培养基的配置和灭菌
实验二.培养基的配制及灭菌
实验二培养基的配制及灭菌
一、实验目的：
1. 掌握常用培养基的制备方法；
2. 了解培养基的成分、类型及特点；
3. 学会玻璃仪器的洗涤和灭菌前的准备工作。
4.了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。
二、实验原理
人工配制的培养基是植物组织培养的营养基础，不同材料对培养基的要求不尽相同，适当地设计和选用培养基对组织培养是至关重要的，一个完整的培养基配方应包含有无机盐、
有机营养、水、植物生长调节剂、琼脂及其他成分。培养基的主要成分的详细内容见课本
p26~29。为了省时和减少多次称量的误差，一般先将药品配制成浓缩一定倍数的母液，用时
稀释，储存于冰箱低温（2~4摄氏度）中待用。
基本培养基有8中母液，即大量元素母液、微量元素母液、有机物母液、钙盐母液、铁盐母液、肌醇母液、镁元母液、生长调节物质母液，基本培养基的配制方法有两种：一是可
以将培养基的每种成分配成单一化合物的母液，便于配制不同种类的基本培养基时使用；二
是配成几种不同的混合液，这样在大量配制同一种培养基时更省时、省力。在配制母液时应
注意防止沉淀产生。绝大多数生长调节物质不溶于水，可以加热并不断搅拌促使溶解，必要
时加入稀酸或稀碱等物质促溶。各类植物生长调节物质的用量极小,它们对外植体愈伤组织
的诱导和根、芽等器官分化起着重要和明显的调节作用。通常使用的浓度单位是mg/L。
配制好的培养基应在24h之内完成灭菌工作，以免造成杂菌大量繁殖。灭菌方法有：高温高压灭菌、过滤除菌、射线除菌等方法。培养基常采取高压灭菌的方法，灭菌时间一般是
在0.105MPa压力下，温度121摄氏度时，灭菌时间应根据容积的体积确定，所需最少时间
实验一培养基的配制与灭菌
实验一培养基的配制与灭菌
一、目的
掌握培养基母液的配制方法；培养基的配制和灭菌技术；不同质地实验用品的灭菌方法。
二、方法步骤
1、母液配制
一般大量元素、微量元素和其它成分分别配制成100－200倍母液，使用时按比例稀释即可。配好的母液需贮存于2～4℃的冰箱中，定期检查有无沉淀和微生物污染，如果出现沉淀或微生物污染，则不能使用。
2、植物激素配制
植物激素一般配制成浓度为0.1—1.0mg/ml的溶液，贮存在2～4℃下备用。由于多数激素难溶于水，所以配制时应按下面步骤进行：
IAA：先用少量95%乙醇使之充分溶解，再加蒸馏水定容至需要浓度的体积。
NAA：可溶于热水中，也可采用与IAA同样的方法配制。
2,4-D：先用少量1mol/L的NaOH溶液充分溶解，然后缓慢加入蒸馏水定容至需要浓度体积。细胞分裂素类：KT和BA等细胞分裂素类物质均溶于稀盐酸，应先用少量1mol/L的HCl溶解后再稀释至需要浓度。
赤霉素：赤霉素的水溶液稳定性较差，一般用95%的乙醇配制成5～10mg/ml的母液低温保存，使用时再稀释。
3、培养基配制
按实际配制培养基体积，取各母液的需要量加入一适当体积的烧杯或其它配制培养基的容器中，再加入实际配制培养基体积约2/3—3/4的蒸馏水，然后以每升所用蔗糖的量称取放入培养基并使其溶化。用0.1mol/L的NaOH或0.1mol/L的HCl调整pH至5.6—5.8，以
0.6%—0.8%的比例加入琼脂，并搅拌加热使琼脂完全溶化，用蒸馏水定容至终体积，混合均匀后分装于培养器皿中，然后进行高压灭菌。
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌
培养基的制备与灭菌
实验⼋培养基的制备与灭菌
⼀、⽬的要求
1.掌握微⽣物实验室常⽤玻璃器⽫的清洗及包扎⽅
法。
2.掌握培养基的配置⽅法。
3.掌握⼲热灭菌和⾼压蒸汽灭菌的操作⽅法。
