水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞体外抑制作用研究

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水蛭水煎液抗栓作用机制的体外实验研究_朱正光

糖尿病的治疗,目前还缺少特效药,饮食治疗仍是重要措施之一。

本实验表明:甲壳低聚糖具有降血糖、促进双歧杆菌等有益菌增殖的作用。

甲壳低聚糖具有爽口的甜味、良好的水溶性、无免疫原性、可在生物体内降解等特点[9],可以作为糖尿病患者的可食甜味添加剂应用于饮料食品中,可能在治疗糖尿病及调整肠道菌群方面具有一定应用前景。

参考文献[1] Shibata Y,Fos ter LA,Metz ger WJ,et al .Alveolar macrophagepri ming by intravenous admi nistrati on of chi tin particles,polymers of N -acety-l D -glucosami ne,i n mice [J ].Infec t Immun,1997,65(5):1734~1741.[2] Torz sas TL,Kendall CW,Suganoo M ,et al .The influence of high andlow molecular weight chi tos an on colonic cell proliferation and aberrant crypt foci development in CF1mice [J].Food Chem Toxicol,1996,34(1):73~77.[3] O rmrod DJ,Hol mes CC,M iller TE.Dietary chitosan inhi bitshypercholes terolaemia and atherogenesis i n the apolipoprotei n E -defici ent mouse model of atherosclerosis [J].Atherosclerosis,1998,138(2):329~334.[4] Tarsi R,Corbi n B,Pruzzo C,et al .Effect of l ow -molecular -weight chitosans on the adhesive properties of oral streptococci[J ].Oral M icrobiol Immunol,1998,13(4):217~224.[5]Tsai GJ,Wu ZY,Su WH.Antibacterial activity of achi tooligos accharide mi xture prepared by cellulase digestion of s hri mp c hitosan and its application to milk preservation [J ].J Food Prot,2000,63(6):747~752.[6] 李邦良,高仕瑛,乔新惠,等.甲壳低聚糖的制备和分析[J ].中国生化药物杂志,1999,20(6):292~294.[7] 任林,李邦良,高仕瑛,等.甲壳低聚糖对抗生素脱污染小鼠肠道菌群的影响[J].实用预防医学,2001,8(1):21~22.[8] 马淑霞,杨景云,施忠凯,等.黄芪复方制剂对实验性糖尿病大鼠及肠道菌群的影响[J].中国微生态学杂志,2000,12(2):69.[9] Kas HS.Chitosan:properties,preparati ons and application tomicroparticulate systems [J].J M icroencapsul,1997,14(6):689~711.水蛭水煎液抗栓作用机制的体外实验研究朱正光,吴曙光,孙燕荣(第一军医大学药物研究所,广东广州 510515)摘要:目的研究水蛭提取液的抗凝和纤溶作用。

水蛭抗肿瘤作用机制研究进展

水蛭抗肿瘤作用机制研究进展中药水蛭具有破血逐瘀消癥之功，一直以来用于治疗各种血瘀顽疾。

随着现代药理学研究进展，水蛭在恶性肿瘤临床治疗中广泛应用，其抗肿瘤作用得到了许多临床及实验研究的证实。

本文通过对国内外近年文献的分析、归纳和总结，从抑制肿瘤的生长和增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管生成、抗血小板聚集和抗凝血作用、提高机体免疫力、抗肿瘤多药耐药性几方面归纳了水蛭的抗肿瘤作用机制，并指出目前研究中存在的不足和争议之处，希望能为临床应用及进一步研究提供思路。

标签：水蛭；抗肿瘤；作用机制；综述水蛭是水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman、柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体，主治血瘀经闭、癥瘕积聚、跌打损伤、心腹疼痛等。

现代药理研究表明，水蛭的药用成分主要包括水蛭素、氨基酸、磷脂类化合物、糖脂类化合物、甾醇类及微量元素等，其中水蛭素是其最主要的活性成分[1]。

近年来，水蛭在临床治疗恶性肿瘤中得到广泛应用，兹就其抗肿瘤作用机制综述如下。

1 直接抑制肿瘤生长和增殖肿瘤细胞增殖是肿瘤生长的基础，也是肿瘤侵袭和转移的前提。

水蛭素可以调控肿瘤细胞某些基因表达，使细胞生长的DNA、RNA、蛋白质的合成受到严重障碍，从而抑制肿瘤细胞的生长与增殖。

张氏等[2]进行了“复方水蛭素对小鼠移植瘤组织中p53、Ki67以及VEGF表达的影响”的实验研究，结果复方水蛭素对小鼠移植瘤具有显著的抑制作用，使肿瘤组织Ki67表达降低，从而抑制肿瘤细胞的增殖。

郭氏等[3]以液氮快速冻融法制备水蛭提取物，以常规水提醇沉法水蛭提取物作为对照，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）微量酶反应比色法检测不同浓度的2种水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用，并进行细胞计数。

结果表明，水蛭液氮快速冻融法提取物可体外抑制HepG2细胞的增殖，并呈剂量依赖性。

水蛭药理研究资料搜集册

水蛭功效的药理学研究2009-10-26 20:14水蛭为水蛭科动物蚂蟥、水蛭或柳叶蚂蟥干燥体。

水蛭主要含蛋白质，新鲜水蛭唾液中含有一种抗凝血物质——水蛭素。

水蛭味咸、苦，性平；有小毒。

归肝经。

「药理作用」1.抗血栓形成去头水蛭醇提物对胶原蛋白-肾上腺素诱导的小鼠体内血栓和大鼠动-静脉旁路血栓形成有显著抑制作用，水蛭素对实验性血栓形成有明显的抑制作用。

水蛭素抗血栓作用与抑制血小板聚集、抗凝血、促进纤溶过程有关。

抗血小板聚集水蛭及其制剂，或水蛭唾液，给动物灌胃或注射，均能明显降低血小板表面活性，抑制血小板聚集，也能抑制胶原、ADP、肾上腺素或花生四烯酸等诱导的血小板聚集，降低血小板黏附性。

抗凝水蛭素能选择性抑制凝血酶，抗凝作用强大。

促纤溶水蛭的水提取物能降低纤溶酶原抑制剂（PAI）的活性，使纤溶酶原激活剂（t-PA）的活性提高。

2.对血液流变学的影响水蛭提取物可使血液黏度降低，红细胞电泳时间缩短。

水蛭粉对缺血性中风病人的医学教.育网搜集整理血细胞比容、血浆比黏度、全血比黏度、红细胞电泳时间、纤维蛋白原含量及血沉方程K值，均有明显降低。

3.降血脂水蛭能抑制血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）的升高。

对食饵性高脂血症家兔，水蛭粉预防或治疗给药，均能使血中胆固醇和甘油三酯含量降低，同时使主动脉与冠状动脉病变较对照组减轻，斑块消退明显，可见胶原纤维增生，胆固醇结晶减少。

4.抗肿瘤新鲜水蛭唾液中的抗凝血物质——水蛭素注入实验性肺癌小鼠体内，能防止肿瘤细胞的扩散，对实验性肝癌小鼠也有同样抑制作用。

5.对实验性脑血肿及皮下血肿的影响水蛭能促进血肿吸收，减轻周围脑组织炎症反应及水肿，缓解颅内压升高，改善局部血流循环，保护脑组织免遭坏死，有利于神经功能的恢复。

本药又名蚂蟥。

【性味与功效】味苦、成，性平。

功效：活血破瘀，通经消积。

【传统应用】主治血滞闭经、外伤瘀血、癥瘕积聚等病症。

本药常用于以下传统方剂：①抵当汤、抵当丸(《伤寒论》)：水蛭、虻虫、桃仁、大黄，治疗伤寒蓄血，少腹满痛；②夺命散(《济生方》)：红蛭、大黄、黑牵牛，治疗金疮打损，心腹疼痛，大小便不通。

四味归肝经虫类中药对肝癌HepG_2细胞增殖抑制作用对比研究

第８卷第ｌ６期总第９６期２０１０年癌Ｈ印Ｇ２细胞增殖抑制作用对比研究
孙婧田雪飞湖南中医药大学科技处中医内科学实验室（４１０２０８）
摘要：目的观察并对比分析四味归肝经虫类中药全蝎、蜈蚣、土鳖虫、水蛭水提物对人肝癌ＨｅｐＧ２细胞株增殖抑制作用差别。方法采用液氮冻融法及丙酮沉淀法制备药物，根据回归方程计算半数抑制率（ＩＣ５０），ＭＴＴ法检测各药物对ＨｅｐＧ２细胞的增殖抑制作用。结果全蝎、蜈蚣、水蛭水提物具有显著抑制ＨｅｐＧ２细胞增殖作用，呈明显的量效关系，土鳖虫水提物作用不明显，各药物的ＩＣ５０分别为全蝎７．０２ｍｇ／ｍｌ，
◎ ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２—２７７９．２０１０．１６．１３６
文章编号：１６７２—２７７９（２０１０）一１６—０１６１－０２
ＴｈｅＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＥｆｅｃｔｓｏｆＦｏｕｒＣｈｉｎｅｓｅＨｅｒｂｓｏｆＩｎｓｅｃｔｗｉｔｈＬｉｖｅｒＣｈａｎｎｅｌＴｒｏｐｉｓｍｔｏＨｅｐＧ２ＣｅｌｌＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
制细胞增殖，增殖抑制率随药液浓度增高而增加。以药物浓度的对数为横坐标，以增殖抑制率为纵坐标做半对数拟合直线，求出直线回归方程 ① 全蝎：ｙ＝４．８３６９ｘ＋１６．０５；②
床治疗具有重要意义。虫类中药其性走攻窜，有活（破）血祛蜈蚣：ｙ＝９．６０７７ｘ＋１４．９７：③ 土鳖虫：ｙ＝０．１１７ｌｘ．０．７７；④水

