实验8 苯酚生物降解菌的筛选
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析一、前言苯酚是一种常见的有机化合物，广泛应用于各种工业领域中，但长期的排放和使用会对环境产生严重的污染。
因此，开发一种高效的苯酚降解菌对于环境保护至关重要。
本研究旨在筛选一株好氧反硝化苯酚降解菌，并对其降解特性进行分析。
二、材料与方法2.1 筛选苯酚菌本实验采用活性污泥为菌源，经过序列分离筛选获得苯酚降解菌。
分离后的菌株进行纯化后，经过16S rDNA序列比对确定其菌种。
2.2 生长条件的优化在不同的培养基和培养条件下，探究苯酚降解菌的最适生长条件，并确定其最适浓度和最适pH值等。
2.3 苯酚降解试验将苯酚降解菌接入含有苯酚的培养基中，分别在不同时间段内收集样品，使用高效液相色谱（HPLC）检测降解产物。
2.4 剖析苯酚降解代谢途径通过GC-MS分析降解菌代谢苯酚的代谢产物，分析苯酚降解代谢途径。
三、结果分析经过序列分析和比对，鉴定出本次筛选获得的菌株为一株好氧反硝化菌，归属于福克斯氏菌属。
本次实验结果显示，最适生长温度为30℃，最适pH值为7.5，最适浓度为250mg/L。
本次实验结果显示，在48小时内，苯酚的降解率可达到85%，降解产物主要为苯酚羟基化物。
GC-MS分析结果显示，菌株代谢苯酚主要通过羟基化、甲基化、环化等途径进行，其中苯酚加氧羟基化产物的比例最高。
四、结论本研究成功筛选出一株好氧反硝化苯酚降解菌，其最适生长条件为30℃，pH值为7.5，浓度为250mg/L。
在48小时内，苯酚降解率达到了85%，代谢途径主要为羟基化、甲基化、环化等。
本研究的结果对于苯酚的治理与处理具有重要的实践意义。
苯酚降解细菌实验报告
苯酚降解细菌实验报告引言苯酚是一种有机溶剂和消毒剂，在工业生产和日常生活中广泛使用。
然而，由于其具有较强的毒性和对环境的潜在危害，苯酚的降解成为了一个重要的研究领域。
本实验旨在从自然环境中分离得到能够降解苯酚的细菌，并对其降解效果进行评估。
实验方法物质及设备- 实验材料：含有苯酚的培养基、蒸馏水、苯酚溶液- 实验仪器：培养皿、移液管、恒温振荡器、烧杯、离心机实验步骤1. 从自然环境中采集土壤、水样品。
2. 将土壤、水样品分别加入含有苯酚的培养基中。
3. 分别在不同温度下（比如25、37）进行恒温振荡培养，培养时间根据实验需求确定。
4. 取样品进行稀释，并分别接种在含有苯酚的琼脂培养基上。
5. 利用平板计数法，计算出细菌的菌落数目。
6. 采用高效液相色谱法检测苯酚的含量。
7. 进一步筛选表现出较强降解能力的细菌，进行进一步鉴定。
实验结果细菌菌落数目在实验过程中，我们成功分离到了一株对苯酚具有较强降解能力的细菌。
经过平板计数法的计算，其细菌菌落数目为1.2x10^6 CFU/ml。
苯酚的降解效果我们利用高效液相色谱法对苯酚的降解情况进行了检测。
实验结果表明，在细菌作用下，苯酚的降解速率较快。
在48小时内，苯酚的浓度从初始浓度的100 mg/L 降至5 mg/L，降解率达到了95%以上。
数据分析与讨论细菌的降解机制细菌通过代谢苯酚的酶系将苯酚降解为无机化合物，并利用其作为碳源和能源。
该细菌可能通过以下途径降解苯酚：1. 将苯酚通过羟化作用转化为苯酚羟化物；2. 苯酚羟化物经进一步代谢，生成苯甲酸、邻苯酚等化合物；3. 经过一系列代谢反应，最终生成无机化合物，如水和二氧化碳。
细菌的应用前景本实验分离得到的对苯酚具有降解能力的细菌，拥有较高的降解效率和广泛的适应性。
这些细菌可应用于苯酚的处理和环境修复，对于解决苯酚污染问题具有良好的应用前景。
结论通过本次实验，我们成功地分离出具有苯酚降解能力的细菌，并对其降解效果进行了评估。
苯酚降解菌的筛选及降解性能研究
苯酚降解菌的筛选及降解性能研究王启明;彭仁;陈文静;杜芸芸;杨贵娟;简敏菲【期刊名称】《江西师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2012(036)003【摘要】从腐烂的树木枯枝和污染的淤泥中分离出苯酚的高效降解菌.通过对它们的形态和16S rDNA分析,筛选到的新菌株分别命名为Acinetobactersp.SD1,Pseudomonas sp.SD2和Rhodococcussp.SD3.在筛选到的3株菌中,Rhodococcus sp.SD3的苯酚降解性能最好,该菌株在72 h内几乎能将浓度为1.0 g/L的苯酚完全降解.%Phenol-degrading microbes were isolated from rotting wood and polluted sludge. These strains were identi-fied as Acinetobacter sp. SD1, Pseudomonas sp. SD2 and Rhodococcus sp. SD3 according to their morphological feature and 16S rDNA sequence, respectively.The phenol-degrading performance of Rhodococcus sp. SD3 strain was best among three strains, which almost completely degraded 1.0 g/L phenol in 72 hours.【总页数】4页(P317-320)【作者】王启明;彭仁;陈文静;杜芸芸;杨贵娟;简敏菲【作者单位】江西师范大学生命科学学院,江西南昌330022;江西师范大学生命科学学院,江西南昌330022;江西师范大学生命科学学院,江西南昌330022;江西师范大学生命科学学院,江西南昌330022;江西师范大学生命科学学院,江西南昌330022;江西师范大学生命科学学院,江西南昌330022【正文语种】中文【中图分类】X172【相关文献】1.高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究 [J], 赵宇虹;王月;兰莹;张跃华;赵坤宇2.苯酚降解菌的筛选及其降解性能研究 [J], 张雯;苏静静;曹丽琴3.沙雷氏苯酚降解菌固定化条件优化及降解性能研究 [J], 王春荣;高振凤;王建兵;程芳琳;常莎4.一株苯酚降解菌的筛选及其降解性能研究 [J], 付玲玲5.一株高效苯酚降解菌的筛选及降解性能考查 [J], 石瑞文;哈妮;郭楠;张晓琴;关海滨因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
降解菌的筛选
降解菌的筛选
降解菌的筛选过程包括以下步骤：
1.采集具有代表性的土壤样品。
选择具有代表性的若干采样点，使用铲子或样品采集器采集土壤样品。
注意避免受到污染，避免接触有机物、农药等潜在干扰物。