⼆、基本原理
正确掌握培养基的配制⽅法是从事微⽣物学实验⼯作的重要基础。由于微⽣物种类及代谢类型的多样性．因⽽⽤于培养微⽣物的培养基的种类也很多，它们的配⽅及配制⽅法虽各有差异。但⼀般培养基的配制程序却⼤致相同．例如器⽫的准备，培养基的配制与分装，棉塞的制作，培养基的灭菌，斜⾯与平板的制作以及培养基的⽆菌检查等基本环节⼤致相同。
三、实验材料
1.药品：待配各种培养基的组成成分、琼脂、
1mol/L 的NaOH 和HCl 溶液。
2.仪器及玻璃器⽫：天平、⾼压蒸汽灭菌锅、移液
管、试管、烧杯、量筒、三⾓瓶、培养⽫、玻璃漏⽃等。
3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉
花等。
四、操作步骤
(⼀)玻璃器⽫的洗涤和包装
1.玻璃器⽫的洗涤
玻璃器⽫在使⽤前必须洗刷⼲净。将三⾓瓶、试管、培养⽫、量筒等浸⼊含有洗涤剂的⽔中.⽤⽑刷刷洗，然后⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲净。移液管先⽤含有洗涤剂的⽔浸泡，再⽤⾃来⽔及蒸馏⽔冲洗。洗刷⼲净的玻璃器⽫置于烘箱中烘⼲后备⽤。
2 ?灭菌前玻璃器⽫的包装
(1)培养⽫的包扎：培养⽫由⼀盖⼀底组成⼀套，
可⽤报纸将⼏套培养⽫包成⼀包，或者将⼏套培养⽫直接置于特制的铁⽪圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养⽫须经灭菌之后才能使⽤
(2)移液管的
包扎：在移
液管的上端
塞⼊⼀⼩段
棉花(勿
图8-1移液管的包扎
⽤脱脂棉），它的作⽤是避免外界及⼝中杂菌进⼊管内，并防⽌菌液等吸⼊⼝中。塞⼊此⼩段棉花应距管⼝约0.5cm 左右，棉花⾃⾝长度纟勺1~1.5cm。塞棉花时.可⽤⼀外围拉直的曲别针、将少许棉花塞⼊管⼝内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通⽓⽽⼜不使棉花滑下为准。
实验一培养基的配制及灭菌
实验一培养基(d e)配制及灭菌培养基是人工配制(de)适合微生物生长繁殖或积累代谢产物(de)营养基质,用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物.各类微生物对营养(de)要求不尽相同,因而培养基(de)种类繁多.在这些培养基中,就营养物质而言,一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类.培养基(de)配制,一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育(de)需要,二是培养基在使用前不带菌,三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化.培养基(de)灭菌通常在培养基配制后进行,其目(de)是杀灭培养基中残存(de)微生物或活(de)生物残体,保证培养基在贮存过程中不变质,也防止其他生物对培养(de)污染.
一、实验目(de)
1．掌握实验室常用玻璃器皿(de)清洗、干燥和包扎方法.
2．明确培养基(de)配制原理.
3．掌握配制培养基(de)一般方法和步骤.
4．了解湿热和干热灭菌(de)原理,并掌握有关(de)操作技术.
二、实验原理
灭菌是指杀灭物体中所有微生物(de)繁殖体和芽孢(de)过程.消毒是指用物理、化学或生物(de)方法杀死病原微生物(de)过程.灭菌(de)原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性,从而达到灭菌(de)作用,实验室中最常用(de)就是干热灭菌和湿热灭菌.