动物类中药抗癌机制研究

ʌ述评ɔ动物类中药抗癌机制研究❋吴㊀越1,李贤煜2ә,杨洪军3(1.南京中医药大学药学院,南京㊀210000;2.中国中医科学院医学实验中心,中医药防治重大疾病北京市重点实验室,北京㊀100700;3.中国中医科学院中药研究所,北京㊀100700)㊀㊀摘要:恶性肿瘤是严重威胁人类生命的疾病,动物药是中药抗肿瘤复方中的常用药物㊂目前对于动物类中药的抗肿瘤作用研究已取得初步成果,但还存在着一些缺陷,诸如有效成分不明确,作用机制模糊,多靶点多层次的抗肿瘤作用机制研究难度大,毒性损伤难以预估,研究手段较为单一等㊂因此,理想的研究手段需参考生物药的基础研究,运用多组学方法整合分析策略,构建基于动物药肽库的高通量药物筛选模型,并建立一套完整的分析体系对动物类中药进行科学评价㊂本文述评近年来动物类中药的抗癌作用机制及其研究方法的相关进展,对已有研究内容进行总结,有助于拓展动物类中药抗癌研究的新方法与新思路㊂㊀㊀关键词:中药;动物药;抗癌药物㊀㊀中图分类号:R282.74㊀㊀文献标识码:A㊀㊀文章编号:1006-3250(2021)04-0671-07Advances in Anti-cancer Mechanisms of Animal Traditional Chinese MedicineWU-Yue 1,LI Xian-yu 2ә,YANG Hong-jun 3(1.School of Pharmacy,Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210000,China;2.Beijing Key Laboratory of Traditional Chinese Medicine Basic Research on Prevention and Treatment for Major Diseases,Experimental Research Center,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100700,China;3.Institute of Chinese Materia Medica,China Academy of Chinese Medical Sciences,Beijing 100700,China)㊀㊀Abstract :Malignant tumor is a disease which threats human life seriously.In traditional Chinese medicine compound ,animal drugs are commonly used in treating tumor.Preliminary results have been achieved in researching in antitumor effect of animal traditional Chinese medicine ,but defects remain such as :The effective ingredients are unclear ;The mechanism of action is vague ;It is difficult to study the antitumor effect of multi-target on a multi-level ;Toxic damage is unpredictable ;The research method is single.In that way ,we should use the methods of histology combining with the integrated analysis strategy to build a high-throughput drug screening model based on animal drug peptide library and establish a sound evaluation system for scientific evaluation of animal traditional Chinese medicine referring to the research methods of Biopharmaceutics.Here ,we reviews the recent advances in anti-cancer mechanism and research methods of animal traditional Chinese medicine ,and summarizes the existing research contents ,which will help us to make new ideas for the study of anti-cancer mechanism of animal traditional Chinese medicine.㊀㊀Key words :Traditional Chinese medicine ;Animal medicine ;Anti-cancer drugs❋基金项目:中央公益性研究机构基础研究经费中国中医科学院自主课题(ZZ2018010)-基于质谱成像技术的丹红方抗脑缺血作用的原位特征小分子代谢物分析;中国中医科学院优青项目(ZZ13-YQ-080)-基于非标靶向二维(2D)㊁三维(3D)质谱成像技术建立活血方抗脑缺血作用的药效评价系统作者简介:吴㊀越(1998-),男,江苏南京人,在读本科,从事中药抗肿瘤的临床与研究㊂ә通讯作者:李贤煜(1984-),男,山西昔阳人,副研究员,从事生物质谱㊁中药分子药理相关研究,Tel :************,E-mail :stu_xianyuli@ ㊂㊀㊀动物类中药的应用在我国有着悠久的历史,战国时期‘山海经“[1]便有关于麝㊁鹿㊁犀㊁熊㊁牛等药用动物的记载㊂‘本草纲目“共收载药物1892种,其中动物药461种[2]㊂清㊃唐容川在‘本草问答“中论述动物之功利,优甚于植物,以其动物之本性能行,而且具有攻性 [3],指出了动物药的优越性㊂据报道,中药材中抗癌作用确切的动物药有蜈蚣㊁全蝎㊁蚕蛹㊁蛇毒㊁蟾酥㊁土鳖虫㊁蛤壳㊁水蛭㊁牡蛎㊁蛤蚧㊁斑蝥㊁地龙等㊂对其进行梳理,有助于拓宽对动物药研究的新思路和新策略㊂本文将从动物类中药起效成分㊁抑癌机制方面进行阐述,并对其进行展望㊂1㊀起效成分动物类中药的成分主要包括蛋白质(酶)类㊁多肽类㊁生物碱类㊁黄酮类和甾体化合物类[4-5],且多数为复杂混合物㊂从动物体内分离抗癌特异的活性物质是研究动物药的策略之一[6]㊂由于蛋白质㊁多肽等生物大分子结构复杂㊁分离获取较困难,于是科学家们将注意力转向了动物药小分子活性物质的分离与筛选㊂目前,仅有小部分动物药专属成分被确切分离到,如蝎毒[10]㊁蚕蛹多糖㊁华蟾素等[24](见表1)㊂1.1㊀蛋白质及多肽组分目前对于动物药中活性蛋白质和肽段的研究已经成为一个新的研究热点,如文蛤多肽㊁蜈蚣抗肿瘤蛋白等均有强烈的抗肿瘤活性,广泛应用于临床[39]㊂表1　起效成分归纳和分类比较药物起效成分参考文献全蝎蝎毒㊁三甲胺㊁核苷㊁蝎毒多肽㊁有机酸㊁酯类㊁及少量游离氨基酸[7-10]蜈蚣蜈蚣抗肿瘤蛋白㊁生物碱[11-14]蛤壳多肽[15-16]牡蛎牡蛎天然活性肽㊁牡蛎多糖[17-20]蚕蛹蚕蛹多糖㊁蛋白水解物[21-22]蟾蜍华蟾素[23-26]水蛭水蛭素[27-31]蛤蚧壁虎粗多肽[32-34]土鳖虫地鳖纤溶活性蛋白等抗肿瘤蛋白[35-38]㊀㊀蛤壳有清热利湿㊁化痰散结的功效,对肝癌㊁肺癌㊁胃癌㊁甲状腺肿瘤等有明显的抑制作用[16]㊂Wang等[15]通过研究文蛤中纯化的抗肿瘤多肽即文蛤多肽(Mere15),发现其能抑制A549细胞生长,抑制率呈剂量和时间依赖性,且主要通过促凋亡与抗转移途径来抑制肿瘤生长,具有开发为治疗人肺癌多靶点治疗剂的潜力㊂蜈蚣具有镇痛㊁中枢抑制㊁调节免疫㊁抗肿瘤等作用㊂Zhou等[12]发现,蜈蚣的醚提物和醇提物均可在小鼠体内抑制宫颈肿瘤的生长㊂Ma等[14]通过研究蜈蚣的乙醇提取物发现,其可诱导肿瘤细胞凋亡,可作为人类癌症潜在的治疗药物之一㊂张丽等[11]从蜈蚣中分离纯化得到较纯的蜈蚣抗肿瘤蛋白(CGⅠ),对人宫颈癌细胞Hela和人胃癌细胞BGC-823有很强的体外抑制作用㊂Zhan等[37]通过研究中华土鳖虫乙醇提取物(alcohol extracts of the centipede scolopendra subspinipes mutilans,AECS)发现,其可通过调节MAPK信号通路和相关转移因子发挥抗乳腺癌细胞增殖侵袭作用,可成为干预乳腺癌的潜在药物㊂Dai 等[38]研究了土鳖虫提取物对肺癌细胞系A549细胞增殖的抑制作用,发现土鳖虫70%乙醇提取物有效,且可通过抑制血管生成从而抑制癌细胞生长㊂此外,王凤霞等[36]从土鳖虫新鲜雌虫体中分离纯化得到分子量约为72kDa的抗肿瘤活性蛋白成分,并命名为ESP72,发现其对人A549肺癌细胞也有抑制作用㊂全蝎中含有蝎毒㊁核苷等活性成分,具有抗肿瘤功效㊂Emanuelly等[8]研究了蝎毒对宫颈癌细胞系的影响,发现其对HeLa细胞有细胞毒性作用㊂Wang等[40]发现,蝎毒多肽提取物可诱导体外培养的良性胶质瘤U251-MG细胞凋亡㊂水蛭是破血逐瘀之良药㊂Lu等[29]发现,重组水蛭素能剂量依赖性地抑制HepG2喉癌细胞的黏附㊁迁移和侵袭且呈剂量依赖性㊂Guo等[31]发现,水蛭素能显著抑制凝血酶的活性,并抑制肿瘤的生长与转移㊂李先建等[27]发现,水蛭素能抑制肝癌HepG2细胞株的增殖㊁凋亡㊁迁移及侵袭㊂牟忠祥等[41]发现,水蛭素活性因子对S180肿瘤和鸡胚绒毛尿囊(CAM)新生血管具有较强的抑制作用㊂牡蛎,也是历版中国药典收载的中医临床常用药㊂Zhong Ming等[18]研究了低分子量牡蛎多糖(low molecular weight oyster polysaccharide,LMW-OPS),发现其能显著抑制肿瘤生长㊂Sakaguchi Kaito等[19]发现,牡蛎30%~50%乙醇提取物(ethanol precipitate of oyster extract,EPOE50)可增强NK细胞活性,同时EPOE50可能通过NK细胞活化抑制小鼠肿瘤的生长㊂Wang等[20]研究利用芽孢杆菌蛋白酶生产的富含寡肽牡蛎水解物,发现牡蛎水解物对小鼠产生了很强的免疫刺激作用,这可能激发其抗肿瘤活性㊂蛤蚧即大壁虎,多项研究表明壁虎具有良好的抗肿瘤功能㊂Huang等[33]检测壁虎水提物对人肝癌细胞Huh7的影响发现,壁虎水提取物可抑制Huh7肝癌细胞生长并呈剂量与时间相关性㊂Kim 等[34]通过研究壁虎中蛋白成分在人膀胱癌细胞5637中的抗肿瘤作用及其细胞机制,发现壁虎蛋白可诱导膀胱癌细胞凋亡,而对正常细胞没有任何细胞毒性作用㊂蚕蛹作为一种常用的动物类中药,其应用有着悠久的历史㊂Li等[22]发现,蚕蛹蛋白水解物(silkworm pupa protein hydrolysate,SPPH)能特异性地抑制人胃癌细胞Sgc-7901的增殖并呈剂量与时间依赖性㊂综上,蛋白质和多肽成分是动物类中药的独有组分,或许是其疗效区别于植物类中药的原因㊂但其在进行蛋白质纯化的过程中,部分试剂与操作会促使蛋白质的空间结构丢失,进而失去生物活性,那么究竟是否这些蛋白质或多肽发挥抑癌作用,还是仅有部分特殊位点发挥功能,亦或是其他成分?