诺如病毒标本处理和室检测技术方案
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
诺如病毒是一种常见的病毒，可以引起呼吸道感染，包括感冒
和肺炎。在当前全球新冠疫情的背景下，准确、快速地检测诺如病
毒变得尤为重要。本文将介绍几种常见的诺如病毒检测方法，帮助
大家更好地了解和应对这一病毒。
首先，最常见的诺如病毒检测方法是核酸检测。这种检测方法
通过采集患者的呼吸道样本（例如鼻拭子或咽拭子），提取样本中
的核酸，然后使用特定的试剂盒进行PCR扩增和检测。核酸检测的
优点是准确性高，可以快速确定患者是否感染了诺如病毒。然而，
核酸检测需要专业实验室设备和技术人员，通常需要较长的等待时间，且成本较高。
其次，抗原检测是另一种常用的诺如病毒检测方法。这种方法
通过检测患者呼吸道样本中的诺如病毒抗原（例如蛋白质），来判
断患者是否感染了该病毒。抗原检测的优点是操作简便、成本较低、结果快速，通常在15-30分钟内就可以得出初步结果。然而，抗原
检测的准确性相对核酸检测略低，尤其是在病毒载量较低的情况下，可能会出现假阴性结果。
此外，近年来出现的快速血清学检测方法也被广泛用于诺如病
毒的检测。这种方法通过检测患者血清中的特定抗体（例如IgM和IgG抗体）来判断患者是否感染了诺如病毒。快速血清学检测的优
点是操作简便、结果快速，通常在15-20分钟内就可以得出初步结果。然而，血清学检测的准确性受到多种因素的影响，包括样本采
集时间、病毒变异等，可能会出现假阳性或假阴性结果。
综上所述，诺如病毒的检测方法多种多样，各有优缺点。在实
际应用中，应根据实际情况选择合适的检测方法，并结合临床症状、流行病学史等综合判断。希望本文介绍的内容能够帮助大家更好地
诺如病毒检测技术研究
诺如病毒检测技术研究
诺如病毒是非细菌性腹泻暴发的主要病原之一，对相关检测技术的研究十分必要。本文通过引物、探针、染料的选择，结合适用范围、灵敏度、特异性、重复性的评估对常规反转录-聚合酶链反应、荧光定量RT-PCR、反转录-环介导等温扩增、基因芯片、酶联免疫吸附测定和荧光微球检测条快速检测诺如病毒的技术进行了综述。着重关注了食品和水中诺如病毒检测的病毒富集技术，并提出平衡准确灵敏与简便高效对诺如病毒检测技术的研究具有重要意义。
Abstract：Norovirus is one of the main pathogens in non bacterial diarrhea，research on correlation detection technology is very necessary.This paper probes，primers，dye selection，combined with the applicable scope，sensitivity，specificity，repeatability of the evaluation of conventional reverse transcription polymerase chain reaction，fluorescence quantitative reverse transcription loop mediated RT-PCR.Mediated isothermal amplification，gene chip，ELISA and fluorescent microsphere detection strip for rapid detection of norovirus technology are reviewed.Focusing on the technology of virus detection in food and water enrichment of norovirus，and put forward the balance is accurate and sensitive and efficient research on the detection of norovirus has important significance.