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内(de)蛋白质凝固变性而达到灭菌(de)目(de).细胞内(de)蛋白质凝固性与其本身(de)含水量有关,在菌体受热时,当环境和细胞内含水量越大,则蛋白质凝固就越快,反之含水量越小,凝固缓慢.因此,与
实验七 培养基的配制和灭菌
二、基本原理
培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质， 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养物质， 用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、 用人工方法配制而成的营养基质。其中含有碳源、氮源、 无机盐、生长因子以及水分等。 无机盐、生长因子以及水分等。微生物在培养基上生长繁 殖还必须在最适酸碱度范围内才能表现它们最大生命力， 殖还必须在最适酸碱度范围内才能表现它们最大生命力， 因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH值范围。 pH值范围 因此不同种类的微生物应将培养基调到一定pH值范围。培 养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。 养基种类很多，不同的微生物所需培养基不同。按其组成 可分天然培养基、合成培养基、 合成培养基。 可分天然培养基、合成培养基、半合成培养基。按其物理 状态可分固体培养基、液体培养基和半固体培养基。 状态可分固体培养基、液体培养基和半固体培养基。按其 用途可分加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。 用途可分加富培养基、选择培养基、鉴别培养基。 培养基配制后还必须进行灭菌。 培养基配制后还必须进行灭菌。高压蒸汽灭菌法是在密 闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽， 闭的加压容器内进行，加热使器内的水产生蒸汽，由于密 增加了器内的压力，使水的沸点升高， 闭，增加了器内的压力，使水的沸点升高，从而获得高于 100度的蒸汽温度 度的蒸汽温度， 100度的蒸汽温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌 的目的。 的目的。
培养基的制备和灭菌
培养基的制备和灭菌
注意事项
1.原料称量中，快接近终点时，用左手轻轻拍
打右手手腕，将少量药品振落，以免过量；
2.成分中如含有磷酸盐和钙盐应分开溶解，否
则会产生沉淀； 3.待培养基冷却至室温时调节pH值。调节pH前 要先测一下培养基的原始pH，缓慢滴加碱液，
尽量避免回调；
4.在加热融化琼脂过程中要不断搅拌，以防琼
第4页，本讲稿共12页
培养基的制备和灭菌
实验步骤
原料称量
溶解
调节pH
（加
琼脂熔化） （过滤澄清） 分装
塞棉塞、包装
灭菌
第5页，本讲稿共12页
培养基的制备和灭菌
实验步骤之分装
固体试管斜面分装
固体培养基三角烧瓶的分装
第6页，本讲稿共12页
培养基的制备和灭菌
实验步骤
原料称量
溶解
调节pH （加
琼脂熔化） （过滤澄清） 分装
实验步骤
原料称量
溶解
调节pH
（加
琼脂熔化） （过滤澄清）
分装
塞棉塞、包装
灭菌
第3页，本讲稿共12页
培养基的制备和灭菌
实验步骤之溶解
一般情况下，几种药品可一起到入烧杯 内，先加少于计料体积的水进行加热溶 解，但如有磷酸盐和钙盐等混合在一起
时,易产生磷酸钙和磷酸镁沉淀，所以 要分别溶解。加热时要搅拌，完全溶解 后补足水分至计料体积。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告实验名称：培养基的配制与灭菌实验
实验目的：了解培养基的配制方法和灭菌技术，掌握实验操作
技能，培养实验室操作能力。
实验原理：
1. 培养基配制
培养基的配制是在一定比例下将各种营养成分混合组成的，包
括碳水化合物、胺基酸、氮源、矿物质等，以提供生长和繁殖细
菌所需的条件。
2. 灭菌
细菌培养需要具备无菌环境，因此必须对培养基进行灭菌处理。实验中常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌和紫外线灭菌。
实验器材和试剂：
1. 水浴锅
2. 培养瓶和试管
3. 称量硬度高的玻璃容器
4. 试剂：琼脂、提取物、蔗糖、酵母提取物、胆汁、NaCl，
实验步骤：
1. 培养基配制
按照比例将各种营养成分混合，加入含有一定含量的蔗糖和酵母提取物的琼脂，再加入一定量的胆汁和NaCl，配制成固体培养基。将琼脂和提取物等放入庞大的试管中；配合无水熔点管等研磨出来的溶液进行试管的分离悬胶操作，所得的琼脂可以冷藏保存。
