计选择18例作为研究对象，年龄在3个月～80岁之间，平均（45.6±12.3）岁。
吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用研究
吸收放散试验及抗体增强方法在 ABO疑难血型鉴定中的应用研究【摘要】目的：在ABO疑难血型鉴定中应用吸收放散试验及抗体增强方法的价值做研究。
方法：试验时间2020年2月至2021年2月，取ABO疑难血型28例作为试验标本，并经抗体增强方法、不规则抗体筛选、呼吸放射试验、直接抗人球蛋白试验检验，对血型抗原、血清中抗体检出情况进行观察。
结果：28例患者中，有17例ABO正反定型不符的患者，11例低效价血清患者。
结论：吸收放散试验可实现浓缩血清、初步纯化抗体的效果，抗体增强方法可使低效价血清抗体的凝集强度增加，吸收放散试验及抗体增强方法应用在输血相容性检测中，对ABO疑难血型鉴定具有准确的检测价值，对部分交叉配血不合情况予以解决。
【关键词】吸收放散试验；抗体增强方法；ABO疑难血型鉴定在临床输血相容性检测中，ABO血型鉴定属于必检项目中最重要的一项，其检测目的主要为保证临床输血治疗的安全性，因此ABO血型鉴定准确性可作为临床输血安全的前提和重要措施[1]。
在大部分医院输血科实验室中未充分普及ABO 血型基因检测工作，鉴定ABO疑难血型和交叉配血试验中完全依赖血清学方法实施检测。
吸收放散试验的检测方法主要为输血相容性检测的常用方法，其属于准确性高的技术方式，在临床实际检测中，第一时间指出吸收放散试验在检测低效价血清抗体工作时，放散液、试剂红细胞的凝集强度降低，且操作时间较长，流程相对繁琐。
因此在此组试验中使用吸收放散试验及抗体增强方法鉴定ABO疑难血症，将抗原抗体减弱的凝集强度逐渐将混合外观凝集MF~1+增加至3+，将血型抗原抗体减弱、冷凝集素、亚型对检测结果造成的干扰予以排除[2]。
为使ABO疑难血型鉴定的准确性提升，现分析吸收放散试验及抗体增强方法检测的意义，并作如下报道。
1.一般数据与方法1.一般数据于2020年2月至2021年2月时段开展此次试验，并取28例ABO疑难血型作为试验标本，其中男性人数16例、女性人数12例，年龄值域21~69岁，均值（45.35±5.12）岁；整体一般数据，并对其进行比对结果无差异（p＞0.05）；全部人员均自愿签订同意书，并保证积极配合试验进行，将其上报于我院伦理委员会，得到批准认可。
血型抗体减弱或缺乏导致ABO血型正反定型不相符的检测分析
细胞与分子免疫令杂志（Chin J Cell M ol Immurn丨丨）202l，37(3)253 .论著•文章编号：1007-8738(2021 )03"0253*04血型抗体减弱或缺乏导致ABO血型正反定型不相符的检测分析江涛1△，安宁2△，杨世明崔颖穆士杰、王林、杜娟1('空军军医大学唐都医院输血科，陕西西安710038; 2空军军医大学西京医院输血科，陕西西安710032; 3西安秦皇医院输血科，陕西西安710600)[摘要]目的分析血型抗体减弱或缺乏的原因及其对A B0血型鉴定的影响和处理方法。
方法采用正反定型、抗体增强方 法、吸收放散试验、抗球蛋白试验、不规则抗体筛选及交叉配血试验对患者进行血型血清学检测。
结果病例1、2、3、4正定 型为〇型，病例1、2反定型抗A、抗B抗体在常规方法中与A c、B e不凝集，病例3抗B抗体在常规方法中与B e不凝集。
经采 用抗体增强方法及吸收放散试验，使抗A、抗B抗体凝集强度增加到弱凝集至2 +。
病例4正定型为0型、病例5正定型为 A型，反定型采用抗体增强方法及吸收放散试验，仍未检测出抗B抗体，为抗B抗体缺乏。
结论患者血型抗体减弱或缺乏可 导致A B0血型正反定型不相符，使判定结果和临床及时输血受到影响。
[关键词]A B O血型；抗体减弱；抗体缺乏；正反定型；不相符；血型血清学检测[中图分类号]R457.1 +3, R446 [文献标志码]A正确鉴定ABO血型是保证临床输血安全有效和 提高组织器官移植成活率的重要措施[1<。
红细胞上 含有抗原而血清中缺乏相应抗体，红细胞上缺乏抗 原而血清中存在相应抗体，以及80%的人组织细胞 及分泌液存在A、B、H血型物质，是AB0血型系统 所具有的独特性质[3]。
AB0血型是一种遗传性状，位于第9号染色体长臂上，在健康人中一般不会改 变[4]。