将采集到的土壤样品倒入干净的塑料袋或容器中，并将多个采样点的样品混合均匀，以获得代表性的复合土壤样品。
对于大面积的稻田，可能需要采集多个复合样品。
2.将采集的土壤样品进行富集培养。
例如，在富集培养基配方中，添加活性污泥，于30℃、150rpm振荡培养，直到颜色变浅后，将菌液转接入新鲜培养基中。
重复这一过程3次-4次，得到能够使溴氨酸脱色的菌群。
3.进行平板分离。
将菌液稀释，分别取0.1mL菌液于平板中，用涂棒涂布均匀。
静置几分钟后，将平板倒置于30℃的培养箱中培养。
4.进行好氧培养。
将无菌操作台的紫外灯打开，灭菌20min后，用接种环从已脱色平板中挑若干单菌分别放入不同三角瓶中，用棉塞封口。
于30℃、150rpm 振荡培养。
苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究
上海师范大学硕士学位论文苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究姓名：何小丽申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：肖明20090501上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究学校专业：微生物学学位申请人：何小丽指导教师：肖明摘要酚类化合物为细胞原浆毒物，属高毒性物质。
这类物质来源广泛，通常污染水源，毒死鱼虾，危害农作物，并严重威胁人类的健康。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数的微生物分解。
从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种，有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术，能够快速提供大量具有特殊作用的微生物，在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。
1、本研究从胜利油田河口采油厂的飞雁滩油田土壤样品中分离得到10株能够利用并降解苯酚的菌株P1-P4、P7、P9-P13。
该10株苯酚降解菌能够在以苯酚为唯一碳源和能源的培养基上生长，经16S rDNA分子鉴定和生理生化检测，该10株降酚菌分别被鉴定到属或种。
其中降酚菌株P1、P3和P4这3株菌株分别属于劳尔氏菌属(Ralstonia)、贪噬菌属（Variovorax）和节杆菌属（Arthrobacter）里的种。
其它7株降酚菌株P2、P7、P9-P13都属于假单胞菌属（Pseudomonas）里的种。
这4个属里的细菌在国内外都已被报道有降解苯酚的特性，其中有关假单胞菌降解环境有机物的报道较多。
2、培养液中的苯酚含量通过4-氨基安替比啉分光光度法测定，通过苯酚降解效率的比较，菌株P2降解苯酚的能力较其它9株菌株要强。
于是将菌株P2作为本研究中进一步研究的对象，研究了不同的环境条件下该菌株降解苯酚和菌体生长的情况。
3、通过苯酚羟化酶特异性引物的设计，从菌株P2扩增出苯酚羟化酶大亚基基因，该基因片段编码对苯酚有催化活性的多肽，催化苯酚代谢的第一步反应；表明菌株P2能降解苯酚是由于细胞具有降解苯酚的遗传基础。
苯酚降解菌的筛选及动力学初步研究
＊联系人 E -mail :jiangs t @收稿日期:2002-09-12,修回日期:2002-11-26苯酚降解菌的筛选及其降解特性的初步研究潘利华 姜绍通＊ 刘鹏达 李慧星(合肥工业大学生物与食品工程学院 合肥 230009)摘要:从某印染厂下水道的污泥中分离到一株能高效降解苯酚的菌株ph 16,经初步鉴定为微球菌属(Micro coccu s sp .)。
该菌株最高可耐受1.5g L 左右的苯酚,对苯酚降解最适条件为p H 7.0,温度35℃,苯酚浓度为1.0g L ,时间为36h ,降解率可达99.6%。
试验还表明Hg +、Co 2+、Ag 2+等重金属离子对该菌株降解苯酚能力有不同程度的抑制作用。
并对其降解动力学作了初步探讨。
关键词:苯酚,生物降解,微球菌属中图分类号:Q93 文献标识码:A 文章编号:0253-2654(2003)05-0078-04SCREENING AND CHARACT ERIZATION OF A PHENOL -DEGRADING BACTERIUMPAN Li -Hua JIANG Shao -Tong LIU Peng -Da LI Hui -Xing(Co lleg e o f Bio tech no lo gy a nd Fo o d En gin eer ing ,Hefei Uni vers ity o f T echn ol og y ,Hefei 230009)Abstract :A s train ph 16,th at cou ld effectivel y degrad e phen ol ,was is olated from se wer s lud ge of prin ting and dyeing p lant .The p reliminary id entification su ggested that the strain belongs to Micr o co ccu s s p .Th e strain cou ld res ist to p henol u p to 1.5g L .The efficient biodegrad ation of p henol occu rred when t he s train was cul tured in th e mediu m (p H 7.0)contain ing 1.0g L p henol u nd er 35℃,wh ere the high es t d egradation rate reac h 99.6%after 36h ours .Th is s train ,when treated wi th s ome h eavy metal i on s such as Hg +、Co 2+and Ag 2+,sh owed th e s ign ifican t inh ibition of p henol d egradation by 74.2%～100%.The k inetics of p hen ol d egradation durin g cu lture of th e s train was also explored .K ey words :Ph en ol ,Biodegrad ation ,Mi cr oc o ccus sp .苯酚是重要的化工原料,被广泛应用于酚醛树脂、杀虫剂、染料、农药和医药的生产中。
苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件分析研究
苯酚降解菌的富集筛选及其降解条件研究摘要：［目的］从炼油厂的活性污泥中分离高效苯酚降解菌，对其进行形态学鉴定，并研究其特性，为含酚废水的处理及环保工程菌株构建奠定基础，具有一定的理论和实际应用价值。
［方法］从南京金陵石化炼油厂的活性污泥中筛选、驯化得到1 株高效苯酚降解菌株P4。
通过形态学对其进行鉴定。
最后，对P4的苯酚降解特性进行研究。
［结果］P4为革兰氏阴性球菌，最适降解苯酚的温度为28℃，最适pH 为5.5。
36h 内对300mg/L的无机培养液苯酚降解率达到56.6%。
［结论］P4 具有较强的适应能力和苯酚降解能力，可用于高浓度含酚废水的生物处理，有较高的研究及应用前景。
关键词:苯酚降解菌。
筛选。
驯化。
最佳降解条件苯酚是有机合成的重要原料，是造纸、炼焦、炼油、塑料、农药和医药合成等行业生产的原料或中间体[1]，大量用于制造酚醛树脂以及其他高分子材料、药物、燃料和炸药等。
随着树脂、化工和高分子材料等企业对苯酚需求量的日益增加，各企业所排放的含苯酚废水量也日益增加[2]。
由于苯酚是一种原型质毒物，具有很强的毒性，对生态环境和人体健康构成巨大威胁[3, 4]。
在许多国家，苯酚已被环保部门列入优先控制污染物的黑名单之中[5, 6]。
结合国标GB8978-1996的实施，有关工作人员将每升1000毫克以上的含酚废水进行回收处理；每升1000毫克以下的含酚废水浓缩后回收处理；每升300毫克以下的含酚废水才允许采用某种方法清除废水中苯酚，处理达标后排放。
清除工业废水中苯酚的方法主要分为三大类：物理处理方法、高级氧化处理技术、生物治理方法。
常用的物理处理方法包括吸附法、溶剂萃取法、膜萃取技术和膜蒸馏技术等；常用的高级氧化处理技术包括湿式催化氧化技术、光催化氧化技术和电催化氧化技术等；常用的生物治理方法包括活性污泥法、酶处理技术和固定化微生物技术等[7]。
其中利用微生物降解苯酚不仅处理效率高、二次污染少，而且成本低廉、简单方便，因此生物降解法成为经济效益和环境效益俱佳的苯酚清除方法[8]。
一株苯酚降解菌株的筛选鉴定及特性研究
收稿日期：2018-04-25基金项目：山西省高等学校大学生创新创业训练计划项目（2017105）作者简介：任瑞凡（1997—），女，山西河津人，在读本科生，主要从事生物技术研究。
通讯作者简介:吕建华(1977—)，女，山西祁县人，讲师，博士，主要从事环境微生物修复研究。
一株苯酚降解菌株的筛选鉴定及特性研究任瑞凡,刘永阳,曲文浩,孔令腾,李潇潇,薛智权,吕建华（山西农业大学生命科学学院,山西太谷030801）摘要：为了从焦化废水活性污泥中筛选出高效降酚的细菌，以对废水中苯酚进行生物处理。
以苯酚为唯一碳源，从太谷县某焦化厂活性污泥中筛选苯酚降解菌，同时通过Plackett-Burman 试验设计，结合正交试验分析，确定该菌株降解苯酚的最佳条件，通过酶活性测定推测菌株降解途径。
结果从活性污泥中分离得到1株苯酚降解菌株B10，经分析16S rDNA 序列和构建系统进化树，初步鉴定该菌株为芽孢杆菌属细菌。
通过利用Plackett-Burman 试验设计，结合正交试验分析，确定该菌株降解苯酚的最佳条件为：酵母膏10g ·L -1，乙醇4g ·L -1，初始接菌量2.5%，培养温度30℃，硫酸镁1g ·L -1。
当以苯酚为唯一碳源时，菌株B10中仅有邻苯二酚1,2-双加氧酶活性被检测到，因此推测，该菌株通过邻位途径降解苯酚。
结果表明，B10菌具有降解苯酚能力，对于治理含酚废水具有应用潜力。
关键词：苯酚；芽孢杆菌属B10；Plackett-Burman 试验设计；邻苯二酚1,2-双加氧酶活性中图分类号:X172文献标识码:ADOI 编码:10.3969/j.issn.1006－6500.2018.11.004Study on Screening,Identification and Characterization of A Phenol-degrading Bacterium Strain REN Ruifan,LIU Yongyang,QU Wenhao,KONG Lingteng,LI Xiaoxiao,XUE Zhiquan,LYU Jianhua(College of Life Science ,Shanxi Agricultural University ,Taigu,Shanxi 030801,China)Abstract :The purpose of this paper is to screen highly effective phenol -degrading bacteria from the activated sludge of coking wastewater for the treatment of phenol in wastewater.The paper took phenol as the sole carbon source,by utilizing phenol as sole car ⁃bon source,screening phenol -degrading bacteria from the active sludge of coking plant in Taigu county of Shanxi province,at the same time,the optimum conditions for degradation of phenol were determined by Plackett-Burman experimental design and orthogonal test analysis,and the degradation pathway of the strain was determined by enzyme activity detection.The results showed that a phe ⁃nol-degrading bacterium strain B10was isolated from the active sludge.Based on the analysis of the 16S rDNA sequence and the construction of the phylogenetic tree,the strain was identified as Bacillus .Utilizing the Plackett-Burman design,together with orthog ⁃onal test analysis,it was confirmed that the optimum degradation conditions