2. 灭菌
将培养基装入培养瓶中，放入水浴锅中加热，使水温达到100℃左右，进行高压蒸汽灭菌。灭菌后将培养基放置在无菌环境中，
待其温度降至40℃左右，即可使用。
实验结果和分析：
实验结果表明，配制的培养基已可以暂存和使用，经过高温蒸
汽灭菌可以达到无菌效果。
实验结论：
本实验灭菌技术和培养基配制方法是现代微生物学实验检测的
基础，熟练掌握这些操作技能可以提高实验室操作能力，为实验
的顺利开展提供有力保障。
培养基的配制和灭菌-
实验目的
❖学习培养基配制的原理和基本步骤 ❖学习高压蒸汽灭菌的原理和方法
实验原理
三.实验步骤—培养基的配制
一、常用器皿的洗涤与包扎： ❖ 试管（塞）：10支 ❖ 三角瓶250mL（棉塞）：1个 ❖ 1ml吸管6支, 10ml吸管1支 ❖ 培养皿10个（一包） ❖ 制作涂布器2个：用酒精灯
将以上用品包扎后，灭菌。
三.实验步骤—培养基的配制
二．牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、
培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组）
配方：
❖ 营养肉汤
1.8g
❖ 琼脂
2g
❖ 固体培养基
2%(1.5-2.5%)
❖ 蒸馏水
100mL
三.实验步骤—培养基的配制
1. 斜面的制备
❖ 准确地称取营养肉汤1.8*2 g放入烧杯中。在上述烧杯中 先加入200 ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g 加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要 时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，
每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起 做）。加塞，包扎后，灭菌。
❖ 注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因 沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧 焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离 子进入培养基中，影响细菌生长。
三.实验步骤—培养基的配制
培养基的配制与灭菌技术
培养基的配制与灭菌技术
⼀、培养基的配制与灭菌技术
培养基是将微⽣物⽣长繁殖所需要的各种营养物质，⽤⼈⼯的⽅法配制⽽成的
⽤于培养微⽣物的营养基质。培养基种类很多，不同的微⽣物所需培养基不同。就
培养基中营养物质的来源可分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。按培养
基特殊⽤途可分加富培养基，选择培养基、鉴别培养基。按培养基制成后的物理状
态可分为固体培养基，液体培养基和半固体培养基。固体培养基是在液体培养基中
加⼊1.5 %-2.0 %琼脂作凝固剂; 半固体培养基则加⼊0.5 %-0.8 %的琼脂。
⼀般培养基除含有⼤量⽔分外, 还含有碳素、氮素、⽆机盐类和维⽣素等。此
外, 由于徽⽣物⽣长繁殖必须在最适的酸碱度范围内, 才能表现出最⼤的⽣命活
⼒, 因此应根据不同种类的徽⽣物. 将培养基调节到⼀定的pH值范围。
培养基配制后还必须进⾏灭菌, 灭菌是指杀死或消灭所有微⽣物, 包括营养
体、孢⼦和芽孢。灭菌的⽅法很多，可分为物理⽅法与化学⽅法两⼤类。物理⽅法
包括湿热灭菌、⼲热灭菌、紫外线灭菌、过滤除菌等; 化学⽅法主要是利⽤化学药
品对接种室空间、⽤具和其它物体表⾯进⾏灭菌与消毒。消毒⼀般是指消灭有害微
⽣物的营养体和病原菌。
(⼀) 培养基的配制⽅法
⼀般培养基的配制⽅法如下 (各种天然培养基的配制⽅法略有不同)：
l. 按照配⽅的组分及⽤量先分别称量并配成液体；
2. 根据要求调到⼀定的酸碱度(pH值)；
3. 若要制成固体则加⼊2%琼脂并加热融化；
4. 根据需要的数量分装⼊试管或三⾓瓶中, 加上棉塞或盖上纱布；
培养基的配制及灭菌
培养基的配制及灭菌
一．实验目的
1.三角瓶，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒等仪器的清洗。
2.三角瓶棉塞的制作，三角瓶，吸管，培养皿，试剂瓶，试管，枪尖盒的包装
与灭菌。
3.高温蒸汽灭菌原理的学习。
4.LB和MacConkey培养基的制作与灭菌。
二．实验原理
1.高温灭菌的原理：
由于培养基配置过程中并非是无菌操作，所以要通过立即灭菌来防止配制过程中混入的杂菌利用培养基中的营养物质进行繁殖从而破坏培养基的性能。
高压蒸汽灭菌是生物试验应用最广，效果最好的一种湿热灭菌法。在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。