诺如病毒处置方案（精选5篇）
诺如病毒处置方案（精选5篇）
诺如病毒处置方案
诺如病毒处置方案（精选5篇）
为了确保工作或事情能高效地开展，时常需要预先制定方案，方案是从目的、要求、方式、方法、进度等方面进行安排的书面计划。那么优秀的方案是什么样的呢？以下是小编整理的诺如病毒处置方案（精选5篇），供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。
诺如病毒处置方案1
为科学、规范、及时、有序地开展新型冠状病毒疫情的防控工作，采取有效措施，控制疫情传播和蔓延扩散，确保国控公司本部及所属单位的正常工作和生活秩序，按照中央、省委省政府和省国资委有关要求，根据疫情形势和进展情况，并结合公司实际，特制定本预案。
一、防控原则
按照统一领导、及时反应、协调一致、规范措施的指导原则，做到“早发现、早报告、早隔离、早治疗”，防范疫情传播，保障防控成效，维护正常工作生活秩序。防控工作在国控公司疫情防控领导小组(以下简称领导小组)统一领导下进行。
二、防控措施
(一)人员防控
人员检测防控范围为国控公司员工。
第一类情况：目前在湖北人员。目前已在湖北地区尚未返回江西的人员须经领导小组同意后方可返回，未经同意不得擅自返回。
第二类情况：有密切接触人员。与疑似或确诊为新型冠状病毒感染的肺炎患者有过近距离接触人员;与从湖北地区、其他有本地病例持续传播地区返回人员有密切接触(包含本人是返回人员，子女在湖北地区上学、上班返回人员)的人员。
1、与自确定为疑似或确诊病例前十四日有过近距离接触的人员，应立即上报保障工作组，由保障工作组统一登记汇总在册。
2、密切接触人员应立即上报保障工作组，由保障工作组统一登记
诺如病毒处理流程
诺如病毒处理流程
诺如病毒，是一种新型的病毒性疾病，最初在诺如病毒疫情暴
发地尼日利亚被发现。该病毒主要通过空气传播和接触传播，对人
类健康造成了极大威胁。为了有效应对诺如病毒的传播和控制，制
定了一系列的处理流程，以确保病毒不会继续蔓延。下面将详细介
绍诺如病毒的处理流程。
1. 诺如病毒的传播途径。
诺如病毒主要通过空气传播和接触传播，患者的呼吸道分泌物、血液、粪便等含有病毒的体液是诺如病毒的主要传播途径。因此，
在处理疑似感染者时，需要采取相应的防护措施，避免直接接触患
者的体液和呼吸道分泌物。
2. 诺如病毒的诊断。
诺如病毒的诊断主要依靠临床症状和实验室检测。患者出现发热、咳嗽、呼吸困难等症状时，需要及时进行病毒核酸检测和血清
学检测，以确认是否感染了诺如病毒。
3. 诺如病毒的隔离。
一旦确认患者感染了诺如病毒，需要立即将患者隔离，避免病
毒继续传播。隔离病房的空气流通和消毒工作非常重要，确保病毒
不会通过空气传播给其他人。
4. 诺如病毒的治疗。
目前针对诺如病毒尚无特效药物，治疗主要是对症支持治疗。
患者需要接受氧疗、抗病毒治疗、抗感染治疗等，以缓解症状并提
高免疫力。
5. 诺如病毒的防控措施。
除了对患者进行隔离和治疗外，还需要采取一系列的防控措施，包括加强个人防护、提高公众卫生意识、加强医疗机构感染控制等，以阻断病毒的传播链。
6. 诺如病毒的疫苗研发。
针对诺如病毒的疫苗研发工作也在紧锣密鼓地进行中，科研人
员正在加紧研究，争取早日研发出有效的疫苗，以控制疫情的蔓延。
总之，诺如病毒的处理流程主要包括传播途径的防控、诊断和隔离、治疗和防控措施以及疫苗研发。只有通过科学的处理流程和全社会的努力，才能有效地控制诺如病毒的传播，保护人民的健康安全。希望全球各国能够团结合作，共同应对诺如病毒疫情，早日战胜这一全球性挑战。
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
一、实时荧光定量PCR法。
实时荧光定量PCR法是一种高灵敏度、高特异性的诺如病毒检测方法。该方法利用PCR技术检测样本中的诺如病毒RNA，通过实时荧光信号来定量检测病毒载量。实时荧光定量PCR法能够在短时间内准确检测出诺如病毒，是目前常用的检测方法之一。然而，该方法需要昂贵的设备和专业的操作技能，不适合于一般的实验室条件。
二、免疫层析法。
免疫层析法是一种简便快速的诺如病毒检测方法。该方法利用特异性抗体与诺如病毒抗原结合，形成免疫复合物，通过色素或荧光信号来检测病毒的存在。免疫层析法操作简单，无需昂贵的设备，适合于基层医疗单位和野外应急检测。然而，免疫层析法的灵敏度和特异性较PCR法稍逊，可能存在假阳性或假阴性结果。