值得进一步研究与思考㊂1.2㊀小分子化合物组分中药中的小分子化合物组分主要包括甾体类㊁生物碱类㊁黄酮类㊁多糖类㊁砧烯类㊁脂肪族类㊁芳香族类㊂动物药中小分子类化合物往往具有成分明确㊁药效显著㊁作用机制清晰等特点㊂全蝎中的蝎毒中含有有机酸㊁酯类及少量游离氨基酸㊂迄今为止,已经从蝎毒中分离出数十种蝎毒素单体[7]㊂蝎毒可以特异性阻滞钾离子通道,其受体已被定位㊂氯离子通道在细胞膜信号传导中具有重要作用,而蝎毒中提取的氯毒素(Chlorotoxin)是氯离子通道的特异性阻断剂[42]㊂蚕蛹中的蚕蛹多糖具有多种药理作用[21]㊂王什等[43]检测蚕蛹中的多糖组分,发现随着多糖提取物浓度增加,人肝癌细胞SMMC-7721的Bax㊁p53蛋白表达均逐渐升高,而细胞Bcl-2蛋白的表达逐渐降低,得出蚕蛹多糖提取物具有一定抗肝癌活性的结论㊂华蟾素是中华大蟾蜍的有效提取物,临床应用较为广泛,已有研究表明华蟾素具有明确的抗肿瘤作用[23]㊂Cheng等[24]对华蟾素及其主要活性成分蟾蜍灵进行了体外㊁体内和临床研究,发现其可以通过抗增殖㊁诱导凋亡㊁抗转移㊁抗血管生成㊁上皮-间质转化抑制㊁抗炎㊁Na+/K+-ATP酶活性靶向㊁类固醇受体共激活子家族抑制等多种途径抑制肿瘤的侵袭与迁移㊂Xiong等[25]发现,华蟾素可诱导人SGC-7901肿瘤细胞的凋亡㊂Li等[26]也发现,华蟾素可以通过细胞凋亡等多种途径发挥其抗肿瘤作用㊂小分子类化合物有着其独特的优势,由于其清晰的化学结构可对其进行化学修饰与减毒增效,如去甲斑蝥素的合成大大降低了其毒性[47]㊂进一步寻找动物类中药中的小分子化合物,有助于进一步阐明动物药的抗肿瘤机制与作用靶点㊂2　抑癌机制概述动物类中药的成分复杂,其抑癌机制往往是多层次多靶点的㊂如蜈蚣乙醚提取物既可以诱导肿瘤细胞凋亡,又可以抑制癌组织新血管的生成[44-45]㊂现将目前动物类中药较为清晰的抑癌机制进行总结(表2)2.1㊀诱导肿瘤细胞凋亡细胞凋亡是一种细胞程序性死亡的形式,指机体有序有效地去除受损细胞,细胞凋亡在癌症的发生发展中具有重要作用㊂目前临床使用的大多数抗癌药物主要利用完整的凋亡信号通路来触发癌症细胞凋亡㊂因此,总结动物类中药组分对细胞凋亡的影响有广泛的生理和病理意义[51]㊂Huang[33]发现,壁虎水提物能通过阻止LRP6与Frizzled6复合物的形成而抑制Wnt信号通路,从而抑制肝癌细胞的增殖㊁肿瘤球的形成及肿瘤干细胞的比例㊂Kim等[34]发现,壁虎蛋白可通过抑制Akt途径并激活内在Caspase途径,导致膀胱癌细胞的凋亡㊂郭梦丽等[32]发现,壁虎粗多肽(gecko crude peptides,GCPs)可通过下调VEGF-C(血管内皮生长因子C)㊁CXCR4(趋化因子受体4)㊁p-ERK1/2(细胞外调节蛋白激酶)㊁p-p38MAPK(磷酸化P38丝裂原活化蛋白酶)及p-Akt的表达水平而抑制HepG2(赫曼肝癌细胞)细胞的增殖与迁移,并诱导其凋亡㊂Zhou等[12]发现,蜈蚣提取物可在小鼠体内抑制宫颈肿瘤的生长,可能是通过Bax和Caspase-3介导的线粒体信号传导途径诱导肿瘤组织的凋亡㊂Ding等[13]发现,蜈蚣提取物可通过阻止细胞周期G0-G1期,激活Caspase9/3,下调bcl-2/bax蛋白比率以诱导肿瘤细胞凋亡㊂Ma等[14]发现,蜈蚣提取物可通过降低Bcl-2表达水平,升高Bak㊁Bax和Bad 表达水平诱导A375细胞凋亡㊂孙婧[52]等研究发现,蜈蚣提取物具有显著抑制人肝癌HepG2细胞株增殖的作用且呈明显的量效关系㊂Oliveira等[8]通过流式细胞术发现,蝎毒可诱导HeLa细胞的凋亡㊂Kampo Sylvanus等[9]通过研究东亚钳蝎抗肿瘤镇痛肽(buthus martensii karsch antitumor-analgesic peptide,BMK AGAP)对乳腺癌细胞干与上皮间质转化的影响,发现BMK AGAP通过NFκB(核因子κB)和Wnt/β-连环蛋白信号通路下调Ptx3的表达,抑制乳腺癌细胞的迁移和侵袭㊂Moradi等[10]发现,通过蝎毒治疗后的结肠癌细胞中,Bax(BCL2相关的X蛋白质)㊁Casp3(胱天蛋白酶3)和Trp53(细胞肿瘤抗原p53)显著过表达,肿瘤组织Bcl-2mRNA水平下降,说明其对肠癌胞具有特异性抑制作用㊂贾莉等[46]采用东亚钳蝎毒(buthus martensii karsch,BMK)作为干预手段,发现其对Raji细胞具有生长抑制作用与诱导凋亡作用㊂Li等[22]发现,SPPH能特异性地抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖,并以剂量与时间依赖的方式引起其异常形态特征㊂流式细胞术显示,SPPH能抑制S期细胞周期㊂此外,SPPH还能引起活性氧(ROS)的积累和线粒体膜电位的去极化,抑制Bcl-2表达,促进Bax表达,最终导致细胞凋亡㊂王什等[43]以蚕蛹中的多糖组分为研究对象,利用CCK-8法检测蚕蛹多糖提取物对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制情况㊂Western blot检测细胞凋亡相关蛋白(Bax㊁Bcl-2和p53)的表达,结果表明蚕蛹多糖提取物对SMMC-7721细胞的增殖具有抑制作用且呈时间和浓度依赖性(P<0.01)㊂随着多糖提取物浓度增大,细胞Bax㊁p53蛋白的表达逐渐升高,Bcl-2蛋白的表达逐渐降低㊂Wang等[15]通过研究表明,从文蛤中提取出的新型抗肿瘤多肽(Mere15),可以通过促凋亡和抗转移途径抑制肿瘤生长㊂范成成等[32]发现,文蛤多肽处理后的肝癌细胞HepG2和胆管癌细胞QBC939的外形变化明显,并出现凋亡小体㊂通过检测细胞周期,经处理的肝癌细胞出现明显的凋亡峰,表明文蛤多肽可以诱导癌细胞凋亡㊂Wang等[16]发现,文蛤多肽作用后,肿瘤细胞G2/M期细胞比例逐渐升高,微管蛋白聚合受到抑制,表明文蛤多肽具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,其作用机制与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞有关㊂表2　动物类中药抗肿瘤作用机制概述药物作用环节作用靶点参考文献蛤蚧诱导细胞凋亡等VEGF-Cˌ㊁CXCR4ˌ㊁p-ERK1/2ˌ㊁p-p38MAPKˌ㊁p-Aktˌ㊁caspaseʏ㊁抑制Wnt 信号通路[32-34]蜈蚣诱导细胞凋亡㊁抑制肿瘤新血管生成等Baxʏ㊁Bakʏ㊁BadʏCaspase3ʏ,VEGFʏ㊁Bcl-2ˌ㊁细胞被阻滞在G0-G1期[12-14][45]全蝎诱导细胞凋亡等Bcl-2ˌ㊁ptx3ˌ㊁Baxˌ㊁Caspase3ʏ[8-10][46]蚕蛹诱导细胞凋亡等Baxʏ㊁p53ʏ㊁Bcl-2ˌ㊁抑制S 期细胞周期[43-44]蛤壳诱导细胞凋亡等Bcl-2ˌ[15-16]水蛭诱导细胞凋亡㊁抑制肿瘤新血管生成等VEGFˌ㊁Bcl-2ˌ㊁Badʏ[27-31]斑蝥诱导细胞凋亡等TNF-αʏ,Baxʏ,VEGFˌ㊁Bcl-2ˌ㊁MMP-2ˌ和MMP-9ˌ[47][53]蚯蚓诱导细胞凋亡等细胞被阻滞在G0-G1期[48]牡蛎诱导细胞凋亡等p16ʏ,c-mycʏ,Fasʏ,p21WAF1/CIP1ʏ,增强NK 细胞的活性p53ˌ,bcl-2ˌ[17-20]蛇毒抑制肿瘤新血管生成抑制碱性成维细胞生长因子诱导的体外血管生成,P53ˌ[49-50]土鳖虫抑制肿瘤新血管生成VEGFˌ,bFGFˌ[37-38]㊀㊀Lu 等[29]发现,重组水蛭素通过调控Bcl-2和促凋亡蛋白Bad 的方式,显著抑制HepG2细胞的生存力并诱导细胞凋亡㊂李先建等[27]将含不同浓度水蛭素的培养液作用于肝癌HepG2细胞,采用MTT 法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞增殖的影响,流式细胞法检测水蛭素对肝癌HepG2细胞凋亡的影响,发现HepG2细胞凋亡率㊁侵袭及迁移个数随水蛭素浓度增加而增加并呈浓度依赖性(P <0.05)㊂VEGF 蛋白的表达量随水蛭素浓度增加而明显下调(P <0.05),得出水蛭素能诱导肝癌HepG2细胞凋亡的结论㊂Chi 等[47]以羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan ,CMCS )和去甲斑蝥素(norcantharidin ,NCTD )为原料,通过酰胺化反应制备了新型聚合物药物(Novel polymer-drug conjugates ,CNC )㊂CNC 偶联物对胃腺癌细胞SGC-7901的增殖具有显著的抑制作用,并能抑制人脐静脉内皮细胞的迁移和成管㊂此外检测表明,与游离NCTD 比较,聚合物更有效地触发sgc-7901细胞凋亡㊂进一步,CNC 在balb /c 裸鼠试验中对sgc-7901胃肿瘤的抑瘤率为59.57%,并显著降低毒性,增强了其体内抗肿瘤效果㊂同时研究发现,CNC 可以通过上调TNF-α和Bax 的表达,下调VEGF ㊁Bcl-2㊁MMP-2和MMP-9的表达,抑制肿瘤转移,诱导肿瘤细胞的凋亡㊂Chen 等[57]采用NCTD 对鼻咽癌细胞系进行处理,显示细胞系中的胱天蛋白酶-3㊁胱天蛋白酶-8㊁胱天蛋白酶-9活化,抗凋亡蛋白Bcl-XL 表达明显降低,促凋亡蛋白Bak 表达增加,表明NCTD 能明显促进鼻咽癌细胞的凋亡㊂Li 等[26]通过使用微阵列数据和计算机分析探讨华蟾素抗肿瘤机制,发现其很可能在MCF-7细胞中以类似咪康唑的方式发挥抗肿瘤作用㊂何道伟等[48]分析了细蚯蚓提取物对Eca-109细胞生长抑制作用及机制,发现在细胞检测中有凋亡细胞出现,且细胞被阻滞在G0-G1期,DNA 合成受阻,使肿瘤细胞受抑制,肿瘤体积缩小㊂Sakaguchi Kaito 等[19]实验结果表明,EPOE50增强NK 细胞活性,抑制肿瘤的生长㊂李鹏等[10]通过研究牡蛎天然活性肽(bioactive peptides of oyster ,BPO )对人胃腺癌BGC-823细胞凋亡的生物学效应,发现BPO-1对胃癌细胞具有显著的诱导凋亡作用㊂诱导癌细胞凋亡是很多动物类中药所共有的抑癌机制㊂诱导癌细胞凋亡的途径有很多,报道最多的有两条:一是通过细胞膜上的死亡受体激活半胱氨酸蛋白酶诱导细胞凋亡;二是通过胞质内线粒体途径释放细胞凋亡因子(ICE ,APaf-1,Bcl-2,Fas /APO-1)激活半胱氨酸蛋白酶诱导细胞凋亡㊂而动物类中药究竟通过哪条途径诱导细胞凋亡的还值得进一步探讨㊂2.2㊀抑制肿瘤新血管生成血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor ,VEGF )是肿瘤血管生成因子(tumor angiogenesis factor ,TAF )重要的调控因子之一㊂肿瘤血管是肿瘤治疗的重要靶位㊂肿瘤细胞分泌高水平的促血管生成因子,有助于形成异常的血管网络,通过恢复肿瘤灌注和氧合使血管正常化,可以限制肿瘤细胞的侵袭性,提高抗癌治疗的效果[54-55]㊂刘细平等[45]采用裸鼠Bel-7404人异位肝癌移植模型,以蜈蚣提取液灌胃31d 后,用免疫组化法对肿瘤组织标本进行血管内皮细胞生长因子VEGF 和促血管生成素2(Angiopoietin 2,Ang-2)的检测发现,对照组VEGF 与Ang-2的染色细胞数㊁染色强度及OD 值均较治疗组多而强,差异均有统计学意义(P <0.01),说明蜈蚣提取液能抑制裸鼠Bel-7404移植瘤的生长,且与抑制肿瘤血管生成有关㊂Lu 等[29]发现,重组水蛭素可以显著下调黏附与血管生成相关蛋白Fak 和VEGF 的表达,抑制肿瘤新血管生成㊂牟忠祥等[41]将水蛭素活性因子含药载体种植于鸡胚绒毛尿囊膜(chick chorioallantoic membrane ,CAM )中,观察药物抑制新生血管的生长情况,并用计算机分析系统对CAM 进行扫描发现,用药组血管分布稀疏㊁间距增大,含药载体周围血管减少;模型对照组则血管分布密集㊁间距缩小㊁呈放射状排列,说明水蛭素可以抑制新血管的生成㊂大量研究报道,蛇毒组分可抑制血管生成[49]㊂Denise等[50]研究了蛇毒对各种类型癌细胞的抗肿瘤作用㊂从泡桐蛇毒中分离的去整合素样金属蛋白酶(Bothropoidin),对人乳腺癌细胞Mda-mb-231具有抗肿瘤和抗血管生成作用㊂曹付春等[35]通过免疫组织化学法检测地鳖纤溶活性蛋白(eupolyphaga sinensis walker fibrinolytic protein,EFP)对S180和H22荷瘤小鼠肿瘤组织的微血管密度(microvascular density,MVD),细胞培养液中VEGF和碱性成纤维生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的影响发现,EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞㊁肺癌㊁乳腺癌细胞有显著抑制作用㊂ELISA法检测结果表明,EFP含药血清对人脐静脉内皮细胞㊁肺癌㊁乳腺癌细胞的VEGF和bFGF表达均有抑制作用㊂VEGF能刺激肿瘤毛细血管的生长,为肿瘤增殖和播散提供条件,并已发现在多种肿瘤体系中过度表达[55]㊂目前很多动物类中药研究表明,可通过抑制VEGF的表达来抑制肿瘤新血管的生成,可为未来的进一步研究提供启示㊂3　讨论与展望目前对于动物类中药的抗肿瘤作用研究成果主要体现在以下几点㊂一是确定了一些新的有效成分并对其进行修饰㊂如去甲斑蝥素(NCTD)是中药斑蝥中发挥抗癌成分斑蝥素的衍生物,是由斑蝥素去除1㊁2位的2个甲基后人工合成,是具有世界领先地位的,能升高白细胞作用的新型抗肿瘤药物[47];二是找到了一些新的中药抗肿瘤的通路和靶点;三是开辟了一些新的动物类中药研究方法㊂如SPME-GC-MS分析法等,均为动物类中药的研究提供了可行的方法㊂但从现有的研究可以看出,动物类中药抗肿瘤作用研究还存在缺陷,诸如有效成分并不明确㊂动物药的成分复杂,种类繁多,目前的研究大多局限于动物药的溶剂提取物或含药血清体内体外实验中表现出的作用,并没有对其成分进行深入剖析;二是作用机制模糊㊂目前有大量研究报道,很多动物药都是通过诱导细胞凋亡发挥其抑癌作用,但是诱导细胞凋亡是适用于很多疾病治疗的普适性机制(如糖尿病[56]㊁肾脏病[57]㊁哮喘等[58]),并不是动物类中药发挥其抑癌作用的特有机制㊂且想要阐明动物类中药抑癌机制只从细胞凋亡层面论述显然不够㊂细胞凋亡作为一种细胞表象 ,其背后的作用机制和作用靶点需要进一步探讨;三是中药具有多靶点多层次的抗肿瘤作用,为后续的研究增加了难度;四是中药中的动物药虽然抗癌作用往往超出植物药,但是其毒性会对人体造成损伤,如蜈蚣㊁蛇毒等会造成毒性反应,故减毒增效是动物类中药的潜在研究方向;五是研究手段单一㊂目前对于动物类中药的研究手段主要采用MTT技术㊁CCK-8技术㊁细胞流式实验技术㊁Western Blot技术㊁划痕愈合技术等,用以检测动物类中药对癌细胞侵袭㊁迁移作用的影响,但并没有从生物整体水平和分子层面进行深度剖析,因此整合分析很有必要㊂动物类中药具有成分复杂性㊁物质不稳定性㊁作用环节多样性等特点㊂近年来,运用组学策略从分子生物学水平研究疾病状态下基因㊁蛋白质㊁代谢产物等变化,找出药物的作用通路与作用靶点,在中医药的研究中已被广泛使用㊂运用组学的方法对动物类中药进行研究,运用整合分析策略,将可能为研究动物类中药的抗肿瘤机制开辟新思路㊂此外,还应充分参考生物药的研究手段,建立一套适用于动物类中药的研究方法㊂首先,应确定动物类中药的物质基础,充分利用技术的进步,将低温柱层析等先进分离手段应用在动物药的提取分离中㊂其次,应把目光聚焦到动物类中药中的肽类物质上㊂大量研究表明,某些特定的动物肽类物质是具有强烈生物活性的[59],是动物类中药的重点起效成分㊂因此构建基于动物药肽库的高通量药物筛选模型,并确立一套健全的评价体系,将更加有助于动物类中药的开发与应用,为临床用药奠定基础㊂参考文献:[1]㊀冉俐,王雪颖,庄淑涵,等.‘山海经“中医药成就管窥[J].中医药导报,2018,24(14):7-10.[2]㊀姜岚,孔欠文,黄冰沁,等.‘本草纲目“药食两用的动物药再整理[J].中药材,2019,42(4):945-948.[3]㊀唐容川.本草问答[M].北京:中国中医药出版社,2019:43-44.[4]㊀ZHENG X,WU F,LIN X,et al.Developments in drug deliveryof bioactive alkaloids derived from traditional Chinese medicine[J].Drug Delivery,2018,25(1):398-416.[5]㊀YING J,ZHANG M,QIU X,et al.The potential of herbmedicines in the treatment of esophageal cancer[J].Biomedicine&Pharmacotherapy,2018,103(1):381-390.[6]㊀CHATTERJEE B.Animal Venoms have Potential to Treat Cancer[J].Current Topics in Medicinal Chemistry,2018,18(30):2555-2566.[7]㊀施小妹,吴发玲,李响,等.蝎毒抗肿瘤作用机制研究新进展[J].西北药学杂志,2010,25(3):235-237. [8]㊀BERNARDES-OLIVEIRA E,FARIAS K J S,GOMES D L,etal.Tityus serrulatus Scorpion Venom Induces Apoptosis inCervical Cancer Cell Lines[J].Evidence Based Complementary&Alternative Medicine,2019,2019(11):1-8.[9]㊀KAMPO S,AHMMED B,ZHOU T,et al.Scorpion VenomAnalgesic Peptide,BmK AGAP Inhibits Stemness,andepithelial-mesenchymal transition by down-regulating ptx3inbreast cancer[J].Frontiers in Oncology,2019,2019(1)9-21.[10]㊀MORADI M,NAJAFI R,AMINI R,et al.Remarkable apoptoticpathway of Hemiscorpius lepturus scorpion venom on CT26cellline[J].Cell Biology&Toxicology,2019,35(4):373-385.[11]㊀郭友立,谭晓梅.动物药药理研究概况[J].中药药理与临床,2008,24(2):112-115.[12]㊀ZHOU Y Q,HAN L,LIU Z Q,et al.Effect of centipede extracton cervical tumor of mice and its mechanism[J].Journal of。

