六双波长分光光度法
药代动力学血药浓度法测定静注给药氨茶碱的
2. 材料： 氨茶碱注射液， 0.1M 盐酸溶液， 0.1M 氢氧化钠溶液， 氯仿—异丙醇溶液 （95：
5，V：V） ，75%乙醇等。
3. 动物：家兔
四、
实验内容
1. 标准曲线的制备
1) 2) 配制 10mg/L 的氨茶碱标准溶液。 精密吸取标准溶液 0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml 置于具塞试管中，并加蒸 馏水至 1ml，各兔血清 0.5ml，使标准溶液相当于血清浓度为 2，4，8，12， 16，20mg/L。 3) 在试管中加入 0.1mol/L 盐酸溶液 0.2ml，于涡旋混合器上混匀后，再加入氯仿 —异丙醇溶液 （95： 5， v： v） 5.0ml， 密塞， 振摇混合， 以 2500rpm 离心 20min。
2. 残数法测定氨茶碱药代动力学参数的基本原理：
氨茶碱静脉注射后， 其体内血药浓度—时间曲线呈二室模型曲线特征。 若药物在体 内成二室模型分布，药物消除仅发生在中央室，并符合表观一级动力学过程，则静脉注 射给药后血药浓度经时变化公式为：
C Ae
t
Be
t
A
其中
X 0 k 21 Vc X 0 k 21 Vc
3. 血清中氨茶碱浓度的测定
将血样以 2500rpm 离心 20min，使血清分离，吸取 0.5ml 血清样品，置于举塞试管 中，加蒸馏水 1.0ml，混匀。以标准曲线项下的方法，测定吸收度。将△A 值代入标准曲 线回归方程，求出血清中氨茶碱的浓度，并记录到表中。
五、
实验结果
1. 原始记录与数据处理
C Be
取对数
t
lg C
t lg B 2 . 303
分光光度技术
3.吸收池
用于盛装试液的装置。吸收材料必须能够透过所测 光谱范围的光。一般可见光区使用玻璃吸收池，紫外光 区使用石英吸收池。 规格有0.5、1.0、2.0、5.0cm 等。
在高精度的分析测定中（紫外区尤其重要）吸收池 要挑选配对，因为吸收池材料的本身吸光特性以及吸收 池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。
第六节 常见分光光度计
四、日本日立U2000紫外/可见分光光度计
吸收曲线图
0.300 0.200 0.100
400
500
600
第二节 光吸收的基本定律 Ir
Ia Io
It
设入射光，吸收光，透射光和反射光的强度依次为I o，I a，
I t，I r，则他们之间的关系为:
Io = Ia + It + Ir
T It Io
或 T % It 100% Io
T为透光度（transmittance）或透光率
一般情况，单独依靠紫外光吸收光谱不能决定一个未知
物质的结构，往往需要与红外、质谱等其它方法相配合。
第四节 分光光度计的基本构造
基本构造主要由光源、单色器、吸收池、检测器和显 示器五大部分组成。
光源 单色器 样品池 检测器
显示器
1.光源
在整个紫外光区或可见光区可以发射连 续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定 性、较长的使用寿命。
生物技术实验常用研究技术
——分光光度技术
➢比色分析法：利用比较溶液颜色深浅的 方法来确定溶液中有色物质的含量。
➢用分光光度计进行比色分析的方法称为分 光光度法。
物质对光的选择性吸收
溶液为什么有颜色，其实质是什么？
实验证明，溶液的颜色是由于均匀分布在溶液中 的有色化合物的质点选择性的吸收了某种颜色的光所 造成的。
仪器分析第六章UV-VIS
3.芳香烃 （1）苯：苯为环状共轭体系，其UV谱如下 主要吸收带：E1、E2和B带 E1带：180～184nm （为末端吸收） E2带：200～204nm B带：230～270nm 其中最大吸收在256nm 左右且显示精细结构
苯在环己烷中的紫外光谱
（2）取代苯 ①一取代苯 若苯环上有助色团如OH、Cl等取代时，由 于n-π共轭，使E2吸收带红移，强度增大， 但一般λmax在210nm左右。 若有生色团取代而且与苯环共轭，则E2吸 收带与K 吸收带合环芳烃 稠环芳烃较之苯环形成了更大的共轭体系， 使E、K、B带均比苯环移向长波长方向， 精细结构比苯环更明显。
苯、萘、蒽和 并四苯的紫外 可见吸收光谱
6.3无机化合物紫外-可见吸收光谱
无机化合物的电子跃迁形式主要有：电荷 迁移和配位场跃迁两种 一、电荷迁移跃迁 产生原因：当物质吸收紫外或可见光时， 使电子从给予体外层轨道向接受体相应的 轨道跃迁产生吸收光谱，此过程又称内氧 化-还原。
整个分子的能量主要为这三种能量的加和。 即E=Ee+Ev+Er 实验证明这些能量都是量子化的，且 ΔEe>ΔEv>>ΔEr 当用紫外或可见光照射溶液中的物质分子 时，只有当辐射光子的能量等于两电子能 级间能量差时，物质分子才能吸收辐射产 生跃迁，即电子由基态跃迁至各个激发态。 用适当的仪器记录下吸收过程，就可获得 物质的紫外—可见分子吸收光谱。
本章主要内容
6.1分子吸收光谱基本原理 6.2有机化合物紫外—可见吸收光谱 6.3无机化合物紫外—可见吸收光谱 6.4溶剂对紫外—可见吸收光谱的影响 6.5紫外—可见分光光度计 6.6紫外—可见吸收光谱的应用
概述
药物分析实验习题答案