三、电子显微镜法。
电子显微镜法是一种直接观察诺如病毒颗粒的检测方法。该方法通过对样本进行浓缩和纯化处理，然后利用电子显微镜观察样品中的病毒颗粒。电子显微镜法能够直接看到诺如病毒的形态特征，具有极高的特异性。然而，该方法需要昂贵的设备和专业的操作技能，且不能进行病毒载量的定量分析，因此在实际应用中较少使用。
综上所述，针对诺如病毒的检测，实时荧光定量PCR法具有高灵敏度和高特异性的优势，但需要昂贵的设备和专业的操作技能；免疫层析法操作简单，适合基层医疗单位和野外应急检测，但灵敏度和特异性较PCR法稍逊；电子显微镜法具有极高的特异性，但设备昂贵且不能进行定量分析。在实际应用中，应根据实际情况选择合适的检测方法，以确保诺如病毒的及时检测和有效控制。
诺如病毒实验室技术培训
出病毒。
病毒分离培养步骤
02
包括细胞准备、病毒接种、病毒培养、病毒鉴定等步骤。
病毒分离培养注意事项
03
确保细胞系的质量、病毒接种量的准确性、培养条件的稳定性
等。
RT-PCR检测技术原理及操作指南
1 2
RT-PCR检测原理
利用逆转录酶将病毒RNA逆转录成cDNA，再通 过PCR扩增特异性检测病毒基因。
该病毒具有高度的传 染性和变异性，易引 起暴发流行。
诺如病毒传播途径
01
02
来自百度文库
03
人传人
通过接触感染者的粪便、 呕吐物等排泄物，或者接 触被污染的物品、食物和 水源而传播。
经水传播
病毒污染水源，通过饮用 水传播。
经食物传播
病毒污染食品，通过进食 被污染的食品而感染。
诺如病毒危害程度
诺如病毒感染可引起急性胃肠炎 ，主要症状为恶心、呕吐、腹泻
样本保存条件及时间要求
保存条件
将采集好的样本放在4℃以下的冰箱中保存，避免反复冻融和长时间暴露在室 温下。
时间要求
样本应在采集后24小时内送达实验室进行检测，如无法及时送达，应在4℃以下 保存，并在72小时内送达实验室。
04
实验室检测技术培训
病毒分离培养技术
病毒分离培养原理
01
利用病毒在特定细胞系中的增殖特性，通过细胞培养技术分离
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
诺如病毒（Norovirus）是一种引起胃肠道感染的病毒，常见于人群中，尤其是在集体生活环境中易发生暴发性感染。因其高传染性和易造成集体感染的特点，对诺如病毒的检测尤为重要。本文将介绍诺如病毒检测的方法及相关注意事项。
首先，诺如病毒的检测主要通过实验室检测和临床症状判断两种方式。实验室检测主要包括病毒核酸检测和抗原检测。病毒核酸检测是通过提取患者的样本，如粪便或呕吐物，然后进行核酸提取和PCR扩增检测来确定是否存在诺如病毒的核酸。而抗原检测则是通过检测患者样本中的诺如病毒抗原来进行诊断。这两种实验室检测方法都需要在专业实验室条件下进行，确保检测结果的准确性和可靠性。
其次，临床症状判断是通过患者的临床表现来初步判断是否感染了诺如病毒。诺如病毒感染的症状主要包括呕吐、腹泻、腹痛、发热等，临床医生可以通过观察患者的症状来初步判断是否感染了诺如病毒。但需要注意的是，临床症状判断并不具备确诊的功能，仍需通过实验室检测来确定诊断结果。
除了以上介绍的检测方法外，诺如病毒的检测还需要注意以下
几点。首先，在进行实验室检测时，需要严格按照操作规程来进行，避免交叉污染和假阳性结果的产生。其次，在临床症状判断时，需
要结合患者的流行病学史和暴露史来进行综合分析，以提高诊断的
准确性。最后，对于诺如病毒的检测结果，应及时报告并采取相应
的隔离和治疗措施，以防止病毒的传播和扩散。
综上所述，诺如病毒的检测方法主要包括实验室检测和临床症
状判断两种方式。在进行检测时，需要严格按照操作规程来进行，
并结合患者的流行病学史和暴露史进行综合分析，以提高诊断的准
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
诺如病毒是一种常见的病毒，它可以引起呼吸道感染和肠道疾病。在当前全球新冠疫情的背景下，对诺如病毒的检测变得尤为重要。本文将介绍诺如病毒的检测方法，以帮助大家更好地了解和预防这种病毒的传播。
一、症状检测。