of the strain were yeast extract 10g ·L -1,ethanol 4g ·L -1,inoculation volume 2.5%,temperature 30℃,magnesium sulphate 1g ·L -1.When phenol was the only carbon source,only catechol 1,2-dioxygenase activity in strain B10was detected.Therefore,it was speculated that the strain might metabolize phenol via ortho -cleavage pathway.The results showed that B10could degrade phenol and had potential application in the treatment of phenolic wastewater.Key words :phenol;Bacillus sp.B10;Plackett-Burman;catechol 1,2-dioxygenase activity天津农业科学Tianjin Agricultural Sciences 圆园18,24(11):11-16,50苯酚及其衍生物是各种有机化合物的基本结构单元，作为原料已被广泛应用于石油化工、医药、印染、造纸等行业，其工业废水成为含酚废水的主要来源[1-3]。
苯酚降解菌的筛选及其降解特性初探
Ｖ１７ 。 ｏ２ Ｎ． ． ４
Ａ ｇ２ １ ｕ．０ １
苯 酚 降解 菌 的 筛 选 及 其 降解 特 性 初 探
周倩倩 ， 丁 丛 ， 志平 ， 王 蔡伟 民
（ 上海交通大学 环境科 学与工程学 院 ， 上海 ２ ０４ ） ０ ２ ０
摘
要： 为深入 了解好氧颗粒污泥降解苯酚的 内在机 制 ， 用苯酚选择性培养基从 颗粒污泥 中筛选出 采
关键词 ： 生物 降解 ； 热带假 丝酵母 ； 苯酚 ； 降解特性
中图分 类号 ： １２ Ｘ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ：６２— ９ ６ ２ １ ）４— ５４— ６ １７ ０ ４ （０ １ ０ ０ ４ ０
பைடு நூலகம்
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｏ ｅ ｏ － ｅ ｒ ｄｉ ｇ ｓｒ ｉ ｎ ｒ ｌ ｉ ｒ ｓ ｌ ｔｏ ｆｐｈ ｎ ｌｄ ｇ ａ ｎ ｔ ａ ｎ ａ ｄ ｐ ｅｉ ｎａ ｙ ｍ
第２卷 第４ ７ 期
２ １ 年８月 ０ １
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 （自然科 学版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨ ｒ ｉ ｎｖｒｉ ｆ ｏ ｏ ｒ ａ ｏ ａ ｂｎ Ｕ ｉｅｓ ｙｏ ｍｍｅｃ Ｎａｕ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ｄｔ ｎ ｔ Ｃ ｒｅ（ ｔｒｌ ｃ ｃｓＥ ｉｏ ） ｅ ｉ
苯酚降解菌筛选及降解特性研究
（ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆＥ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ １ １ ０ ０ ３ ６降解特性研 究
李鲜珠 ， 沈玉冰 ， 马溪平 ， 王 闻烨 ， 李万龙 ， 张宏亮 ， 徐成斌
（ 辽 宁大学环境学院 ， 辽宁 沈阳 １ １ ０ ０ ３ ６ ）
摘要 ： 针 对 焦化废 水 生物难 降 解有机 物含 量 高、 实 际生产过 程 中的 水质 和 水 量 变化 大的 特 点 ， 开展 了高效 菌株 处理含 酚 废水 的试 验研 究 。从 某焦化 厂水 处理 车 间生物 处理装 置 曝 气池活性 污泥 中驯
化、 分 离和 筛选得 到 ４株 以苯 酚为唯 一碳 源的 高效降解 茵 ， 并对 其进行 鉴 定及 降解特 性研 究。结 果
表 明： 初 步鉴 定 ｈ ３ ２ ａ ２ 、 ｂ ３ １ Ｂ 、 ｈ ３ １ Ａ和 ｂ ４ １ ａ为假 单胞 菌属 （ Ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ ｍ ｏ ｎ ａ ￥ ｓ ｐ ． ） ； 通过 溴化 容 量 法测 定 苯酚含 量 ， 确定 了菌株 的最佳 降解条件为 ： 温度 ３ ２ ｏ Ｃ， ｐ Ｈ值 ７ ． ５ ， 培养 时间 １ ６ ｈ ， 接种 密度 １ ％， 且 单一
ｄ ｏ ｍｅ ｓ ｔ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｅ ｄ ｓ ｌ ｕ ｄ ｇ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ａ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ａ ｎ ｋ。ａ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｖ ｉ ｃ ｅ ，ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗａ ｔ ｅ ｒ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｎ ａ ｃ ｏ ｋ ｉ ｎ ｇ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｙ ．Ｔ ｈ ｏ ｓ ｅ ｆ ｏ ｕ ｒ ｈ ｉ ｇ ｈ ｌ ｙ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｇ ｒ ａ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｉ ｒ ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌,初步确定为假单胞菌属(Pseudomonas);该菌株能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长;可以在20～40 ℃、pH值5.0～9.0范围内较好生长;降解苯酚最适温度为35℃,最适pH值为7.0,最大降解率达到89%.完全降解无机盐培养基中500mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L的苯酚分别需要60h、72h、108h.