但人类血型系统非常复杂，受环境或免疫系 统疾病等因素的影响，使血型抗原或抗体暂时性减 弱或缺乏，导致AB0血型正反定型不相符，使判定 结果和临床及时输血受到影响[5<。
放散试验标准操作规程
放散试验标准操作规程1.目的为规范红细胞放散试验的技术操作，依据《输血实验室管理程序》4.1.8（2）条款的要求制定本规程。
2.适用范围适用于输血科( 血库) 对红细胞血型弱抗原的鉴定及致敏红细胞的抗体特异性鉴定等。
3.职责输血科（血库）技术人员负责放散试验操作。
4.原理红细胞血型抗体与血型抗原的结合是可逆的，通过改变某些物理条件，可使结合在红细胞血型抗原上的抗体被放散出，再通过检测放散液中的抗体，可鉴定致敏红细胞的抗体特异性或间接鉴定红细胞抗原。
5.所需设备和试剂5.3设备普通离心机，血型血清学专用离心机，水浴振荡仪。
5.4试剂分析纯乙醚。
6.检测环境条件室温应保持在18- 27℃，湿度应保持30%-70%。
7.步骤与方法7.1热放散试验7.1.1将受检者抗凝压积红细胞或已进行吸收试验的压积红细胞用生理盐水洗涤3-6次，每次洗涤后将生理盐水除尽，最后一次洗液留作对照。
7.1.2在洗涤后的压积红细胞中加入与压积红细胞等容量的生理盐水（如放散液需要保存，改用6%牛血清白蛋白或红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清）,充分混匀后56℃轻摇（15-30s摇动一次) 10min，56℃保温离心（1300g离心3min）立即将上清液（放散液）转移至另一试管中备用。
7.2乙醚放散试验7.2.1将受检者抗凝压积红细胞或已进行吸收试验的压积红细胞用生理盐水洗涤3-6次，每次洗涤后将生理盐水除尽，最后一次洗液留作对照。
7.2.2在洗涤后的压积红细胞中加入与压积红细胞等容量的生理盐水（如放散液需要保存，改用6%牛血清白蛋白或红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清），再加2倍于压积红细胞容量的分析纯乙醚，密封。
7.2.3用力颠倒摇动1min，小心放气减压，置37℃30min每10min摇动1次1000g离心5min。
7.2.4离心后分成三层，最上层是乙醚，中层是红细胞基质，下层是深红色放散液（含有血红蛋白）。
7.2.5弃去上层乙醚，用清洁的吸管通过中间基质层，吸出下层放散液移人另一试管中（不加盖），置37℃水浴中挥发残存乙醚后备用。
吸收放散试验 文档
吸收放散试验
1、原理：有些弱A或弱B抗原的红细胞不为标准抗A或抗B试剂所凝集，但可以吸附特异性抗体，并用标准红细胞检测放散液中是否含有特异性抗体。
采用吸收放散的试验方法可间接检测。
2、标本采集与处理
2.1静脉采集
2.2抗凝剂：使用EDTA-K2抗凝，以免发生补体参与的溶血反应。
2.3标本处理：标本应尽快送实验室，离心分离出血浆，待用，4℃冰箱中保存3天。
2.4严重溶血和脂肪血的标本不能测定。
3、试剂：长春生物制品研究所生产的单克隆抗体：抗A,抗B试剂。
4、操作
4.1、将受试者的红细胞用生理盐水洗涤3次，取压积红细胞1份与等量的标准抗A或抗B试剂血清充分混合，置于4℃温浴1小时，每10分钟振摇1次以充分吸收。
4.2、离心分离血清，用大量生理盐水洗红细胞5次以上，留下最后一次的洗液做游离抗体检测。
4.3、对已洗过的洗涤红细胞加入等量的生理盐水，混匀，将该试管放在56℃水浴中10分钟，振摇，以洗脱吸附的抗体。
水浴后立即离心取出樱桃红色的上层洗脱液。
4.4、分别取樱桃红色的上层洗脱液200ul分别加入装有2%的对应标准红细胞200ul和2% O型标准红细胞200ul的两支试管中,3000转\
分离心1分钟，观察结果。
5、结果判读
如果洗脱物与对应标准红细胞发生凝集或反应，不与O型标准红细胞反应，则该患者细胞表面上存在能够结合特异性抗体的活性A或B抗原。
如果洗脱物也与O型标准红细胞反应，表明有非特异性的反应，结果不准确。
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改良吸收放散试验证明异种弱血型抗原
【关键词】异种弱血型抗原
抗体与相应抗原在适合条件下发生凝集可致敏，但这种结合实际是可逆的，如改变某些物理条件时抗体又从结合的红细胞上解脱下来［1］。