注意：①使用高压蒸汽灭菌前一定要完全排除锅内空气，使锅内全部是水蒸气，灭菌才能彻底。否则在同一压力下，锅内实际温度和理想温度就会有差距，不能达到最好灭菌效果。②在使用灭菌锅前切勿忘记加水，水加至与三角搁架相平，以防灭菌锅烧干而引起炸裂事故。③使用完后要等到压力降为零再打开锅盖，否则会因为锅内外压力不平衡而导致棉塞蹦出造成污染，也容易伤害到操作者。
2.培养基的配置原理：
微生物的生长依赖于可利用的营养物质和适宜的生长环境。培养基是用于培养，转移，贮存微生物的固体，半固体或液体的营养物质。培养基中含有微生物所需的全部营养物质，包括碳源、氮源、能源、无机盐、水分和生长因子。适宜的pH对微生物的生长是必不可少的。
培养基的物理状态有三种：液体、半固体和固体。这些培养基的主要区别是在固体和半固体培养基里面加了固化剂------琼脂。当将琼脂加入溶液中时，在98℃能融化成有一定粘性的液体。并在42℃凝固。琼脂具有的特性有：不易被微生物降解；接近无色等。对于固体培养基需要加入琼脂量约为 1.4%~1.6%，半固体培养基加入约0.6%~0.8%。
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基配制：
1.选择合适的成分：根据实验需求选择合适的成分，常见的成分包括
碳源、氮源、无机盐、维生素和其他添加剂等。不同菌株具有不同的营养
需求，因此需要根据菌株的特点进行选择。
2.称量成分：准备好所需的成分，并根据实验方案的要求称量合适的量，注意遵循慎重、准确的原则。称量时要注意卫生和避免污染，避免手
直接接触培养基成分。
3.溶解和调节pH：将所需的成分加入适量的去离子水中，用磁力搅
拌器充分溶解。根据菌株的要求，调节培养基的pH值。常用的调节剂有
氢氧化钠（NaOH）和盐酸（HCl）。
4.加入琼脂糖：将配制好的液体培养基加热至沸腾并搅拌，然后加入
适量的琼脂糖，再次搅拌直至琼脂糖完全溶解。
5.分装和灭菌：将配制好的培养基分装到培养皿或试管中，然后灭菌。灭菌的注意事项：
1.选择合适的灭菌方法：常见的灭菌方法包括高压灭菌、滤液灭菌和
热灭菌等。选择合适的灭菌方法应基于培养基的成分和需求。
2.准备好实验室器具：在灭菌前，要确保实验室器具和操作台面都是
清洁的，并准备好所需的灭菌设备和物品，如高压锅、培养皿、试管和酒
精灯等。
3.严格操作：灭菌前要对培养基容器进行必要的清洁，如使用酒精进行消毒。然后将培养基装入容器中，并用适当的方法进行密封，如用铝箔纸包裹或用锡纸密封。
4.控制温度和时间：根据选择的灭菌方法和设备的要求，设置合适的温度和时间。灭菌时间一般为15-30分钟，不同的培养基和设备可能有所不同，需要根据实际情况进行调整。
5.检查培养基质量：灭菌后，打开培养基试管或培养皿的盖子，观察培养基是否有异常变化，如出现颜色变化、气泡或异味等。若有异常，应立即进行处理。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告
引言：
在微生物学研究中，培养基的配制和灭菌是非常重要的实验步骤。培养基是供养菌落生长和繁殖所必需的营养物质的混合物，而灭菌则是为了杀灭培养基中可能存在的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。本实验旨在探究不同培养基的配制方法以及灭菌的效果，并提供一种简单可行的实验方案。
一、培养基的配制
1. 培养基的种类
在微生物学实验中，常用的培养基有固体培养基和液体培养基两种。固体培养基主要用于菌落计数、分离纯种菌落以及观察微生物生长形态等实验，而液体培养基则适用于大规模培养、生物化学分析等实验。
2. 培养基的配方
培养基的配方根据不同微生物的需求而定，常见的培养基配方包括营养物、水和琼脂。营养物可以是有机物如蛋白胨、肉汤，也可以是无机盐如硝酸钠、磷酸氢二钾等。水的选择要注意纯净度，最好使用经过蒸馏或纯化的水。琼脂是一种提供凝胶状基质的物质，常用于制备固体培养基。
3. 培养基的制备步骤
（1）称取所需的营养物和琼脂，按照一定比例加入适量的水中。
（2）将容器密封，并在高压蒸汽灭菌器中进行高温高压灭菌，以杀灭培养基中的有害微生物。
（3）取出灭菌后的培养基，待其冷却至适宜生长温度后，即可使用。
二、灭菌实验
1. 灭菌的重要性
灭菌是为了消除培养基中的有害微生物，以保证实验结果的准确性和可靠性。
如果培养基未经灭菌处理，其中可能存在的细菌、真菌等微生物会与待测微生
物相互干扰，导致实验结果的偏差。
2. 灭菌方法
（1）高温高压灭菌：将培养基密封于容器中，放入高压蒸汽灭菌器中进行高温高压处理。高温高压可以有效杀灭细菌、真菌等微生物。
培养基的配制灭菌
6) 将取出的灭菌培养基放入37℃温箱培养24小时，经检
1) 每次使用前一定要检查水位，添加适量水。
查若无杂菌生长，即可待用。 1MPa(相当于15Ib/in2或1.