药物分析实验思考题参考答案实验一 甲硝唑片溶出度的测定-----------------------------------------------------------------------------------------------1 实验二 RP(Reverse Phase)-HPLC(High Performance Liquid Chromatography)测定醋酸地塞米松片的含量2 实验三 Gas Chromatography(GC,气相色谱法)测定维生素E软胶囊的含量-----------------------------------------2 实验四 永停滴定法测定磺胺嘧啶的含量-----------------------------------------------------------------------------------3 实验五 复方磺胺甲噁唑片的含量测定--------------------------------------------------------------------------------------4 实验六 阿司匹林Aspirin的红外光谱(IR, Infrared Spectroscopy)鉴别-------------------------------------------------4 实验七 薄层扫描法测定卷烟中尼古丁的含量-----------------------------------------------------------------------------5 实验八维生素B1注射液的含量测定------------------------------------------------------------------------------------------5 实验九 荧光分光光度法测定维生素B2片的含量-------------------------------------------------------------------------6 实验十AAS法龙牡壮骨颗粒中钙的含量--------------------------------------------------------------------------------------6实验一 甲硝唑片溶出度的测定1. 何为溶出度？哪些类型药物需做溶出度实验？溶出度：是指药物从片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度。
pKa的测定方法
当用Henderson Hasselbach等式来处理下述平衡得到 pKa=pH+lg[HA]/[A-] 因此,当[HA]=[A-]时,溶液pKa=pH1/2 (pH1/2即为滴定HA至一半时溶液pH值)。 因此,当用一种碱(例如氢氧化钠)滴定某一元弱 酸时,滴定HA至一半时,溶液所对应的pH值即为HA 的表观pKa。 以弱酸为例，说明以电位法pKa的测定方法。
一、电位法
某些弱酸、弱碱离解常数较小,或各级离解常数 差别很小,无法用普通滴定分析法进行测定。电位 滴定法是根据滴定体系pH值突跃来确定滴定终点 的,不受上述情况的影响,因而可以进行弱酸的各种 测定。关于pKa≥11.3极弱酸离解常数的测定,尚 未见有报道。依据Helmkamp和Johnson所提出的 实验方法,只要选择一些易溶于水的弱酸(避免 使用二甲亚砜之类的助溶剂),可以测定弱酸的离解 常数,并由数学方法计算pKa。
pka目前常用的测定方法?电位法?电导法?分光光度法单波长分光光度法双波长分光光度法?毛细管电泳法一电位法某些弱酸弱碱离解常数较小或各级离解常数差别很小无法用普通滴定分析法进行测定
pKa的测定方法
目前常用的测定方法
电位法 电导法 分光光度法 单波长分光光度法 双波长分光光度法 毛细管电泳法
三、毛细管电泳电化学检测
二、分光光度法
1. 单波长分光光度法
再根据BHA溶液在不同pH下缓冲溶液 中的吸光度，再作图法作 的线性曲线，并求出它们的线性方程，即可 求算其电离常数。
2、双波长分光光度法
某一元弱酸HL(总浓度为c0) 假定其酸式体(HL)和共轭碱式体(L-)具有如图1 所示的吸光光谱曲线。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
根据图1所示,以酸式体最大吸收值附近的任 意波长λ1为第一工作波长,再选择与碱式体在λ1处 具有等吸收的波长λ2作为第二个工作波长。假设 在波长λ1和λ2处,其酸式体的摩尔吸光系数分别为 εHL1和εHL2,碱式体的摩尔吸光系数分别为εL1和 εL2调节溶液的pH值使其全部以碱式体形式存在时 的吸光度分别为AL1和AL2,全部以酸式体形式存 在时的吸光度分别为AHL1和AHL2。根据朗伯-比 耳定律,在任一pH条件下,弱酸溶液的吸光度为:
药分实验思考题
药分实验实验一：氯化钠的杂志检查1.药物中杂质检查的意义是什么药物中的杂质是影响药品质量的主要因素之一，药品的杂质是药品中不具治疗作用或对人体有危害或影响药品稳定性和疗效的物质，因此，杂质检测是控制药品质量的一项重要指标，以保证药品质量和临床用药安全有效。
2.药物中杂质的来源主要有哪些？什么的一般杂质？什么是特殊杂质？来源：（1）由生产过程中引入的（2）贮藏过程中产生的一般杂质：指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。
特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质3.药物中杂质检查应严格遵循什么原则？为什么？遵行平行实验的原则，如加入的试剂，反应的温度，放置的时间等均应相同，这样检查结果才有可比性，减少系统误差。
4.试计算出氯化钠中溴化物，硫酸盐，镁盐，钾盐，铁盐，重金属和砷盐的限量5.取某一药物0.5g进行金属检测，规定限量为百万分之十，应取多少ml标准铅溶液？6.某一药物砷盐限量为百万分之四，取标准砷溶液2ml做对照，问应取供试品多少克？实验二：药物中特殊杂志的检查1.简要说明以上杂志检查项目的原理和方法1)阿司匹林中水杨酸检查的原理：水杨酸在弱酸性环境中和FeCl3作用显紫色，而阿司匹林结构中无游离酚羟基，不能发生此反应。
方法为化学方法中的显色反应检查法：取一定量的被检杂质标准溶液和一定量供试品溶液，在相同条件下处理比较反应结果从而确定含量是否超过限量。
2)盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸检查原理：盐酸普鲁卡因、对氨基苯甲酸在酸性条件下可与二甲氨基醛缩合而成色。
不同物质分配系数不同，在薄层色谱中可被分离，且斑点大小和浓度有关。
方法：本实验采取薄层色谱中的的杂质对照品法，根据杂质限量取供试品溶液和一定浓度的杂志对照片溶液，分别点样于薄层色谱板上，展开，斑点定位，供试品溶液除斑点外的其他斑点与相应的杂志对照片进行比较，若供试品杂质斑点颜色不深于对照品杂杂质斑点，则说明没有超过限量。
微量铁的分光光度测定概述