诺如病毒感染的主要症状包括发热、咳嗽、喉咙痛、乏力、肌肉疼痛、头痛、嗅觉或味觉丧失、腹泻等。如果出现这些症状，应及时就医并进行诺如病毒检测。
二、核酸检测。
目前，诺如病毒的主要检测方法是核酸检测。核酸检测是通过采集患者的咽拭子、鼻拭子或痰液样本，提取病毒RNA，然后进行逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测。这种方法具有高灵敏度和特异性，是目前诺如病毒检测的金标准。
三、抗原检测。
除了核酸检测，近年来还出现了诺如病毒抗原检测方法。抗原检测是通过采集鼻拭子或咽拭子样本，检测样本中的诺如病毒抗原。这种方法操作简单、快速，可以在15-30分钟内得出结果，适用于临床快速筛查和疫情防控。
四、血清学检测。
血清学检测是通过采集患者的血清样本，检测其中的抗体水平来判断是否感染诺如病毒。这种方法适用于早期感染者和无症状感染者的检测，但需要在发病后一定时间才能得出准确结果。
五、影像学检测。
对于诺如病毒引起的肺部病变，影像学检测也是一种重要的诊断方法。X线、CT等影像学检查可以帮助医生判断患者是否存在肺部病变，对于疑似病例的诊断和治疗具有重要意义。
总结。
诺如病毒的检测方法多种多样，每种方法都有其独特的优势和适用范围。在疫情防控中，及时准确地进行诺如病毒检测对于阻断病毒传播、保护公共健康至关重要。希望本文的介绍能够帮助大家更好地了解诺如病毒的检测方法，做好疫情防控工作。
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
诺如病毒（Norovirus）是一种引起急性胃肠炎的病毒，常见于
冬季和春季，是引起食物中毒和呕吐腹泻的主要病原体之一。诺如
病毒的传播途径主要包括食物、饮水、接触传播和空气传播等多种
途径，因此及时准确地检测诺如病毒对于预防和控制疾病具有重要
意义。本文将介绍诺如病毒的检测方法，希望对相关人员有所帮助。
一、病毒核酸检测法。
病毒核酸检测法是目前诺如病毒检测的主要方法之一。该方法
利用聚合酶链式反应（PCR）技术对样本中的病毒核酸进行扩增，然
后通过特定的引物和探针检测扩增产物，从而确定样本中是否存在
诺如病毒。该方法具有高灵敏度、高特异性和快速的特点，适用于
临床诊断和流行病学调查。
二、免疫学检测法。
免疫学检测法是诺如病毒检测的另一种常用方法。该方法利用
酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫层析法等技术，检测样本中的诺
如病毒抗原或抗体。通过与特定的抗原或抗体结合，从而确定样本
中是否存在诺如病毒。该方法具有简便、快速、经济的特点，适用于大规模筛查和流行病学监测。
三、电子显微镜检测法。
电子显微镜检测法是一种直接观察诺如病毒颗粒的方法。该方法将样本进行超速离心、过滤等处理，然后利用电子显微镜观察样本中的病毒颗粒形态和结构，从而确定样本中是否存在诺如病毒。该方法具有直接、准确的特点，但需要专业的技术和设备支持，适用于科研和疫情溯源。
四、细胞培养法。
细胞培养法是一种传统的诺如病毒检测方法。该方法将样本接种到特定的细胞系中，观察是否出现细胞变形、溶解等现象，从而确定样本中是否存在诺如病毒。该方法具有直观、可靠的特点，但需要较长的培养周期和专业的技术支持，适用于病毒分离和鉴定。
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测
诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺瓦克病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中分离的病原。2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒（Norovirus,NV）。诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒（Sapporo-like Virus，SLV），正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV)，合称为人类杯状病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。诺如病毒有许多共同特征：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。