时间的长短可根据灭菌物品种类和数量的不同而有所变化，以达到彻底灭菌为准。
1MPa，121℃保持15～30分钟进行灭菌。
注意事项： 这种灭菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌，也可以用于玻璃器皿的灭菌。
高压蒸汽灭菌法
高压蒸汽灭菌法 是将物品放在高压蒸汽灭菌锅内0.1MPa， 121℃保持15～30分钟进行灭菌。时间的长短可根据灭菌物品 种类和数量的不同而有所变化，以达到彻底灭菌为准。这种灭 菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌，也可以用于玻 璃器皿的灭菌。
高压蒸汽灭菌的基本原理：将待灭菌的物品放在一个密闭 的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生 蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后 关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭 菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。最 终导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
3. 分装：将培养基分装到试管或三角瓶，试管内培养基 厚度为1-2cm，三角瓶培养基厚度为2-3cm，用纸把瓶口擦干 净，加上棉塞，外围用牛皮纸和棉线包扎。
4. 灭菌：置121℃高压蒸汽灭菌15分钟。 5. 培养酵母菌：待培养基冷却后，在培养基的 表面滴加1-2滴新鲜酵母液，放置1d待培养基表面干 燥后再接种果蝇。 6. 接种果蝇：拔出接种瓶、亲本瓶的棉塞，夹 在指缝中间，迅速将亲本瓶口倒扣在接种瓶上方，轻 拍亲本瓶让果蝇落入接种瓶中，此法仅适用于原种继 代培养。如要挑取处女蝇、不同品种杂交、子代性状 检查，需要先做麻醉处理，有选择性转入接种瓶。
实验-培养基的制备和灭菌
实验原理
培养基是一种人工配制的、适合微生物生 长繁殖或产生代谢产物用的混合养料。微 生物的种类不同，营养类型不同，对营养 的要求也就不同。
营养要求：碳源、氮源、无机盐、水分、 生长因子及微量元素等。
理化条件：适宜的酸碱度（pH值）、缓冲 能力和适宜的渗透压。
培养基的制备和灭菌
100mL/250ml瓶
生理盐水(0.85%)—— 5支（5 ml/支，需要精确计量）
Βιβλιοθήκη Baidu
包平板：7个
关于肉汤固体的配法
以一个实验台（四组）为单位，每组液 体培养基共200ml，由其中的一组加好琼 脂，并在电磁炉上进行融化，期间不停搅 拌，以免琼脂糊在锅底，待融化好后，分 给四个组进行斜面的分装。
而升高。当水在灭菌锅中煮沸，产生蒸汽驱逐 出锅内的空气后，随蒸汽的增加，锅内蒸汽压 力也随之升高，故而水的沸点也就随着上升， 从而获得高于100 ℃的温度，达到灭菌效果。 注：使用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌时，锅内的 冷空气必须排除。
培养基的制备和灭菌
高压蒸汽灭菌
因为当水蒸气中含有空气时，灭菌锅的压 力表表示的是两者压力的总和，水蒸汽的 压力还没有达到1 kg/cm2。我们通常是以 压力表的读数判断是否达到灭菌温度，所 以，因为水蒸汽的压力没有达到1 kg/cm2， 灭菌锅内的温度是低于121℃的，则灭菌 不彻底。
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基的配制与灭菌的注意事项
培养基是微生物学实验中必不可少的一种实验用品，它是用来培养微生物的营养物质基础。培养基的配制和灭菌是影响实验结果的重要因素，下面我们来详细了解一下。
一、培养基的配制
1.选择合适的培养基配方
不同的微生物需要不同的营养物质，因此在选择培养基配方时需要根据实验需要选择合适的培养基配方。
2.准确称量
在配制培养基时需要准确称量每种成分，以保证培养基的质量。
3.加热溶解
将配制好的培养基加入适量的蒸馏水中，加热溶解，使其均匀混合。
4.调节pH值
不同的微生物对pH值的要求不同，因此在配制培养基时需要根据实验需要调节pH值。
5.滤过灭菌
配制好的培养基需要进行滤过灭菌，以去除其中的微生物和杂质。
二、灭菌的注意事项
1.选择合适的灭菌方法
常用的灭菌方法有高压灭菌、干热灭菌、紫外线灭菌和滤过灭菌等。在选择灭菌方法时需要根据实验需要选择合适的灭菌方法。
2.控制灭菌时间和温度
不同的灭菌方法需要不同的时间和温度，因此在灭菌时需要控制好灭菌时间和温度，以保证灭菌效果。
3.注意灭菌器的清洁和维护
灭菌器需要定期清洁和维护，以保证其正常工作和灭菌效果。
4.注意灭菌后的保存
灭菌后的培养基需要保存在干燥、阴凉、避光的地方，以保证其质量。
培养基的配制和灭菌是微生物学实验中非常重要的环节，需要严格按照操作规程进行操作，以保证实验结果的准确性和可靠性。