文章编号:1006-446X(2005)09-0005-06微量铁的分光光度测定概述王爱荣 谷永庆 王少冷(河南科技学院化工系,河南 新乡453003)摘 要:对近年来我国测定微量铁的各种分光光度法发展状况及灵敏度、选择性、应用等方面进行了概述。
关键词:微量铁;分光光度法;灵敏度;选择性中图分类号:O65713 文献标识码:A铁在地壳中含量丰富,分布广泛。
铁又是人体不可缺少的微量元素之一,若机体铁的携氧能力受阻或铁的数量不足,则直接影响人体健康。
因此在食品、医药、卫生等方面对铁的含量测定均有严格要求,对铁的测定方法研究有着重大意义。
本文仅就我国微量铁的分光光度测定方法的新近发展状况及相应光度分析的灵敏度、选择性及应用等方面进行评述。
光度法测铁按其反应原理不同,可以分为以下几种方法。
1 二元配合物分光光度法111 磺基水扬酸分光光度法磺基水扬酸分光光度法是测定铁最普遍的方法,在pH9～11的条件下,铁(Ⅲ)与磺基水扬酸生成黄色的二元配合物[1]。
应用在循环水中铁含量测定,与邻菲罗啉光度法相比,测定灵敏度有不同程度的提高,也有很好的选择性,结果准确可靠。
其主要干扰元素有铜、铋、锰、钴、镍等。
112 邻二氮菲分光光度法在pH4～6的溶液中,邻二氮菲与铁(Ⅱ)生成桔红色二元络合物[2]。
邻二氮菲光度法是一种使用多年的方法,很好应用在瓜果蔬菜中对铁含量的测定。
瓜果蔬菜中的三价铁需要用盐酸羟胺将其还原为二价铁,二价铁与邻二氮菲形成络合物,此后可用分光光度法测定。
此法灵敏度较高,选择性好,也是比较广泛使用的铁测定方法。
113 亚硝基-R盐为显色剂的分光光度法亚硝基-R盐在pH4～6的溶液中与铁形成稳定的络合物[3],可在水溶液中直接进行测定。
在酸性镀铜液中铁是最常见的杂质,利用此法可以很好地测定微量铁,在720nm波长下,铁的质量浓度在012～210μg/m L范围内测得吸光度与质量浓度之间的关系遵守比耳定律,平均回收率为9814%。
实验六复方磺胺甲恶唑片含量测定(精)
实验六 复方磺胺甲噁唑片含量测定
一、实验目的
掌握双波长分光光度法的基本原理 掌握复方制剂不经分离直接测定各组分含量
的方法 熟悉紫外分光光度仪的使用
二、仪器与试药
仪器
Mettler AL204电子天平 752型紫外-可见分光光度仪 胖肚移液管 规格：25mL 研钵 定量滤纸（直径10cm） 容量瓶 规格：25、100 mL
（2）SMZ的标准曲线及回归方程制作
1、工作标准曲线的制备
（2）SMZ的标准曲线及回归方程制作
取贮备液0,3, 6,9,12,15ml
100ml量瓶， 0.1mol/L NaOH稀释
测定波长: 257nm 参比波长：304nm
作标准曲线
测ΔA（λ1λ2）
管号 1
2
3
4
5
6
浓度 C1 C2 C3 C4 C5 C6
紫外测定线性关系：配置系列浓度对照液（n≥5） A（0.2-0.8）；r=0.9996（n=5）,截距应接近于零 。
实验说明
0.1mol/LNaOH自己配置
每人均做两份供试品，紫外测定每个数据平 行测定两次，做好记录
仪器分配（测定样品选择相同型号的仪器）
波长 257nm
实验室 505
二、仪器与试药
试剂
复方磺胺甲噁唑片 规格：磺胺甲噁唑（SMZ）0.4g/片
甲氧苄啶（TMP） 0.08g/片 氢氧化钠 95%乙醇
三、实验原理
双波长分光光度法-消除干扰
干扰组分吸收光谱中两个波长处有吸收系数相同 在干扰组分等吸收波长处被测组分吸收系数有显著
差异 可用于消除干扰吸收 直接测定混合物溶液在等吸收波长处的吸收度之差
2018年秋季学期仪器分析期末考试模拟试卷 第9套
2018年秋季学期仪器分析期末考试模拟试卷第9套一．选择题1.紫外可见光区波长范围是A.200-400nmB.200-780nmC.200-700nmD.400-700nm2.根据检测目标的不同，下列不属于光谱法的是A.吸收光谱B.发射光谱C.分子光谱D.散射光谱3.有机化合物的电子跃迁类型有几类A.2类B.3类C.4类D.5类4.下列关于朗博比尔定律不正确的是A.稀溶液（C<0.1mol/L)B.适合于单色光C.可用于AAS分析D.适用于均匀介质5.下列关于紫外-可见分光光度计说法错误的是A.其基本组成为光源、单色器、吸收池、检测器、显示系统B.入口狭缝的作用是限制光的进入C.出口狭缝的作用是让色散后所需波长的光通过D.色散元件的作用是把混合光分散为单色光6.在进行紫外-可见分光光度法测定时，下列说法错误的是A.应遵循“吸收大，干扰小”的原则来选择测量波长B.参比溶液就是空白溶液C.吸光度的一般读数范围是0.2-0.8D.平行操作空白是指不含待测物其余成分都有的空白溶液7.关于双波长分光光度法说法错误的是A.双波长分光光度法适用于多组分分析B.主波长要选待测物和干扰物的最大相交波长C.副波长要选择主副波长干扰物吸光度一样且待测物的吸光度差值足够大D.双波长法可以消除干扰组分的吸收，从而实现对待测组分的定量测定8.下列不属于无辐射跃迁的是A.振动弛豫B.内转换C.外转换D.去活化9.下列关于激发光谱和发射光谱说法正确的是A.激发光谱是固定激发光波长，改变发射波长，再测定不同波长下的荧光强度B.发射光谱是固定发射波长，改变激发光波长，再测定不同波长下的荧光强度C.荧光光谱的形状与激发光波长有关D.激发光谱与荧光光谱呈镜相对称关系10.影响荧光产生的结构因素不包括A.共轭π键结构B.刚性平面C.溶剂的结构D.取代基效应11.能斯特方程中，各个参数的意义错误的是A.R为标准气体常数，其值为8.314J/（mol*K）B.T为温度，其单位为摄氏度C.F法拉第常数，其值为96487库伦/摩尔（C/mol)D.α为物质的活度，单位为mol/L12.下列哪个点击不属于参比电极A.标准氢电极B.甘汞电极C.pH玻璃电极D.银-氯化银电极13.下列不属于指示电极适合的条件的是A.符合能斯特方程B.可逆性好C.对所测得组分响应快，重现性好D.简单耐用14.pH电极的内参比电极为A.甘汞电极B.银-氯化银电极C.铂电极D.银电极15.标准甘汞电极的外玻璃管中装的是A.1.0mol/LKCl溶液B.0.1mol/LKCl溶液C.0.1mol/LHCl溶液D.1.0mol/LHCl溶液16.pH电极再使用前活化的目的是A.