诺如病毒根据遗传性分为5个基因组，至少有29个基因群，其中基因组I （GGI）有8个基因群，基因组II（GGII）有17个基因群，基因组III（GGIII）有2个基因群，基因组IV（GGIV）和基因组V （GGV）各有1个基因群。与人类有关的主要是GGI、GGII和GGIV。
诺如病毒检测方法
诺如病毒检测方法
诺如病毒（Norovirus）是一种引起急性胃肠炎的病毒，也被称
为“冬季呕吐病毒”。诺如病毒感染主要通过食物、水源或空气传播，是一种非常具有传染性的病毒。因此，及时准确地检测诺如病
毒感染对于防控疫情至关重要。
目前，诺如病毒的检测方法主要包括基因检测法、抗体检测法
和病毒培养法。其中，基因检测法是目前应用最为广泛的一种方法。基因检测法利用PCR技术，通过检测诺如病毒的基因组序列来确认
感染情况。这种方法具有高灵敏度和特异性，能够快速准确地检测
出诺如病毒的存在。
另一种常用的检测方法是抗体检测法。抗体检测法通过检测人
体对诺如病毒产生的抗体来确认感染情况。这种方法需要采集患者
的血样，通过实验室检测来确定感染情况。虽然抗体检测法的操作
相对简单，但其灵敏度和特异性不如基因检测法。
除了以上两种方法，病毒培养法也是一种常用的诺如病毒检测
方法。这种方法需要将患者的样本接种到细胞培养物中，通过观察
细胞的变化来确认感染情况。病毒培养法能够获得活病毒，有利于
病毒的研究和疫苗的研发，但操作复杂且耗时较长。
总的来说，诺如病毒的检测方法各有优缺点，选择合适的方法
需要根据实际情况和实验室条件来决定。在进行检测时，需要严格
按照操作规程进行，避免交叉污染和误操作，确保检测结果的准确性。
此外，随着科技的不断进步，新的诺如病毒检测方法也在不断
涌现。例如，近年来出现的快速诊断试剂盒能够在短时间内快速检
测出诺如病毒的存在，为疫情防控提供了更多的选择。未来，随着
技术的发展，相信会有更多更快速、更准确的诺如病毒检测方法出现，为疫情防控提供更大的帮助。
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测
诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺瓦克病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中分离的病原。2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒（Norovirus,NV）。诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒（Sapporo-like Virus，SLV），正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV)，合称为人类杯状病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。诺如病毒有许多共同特征：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。
诺如病毒根据遗传性分为5个基因组，至少有29个基因群，其中基因组I （GGI）有8个基因群，基因组II（GGII）有17个基因群，基因组III（GGIII）有2个基因群，基因组IV（GGIV）和基因组V（GGV）各有1个基因群。与人类有关的主要是GGI、GGII和GGIV。
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测
诺瓦克病毒（Norwalk Viruses，NV）是人类杯状病毒科(Human Calicivirus，HuCV)中诺如病毒（Norovirus,NV）属的原型代表株。NV是一组形态相似、抗原性略有不同的病毒颗粒。诺瓦克病毒最早是从1968年在美国诺瓦克市暴发的一次急性腹泻的患者粪便中分离的病原。2002年8月第八届国际病毒命名委员会批准名称为诺如病毒（Norovirus,NV）。诺如病毒与在日本发现的札幌样病毒（Sapporo-like Virus，SLV），正式名称为札如病毒(Sapovirus,SV)，合称为人类杯状病毒。诺如病毒感染性腹泻在全世界范围内均有流行，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发。