（医学专业论文）中药水蛭的提取工艺、质量控制及药理研究

兰州大学硕士学位论文中文摘要本试验对传统活血化瘀中药水蛭的抗凝血活性部位进行了提取、分离和纯化。

建立了水蛭提取液蛋白含量测定及抗凝活性测定的质控方法。

以水蛭提取液中蛋白质含量及活化部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）为指标分别考察药材在不同溶媒、温度、提取时间、溶媒倍量及提取次数条件下的提取效果。

在此基础上对水蛭提取物的抗结石、抗纤维化的药理作用进行了初步研究。

初步建立了在６０＂（２条件下，采用ｌＯ倍于药材重量的４％ＮａＣｌ水溶液分３次提取药材６ｈ（３ｈ＋２ｈ＋ｌｈ），作为干品宽体金线蛭的提取工艺。

采用１０倍于药材重量的４％ＮａＣｌ水溶液，在３０℃条件下分３次提取药材６ｈ（３ｈ＋２ｈ＋ｌｈ），作为活体蛭的最佳提取工艺。

本试验考察了水蛭提取物对抗酸损伤（Ｏ．１ＭＨＣＬ）致大鼠膀胱粘膜上草酸钙沉积的作用。

发现与肝素类似，水蛭提取物可覆着在已受化学损伤的膀胱粘膜上，抑制草酸钙在膀胱粘膜上的粘附作用。

其抗草酸钙沉积作用优于肝素。

水蛭提取液也可溶解部分白内障皮质变性蛋白，但纤溶活性很弱，不随时间而延长。

其纤溶活性仍需通过进一步药理试验加以证明。

关键词；水蛭；提取工艺；质量控制｛抗结石；抗纤维化兰州大学硕士学位论文ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｓｅｇｍｅｎｔｏｆｔｈｅＣｈｉｎｅｓｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｄｉｃｉｎｅＬｅｅｃｈｈａｄｂｅｅｎｅｘｔｒａｃｔｅｄａｎｄｉｓｏｌａｔｅｄ．ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｓｏｆｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｗｉｔｈｐｒｏｔｅｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎａｎｄａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｗｍａｔｅｒｉａｌｗｅｒｅａｌＳＯｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅｆａｃｔｏｒｓｓｕｃｈａｓｓｏｌｖｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ｔｉｍｅ，ｔｈｅｆｏｌｄｏｆｓｏｌｖｅｎｔａｎｄｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ，ｗｈｉｃｈｃｏｕｌｄａｆｆｅｃｔｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｏｆｔｈｅＷｈｉｔｍａｎｉａＰｉｇｍＷｈｉｎｌｓ．ｎｈａｄｂｅｅｎｈａｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｄｕｒｅｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄ谢ｔｈＡｃｔｉｖａｔｅｄＰａｒｔｉａｌＴｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎＴｉｍｅ（ＡＰＴｌ）ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｒｏｔｅｉｎｉｎｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｌｅｅｃｈ．Ｏｎｔｈｅｂａｓｉｓｏｆａｌｌｔｈｅｗｏｒｋ，ｔｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｆｒｏｍｌｅｅｃｈｔｈａｔＣａｌｌｒｅｓｉｓｔｃａｌｃｕｌｕｓａｎｄｆｉｂｒｏｓｉｓｗｅｒｅｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｅｖａｌｕａｔｅｄ．ＴｈｅｏｐｔｉｍｕｍｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｃｅｓｓｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｏｆｔｈｅｄｒｙＷｈｉｔｍａｎｉａＰｉｇｒａＷｈｌｍＲＩｌｗｅｒｅｆｏｌｌｏｗｅｄａｓ：ａｄｄｉｎｇ１０ｆｏｌｄｏｆ４％ＮａＣｌｓｏｌｖｅｎｔ，ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｆｏｒ６ｈｕｎｄｅｒ６０。

水蛭素活性因子抗癌作用的实验研究

水蛭素活性因子抗癌作用的实验研究目的观察水蛭素活性因子对H22肝癌瘤细胞、S180肉瘤的抑制作用，为临床用药提供理论依据。

方法取小鼠48只，每只小鼠左前腋下接种H22肝癌瘤细胞0.2 mL，随机分为4组，每组12只，分成模型对照组、5-FU组、水蛭素活性因子大剂量组（水蛭素活性因子2.6 g/kg）和水蛭素活性因子小剂量组（水蛭素活性因子1.3 g/kg）；另取小鼠44只，每只小鼠左前腋下接种S180肉瘤细胞0.2 mL，随机分为4组，每组11只，分成模型对照组、5-FU组、水蛭素活性因子大剂量组（水蛭素活性因子2.6 g/kg）和水蛭素活性因子小剂量组（水蛭素活性因子1.3 g/kg）；连续给药14 d，比较各组肿瘤生长情况，并计算抑瘤率。

结果①水蛭素活性因子对H22肝癌实体瘤的影响：5-FU组[瘤重（0.78±0.41）g]、水蛭素活性因子大剂量组[瘤重（0.99±0.48）g]、水蛭素活性因子小剂量组[瘤重（1.15±0.50）g]对H22肝癌抑瘤率分别为58.73%、47.62%、39.15%，与模型对照组相比，差异均有统计学意义（P 0.05）。

③所有5-FU组小鼠在给药第9天开始出现精神萎靡、蜷缩少动、脱毛、食欲减退等，而水蛭素活性因子组小鼠未发生此现象。

结论水蛭素活性因子对H22肝癌瘤细胞和S180肉瘤均有较好的抑制作用，且水蛭素因子无明显副作用。

[Abstract] Objective To observe the anti-tumor effect of hirudin active factor on H22 liver tumor cells and S180 sarcoma，thus to provide theoretical basis for clinical pharmacy. Methods 48 mice were selected，0.2 mL H22 liver tumor cells inoculated subcutaneously，divided into 4 groups，each group had 12 mice. Four groups were named as control group，5-FU group，high-dose hirudin group （hirudin active factor 2.6 g/kg），low-dose hirudin group （hirudin active factor 1.3 g/kg）. Another 44 mice were selected，0.2 mL S180 sarcoma cell inoculated subcutaneously，divided into 4 groups，each group had 11 mice. Four groups were named as control group，5-FU group，high-dose hirudin group （hirudin active factor 2.6 g/kg），low-dose hirudin group （hirudin active factor 1.3 g/kg）. All mice were treated by saline，5-FU group，high-dose hirudin，low-dose hirudin respectively for 14 days daily. The growth of carcinoma cell were compared，and the anti-carcinoma rate was calculated. Results ①The effect of hirudin active factor on H22 solid liver cancer：the anti-carcinoma rates of 5-FU group [tumor weight （0.78±0.41）g]，high-dose hirudin group [tumor weight （0.99±0.48）g]，low-dose hirudin group [tumor weight （1.15±0.50）g] to H22 solid liver cancer were 58.73%，47.62% and 39.15% respectively，had obvious difference compared to control group （P 0.05）. ③All the mice of 5-FU group got malaise，curled up，hair slip and eat less on day 9，the mice of hirudin active factor group were escapable of those phenomena. Conclusion Hirudin active factor can restrain the growth of H22 liver tumor cells and S180 sarcoma obviously，and which has no side effect.[Key words] Hirudin active factor；H22 liver tumor cells；S180 sarcoma；Side effect中药水蛭始载于《神农本草经》，具有破血、逐瘀功能，临床用于治疗癓瘕积聚、血瘀闭经、跌打损伤、血小板增多症等[1]。