去除杂质B.定位C.复定位D.在玻璃泡外表面形成水合硅胶层17.测水样时pH值时，所用的复合电极是A.玻璃电极和甘汞电极B.pH电极和甘汞电极C.玻璃电极和银-氯化银电极 C.pH电极和银-氯化银电极18.下列因素与响应时间无关的是A.敏感膜的性质与组成B.被测离子浓度C.共存离子D.被测离子种类19.总离子调节缓冲液的作用是A.使试液离子强度稳定B.增大待测离子活性C.改变溶液温度D.清除干扰离子20.pH玻璃电极产生的不对称电位来源于A.内外玻璃表面特性不同B.内外溶液中H+浓度不同C.内外溶液中H+活度系数不同D.内外参比电极不一样21.下列不是按分离原理分类的色谱法是A、吸附色谱法B、平面色谱法C、离子交换色谱法D、空间排阻色谱法22.下列选项中，说法错误的是A、色谱法的特点之一是准确度高B、色谱法的三要素是色谱柱、流动相、固定相C、固定相的作用是分离待测组分D、死时间是不被固定相保留的组分的保留时间23.对r21的理解，正确的是A、r21=t’R1/t’R2 (R1为基准组分，R2为未知组分)B、r21增加，则两组分的K值或k值差异增大，峰间距增大，柱选择性越好C、相对保留值不可以扣操作条件的影响D、r21表示两个峰在色谱图上的相对位置，只与柱温有关24.下列说法正确的是A、已知R=1.5时，可认为两峰完全分离B、V R是进样开始到色谱峰最大值出现所流过的液体总体积C、TR是被测组分从第一个色谱峰到色谱峰最大值出现所需时间D、δ的大小表示流出色谱柱的分散程度，δ越大，组分流出越集中25.不能引起色谱带展宽的因素是A、涡流扩散B、纵向扩散C、塔板数D、传质阻力26.下列关于色谱法的叙述中，不正确的是A、TLC的原理是吸附色谱B、SEC中，分子质量越大，速度越快C、PC是用高分子材料制成薄膜作固定相D、IEC是利用不同组分离子交换能力的差异进行分离的色谱法27.提高R的方法不包括A、增加理论塔板数B、适当调节控制容量因子kC、增加r21D、降低选择性因子28.色谱法常用的定量方法不包括A、外标法B、内标法C、色谱联用分析法D、归一化法29.归一化法的应用条件A、试样中所有组分都必须出峰B、测定对象必须是混合物C、需要标准品.D、必须严格要求操作条件，以免干扰结果30.下列说法正确的是A、分配系数K是指一定T、P下，组分在两相间达到分配平衡时的质量比B、分配比k是指一定T、P下，组分在两相间达到分配平衡时的浓度比C、全面的描述色谱峰需从三个方面进行，即峰的大小、位置及峰宽D、色谱保留值方程式表明组分的TR随其在两相中的K或k的增大而减小31.下列说法正确的是A、经典液相色谱法主要指高效液相色谱法而不包括常规纸色谱等B、GC是以气体为流动相的色谱分析方法，其流动相常称为载气C、气相色谱仪中气体净化装置常用的是净化干燥器，作用仅是除去载气中的水气D、气化室的死体积要大，以降低进样的柱外效应32.气相色谱法的优点不包括A、高选择性B、高分离效能C、分析速度快D、高准确度33.关于气相色谱仪的叙述，不正确的是A、主要由五大系统组成:气路系统、进样系统、分离和温控系统、检测系统、数据记录及处理系统B、进样系统作用是引入试样，并使样品迅速气化C、一般检测器温度要求控制在±0.5以内D、检出限是检测器的重要性能指标，它表示检测器所能输出的最小组分量34.关于检测器的描述错误的是A、FID 破坏型浓度型检测器B、ECD 浓度敏感型C、FPD 灵敏度最高的检测器D、TCD 浓度敏感型非破坏型检测器35.GLC对固定液的要求不包括A、化学稳定性要好B、选择性好C、粘度大D、热稳定性好36.对程序升温描述错误的是A、程序升温的作用是改善分离效果，缩短分析时间B、程序升温是指柱温按照预设的程序，随时间呈线性增加C、适用于样品复杂，沸程宽的情况D、柱温的控制方式有恒温和程序升温37.衡温色谱柱效能的指标是A、分离度B、容量因子C、塔板数D、分配系数38.在气相色谱法中调整保留值实际上反映了拿些部分分子间的相互作用A、组分与载气B、组分与固定相C、组分与组分D、载气与固定相39.在以甲醇-水为流动相的反相色谱中，升高甲醇比例，组分的保留因子k和TR将A、k和TR均减小B、k和TR均增大C、k和TR不变D、k增大，TR减小40.下列气体中不能用作气相色谱法载气的是A、氮气B、氢气C、氧气D、氦气二．判断题1.精密度是仪器分析测得值与其真实值或参考量之间的一致程度。
化学计量学
第一章 绪 论化学计量学是数学和统计学、化学及计算机科学三者相互交叉而形成的一门边缘学科，是化学中很具有魅力和应用前景十分广泛的新兴分支学科。
1.按照国际化学计量学学会（ICS ）的定义：化学计量学是化学的一门分支学科。
它应用数学和统计学方法，设计或选择最优量测程序和实验方法，并通过解析化学量测数据而获取最大限度的信息。
2.化学计量学发展简史1971年，瑞典化学家Wold S. 在为一项基金项目定名时，从“化学数据分析”、“化学中的计算机”和化学计量学三者中选定后者而正式宣布了化学计量学这们学科的诞生。
三年后，他与美国华盛顿大学的Kowalski B. R.教授在美国西雅图成立了国际化学计量学学会。
80年代，化学计量学课程开始进入化学教学大纲，化学计量学期刊问世。
90年代后，化学计量学得到广泛推广与应用。
3、化学计量学算法和程序化学计量学的精髓主要体现在处理数据的诸多算法。
根据算法写出具体的计算机程序。
理论 上任何高级计算机语言都可以编写计量学程序。
如B 语言、C 语言Fortran 语言、Matlab 等。
第二章 实验数据统计处理一、分析测试中的误差1、 系统误差：在一定的实验条件下，有某个或某些恒定的因素按照确定的一个方向起作用所引起的多次测量平均值对真实值的偏差。
特点：A . 重复出现 B. 单向性 C. 系统误差的数值基本恒定不变2、偶然误差：由随机因素引起的误差。
特点：A. 不确定性 B. 可抵偿性3、粗差：过失误差。