诺如病毒抗体没有显著的保护作用，尤其是没有长期免疫保护作用，极易造成反复感染。诺如病毒感染性强，以肠道传播为主，可通过污染的水源、食物、物品、空气等传播，常在社区、学校、餐馆、医院、托儿所、孤老院及军队等处引起集体暴发。诺如病毒有许多共同特征：直径约为26～35nm，无包膜，表面粗糙，球形，呈二十面体对称；从急性胃肠炎病人的粪便中分离，不能在细胞或组织中培养，也没有合适的动物模型；基因组为单股正链RNA；在氯化铯密度梯度中的浮力密度为1.36～1.41g/cm3；电镜下缺乏显著的形态学特征，负染色电镜照片显示，NV是具有典型的羽状外缘，表面有凹痕的小圆状结构病毒。
诺如病毒根据遗传性分为5个基因组，至少有29个基因群，其中基因组I （GGI）有8个基因群，基因组II（GGII）有17个基因群，基因组III（GGIII）有2个基因群，基因组IV（GGIV）和基因组V（GGV）各有1个基因群。与人类有关的主要是GGI、GGII和GGIV。
诺如病毒检验（食品微生物学检验）
诺如病毒检验（食品微生物学检验）
食品安全国家标准
食品微生物学检验诺如病毒检验
1范围
本标准规定了食品中诺如病毒(N o r o v i r u s)的实时荧光R T-P C R检测方法三
本标准适用于贝类,生食蔬菜,胡萝卜二瓜二坚果等硬质表面食品,草莓二西红柿二葡萄等软质水果等食品中诺如病毒核酸的检测三2设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:
2.1实时荧光P C R仪三
2.2冷冻离心机三
2.3无菌刀片或等效均质器三
2.4涡旋仪三
2.5天平:感量为0.1g三
2.6振荡器三
2.7水浴锅三
2.8离心机三
2.9高压灭菌锅三
2.10低温冰箱:-80?三
2.11微量移液器三
2.12p H计或精密p H试纸三
2.13网状过滤袋:400m L三
2.14无菌棉拭子三
2.15无菌贝类剥刀三
2.16橡胶垫三
2.17无菌剪刀三
2.18无菌钳子三
2.19无菌培养皿三
2.20无R N a s e玻璃容器:见E.1.2三
2.21无R N a s e离心管二无R N a s e移液器吸嘴二无R N a s e药匙二无R N a s e P C R薄壁管:见E.1.3三
3试剂
除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯;实验用水均为无R N a s e超纯水:见E.2.1三3.1 GⅠ二GⅡ基因型诺如病毒的引物二探针:见A.1三
3.2过程控制病毒的引物二探针:见A.1三
3.3过程控制病毒:制备见附录C三
3.4外加扩增控制R N A:制备见附录D三
3.5 T r i s/甘氨酸/牛肉膏(T G B E)缓冲液:见E.2.2三
诺如病毒分析检测方法
食安大讲堂
T
logy
科技
62 食品安全导刊 2017年6月诺如病毒感染性腹泻是在全世界范围内的流行疾病，全年均可发生感染，感染对象主要是成人和学龄儿童，寒冷季节呈现高发状态。诺如病毒感染性强，近些年国内外也爆发过多次由诺如病毒引起的病毒感染事件。为了让大家更好地了解诺如病毒，北京良润生物科技有限公司总经理刘磊老师来到了食安大讲堂，向观众分享了他多年来从事诺如病毒研究的相关认知。
诺如病毒感染事件
近年来，国内爆发了多次诺如病毒感染事件：2010年12月，广州从化有429人发病，调查后最终确认是由水污染引起的诺如病毒感染；2013年4月，揭阳市某学院有近400人患感染性腹泻，经当地疾控中心化验判断，主要是诺如病毒传播引起的；2014年2月，嘉兴市有400多名学生感染就医，累计报告发病人数511人；2014年12月，广州越秀区某小学21人发病，波及217人；2015年1月深圳有140名发病，经检测已确定引发此症状的原因系诺如病毒；2016年3月，北京市卫计委公布数据显示，2016年1~2月，北京市报告了31起急性胃肠炎聚集性疫
情，其中有28起是由诺如病毒引发。以上每次事件波及的人数众多，对我国人民的生命财产安全造成了很大损失。