作者：刘广金张袖丽作者单位：安徽农业大学应用化学系,安徽合肥,230036 刊名：现代农业科技英文刊名：XIANDAI NONGYE KEJI 年，卷(期)：2007 ""(11) 分类号：X7 关键词：苯酚生物降解假单胞菌属。
苯酚高效降解菌的筛选鉴定及其降酚特性研究
Ｓｃ ｅ ｎ ｎｇ，ｄ ｎｔｆｃ ｔｏ ｎｄ ｄ ｇｒ ｄ ｎｇ ｃ ｒ ｃ ｅ ｉｔｃ ｒｅ ｉ ｉ ｅ ｉｉａ ｉ ｎ ａ ｅ ａ ｉ ｈａ ａ ｔ ｒｓ ｉｓ
ｏ ｉ ｈ ｐ ｅ ｏ — ｅ ｒ ｄ ｎ ａ ｔ ｒａ ｔ ａｎ ｆａ ｈ ｇ ｈ ｎ ｌｄ ｇ ａ ｉ ｇ ｂ ｃ ｅ ｉｌｓ ｒ ｉ
Ｂａ ｉｌ ｓｓ ｈ ｅ ｉｕ ． ｅｏ ｔｍａ ｅ ｐ ｒ ｔ ｒ ｆｐ ｅ ｏ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ｓ３ ℃ 。 ｎ ｈ ｐ ｉ ｌｐ ｖ ｌ ｅ ｃｌｕ ｐ ａ ｒｃ ｓ Ｔｈ ｐ ｉ ｌｔｍ ｅ ａ ｕ ｅ ｏ ｈ ｎ ｌｄ ｇ ａ ａ ｉｎ ｗａ ５ ａ ｄ ｔ ｅｏ ｔｍａ Ｈ ａｕ
降酚能力与接种量成正相关． 在最适条件下 ， 当接种量为 ２ 时 ， 株 Ｊ Ｍ－— 菌 Ｄ ２１能在 ４ ２ｈ内将 ８ ０ｍｇ Ｌ的苯酚完 ０ ／
全降解 ， 且对浓度 为 １６０ｍｇ Ｌ的苯酚有一定 的降解能力． ０ ／ 关键词 ： 球形芽孢 杆菌 ； 酚； 苯 降解 ；６ Ｄ １Ｓｒ ＮＡ 中图分类号 ： ０ ． Ｘ ７３１ 文献标 志码 ： Ａ 文章编号 ： ０ ３４ １ （０ ２ ０ —１ ９０ １ ０—３ ５ ２ １ ） ３０ ４ —６
２１ ０ ２年 ６月
甘
肃
农
业
大
学
学
报
第 ３期 １９ ＡＧＲＩ Ｕ ＣＵＬＴＵＲＡＬ ＵＮＩ ＲＳ ，Ｙ ＶＥ Ｉ ｒ
第 ４７卷 双 月 刊
苯 酚 高 效 降解 菌 的筛 选 鉴 定 及 其 降 酚 特性 研 究
王 永 义 高 新 成 潘 中耀 马 陶武。 ， ， ，
ｗａ ． ． ｅｐ ｅ ｏ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ｂ ｌ ｙ ｏ ＤＭ －— ｓｃ ｒｅａ ｅ ｏ ｉ ｖ ｌ ｏ ｉｏ ｕ ａｉ ｍｏ ｎ ． ｄ ｒ ｓ５ ０ Ｔｈ ｈ ｎ ｌｄ ｇ ａ ａｉｎ ａ ｉ ｔ ｆ ｉ Ｊ ２ １ｗａ ｏ ｒ ｌｔｄ ｐ ｓｔ ｅｙ ｔ ｎ ｃ ｌｔ ａ ｕ ｔ Ｕｎ ｅ ｉ ｎ
苯酚降解菌的筛选与鉴定
苯酚降解菌的筛选与鉴定
王太平
【期刊名称】《河南科技学院学报（自然科学版）》
【年(卷),期】2011(039)001
【摘要】从某焦化厂排水沟采集到污泥,通过以苯酚为惟一碳源的培养基逐步驯化,筛选出苯酚高效降解菌株.利用形态观察、生理生化枪测、16S rDNA序列分析进行初步鉴定.结果筛选获得1株高效降解苯酚的球形芽孢杆菌HNND-3.HNND-3能够以苯酚为惟一碳源,耐酚能力高达2 200 mg/L,在30℃和pH 7.0条件下,42 h 内能将800 mg/L的苯酚彻底降解.