二、样本的特征数均数 反映准确度标准差 反映精密度相对标准偏差 三、t 统计检验见p61相关习题见练习本次数愈多，置信限越小，平均值越可靠四．F 统计检验见p63n x x n i i ∑=1)(2--=∑n x x s i %100xs RSD =第三章 回归分析一、 两变量间的关系① 二变量均为非随机变量 --------- 函数② 一变量为非随机变量，另一变量为随机 -------- 回归③ 二变量均为随机 --------- 相关回归方程的稳定性1.回归系数b 的波动xx b sx x ss =-=∑2)(x 的离散越大,就越稳定2.常数项a 的波动xx a x n s s 21+=a s 除了与s 、xx 有关外，n 越大，a 的精度就越高。
双波长分光光度
双波长分光光度
双波长分光光度法是一种用于测定物质浓度的光谱分析方法。
它利用两个不同波长的单色光交替照射同一吸收池的溶液，然后通过检测器和电子控制系统计算出这两个波长下吸收度的差值△A，与被测定物质的浓度成正比。
双波长分光光度法的关键在于正确选择两个波长，以确保被测组分的吸光度足够大，同时干扰组分和背景在两个波长下的吸光度相同（DA=0）。
通常，将长波长λ1选在待测组分的最大吸收波长处，而短波长λ2选在干扰组分等吸收波长处。
该方法的特点是消除了干扰组分对测定结果的影响，提高了测定的准确度和灵敏度，因此在生物、医学、环境监测、食品分析等领域得到了广泛应用。
分光光度法
♦为克服非单色光引起的偏离，首先应 为克服非单色光引起的偏离，
选择比较好的单色器。 选择比较好的单色器。此外还应将入 射波长选定在待测物质的最大吸收波 长且吸收曲线较平坦处。 长且吸收曲线较平坦处。
七 分光光度计
光源 单色器 样品室 检测器 显示
1. 光源 • 在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连 续光谱，具有足够的辐射强度、 续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳 定性、较长的使用寿命。 定性、较长的使用寿命。 • 可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范 可见光区：钨灯作为光源， 围在320～2500 nm。 围在 。 • 紫外区：氢、氘灯。发射 紫外区： 氘灯。发射185～400 nm的 的 连续光谱。 连续光谱。
溶液中CrＯ 的颜色不同， 溶液中CrＯ42-、 Cr2Ｏ72-的颜色不同，吸 Cr 光性质也不相同。 此时溶液pH 光性质也不相同。故：此时溶液pH 对测定有 重要影响。 重要影响。
3 物理性因素 • 朗伯—比耳定律的前提条件之一是入射光 朗伯— 为单色光。 为单色光。 • 难以获得真正的纯单色光。分光光度计只 难以获得真正的纯单色光。 能获得近乎单色的狭窄光带。 能获得近乎单色的狭窄光带。复合光可导 致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 致对朗伯—比耳定律的正或负偏离。 • 非单色光、杂散光、非平行入射光都会引 非单色光、杂散光、 起对朗伯—比耳定律的偏离， 起对朗伯—比耳定律的偏离，最主要的是 非单色光作为入射光引起的偏离。 非单色光作为入射光引起的偏离。
三 紫外可见吸收光谱与有机分子 结构的关系
• 有机化合物的紫 可见吸收光谱， 外—可见吸收光谱， 可见吸收光谱 是其分子中外层价 电子跃迁的结果 三种）： 电子、 ）：σ电子 （三种）： 电子、 π电子、n电子。 电子、 电子 电子。 电子 • 分子轨道理论
pKa的测定方法
当用Henderson Hasselbach等式来处理下述平衡得到 pKa=pH+lg[HA]/[A-]
因此,当[HA]=[A-]时,溶液pKa=pH1/2 (pH1/2即为滴定HA至一半时溶液pH值)。 因此,当用一种碱(例如氢氧化钠)滴定某一元弱
酸时,滴定HA至一半时,溶液所对应的pH值即为HA 的表观pKa。
绘制pH—V曲线。开始滴定时,每加入1mlNaOH 记录一次pH值,直至曲线斜率接近1.0,然后将碱液改 为每加0.20ml记录一次pH值,直至曲线斜率趋于无穷 大,即为终点。重复滴定两次,以确定准确的终点体积。
从曲线中找出pKa。从pH—V曲线可以找到对应 于滴定剂距滴定终点—半处所对应的准确值,相应的 pH值即为表观pKa。--根据弱酸碱pH值计算公式可 得出绝对pKa。
三、毛细管电泳电化学检测
以弱酸为例，说明以电位法pKa的测定方法。
于一干燥的150ml烧杯中加入近60ml 0.100mol·L-1六氟丙醇(若测定pKa<2.3的弱酸用草酸), 用该溶液润洗滴定管,然后注满至0.00ml。
准确放出一定体积溶液(本实验49.95ml)于另一只 洁净干燥的150ml烧杯中。
将电磁搅拌器放入溶液中,烧杯置于电计相 连接,记录初始pH值。
二、分光光度法
1. 单波长分光光度法
再根据BHA溶液在不同pH下缓冲溶液 中的吸光度，再作图法作
的线性曲线，并求出它们的线性方程，即可 求算其电离常数。
2、双波长分光光度法
某一元弱酸HL(总浓度为c0) 假定其酸式体(HL)和共轭碱式体(L-)具有如图1
所示的吸光光谱曲线。
根据图1所示,以酸式体最大吸收值附近的任 意波长λ1为第一工作波长,再选择与碱式体在λ1处 具有等吸收的波长λ2作为第二个工作波长。假设 在波长λ1和λ2处,其酸式体的摩尔吸光系数分别为 εHL1和εHL2,碱式体的摩尔吸光系数分别为εL1和 εL2调节溶液的pH值使其全部以碱式体形式存在时 的吸光度分别为AL1和AL2,全部以酸式体形式存 在时的吸光度分别为AHL1和AHL2。根据朗伯-比 耳定律,在任一pH条件下,弱酸溶液的吸光度为:
药物的分析2作业题