中药抗肿瘤作用及机制研究进展

中药抗肿瘤作用及机制研究进展随着中药现代化进程地不断深入，中药在工艺及功效上也得以稳定和提高。

目前，中药及中药提取成分在抗肿瘤研究中不断获得成效，越来越多的中药及中药提取物进入科研工作者的视野中，并且已有许多中药及中药提取物开始了临床前抗肿瘤药效学的评估工作。

文章对中药和中药提取成分抗肿瘤作用及其作用机制进行综述，以期为寻找具有抗肿瘤作用的中药提供一定的理论依据。

标签：中药；抗肿瘤；分子机制肿瘤严重危害着人类的健康，随着对肿瘤生物学特性认识的深入，抗肿瘤研究的策略也不断地调整，由最初细胞毒类直接杀伤肿瘤细胞逐步转变为通过提高自身免疫系统的免疫能力来杀伤肿瘤。

伴随这一过程，中药抗肿瘤作用的相关研究工作也在不断地深入，已有部分中药作为中晚期癌症患者的辅助用药用于临床上。

本文将对已有明确报道的具有抗肿瘤的作用中药及相关机制进行综述，为中药的抗肿瘤研发提供研究策略和线索。

1.细胞毒类的中药及相关机制研究1.1抑制肿瘤细胞的增殖肿瘤细胞与正常细胞区别的关键之处在于：正常细胞不能够持续的增殖，而肿瘤细胞能则能持续且无限地恶性增殖。

因此，在抗肿瘤研究过程中，寻找能够抑制肿瘤细胞的增殖同且对正常细胞副作用的药物一直是科研工作者的关注点。

彭炳先等研究发现莪术烯醇等莪术挥发油的主要成分在体外能够明显且剂量依赖性地抑制肿瘤细胞的增殖。

在体外实验中，陈源红等的实验结果表明，重楼的水提取液不仅能够抑制人肝癌细胞的增殖，而且促进了肝癌细胞凋亡。

另外，张珂等的研究还表明，在整体动物水平，重楼醇提取液能够有效抑制胃癌裸小鼠移植瘤模型的生长，且与5-Fu具有协同抗肿瘤的作用。

另外还有文献报道在体外细胞水平，半枝莲提取物作用于结肠癌细胞后，肿瘤细胞的增殖受到明显的抑制；雷公藤甲素（雷公藤提取物的主要成分）在体内外能显著抑制多种肿瘤细胞的增殖，如人子宫内膜癌、结直肠癌、胶质瘤等。

1.2促进肿瘤细胞的凋亡凋亡是细胞在多种基因和蛋白精密调控下的程序性死亡过程。

水蛭素的研究进展

文章编号：１６７３２９９５（２０２１）０２０１３５０３·综　述·水蛭素的研究进展程晓梅１，张　萌２，王继红１，吕　莉２，宁淑香１（１．辽宁师范大学生命科学学院，辽宁大连　１１６０３３；２．大连医科大学药学院，辽宁大连　１１６０４４）摘　要：水蛭素是一种来源于水蛭唾液腺的天然肽类活性物质，具备强抗凝血和抗血栓功效，现已被广泛应用于治疗和预防各种心脑血管疾病。

研究表明，水蛭素对癌症、痛风、肾脏疾病等也具有较好的治疗效果。

因此，本文将就水蛭素的结构特性及其药理作用等方面进行综述，以期为水蛭素在临床上更多的应用提供参考。

关　键　词：水蛭素；抗血栓；抗肿瘤；临床应用中图分类号：Ｒ２８文献标志码：Ａ水蛭属环节动物门，具有吸食哺乳动物血液的生物习性，分布在中国的大部分地区。

古人很早就发现水蛭可用于入药疏瘀。

在中医学上水蛭可以通过将其虫体进行干燥、炮制等步骤后入药，用于破血、梳通脉络、除瘀等方面，临床上可减轻中风、偏瘫、血瘀等病症的痛苦［１］。

随着科技的发展，科学家于２０世纪６０年代首次对水蛭唾液腺中的活性物质———水蛭素实现了区别于传统意义上的提纯［２３］，这一成果加速了对水蛭素的研究进程。

近年来，有许多科研团队发现水蛭素不仅在抗凝血、抑制血栓形成方面具有显著的作用，而且还可以起到较为明显的抑制肿瘤转移的效果。

因此水蛭素这种活性物质的发现不仅会开辟出多种抗凝血、抗血栓药物的研发新途径，而且还为身患脑血栓、恶性肿瘤等多种疾病的广大患者群众带来了新的希望和福音。

本文将近些年来水蛭素的结构、药理功效及其临床应用的研究情况作一概述。

１　水蛭素的结构与功能目前科学家已从水蛭体内成功分离出两大类活性物质：一类是可以直接作用于凝血系统，比如水蛭素（ｈｉｒｕｄｉｎ）、菲牛蛭素（ｂｕｆｒｕｄｉｎ）等是较为常见的凝血酶抑制剂；另一类是包括抗栓肽（ｄｅｃｏｒｓｉｎ）等在内的其他蛋白酶类抑制剂和其他活性物质。

水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞体外抑制作用研究

水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞体外抑制作用研究（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）【摘要】目的研究水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞的体外抑制作用。

方法以液氮快速冻融法制备水蛭提取物,以常规水提醇沉法水蛭提取物作对照,不同浓度体外干预人肝癌HepG2细胞,MTT法检测两种水蛭提取物对HepG2细胞增殖的抑制作用,并进行细胞计数,吖啶橙荧光染色法检测细胞凋亡情况。

结果水蛭液氮快速冻融法提取物药物浓度为6～15 mg/mL时,对人肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,细胞数目明显下降,并呈剂量依赖性,与水提醇沉法提取物比较,差异有统计学意义(P＜0.01)。

吖啶橙染色可见典型的凋亡细胞形态学特征。

结论水蛭液氮快速冻融法提取物可体外抑制HepG2细胞的增殖并诱导凋亡,其作用明显优于水蛭水提醇沉法提取物。

【关键词】肝癌HepG2细胞；水蛭提取物；增殖；凋亡；液氮快速冻融法Abstract：Objective To study the inhibition effect of leech extracton HepG2 cells. Methods Human hepatocellular cancer cell line HepG2 were treated with different concentrations of leech extracts which were extracted by method of freeze-thawing with liquid nitrogen and contrasted with that by method of water extracting and ethanol precipitating. The inhibition effects and cell morphous were examined by MTT assay and Acridine orange (AO) fluorescent staining method respectively. Result The 6～15 mg/mL drug concentrations of leech extract by method of freeze-thawing with liquid nitrogen had an obvious inhibition on proliferation of HepG2 cells in a dose-dependent manner, and the effect was better than that by method of water extracting and ethanol precipitating (P＜0.01). Typical morphological features of apoptotic cells were appeared in detection by AO staining. Conclusion The leech extract by method of freeze-thawing with liquid nitrogen can inhibit the proliferation of HepG2 cells and induce apoptosis, andthe effect was better than that by method of water extracting and ethanol precipitating.Key words：hepatocelular carcinoma HepG2 cells；leech extract；proliferation；apoptosis；freeze-thawing with liquid nitrogen水蛭破血逐瘀消癥,主治癥瘕积聚、血瘀经闭及跌打损伤等。

水蛭素抗肿瘤作用研究进展

2020年第19卷第12期水蛭素抗肿瘤作用研究进展□薛雪梅赵永恒高小康孙荣进柯威【内容摘要】水蛭素是水蛭的代表性抗凝血成分，越来越多的研究发现水蛭素除具有抗凝血、抗血栓作用外，还具有多种抗肿瘤作用。

现对国内外近几年关于水蛭素抗肿瘤研究报道进行归纳与总结，以期为水蛭素抗肿瘤药效的开发与利用提供参考。

【关键词】水蛭素；抗凝血；抗肿瘤【基金项目】本文为十堰市科学技术局引导性科研项目（编号：19Y17）和湖北医药学院人才启动金资助项目（编号：2018QDJZＲ19）研究成果。

【作者单位】薛雪梅，赵永恒，高小康，孙荣进；湖北医药学院药学院【通讯作者】柯威，湖北医药学院第一临床学院一、水蛭药材介绍及水蛭素结构特点水蛭是水蛭科动物蚂蟥Whitmania pigra Whitman、水蛭Hirudo nipponica Whitman、柳叶蚂蟥Whitmania acranulata Whitman的干燥全体［1］。

20世纪中期，德国学者Markwardt 首先从水蛭唾液中分离提纯水蛭素。

之后人们陆续完成水蛭素的氨基酸测序、二级与三级结构分析以及利用PCＲ技术合成重组水蛭素。

水蛭素由65 66个氨基酸组成，相对分子质量约为7KD，其C端富含酸性氨基酸，而N端含有3对二硫键，并且密集迭绕成核心环肽结构，使得分子结构更加稳定。

重组水蛭素由基因工程方法合成，与水蛭素相比，重组水蛭素63位酪氨酸残基未被硫酸化，使得其与凝血酶亲和性下降，但其药理活性与天然水蛭素相似，而且产量高、运用更加广泛。