传统的吸收放散试验作为一种证明弱血型抗原的检测方法已被广大血型工作者广泛运用于实际工作中，但无论是证明A、B亚型还是证明弱D抗原，都是用于同种抗原的鉴定。
本文所报告的改良吸收放散试验是在传统方法的基础之上，利用猕猴红细胞放散液与人A、B红细胞反应，避开了人抗猴种属抗体的干扰，达到了证明异种弱抗原的目的，为血型工作者今后开展相关研究打开了思路。
1 材料与方法
材料
标本 30份猕猴血样采自广州华南灵长类研究中心，后肢静脉采血，肝素抗凝。
试剂人源ABO抗血清由河北省血液中心提供。
本实验室按操作规程［2］进行筛选、鉴定、加工为猕猴ABO血型检定专用试剂。
方法
盐水凝集试验分别用商品McAb-A、McAb-B试剂与商品人源抗-A、抗-B试剂与猕猴红细胞进行直接凝集试验。
改良吸收放散试验（1）取2支试管，各加猕猴压积红细胞1ml，以生理盐水洗涤3次，最后一次洗涤后，弃上清液；（2）于每管压积红细胞中分别加入2ml猕猴专用抗-A/抗-B；（3）充分混匀，室温中孵育1h，过程中不时轻摇试管；（4）离心后洗涤5次，将压积红细胞重悬于生理盐水；（5）56℃水浴箱中放散20min，每2~3min摇晃一次；（6）1500rpm离心1min，上清即为放散液；（7）各取200μl放散液移入2支干净试管内，分别加入2%人A、B型红细胞各200μl，混匀；（8）1500rpm离心15s；（9）肉眼和显微镜下观察试验结果。
2 结果
盐水凝集试验商品McAb-A和McAb-B试剂与猴红细胞均无凝集反应，而对照组呈现正常凝集；商品人源抗-A、抗-B试剂与所有猴红细胞均呈凝集反应。
改良吸收放散试验从30只猕猴血液样本中检出类人A型3只（10%）、B型9只（30%）、AB型3只（10%），详细结果见表1。
表1 猕猴红细胞放散液与人试剂红细胞的凝集反应结果（略）
注：1+~4+：凝集的程度；-：未检出
3 讨论
1981年，Terao等［3］对日本猕猴的ABO血型研究结果表明，日本猕猴的红细胞上存在类人ABO血型抗原，且受ABO血型基因调节。
宋怀燕等［4］1995年报道了我国猕猴ABO血型的调查结果，证明我国猕猴的唾液中含有ABH血型物质，但用直接凝集试验无法检测出红细胞上的类人ABO血型。
本实验也表明，商品McAb-A、-B试剂无法检测猕猴红细胞膜上的类人ABO抗原，符合宋怀燕的报道；而商品人源抗-A、抗-B试剂则与所有受检猕猴红细胞呈凝集反应。
经反复
实验分析，排除冷凝集素等因素，确定是由于异种间的种属抗体所致。
为了证明猕猴红细胞上的类人A、B抗原，笔者设计了改良吸收放散试验：先用待测的猕猴红细胞与专用抗-A/-B反应，此时抗血清中的ABO血型抗体及种属抗体均被吸收到猕猴红细胞上。
在56℃水浴条件下将吸附的抗体放散下来（包括ABO抗体和人抗猴种属抗体），以放散液分别与人的A、B型红细胞反应，此时放散液中的ABO抗体与人红细胞发生反应凝集而种属抗体（人抗猴抗体）不会与人红细胞发生凝集，由此推断出猕猴红细胞上有类人A/B或AB血型抗原。
这一巧妙设计避开了种属抗体对猕猴类人ABO血型鉴定的干扰，成功地检定出猕猴红细胞上的类人ABO血型，不仅为广大血型工作者今后开展相关研究打开了思路，而且首次证明出我国猕猴红细胞上具有类人ABO血型抗原，为建立灵长类动物输血动物模型提供了基础资料。
另外，由于猕猴红细胞表面的类人ABO抗原很弱，当专用血清的抗-A/抗-B 效价分别为64或128时，结果不稳定；当抗-A/抗-B效价低于64时结果失败，说明高效价、高特异性、高亲和力的人源ABO抗血清是本技术成败的关键。
本实验中部分猕猴类人ABO血型未检出考虑为这些红细胞上的类人ABO抗原太弱所致。
［参考文献］
1 李勇，杨贵珍.人类红细胞血型学理论与实验技术.北京：中国科学技术出版社，1999，267-273.
2 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程，第2版.南京：东南大学出版社，1997，91-92.
3 Terao K,Fujimoto K,Cho F,et of ABO group-Specific substances on the red cells of the cynomolgus J Med Sci Biol,1981,34（1）: 1-7.
4 宋怀燕，刘雅诚，高富愿，等.恒河猴（Macaca mulatta）血型的研究．中国实验动物学杂志,1995,5（2）：98-102.。