药物分析2第一次作业单选题（分数：15 分）1 . 《中国药典》的制定和修订者是( 1 )分1. 卫生部2. 药典委员会3. 国家药品食品监督管理局4. 国务院5. 商务部2 . 遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质一般叫作( 1 )分1. 易炭化物2. 易脱水有机物3. 易氧化物4. 碳水化合物5. 糖类物质3 . 药物的鉴别试验是证明( 1 )分1. 未知药物的真伪2. 已知药物的真伪3. 已知药物的疗效4. 药物的纯度5. 已知药物的含量4 . 药物中重金属杂质检查时，其溶液的pH值不要求在3 ~ 3.5的方法为：( 1 )分1. 第一法（硫代乙酰胺法）2. 第二法3. 第三法4. 第四法（微孔滤膜法）5. 加硫化氢饱和溶液法5 . 检查砷盐的法定方法均需用醋酸铅棉花，其作用为( 1 )分1. 形成铅汞齐2. 吸收砷化氢气体3. 纯化砷化氢气体4. 防止锑化氢SbH3气体生成5. 吸收H2S，消除药物中所含少量硫化物的干扰6 .一般杂质的检查方法收载于《中国药典》的哪部分内容中( 1 )分1. 凡例2. 正文3. 附录4. 索引5. 目录7 .《中国药典》规定“冷处”是指( 1 )分1. 0 ℃2. 0 ~ 2℃3. 2 ~ 5℃4. 2 ~ 10℃5. -2~2℃8 .《中国药典》规定“精密称定”时，系指( 1 )分1. 称取重量应准确至所取重量的千分之一2. 称取重量应准确至所取重量的万分之一3. 称取重量应准确至所取重量的万分之五4. 称取重量应准确至所取重量的千分之五5. 称取重量应准确至所取重量的百分之一9 .《中国药典》规定称取“0.1 g”系指( 1 )分1. 称取重量可为0.05 ~ 0.15 g2. 称取重量可为0.06 ~ 0.14 g3. 称取重量可为0.07 ~ 0.13 g4. 称取重量可为0.08 ~ 0.12 g5. 称取重量可为0.05 ~ 0.14 g10 .《中国药典》（2010年版）第三部收载的内容为( 1 )分1. 中国药典注解2. 中国药品处方集3. 《中国生物制品规范》4. 《临床用药须知》5. 《中国药品通用名称》11 .《中国药典》规定葡萄糖中氯化物的检查方法为：取本品0.6 g，加水溶解使成25 ml，加稀硝酸10 ml，置50 ml纳氏比色管中，加水使成约40 ml，摇匀，加硝酸银试液1.0 ml，用水稀释至50 ml，摇匀，暗处放置5 min，与标准氯化钠溶液（每1ml相当于10 mg Cl-）1 ml 用同法制成的对照液比较，不得更浓。
pKa的测定方法
三、毛细管电泳电化学检测
以弱酸为例，说明以电位法pKa的测定方法。
于一干燥的150ml烧杯中加入近60ml 0.100mol·L-1六氟丙醇(若测定pKa<2.3的弱酸用草酸), 用该溶液润洗滴定管,然后注满至0.00ml。
准确放出一定体积溶液(本实验49.95ml)于另一只 洁净干燥的150ml烧杯中。
将电磁搅拌器放入溶液中,烧杯置于电磁搅拌器上, 小心将pH电极与甘汞电极插入溶液中,并与电位计相 连接,记录初始pH值。
二、分光光度法
1. 单波长分光光度法
再根据BHA溶液在不同pH下缓冲溶液 中的吸光度，再作图法作
的线性曲线，并求出它们的线性方程，即可 求算其电离常数。
2、双波长分光光度法
某一元弱酸HL(总浓度为c0) 假定其酸式体(HL)和共轭碱式体(L-)具有如图1
所示的吸光光谱曲线。
根据图1所示,以酸式体最大吸收值附近的任 意波长λ1为第一工作波长,再选择与碱式体在λ1处 具有等吸收的波长λ2作为第二个工作波长。假设 在波长λ1和λ2处,其酸式体的摩尔吸光系数分别为 εHL1和εHL2,碱式体的摩尔吸光系数分别为εL1和 εL2调节溶液的pH值使其全部以碱式体形式存在时 的吸光度分别为AL1和AL2,全部以酸式体形式存 在时的吸光度分别为AHL1和AHL2。根据朗伯-比 耳定律,在任一pH条件下,弱酸溶液的吸光度为:
当用Henderson Hasselbach等式来处理下述平衡得到 pKa=pH+lg[HA]/[A-]
因此,当[HA]=[A-]时,溶液pKa=pH1/2 (pH1/2即为滴定HA至一半时溶液pH值)。 因此,当用一种碱(例如氢氧化钠)滴定某一元弱
酸时,滴定HA至一半时,溶液所对应的pH值即为HA 的表观pKa。
分析化学_大连理工大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年
分析化学_大连理工大学中国大学mooc课后章节答案期末考试题库2023年1.定量分析化学中最突出的概念是（）参考答案:量的概念2.用离子选择电极标准加入法进行定量分析时，对加入标准溶液的要求为（）参考答案:体积要小，其浓度要高3.可用下列何种方法减免分析测试中的系统误差-参考答案:进行仪器校正4.能够表示固定相对两种组分选择性的参数是（）参考答案:相对保留值5.玻璃电极在使用前需要在去离子水中浸泡24小时，目的是（）参考答案:形成水化层，使不对称电位稳定6.电位测定时，溶液搅拌的目的是参考答案:缩短电极建立电位平衡的时间7.有两组分析数据，要比较它们的测量精密度有无显著性差异，应当用（）参考答案:F检验8.下列各项中属于过失误差的是（）参考答案:实验中滴定剂溅落到锥形瓶外9.在气-液色谱分析中, 色谱柱中的固定相为参考答案:载体+固定液10.等电位点是指（）参考答案:该点电位值不随温度改变11.测定某有机物, 称取 0.2000 g, 溶解后加入 0.01000 mol/L I2标准溶液 10.00mL, 回滴I2时消耗0.01000 mol/L Na2S2O3 19.20 mL, 则此测定的相对误差约是参考答案:百分之几12.分析SiO2的质量分数得到两个数据:35.01％,35.42％, 按有效数字规则其平均值应表示为参考答案:35.22％13.核磁共振波谱法中选四甲基硅烷Si(CH3)4(TMS)作为参比的原因不包括（）参考答案:分子量相对较大14.对化学位移没有影响的因素是（）参考答案:核磁共振仪的磁场强度15.质量吸收系数a 与摩尔吸收系数κ之间的关系正确的是（）参考答案:a =κ/M；16.假设一分光光度计的读数误差DT = 0.1 %，则其测定待测试样浓度的相对误差最小时，其吸光度值为( )参考答案:0.434；17.请按序排列下列化合物中划线部分的氢在NMR中化学位移值的大小 ()a.CH3Fb.CH2OCH3c.(CH3)3N d.(CH3)4C参考答案:a>b>c>d18.在下列化合物中，用字母标出的4种氢核的化学位移值(d）从大到小的顺序是 ( )【图片】参考答案:d >c>b>a19.三个不同的质子A, B, C, 其屏蔽常数的次序为:s B>s A>s C, 当这三个质子在共振时, 所需外磁场B0的次序是()参考答案:B 0(B)> B 0(A)> B 0(C)20.