【总页数】5页(P43-46,55)
【作者】王太平
【作者单位】河南省驻马店农业学校,河南,驻马店,463000
【正文语种】中文
【中图分类】X172
【相关文献】
1.一株对硝基苯酚降解菌的筛选鉴定及其降解特性 [J], 张清;温玉娟;任何军;王显
胜
2.苯酚降解菌AF1的筛选、鉴定及对含酚废水的降解 [J], 金显春;陈刚;徐翠莲
3.一株苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性 [J], 刘鸿杰;何熙璞;张敏;梁锦添;陈加辉;李俊芳;陈保善
4.一株苯酚降解菌的筛选、鉴定及相关降解特性 [J], 陈禹竹; 唐琦勇; 顾美英; 朱静;
刘晓静; 崔卫东; 张志东
5.苯酚降解菌的筛选鉴定和降酚特性 [J], 陈少云
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苯酚降解菌株的筛选及菌株特性研究
第35卷第1期2021年1月天津化工Tianjin Chemical IndustryVol.35No.1Jan.2021苯酚降解菌株的筛选及菌株特性研究许宁,马勤清（天津长芦集团有+公司，天津300450）摘要：酚类化合物是一种难以降解的有机污染物,具有较高的生物毒性,环境危害极大。
本文进行了苯酚高效降解菌的分离筛选工作，并对苯酚降解菌株特性进行了研究。
结果表明：从焦化厂曝气池活性污泥中分离得到的3个菌株XL1、XL2、XL3对苯酚均有降解利用的能力，其中以XL1降解能力最强，经过90h的培养，苯酚去除率为91.7%。
菌株XL1为革兰氏阴性杆菌，好氧，最适生长pH值为中性微酸，最适温度范围为25~30!。
关键词：苯酚;降解菌；筛选doi:10.3969/j.issn.1008-1267.2021.01.009中图分类号：X952；TQ09文献标志码:A文章编号：1008-1267（2021）01-0024-03Screening of phenol-degrading strain and research on its charactersXU Ning,MA Qin-qing(Tianjin ChangluHaijing Group CO.LTD.,Tianjin300450#Abstract:Phenolic compound is a kind of organic pollutant that is difficult to degrade,and it has high biological toxicity and great environmental harm.In this paper,the separation and screening of efficient phenol degrading bacteria was carried out,and the characteristics of phenol degrading strains were studied.The results show that all the three strains XL1,XL2,and XL3isolated from the activated sludge in the aeration tank of the coking plant have the ability to degrade and utilize phenol.Among them,XL1has the strongest degradability.After90hours of cultivation,the phenol removal rate reached91.7%.XL1is a kind of aerobic Gram-negative bacilli,and the optimum growth pH is neutral or slightly acid,and the optimum temperature range is25〜30!.Keywords:phenol;degrading bacteria;Screening本文从焦化厂采集活性污泥，进行了含酚废水高效降解菌的分离筛选工作，并对苯酚降解菌株特性进行了研究，为进一步实现含酚废水的生化法无害化处理提供菌种资源。
苯酚生物降解菌的筛选
Screening of phenol biodegrading bacteria
实验目的 实验基本原理
实验用品 方法步骤 实验结果及分析
注意事项
实验目的
1·掌握微生物分离纯 化的基本操作 2·掌握用选择性培养 基从土壤中分离苯酚 生物降解菌的原理和 方法
基本原理
苯酚是芳香烃化合物。苯酚是常用的消毒剂，能 意志柠檬酸循环。但在部分细菌中存在芳香烃的降解 质粒，将其降解为三羧酸循环的原料或中间产物。
在苯酚浓度梯度培养基平板高含药区上分离出的 菌落，对苯酚具有较好的耐受性，可能具有分解酚菌 的能力；然后将其在以苯酚为唯一碳源的培养基里进 行摇床培养，淘汰掉不能利用苯酚的菌株，可筛选到 苯酚降解菌；再用不同浓度的苯酚药物培养基分离，
可筛选出耐受能力好，降解程度高的苯酚降解菌。
实验用品
材料 实验土样采自校园肥沃土
4
5
注意事项
各种培养基的配制 应严格按配方的要
A B
涂布梯度平板 的菌悬液只作 适度稀释，菌
C
涂布平板的菌
悬液不要过多
或过少，0.2mL 为宜
求完成，尤其是苯 酚的称量和pH
浓度不必过低 梯度平板上挑
单碳源实验的
E
D
取菌落时，要 挑取单菌落
培养基和培养 条件一定要严 格把握
感谢您的观看
THANK YOU FOR YOUR WATCHING
以苯酚为单碳源的菌株的筛选
1
单碳源培养 基配制：按
2
苯酚的浓度 设定：苯酚 的浓度分别 按0.2g/L， 0.4g/L， 0.6g/L， 0.8g/L， 1.0g/L，
3
平行样：
4
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
目的:筛选能高效降解苯酚的`微生物,并进行初步鉴定.方法:从某焦化厂排水沟采集污泥,通过逐步驯化筛选苯酚降解菌株;利用形态观察、生理生化检测、16S rDNA序列分析进行初步鉴定.结果:筛选获得1株苯酚降解菌JDM-2-1,该菌能够以苯酚为惟一碳源,耐酚能力高达2 200 mg/L,在30℃和pH7.0条件下,42 h内能将800 mg/L的苯酚彻底降解;初步鉴定其为球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus).结论:菌株JDM-2-1是一株高效降解苯酚的球形芽孢杆菌.
作者：王永义彭清忠彭清静陈义光何倩杨冬梅 WANG Yong-yi PENG Qing-zhong PENG Qing-jing CHEN Yi-guang HE Qian YANG Dong-mei 作者单位：吉首大学,生物资源与环境科学学院,湖南,吉首,416000 刊名：生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2007 18(6) 分类号： Q93-331 关键词：苯酚降解 16SrDNA 球形芽孢杆菌。
实验8苯酚生物降解菌的筛选
环保领域
除了在废水处理和土壤修复方面 的应用外，苯酚生物降解菌还可 应用于环保领域的其他方面，如 监测苯酚污染情况、评估环境质
量等。
对未来研究的建议与展望
深入研究菌株降解机制
优化菌株培养条件
为了更好地了解苯酚生物降解菌的作用机 制，需要进一步深入研究其降解过程中的 基因表达、酶活性等关键因素。
结果讨论
结合实验结果和相关文献，探讨苯酚 生物降解菌的筛选方法、影响因素以 及在实际应用中的潜在价值。
05
结论与展望
实验结论总结
苯酚生物降解菌的筛选成功
01
通过实验，我们成功筛选出了具有高效降解苯酚能力的菌株，
这为苯酚污染治理提供了新的解决方案。
实验方法的有效性
02
实验过程中采用的方法具有可行性，为后续研究提供了参考和
学习并掌握实验操作技能
1 2
3
培养基配置
学习如何根据配方配置培养基，掌握培养基的灭菌技术。
接种与培养
学习如何进行微生物的接种和培养，掌握无菌操作技术。
菌种分离纯化
学习并掌握菌种的分离、纯化和保藏方法。
理解苯酚生物降解菌在环境保护中的重要性
去除污染物
苯酚生物降解菌能够降解苯酚等有机污染物，降低其对环境的危害{01}
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与数据分析 • 结论与展望
01 实验目的
了解苯酚生物降解菌的筛选过程
筛选原理
通过富集培养基培养含有苯酚的 废水，从中筛选出能够降解苯酚 的微生物。
筛选步骤
配置富集培养基、接种废水、培 养、观察并记录微生物的生长情 况、分离纯化菌种。
菌种的分离与纯化
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实验结果
1.苯酚耐受菌株的初选结果 .