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培养基的制备与灭菌
一、目的要求
1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2.掌握培养基的配置原则和方法。
3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理
牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料
1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤
（一）玻璃器皿的洗涤和包装
1．玻璃器皿的洗涤
玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装
（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。
先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
（二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制
（1）称量（假定配制1000ml培养基）
按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。
（2）溶化
在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上
加热使其溶解，将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积（1000ml）；如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放人已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。
（3）调pH
调pH：一般用pH试纸测定培养基的pH。用剪刀剪出一小段pH试纸，然后用镊子夹取此段pH试纸，在培养基中蘸一下，观看其pH范围，如培养基偏酸或偏碱时，可用1mol/L NaoH或1mol/L HCl溶液进行调节。调节pH时，应逐滴加入NaOH或HCI溶液，防止局部过酸或过碱，破坏培养基中成分。边加边搅拌，并不时用pH试纸测试，直至pH达7.4-7.6。反之，用1mol／LHCl进行调节。
2．固体培养基的配制
配制固体培养基时，应将已配好的液体培养基加热煮沸，再将称好的琼脂(1.5~2％)加入，并用玻棒不断搅拌，以免糊底烧焦。继续加热至琼脂全部融化，最后补足因蒸发而失去水分。
（三）培养基的分装
根据不同需要，可将已配好培养基分装入试管或三角瓶内，分装时注意不要使培养基沾污管口或瓶口，造成污染。如操作不小心，培养基沾污管口或瓶口时，可用镊子夹一小块脱脂棉，擦去管口或瓶口的培养基，并将脱脂棉弃去。
1．试管的分装
取一个玻璃漏斗，装在铁架上，漏斗下连一根橡皮管，橡皮管下端再与另一玻璃管相接，橡皮管的中部加一弹簧夹。分装时，用左手拿住空试管中部，并将漏斗下的玻璃管嘴插入试管内，以右手拇指及食指开放弹簧夹，中指及无名指夹佐玻璃管嘴，使培养基直接流入试管内。装入试管培养基的量视试管大小及需要而定，若所用试管大小为15×150 mm时，液体培养基可分装至试管高度1／4左有为宜；如分装固体或半固体培养基时，在琼脂完全融化后，应趁热分装于试管中。用于制作斜面的固体培养基的分装量为管高1／5(约3—4mI)，半固体培养基分装量为管高的1／3为宜。
2．三角瓶的分装
用于振荡培养微生物时，可在250 m1
三角瓶中加入50 m1的液体培养基；若用于制作平板培养基用时，可在250 m1三角瓶中加入150ml培养基，然后再加入3g琼脂图8-2培养基的分装粉(按2％计算)，灭菌时瓶中琼脂粉同时被融化。
（四）棉塞的制作及试管、三角瓶的包扎
为了培养好气性微生物，需提供优良通气条件，同时为防止杂菌污染，则必须对通入试管或三角瓶内空气预先进行过滤除菌。通常方法是在试管及三角瓶口加上棉花塞等。1．试管棉塞的制作
制棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的团孔上，用右手食指将棉花从中央压入团孔中制成棉塞．然后直接压入试管或三角瓶口。也可借用玻璃棒塞入，也可用折叠卷塞法制作棉塞。
制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙侵入，棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，试管不下落为准。棉塞的2／3在试管内，1／3在试管外。目前也有采用硅胶塞代替棉塞直接盖在试管口上。
将装好培养基并塞好棉塞或硅胶塞的试管捆成一捆，外面包上一层牛皮纸。用记号笔注明培养基名称及配制日期，灭菌待用。
2．三角瓶棉塞制作
通常在棉塞外包上一层纱布，再塞在瓶口上。有时为了进行液体振荡培养加大通气量，则可用8层纱布代替棉塞包在瓶口上，目前也有采用硅胶塞直接盖在瓶口上。