下列有关色谱分离过程的正确描述是（）参考答案:两相、两相的相对运动以及组分在两相间的多次分配构成了色谱法的基础21.原子吸收光谱分析法建立的关键突破是（）参考答案:特殊光源；22.采用测量峰值吸收系数的方法代替积分吸收，下列条件中哪项是必须的？（）参考答案:发射线轮廓小于吸收线轮廓23.通常用来表示原子吸收线轮廓的特征值的是（）参考答案:中心频率与半宽度；24.原子吸收光谱分析仪中单色器位于（）参考答案:原子化器之后25.用原子吸收光度法测定铷时，加入1%的钠盐溶液，其作用是（）参考答案:消电离剂26.用新方法测定标准样品，得到一组测定值，要判断新方法是否可靠，应该使用（）参考答案:t检验27.置信度一定时，增加测定次数n，置信度区间变；n不变时，置信度提高，置信区间变（）参考答案:小；大28.火焰原子吸收光谱法中，吸光物质是（）参考答案:火焰中待测元素的基态原子29.置信度的定义是（）参考答案:测量值出现在一定范围内的可能性的大小，通常用%来表示30.下列各项造成偶然误差的是（）参考答案:在称量时天平的平衡点稍有变动31.下列哪项是正确的定量分析一般过程（）参考答案:取样-预处理-测定-分析结果的计算与评价32.获1959年诺贝尔化学奖的科学家是（）参考答案:Heyrovsky J33.有两组分析数据,要比较它们的精密度有无显著性差异,则应当用参考答案:F检验34.仪器分析的大发展时期出现在（）参考答案:20世纪40年代后35.普遍认为分析化学经历了几次重要变革（）参考答案:三次36.原子吸收光谱分析法、原子发射光谱分析法都属于（）参考答案:光分析法37.分析化学可分为无机分析，有机分析，生化分析，药物分析，这是（）参考答案:按分析对象分类38.按Q检测法（n=4时，Q0.90=0.76）删除可疑值，下列各组数据中有可疑值应予删除的是（）参考答案:3.03，3.04，3.05，3.1339.能够指示化学反应终点到达的指示剂必须具有下列何种性质（）参考答案:在反应终点前后有明显的颜色变化40.原子吸收光谱分析仪的光源是（）参考答案:空心阴极灯41.在一定温度下，组分的分配系数K参考答案:K越大，出峰越慢42.速率方程正确的是（）参考答案:H = A + B/u + C·u43.载气流速高时, 影响柱效的主要因素是（）参考答案:传质阻力项44.红外吸收光谱属于（）参考答案:分子光谱45.分析结果出现下列情况，属于系统误差（）参考答案:称量时试样吸收了空气中的水分46.下列情况中，使分析结果产生正误差的是（）参考答案:用于标定标准溶液的基准物在称量时吸潮了47.分析数据的可靠性随平行测定次数的增加而提高，但达到一定次数后，再增加测定次数也就没有意义了。
双波长系数倍率氟试剂分光光度法方法验证报告
双波长系数倍率氟试剂分光光度法方法验证报告双波长系数倍率氟试剂分光光度法方法验证报告一、引言双波长系数倍率氟试剂分光光度法是一种常用于测定水中氟含量的分析方法。
本文将对该方法进行评估和验证，以确保其准确性和可靠性。
通过系统的研究和分析，我们将全面了解该方法的原理、步骤和应用，并提供个人观点和理解。
这将有助于读者对双波长系数倍率氟试剂分光光度法的理解和应用。
二、原理与步骤1. 原理双波长系数倍率氟试剂分光光度法基于氟离子与试剂形成复合物的光谱特性。
根据试剂与氟离子的反应，吸收波长会发生变化，进而可测定样品中氟的含量。
该方法的原理简单易懂，且具有较高的测定范围和准确度。
2. 步骤（1）制备标准曲线：采用标准溶液中不同浓度的氟离子，使用双波长系数倍率氟试剂分光光度法进行测定，记录吸光度和氟离子浓度的对应关系。
（2）样品处理：将待测样品进行预处理，如过滤、稀释等，以提高测定的准确性和灵敏度。
（3）测定吸光度：使用双波长系数倍率氟试剂分光光度法，测定经处理后的样品的吸光度值。
（4）计算样品中氟的含量：根据标准曲线，将吸光度值转化为氟离子的浓度，并计算样品中氟的含量。
三、方法验证为了验证双波长系数倍率氟试剂分光光度法的可靠性和准确性，在样品中添加不同浓度的氟离子，进行反复测定，并计算测定结果的相对标准偏差（RSD）。
根据国际标准要求，当RSD值小于2%时，可认定该方法的准确性和可靠性良好。
我们在三个不同浓度下进行了六次测定，并计算了吸光度和氟离子浓度的平均值和RSD值。
结果显示，测定值的RSD均小于2%，符合国际标准要求，表明该方法具有良好的准确性和可靠性。
四、应用与展望双波长系数倍率氟试剂分光光度法可以广泛应用于水质监测、环境保护和食品安全等领域。
其准确性和可靠性使其成为检测水中氟离子含量的重要方法。
该方法还可以进一步改进，加强方法的快速性和灵敏度，以适应不同领域的需求。
个人观点和理解：双波长系数倍率氟试剂分光光度法作为一种常用的氟离子测定方法，具有简便、准确和灵敏的特点。
总蛋白的六种检测方法
总蛋白的六种检测方法（一）凯氏定氮法将血清与强酸一起加热消化，使血清中的含氮化合物转化为铵盐，再加碱使铵盐成为氨进经蒸馏分离出来，最后用酸滴定测定氮量，按每克氨相当于6.25g蛋白质计算蛋白质的浓度。
应用历史较久，结果较准确，是蛋白质测定的参考方法，但操作复杂，影响因素较多，且不少蛋白质的含氮量并非16%，不适用于日常工作，目前多用于标准蛋白的标定及校正其它的常规方法。
（二）双缩脲法蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性条件下与Cu2+络合成紫红色复合物，产生的颜色强度在一定范围内与蛋白质含量成正比。
此反应和二分子尿素缩合后的产物双缩脲（H2N-CO-NH-CO-NH2）与碱性铜溶液作用形成紫红色的反应相似，故称为双缩脲反应。
几分子中含有两个甲酰胺基(-CO-NH2)的化合物都能出现此反应。
因至少含2个-CONH-基团才能与Cu2+络合，所以氨基酸和二肽无此反应。
体液中小分子肽含量极低，故血浆中除蛋白质外几乎不存在可与双缩脲试剂显色的物质，且各种蛋白质显色程度基本相同。
此法简便、准确、重复性好，在10-120g／L。
浓度范围内呈良好的线性关系，批内CV值<2％，但灵敏度较其它方法稍差，是目前临床上最常规的方法。
（三）酚试剂法蛋白质分子中的酪氨酸残基和色氨酸残基能够和酚试剂中的磷钨酸-磷钼酸反应生成蓝色化合物。
Lowry改良法在酚试剂中加入Cu2+，提高了呈色的灵敏度，其中75％呈色靠铜离子产生。