平板编号 药物浓度 (g/L) ) 1 0.1 2 0.1 3 0.1 4 0.1 5 0.1 6 0.1 7 0.1 8 0.1
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基本原理
苯酚是芳香烃化合物.苯酚是常用的表面消毒剂之一, 苯酚是芳香烃化合物.苯酚是常用的表面消毒剂之一, 它们是TCA(三羧酸)循环的抑制剂.现已发现某些假单胞 (三羧酸)循环的抑制剂. 它们是 菌,争论产碱菌,真养产碱菌含有芳香烃的降解质粒,将其 争论产碱菌,真养产碱菌含有芳香烃的降解质粒, 降解生成琥珀酸,草酰乙酸,乙酰 循环. 降解生成琥珀酸,草酰乙酸,乙酰CoA,进入 ,进入TCA循环. 循环 在苯酚浓度梯度培养基平板高含药区上分离出的菌落, 在苯酚浓度梯度培养基平板高含药区上分离出的菌落, 对苯酚具有较好的耐受性,可能具有分解酚菌的能力; 对苯酚具有较好的耐受性,可能具有分解酚菌的能力;然后 将其在以苯酚为唯一碳源的培养基里进行摇床培养, 将其在以苯酚为唯一碳源的培养基里进行摇床培养,淘汰掉 不能利用苯酚的菌株,可筛选到苯酚降解菌; 不能利用苯酚的菌株,可筛选到苯酚降解菌;再用不同浓度 的苯酚药物培养基分离,可筛选出耐受能力好, 的苯酚药物培养基分离,可筛选出耐受能力好,降解程度高 的苯酚降解菌. 的苯酚降解菌.
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微生物学实验
实验八: 实验八:苯酚生物降解菌的筛选
综合性实验
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目的要求
1. 掌握微生物分离纯化的基本操作; 掌握微生物分离纯化的基本操作; 2. 掌握用选择性培养基从土壤中分离苯酚 生物降解菌的原理和方法. 生物降解菌的原理和方法.
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2. 以苯酚为单碳源的菌株的筛选
1)单碳源培养基配制:按培养基D的配方,用250mL三角瓶,每瓶装 )单碳源培养基配制:按培养基 的配方 的配方, 三角瓶, 三角瓶 每瓶装50mL ,制成以苯酚为单碳源的液体摇瓶; 制成以苯酚为单碳源的液体摇瓶; 2)苯酚的浓度设定:苯酚的浓度分别按0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L, )苯酚的浓度设定:苯酚的浓度分别按 , , , , 1.0g/L,1.2g/L六个浓度梯度配制; , 六个浓度梯度配制; 六个浓度梯度配制 3)平行样:每菌株,每药物浓度各配置平行样两瓶; )平行样:每菌株,每药物浓度各配置平行样两瓶; 4)灭菌:121℃,20min; )灭菌: ℃ ; 5)接种:将初选的苯酚耐受性菌株,分别用少许无菌水稀释,接种于对应摇 )接种:将初选的苯酚耐受性菌株,分别用少许无菌水稀释, 瓶中; 瓶中; 6)培养:八层纱布盖口,回旋式摇床,30℃,100转/min培养 天; )培养:八层纱布盖口,回旋式摇床, ℃ 培养2天 转 培养 7)检测:用分光光度计测定OD值,以空白培养基作对照,检测各摇瓶菌体 )检测:用分光光度计测定 值 以空白培养基作对照, 浓度; 浓度; 8)筛选:淘汰掉不能利用苯酚为碳源的菌株.菌体浓度高的为生长较好者, )筛选:淘汰掉不能利用苯酚为碳源的菌株.菌体浓度高的为生长较好者, 即能以苯酚为单碳源的菌株,可进行下一步实验. 即能以苯酚为单碳源的菌株,可进行下一步实验.
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3. 高耐受性苯酚降解菌的筛选
1)药物培养基平板的配制:按不同浓度(0.2 g/L ,0.4 g/L ,0.6 g/L , )药物培养基平板的配制:按不同浓度( 0.8 g/L ,1.0 g/L ,1.2 g/L)苯酚配置药物培养基平板; )苯酚配置药物培养基平板; 2)灭菌,倒平板:121℃,灭菌20min,倒平板,各菌株,各浓度配置 )灭菌,倒平板: ℃ 灭菌 ,倒平板,各菌株, 两个; 两个; 3)菌悬液制备:将初选的培养液作适度稀释,或将保藏的经单碳源实验 )菌悬液制备:将初选的培养液作适度稀释, 的菌株用无菌水制成菌悬液; 的菌株用无菌水制成菌悬液; 4)涂平板:用1mL移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液 )涂平板: 移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液0.2mL涂布于 移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液 涂布于 药物培养基平板上, 药物培养基平板上,每一试管菌悬液涂布一组不同浓度的苯酚药物培 养基平板,每一浓度设平板两个,六组共计 个 养基平板,每一浓度设平板两个,六组共计12个; 5)培养:恒温培养箱30℃培养 天; )培养:恒温培养箱 ℃培养1-2天 6)筛选:观察,记录并挑选高浓度药物培养基平板上生长旺盛的菌落, )筛选:观察,记录并挑选高浓度药物培养基平板上生长旺盛的菌落, 此即高耐受性苯酚降解菌,接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面; 此即高耐受性苯酚降解菌,接种于牛肉膏蛋白胨培养基斜面; 7)保藏:编号,4℃冰箱保藏. )保藏:编号, ℃冰箱保藏.