二、水蛭素抗凝血作用简介水蛭素被认为是目前最强的天然凝血酶特异性抑制剂，与肝素这一经典的抗凝血药物相比，水蛭素抑制凝血酶活性不依赖于任何辅助因子［2］，同时，水蛭素引起的出血或血小板减少等副作用明显少于肝素。

另有报道重组水蛭素在发挥抗凝血作用时不影响血小板功能，对血小板也没有直接作用［3］。

基于在抗凝血、抗血栓方面优异的药理特性，水蛭素成为目前唯一一种由FDA批准用于临床的动物来源抗凝剂［4 6］。

水蛭抗肿瘤作用的实验研究

水蛭抗肿瘤作用的实验研究
刘京生;苗智慧;董力;余素清;周锡英
【期刊名称】《时珍国医国药》
【年(卷),期】2001(12)10
【摘要】目的 :研究水蛭的抗肿瘤作用。

方法 :用水蛭提取液灌胃荷瘤小鼠 ( L-12 10 ) ,电镜观察肿瘤组织凋亡的形态学改变 ,流式细胞仪观察凋亡率和细胞周期动力学变化 ,MTT法检测 NK细胞活性。

结果 :水蛭可通过诱导肿瘤细胞凋亡 ,提高荷瘤小鼠的细胞免疫功能 ,抑制荷瘤小鼠肿瘤的生长 ,并能显著延长荷瘤小鼠的存活时间。

结论 :水蛭具有抗肿瘤功能。

【总页数】2页(P884-885)
【关键词】水蛭;凋亡;抗肿瘤;中药;实验
【作者】刘京生;苗智慧;董力;余素清;周锡英
【作者单位】河北省医科院
【正文语种】中文
【中图分类】R282.740.5;R285.5
【相关文献】
1.水蛭抗肿瘤作用机制研究进展 [J], 季漪;李柳;吴勉华
2.榄香烯对肝癌腹水瘤细胞系Hca—F25／CL—16A3的抗肿瘤作用机理的实验研究Ⅳ．榄香烯的抗肿瘤作用及光镜、透射电镜的观察 [J], 张红;左云飞;等
3.水蛭抗肿瘤作用的研究概况 [J], 袁华;陈建真
4.水蛭素抗肿瘤作用研究进展 [J], 薛雪梅;赵永恒;高小康;孙荣进;柯威
5.气功外气的抗肿瘤作用及增强免疫功能机理的实验研究(一)——气功外气对体内抗肿瘤转移的作用 [J], 曹雪涛;叶天星;高也陶
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水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性

水提取法和仿生提取法研究水蛭不同炮制品的体外抗凝活性作者：单宇张伽妹丁月珠何梦婷戴幸星马小虹袁瑞娟来源：《中国中药杂志》2016年第10期[摘要]为确定水蛭传统炮制的科学性，分别采用水提取法和仿生提取法提取水蛭清水吊干品、滑石粉烫制品、酒浸闷烘品中的抗凝活性成分，以活化部分凝血酶时间（APTT）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶时间（TT）、抗凝血酶活性作为活性指标进行抗凝测定，并采用考马斯亮蓝法，测定各炮制品提取物中的蛋白含量以初步解释抗凝活性变化原因。

对比发现，采用水提取法时，APTT，PT，TT，抗凝血酶活性4种指标结果均显示，滑石粉烫制或酒浸闷烘后水蛭的抗凝活性降低，活性顺序为清水吊干品>酒浸闷烘品>滑石粉烫制品，此结果与水蛭不同炮制品水提物蛋白含量顺序一致；而采用仿生提取法时，除滑石粉烫制后APTT缩短外，其他结果均显示炮制使水蛭抗凝活性升高，且活性顺序为酒浸闷烘品>滑石粉烫制品>清水吊干品。

仿生提取法与水提取法相比更符合水蛭口服后在人体内的吸收过程，结果更具科学性。

所以，传统的炮制方法不仅可以矫味矫臭，还可增强水蛭的抗凝活性作用。

[关键词]水蛭；炮制；仿生提取；抗凝活性[Abstract]In order to determine the scientificalness of traditionally processed Whitmania pigra，water extraction method and bionic extraction method were used respectively to extract the anticoagulating active components in W pigra hanging dry products， talcum powder fried products and wine immersingbaked products Activated partial thromboplastin time （APTT）， prothrombin time （PT）， thrombin time （TT）， and antithrombin activity were selected as the activity indexes to evaluate the anticoagulant activities of different processed W pigra Then the contents of protein in different processed W pigra were measured by Coomassie brilliant blue method to preliminarily explain the reason of anticoagulant activity changes When water extraction method was used， the results of APTT， PT， TT and antithrombin activity showed that the anticoagulant activities of W pigra were decreased both in talcum powder fried products and wine immersingbaked products， and the activity order was as follows： hanging dried products> wine immersingbaked products>talcum powder fried products This order was same as the protein content order While when bionic extraction was used， APTT was shortened in talcum powder fried products， but all the other results indicated the anticoagulant activities of W pigra processed products were increased， and the activity order was as follows： wine immersingbaked products>talcum powder friedproducts>hanging dry products As compared with water extraction， the bionic extraction was more similar to the absorption process of W pigra in human digestive system after oral administration and was more scientific Therefore， the traditional processing method can not only modify the taste and smell， but also enhance the anticoagulant activity of W pigra[Key words]Whitmania pigra； processing； bionic extraction； anticoagulant activitydoi：10.4268/cjcmm20161013水蛭是一味传统的动物类中药，具有明显的抗凝血作用，近年来广泛用于心脑血管疾病的治疗。

一种中药水蛭提取物及其用途[发明专利]

专利名称：一种中药水蛭提取物及其用途专利类型：发明专利
发明人：柴永海,杨培民,刘国飞,邱学伟,代龙申请号：CN201310097031.9
申请日：20130326
公开号：CN103251926A
公开日：
20130821
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种中药水蛭提取物及其用途，属中药领域。

其特征是水蛭以双酶连续酶解法酶解(水蛭先在酸性条件下以胃蛋白酶酶解，酶解混悬液再在碱性条件下以胰蛋白酶酶解)，再经过超滤、纳滤、阳离子交换凝胶等精制、纯化，得到水蛭提取物，其纯度90％以上，可加制剂辅料按常规方法制成冻干粉针剂。

本发明具有良好的活血作用，用于治疗心脑血管疾病，特别是用于治疗缺血性中风效果较好。

申请人：代龙
地址：250002 山东省济南市市中区阳光舜城中六区2-903室
国籍：CN
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中药水蛭抗细胞凋亡的研究进展

跌打损伤、内损瘀血、心腹疼痛、大便不通等症的夺命散（济生方》能破血逐瘀，经消瘕的抵当《）通汤（金匮要略》。米制水蛭及油制水蛭皆酥脆，《）
易粉碎，床应用同滑石粉烫水蛭。临
有保护作用～。水蛭对组织缺氧、血有保护作缺
水煎醇提液能明显降低Ｂ组鼠脑细胞凋亡率，再灌
注２￣４４８ｈ其脑细胞凋亡率明显低于Ａ组，明表水蛭可以通过降低缺血再灌注后脑细胞凋亡率，从而对缺血再灌注性脑损伤起到保护作用。吕莉等采用右侧大脑中动脉阻塞（Ａ模型，实验ＭＣＯ）将
毒性极低，后虽然易碎，味，也会降低其疗烫矫但
效。利用粉碎机制粉，装入胶囊中吞服，即可保持药效，又可矫味，便于服用。不同炮制方法测试浸出物含量由高到低依次为：生水蛭，清炒水蛭，水烫水蛭，石粉烫水蛭。实验表明水蛭炮制后有滑利于增强抗炎作用，作用强度由高到低依次为：其烫水蛭，制水蛭，水蛭，生而对小鼠免疫功能的增强作用，以生用为佳。则
Ｋｅｒｓ：ｅｈ；ｙｗｏｄＬｅｃＡｐｏｐｏｓｓＯｒｎｔｉ；ｇａ
水蛭又名蚂蜞、蟥。水蛭生品多入煎剂，蚂以破血逐瘀为主，治瘀滞瘕瘕、闭、打损伤、如经跌瘀滞疼痛等症的化瘕回生丹（温病条辨》。滑石粉《）

水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的影响

水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α的影响杨志成;刘良红;张晓青;杨蕙榕;黄莺【期刊名称】《中国中西医结合急救杂志》【年(卷),期】2013(000)003【摘要】目的探讨水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放血栓素B2（TXB2）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的作用机制。

方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC），将2～3代生长良好的细胞分为空白对照组、凝血酶刺激组和水蛭提取液低、中、高剂量组。

将生药浓度分别为150、300、600 mg/L的水蛭提取液加入到10 kU/L凝血酶刺激的细胞中培养12 h，空白对照组加入等量RPMI 1640培养液。

取上清液，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TXB2和6-keto-PGF1α的含量。

结果与空白对照组比较，凝血酶刺激组TXB2含量（ng/L）明显升高（206.53±18.60比115.21±12.31，P＜0.01），6-keto-PGF1α含量（ng/L）明显降低（21.31±1.12比30.54±1.11，P＜0.01）；与凝血酶刺激组比较，水蛭提取液各剂量组TXB2（ng/L）含量均明显降低，6-keto-PGF1α（ng/L）含量均明显升高，且以高剂量组变化更显著（TXB2：109.18±9.72比206.53±18.60；6-keto-PGF1α：58.67±3.24比21.31±1.12，均P＜0.01）。

结论水蛭提取液能明显减弱凝血酶诱导HUVEC释放6-keto-PGF1α的抑制作用，并能对抗凝血酶诱导HUVEC释放TXB2，其作用机制可能与其调节血栓素/前列环素平衡有关。