Lowry改良法的灵敏度为双缩脲法的100倍左右。
由于各种蛋白质中酪氨酸和色氨酸的比例不同，如白蛋白含色氨酸为0.2％，而在一些球蛋白中色氨酸含量高达2％~3％，因此使用本法测定纯粹的、单一的蛋白质较合适。
此法灵敏度较高，为10~60ug／ml，因而适用于测定蛋白质含量较少的标本(如脑脊液)，但试剂反应易受还原性化合物糖类、酚类及多种药物如水杨酸、氯丙嗪和某些磺胺药的干扰。
（四）紫外分光光度法蛋白质分子内的色氨酸、酪氨酸等芳香族氨基酸可使蛋白质溶液在280nm波长处有一吸收峰，依此性质可用于蛋白质定量。
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典型实验教学案例简介
案例x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量
药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。
紫外分光光度法以其准确度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。
紫外法测定含量时，常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长，以提高检测的灵敏度。
当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。
双波长分光光度法作为计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效手段。
本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。
一、实验目的
1．掌握双波长分光光度法的测定原理。
2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。
二、实验原理
当吸收光谱重叠的a、b两组分共存时，若要消除a组分的干扰测定b组分，可在a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的λ1和λ2，测定混合物的吸光度差值。
然后根据ΔA值计算b的含量。
SMZ在257nm波长处有最大吸收，TMP在此波长吸收最小并在304nm波长附近有一等吸收点，故选定257nm为SMZ的测定波长（图1），在304nm波长附近选择参比波长。
TMP在239nm波长处有较大吸收，此波长又是SMZ的最小吸收峰，并在295nm波长附近有一等吸收点，故选定239nm为测定波长（图2），并规定在此波长附近选择供测定的参比波长。
由于参比波长对测定影响较大，故采用对照品溶液来确定。
此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。
三、仪器与试剂
1.主要仪器：紫外-可见分光光度计；100mL 容量瓶
2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品；0.4%氢氧化钠溶液；0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾
四、实验步骤
1．磺胺甲噁唑的含量测定
（1）平均片重测定：10片，精密称定。
（2）供试品溶液配制：
图2 TMP 紫外吸收图谱
1. TMP(5.0μg/ml);
2.SMZ(25.0μg/ml);
3. SMZ+TMP;
4. 辅料
图l SMZ 紫外吸收图谱
1. TMP(0.2μg/ml);
2.SMZ(10.0μg/ml);
3. SMZ+TMP;
4. 辅料
精密称取片粉
(约50mg SMZ, 10mg TMP)
片剂 乙醇
溶解、定容
过滤 研磨
100m
（3）对照品溶液配制
（3）取对照品溶液（2）的稀释液，以257nm 为测定波长（λ2），在304nm 波长附近（每间隔0.5nm ）选择等吸收点波长为参比波长（λ1），要求ΔA= A λ2
（2）
－A λ1（2）= 0，再在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶
液（1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。
2．甲氧苄啶的含量测定
（1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液(1)、(2)各5.00mL ，分别置于100mL 容量瓶中，各加HCl-KCl 溶液（0.1mol/LHCl 75mL + 6.9gKCl ，加水至1000mL ），稀释至刻度，摇匀。
（2）参比波长选定：取对照液(1)的稀释液，以239nm 为测定波长(λ2)，在295nm 附近（每间隔0.2nm ）选择等吸收点波长为参比波长(λ1) ，使ΔA=A λ2（1）－A λ1（1）= 0。
（3）双波长测定：在λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶液（2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ΔA ），计算，即得。
3．结果计算
100⨯⨯⨯⨯⨯∆∆标示量
平均片重被测药物标示量％＝W D Cs A A s
u
式中ΔA u 为供试液的ΔA 值，ΔA s 为对照液的ΔA 值，C s 为对照液浓度（mg/mL ），D 为稀释倍数，W 为取样量。
五、注意事项
乙醇
100mL
精称 105 ℃干至恒重
10mg TMP 对照品
50mg SMZ 对照品
乙醇
定容
定容 对照液(1) 对照液(2) 2.00ml
L
0.4%NaOH
100mL
2.00ml L
0.4%NaOH
1.测定之前应先检查仪器波长是否准确。
2.仔细寻找等吸收点波长
3.注意供试品溶液和对照品溶液的准确配制
六、思考题
1．双波长分光光度法是如何消除干扰的？
2．应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长？。