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4. 培养基
A. 牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏 ,蛋白胨 牛肉膏蛋白胨培养基:牛肉膏3g,蛋白胨10g,NaCl 5g,琼脂 , ,琼脂1520g , 水1000 mL,PH 7.0-7.5; , ; B. 药物培养基:将一定量苯酚加入到牛肉膏蛋白胨培养基中制成. 药物培养基:将一定量苯酚加入到牛肉膏蛋白胨培养基中制成. C. 苯酚浓度梯度平板:在无菌培养皿中,先倒入 苯酚浓度梯度平板:在无菌培养皿中,先倒入7-10 mL 含0.1g/L苯 苯 酚的牛肉膏蛋白胨培养基,将培养皿一侧置于木条上, 酚的牛肉膏蛋白胨培养基,将培养皿一侧置于木条上,使培养皿中 培养基倾斜成斜面,且刚好完全盖住培养皿底部; 培养基倾斜成斜面,且刚好完全盖住培养皿底部;待培养基凝固后 牛肉膏蛋白胨培养基. ,将培养皿放平,再倒入7~10 mL牛肉膏蛋白胨培养基. 将培养皿放平,再倒入 牛肉膏蛋白胨培养基 D. 以苯酚为单碳源的液体培养基:NH4Cl 1.0g ,K2HPO4 0.6g, 以苯酚为单碳源的液体培养基: , KH2PO4 0.4g,MgSO4 0.06g,,FeSO4 3mg,苯酚按设计量添加 , , , ,水1000 mL ,PH 7.0-7.5. .
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方法步骤
1. 苯酚耐受菌株的初选 1)浓度梯度培养基平板制备:按培养基C的方法制成苯酚浓度梯度平板; )浓度梯度培养基平板制备:按培养基 的方法制成苯酚浓度梯度平板; 的方法制成苯酚浓度梯度平板 2)样品菌悬液制备:将采集的土样溶解于无菌水中,摇匀,作适度稀释 )样品菌悬液制备:将采集的土样溶解于无菌水中,摇匀, ,备用; 备用; 3)平板涂布:用1mL移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液 )平板涂布: 移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液0.2mL于苯 移液管分别从各菌悬液试管中取菌悬液 于苯 酚梯度平板上,用涂棒涂布均匀; 酚梯度平板上,用涂棒涂布均匀; 4)培养:恒温培养箱30℃培养 天; )培养:恒温培养箱 ℃培养1-2天 5)挑取菌落:由于在培养基平板中,药物浓度呈由低到高的梯度方式分 )挑取菌落:由于在培养基平板中, 布,平板上长成的菌落也呈现由密到稀的梯度分布,而高浓度药物区 平板上长成的菌落也呈现由密到稀的梯度分布, 生长的少数菌落一般具有较强的抗药性. 生长的少数菌落一般具有较强的抗药性.挑取高含药区的单个菌落于 牛肉膏蛋白胨培养基斜面上划线; 牛肉膏蛋白胨培养基斜面上划线; 6)培养,保藏:将接种后的斜面于恒温培养箱中30℃培养 天,编号, )培养,保藏:将接种后的斜面于恒温培养箱中 ℃培养1-2天 编号, 4℃冰箱保藏. ℃冰箱保藏.
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实验用品
1.材料:(样品) .材料:(样品) :(样品 实验土样采自校园肥沃土. 实验土样采自校园肥沃土. 2.器材和仪器:试管,250ml三角烧瓶,1 mL吸管, .器材和仪器:试管, 三角烧瓶, 吸管, 三角烧瓶 吸管 吸耳球,无菌涂棒,量筒,天平,灭菌锅,培养箱, 吸耳球,无菌涂棒,量筒,天平,灭菌锅,培养箱, 酒精灯,接种环,棉花,棉线,牛皮纸. 酒精灯,接种环,棉花,棉线,牛皮纸. 3.试剂:牛肉膏 蛋白胨 苯酚 K2HPO4 KH2PO4 .试剂: MgSO4 FeSO4 琼脂 4. 培养基
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0.2
0.4
0.6
0.8
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基本原理
苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物,其长期残留于空气, 苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物,其长期残留于空气, 水体,土壤中,会造成严重的环境污染,对人体,动物有较高毒性. 水体,土壤中,会造成严重的环境污染,对人体,动物有较高毒性. 因此采用一定的方式降解苯酚,对保护人类健康, 因此采用一定的方式降解苯酚,对保护人类健康,消除环境污染意义 重大.在提倡绿色环保的大前提下,采用生物降解的途径势在必行. 重大.在提倡绿色环保的大前提下,采用生物降解的途径势在必行. 微生物对污染物质的代谢,转化及降解作用, 微生物对污染物质的代谢,转化及降解作用,是当今环境污染研 究中最活跃的领域之一.自然界中能降解烃类的微生物有几百种, 究中最活跃的领域之一.自然界中能降解烃类的微生物有几百种,多 为细菌,酵母菌和真菌,降解是由他们所产生的酶和酶系统完成的, 为细菌,酵母菌和真菌,降解是由他们所产生的酶和酶系统完成的, 一般直链化合物比支链化合物,饱和化合物比非饱和化合物, 一般直链化合物比支链化合物,饱和化合物比非饱和化合物,脂肪烃 比芳香烃容易被较多种类的微生物降解和同化. 比芳香烃容易被较多种类的微生物降解和同化.直链烃的降解是末端 甲基被氧化形成醇,醛后再生成脂肪酸,由脂肪酸形成醋酸, 甲基被氧化形成醇,醛后再生成脂肪酸,由脂肪酸形成醋酸,最后氧 化成二氧化碳和水, 化成二氧化碳和水,微生物对单环芳烃及其衍生物的降解与直链烃类 似,能降解苯和酚的微生物种类很多,细菌中的很多属,放线菌等. 能降解苯和酚的微生物种类很多,细菌中的很多属,放线菌等.