【总页数】3页(P146-148)【作者】杨志成;刘良红;张晓青;杨蕙榕;黄莺【作者单位】湖南中医药大学药学院，湖南长沙410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208;湖南中医药大学药学院，湖南长沙 410208【正文语种】中文【相关文献】1.全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血管性血友病因子和6-酮-前列腺素F1α的影响 [J], 易小民;谭茜;彭延古;徐爱良;黄莺;靳铁飞2.冠心病患者血清血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α和前列腺素E2的测定及其意义[J], 王成尧;季乃军;梅益斌;樊必夫;陈东海;管丽华;高美英3.原发性高血压患者血清血栓素B2、6-酮-前列腺素F1α和前列腺素E2变化研究[J], 季乃军;梅益斌;王成尧;樊必夫;陈东海;管丽华;高美英;李建高4.前列地尔联合特利加压素对高龄肝肾综合征患者血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α表达的影响 [J], 毛迎春;罗俊华5.实验性颈动脉粥样硬化模型中血栓素B2和6-酮-前列腺素F1α与抗凝血酶Ⅲ和纤溶酶原活性的改变 [J], 王明山;张磊;郑荣远;谢淑萍;王拥军;高申孟因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

水蛭素对荷肝癌H22小鼠的抑瘤作用

水蛭素对荷肝癌H22小鼠的抑瘤作用姚娓;张红;鲍发臻;刘勇;贾爱明【期刊名称】《中国医院用药评价与分析》【年(卷),期】2011(11)12【摘要】目的:观察水蛭素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用.方法:小鼠右前腋窝下皮下种瘤造成实体瘤模型,将40只小鼠随机抽样分为4组,水蛭素高剂量和水蛭素低剂量组、氟尿嘧啶组及模型对照组,每组10只.治疗期间记录各组小鼠的体重变化并观察小鼠生存状态,用药14 d后取瘤称重,计算抑瘤率,并计算肝/体比、肾/体比、脾脏指数以及用药前后的体重变化等指标.结果:水蛭素高、低剂量组对小鼠H22肝癌细胞均有明显的抑制作用,抑瘤率分别为37.63％、23.71％,与模型对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.01、P＜0.05),水蛭素高、低剂量组与氟尿嘧啶组比较,肝/体比、肾/体比、脾脏指数均有显著性差异,有统计学意义(P＜0.05),经治疗后水蛭素各组小鼠与模型对照组及治疗前比较体重变化不明显(P＞0.05).结论:水蛭素对小鼠H22肝癌细胞有明显的抑制作用,同时对小鼠重要器官可能具有一定的保护作用.【总页数】3页(P1105-1107)【作者】姚娓;张红;鲍发臻;刘勇;贾爱明【作者单位】大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023;大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023;大连医科大学附属第一医院中医科,大连116011;大连医科大学附属第二医院中医科,大连116023【正文语种】中文【中图分类】R969【相关文献】1.抗肝癌合剂对荷肝癌H22小鼠肿瘤细胞周期的影响 [J], 钱玥;周维顺2.雷公藤对荷肝癌(H22)小鼠的抑瘤作用的实验研究 [J], 齐晓娟;张锐3.水蛭素对肝癌H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及对C-met表达的影响 [J], 姚娓;刘勇;张红;贾爱明4.水蛭素对小鼠H22肝癌细胞Histone H1表达的影响 [J], 贾爱明;张红;鲍发臻;王朝晖;刘耘;姚娓5.复肝春6号对荷H22小鼠抑瘤作用的实验研究 [J], 李秀娟;刘福英;毛宇湘;张焕铃;徐增年;王俊霞因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

水蛭素的药理作用及临床应用研究进展

-综述-水蛭素的药理作用及临床应用研究进展△徐明杰722,赵迪742,李龙宇722 ,伍一炜722，徐暾海、22*,刘铜华2271北京中医药大学中药学院，北京 20929；7 Abstroct ］ HimUin is the 800X0680 specific thmmbin indibiter discovered th date. A Urge number of basic expehoentaland clinical stuUies have coeirmed thas dimUin has a variety of pharmacological effects , such as anOcoauuUhoo , antithmmbotic , antiWOmsis , antiopoptosis , vaschUPzahoo and improvemens of survival rate of free spin Uap. Ah the same hue , k has asignificant tOeragecOo ebect on hemanaUmg , Over cancer , atherosclerosis , gepdroPe sycc/ome , hypemhcemia , salpinaiOsoUstmctioo and cataract and so on. In this pager , the research on diruUin in recent years is analyzed and summarized to provihe reference for its further deveUpmeba［Keaworos t diruUin ； recombinant diruUin ； pharmacoUgical action ； clinical appOcahoo ； adverse reactions△［基金项目］国家国际科技合作项目(292DFB33269)* ［通信作者］徐暾海，教授，研究方向：中药活性成分及质量控制；E-mail ： **************01北京中医药大学中医养生学北京市重点实验室，北京 20929；31北京中医药大学中医养生学教育部重点实验室，北京100929［摘要］水蛭素(dimdin)为特异性凝血酶抑制剂，根据其来源可分为天然水蛭素和重组水蛭素两类。

水蛭提取物对HL60细胞增殖与细胞周期的影响

水蛭提取物对HL60细胞增殖与细胞周期的影响肖移生;侯吉华;李青;汪建民【摘要】目的：研究水蛭提取物对人白血病HL-60细胞的细胞增殖与细胞周期的影响。

方法：用液氮快速冻融法制备水蛭提取物，将0．7～2．8g/L浓度提取物作用HL-60细胞48h，采用MTT、FCM法分别观察提取物对HL60增殖、细胞周期的影响，并用Western blotting检测HL60细胞的细胞周期调节蛋白Cyclin E与CDK2蛋白表达。

结果：0．7～2．8g/L浓度范围内的水蛭提取物以剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖；水蛭提取物能阻滞HL60细胞于细胞分裂周期的G1期、阻止进入S期；提取物能显著降低HL60细胞的Cyclin E、CDK2的表达，且剂量越高，其抑制效果越明显。

结论：水蛭提取物具有良好的抑制HL60细胞增殖作用，其机理之一与细胞周期G1期阻滞有关。

【期刊名称】《江西中医药》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】3页(P31-33)【关键词】水蛭提取物;HL60;增殖;细胞周期【作者】肖移生;侯吉华;李青;汪建民【作者单位】江西中医药大学基础医学院江西南昌330004;江西中医药大学基础医学院江西南昌330004;江西中医药大学基础医学院江西南昌330004;江西中医药大学基础医学院江西南昌330004【正文语种】中文【中图分类】R284中药水蛭性咸、苦、平，归肝、膀胱经，有破血瘀、散结聚、通经脉、利水道等功效，用于治癥瘕、痞块、血瘀闭经、跌打损伤等，其药理作用为抗凝、溶栓、抗血小板及降血脂等［1］;临床上水蛭也可单方或组方运用于肿瘤治疗中［2］。

本课题组前期研究发现水蛭提取物对HL60细胞生长有抑制作用［3］，为进一步探讨，本课题组进行了水蛭提取物对HL60细胞增殖与细胞周期影响的实验。

1 材料与方法1.1 细胞株及培养方法 HL60细胞购自中国医学科学院基础医学研究所基础医学细胞中心，由江西中医药大学基础医学院实验中心保存，将HL60细胞培养于含有10%新生小牛血清的RPMI1640完全培养基中(37℃，5%CO2饱和湿度培养)，培养至细胞处于对数生长期用于后续实验。

中草药提取物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响研究

中草药提取物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响研究肝癌是一种高度恶性的肿瘤，是全球癌症死亡的第三大原因。

虽然现在医学水平有了很大的提高，但是对于肝癌仍然是一个巨大的挑战。

所以，人们不断地寻找新的方法对付这种令人头疼的肿瘤。

在这个过程中，中草药逐渐引起了人们的兴趣，中草药提取物被认为是对肝癌治疗具有很大潜力的一种手段。

随着技术的提高，中草药提取物的研究也在不断地深入。

近年来，越来越多的实验证明了中草药提取物对肝癌的治疗效果。

中草药提取物通过活性成分作用于肝癌细胞，就可以发挥它们的治疗作用了。

中草药提取物作用的机制是多方面的。

首先，它们可以直接抑制肝癌细胞的增殖。

研究表明，多种中草药可以通过抑制细胞周期来抑制肝癌细胞的增殖。

而增殖抑制正是肝癌治疗中想要达到的效果。

其次，中草药提取物还可以诱导肝癌细胞的凋亡。

这一机制是通过活性成分作用于肝癌细胞诱导其自我毁灭。

凋亡作用的实现不仅可以抑制肝癌细胞的增殖还可以使得肝癌细胞产生坏死，防止肿瘤扩散。

研究表明，目前在中草药提取物研究方面表现最好的是靶向多靶点的中草药提取物复方。

多种草药的提取物联合使用，可以发挥协同作用，提高治疗效果。

与此同时，中草药提取物的研究还需要继续加强深入，将复杂的活性成分结构进一步分析，以更好地理解其机制，为开发更有效的中草药提取物复方提供理论基础。

关于中草药提取物对肝癌细胞增殖和凋亡的影响的研究，以国内为例，已经有大量的实验和临床研究证明了中草药提取物对肝癌的治疗效果。

例如，羌活素提取物、金丝楠素等多种中草药提取物都被证实了在治疗肝癌方面的潜在价值。

同时，这些提取物还具有很好的良好的抗癌和免疫调节作用，能够增强肝脏的免疫功能，为肝癌的治疗提供更多途径。

虽然中草药提取物在肝癌治疗中发挥了越来越重要的作用，但是它们的制备过程仍面临很多挑战。

制备中草药提取物要求草药的选择、制备、提取、分离及对其活性成分的深入分析，每个环节都需要大量研究，才能最终得到一种有效的药物。