诺如病毒检测方法
诺如病毒（Norovirus，NoV），又称诺瓦克病毒，是一组形态类似、抗原略有不同的病毒颗粒。可感染人或动物，引发急性肠胃炎、冬季呕吐性疾病、胃肠性流感等病症，主要临床表现为头痛、发热、恶心、腹痛腹泻等，是非细
菌性胃肠炎的主要病原体之一。随着检测技术的不断进步，对于诺如病毒的检测也出现了越来越多的方法，其中代表性的方法有电镜法、免疫法、RT-PCR 3种（对比见表1）。
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测
诺如病毒实验室检测是由世界卫生组织（W）提供的病毒实验室技术，用于快速检测出Novel Coronavirus（2019-nCoV）的流行及分布情况。它是世界卫生组织成立的Novel Coronavirus Global Outbreak and Response Network （GOREN）实施的核心技术。该技术可以用来快速识别未经认证的病毒分子样品及做出实时分析，以确定最新的病毒流行状况。
病毒实验室检测（VLT）是以酶链反应（PCR）技术为基础的实验室检测技术，该技术由完善的实验室设备、抗体探测和液体培养而构成。该技术检测标本的PCR物质，以确定目标病毒的丰度。如果有检测到诺如病毒，样本分析结果可以反映出阳性病毒的基因组大小，以及有用的病毒分类学和流行病学信息。
同时，诺如病毒实验室检测还可以与预防性药物开发、疫苗研发，以及免疫识别研究等有关，以及抗体检测和其他免疫应答技术。这些技术都将减少病毒引发病患数量，提高临床治疗和护理效果，改善国家免疫aad健康水平。
诺如病毒实验室检测技术在2020年起就得到广泛应用，特别是在世界各地展开的新冠疫情监测和应急决策的基础上。它被推广应用到全世界的实验室，以支持全球新冠病毒抗击工作，为国际健康护卫树立良好的抗病路径。
从技术上来说，诺如病毒实验室检测不仅有诸多便利之处，而且可以快速、精准有效地分析病毒样本。此外，该技术还可以通过抗体检测和免疫应答的测试，帮助提高实验室的诊断技术，促进现代医疗保健事业的发展。
总之，诺如病毒实验室检测在新冠爆发的情况让我们把它用来检测病毒的模式变得更加准确、可靠和有效。它已经成为评估新冠疫情流行特征的有效方法，也可以用来为抗病研究和防疫工作提供重要支持。
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附件4
诺如病毒标本处理和实验室检测技术方案
诺如病毒完整的检测及分型流程包括标本前处理、RNA提取、Real-time RT-PCR检测、传统RT-PCR检测、测序和基因分型6个步骤。Real-time RT-PCR方法灵敏度和准确度高，是检测诺如病毒的金标准。用传统RT-PCR可对Real-time RT-PCR阳性标本的PCR产物进行测序，通过序列分析确定诺如病毒的基因群和基因型。在发生聚集或暴发时，ELISA方法可作为辅助的手段快速检测诺如病毒抗原。食品、水、环境涂抹样检测方法的灵敏度不稳定，仅作为参考方法。
一、标本前处理
1.粪便、呕吐物
1.1设备和材料
微量移液器、无菌过滤器、漩涡振荡器、微量离心机、1.5 ml无菌离心管、10 mM pH 值为7.0－7.4的PBS。
1.2 操作方法
（1）离心管每管分装0.5 mlPBS。用一次性移液管（或无菌棒）添加豌豆大小的粪便（约0.1 g），稀释成约10％至20％（重量/体积）的粪便悬浮液。当粪便样品是液态时，不必在PBS中稀释，直接使用500 µl的样品。
（2）漩涡振荡每个样品1 min。在2 400 g下离心5 min，使得固体沉淀。澄清上清液可以直接用于病毒核酸提取或贮存于－70℃。
（3）取澄清的上清液200 µl进行RNA提取。
2.水
通过阴离子滤膜过滤水样品。用牛肉膏（1.5%w/v）含0.05 M甘氨酸（pH9.0）缓冲液洗脱附在膜上的病毒。使用Microsep 100TM 或 CentriconTM columns离心管进一步浓缩洗脱液。
2.1设备和材料
DEPC水、新配置次氯酸盐（至少1%）或等效消毒剂、Millipore HA filter（孔径0.45um、）、换膜过滤器、真空泵、计时器、PH值酸度计、磁力搅拌器及转子、低温冰箱（-20℃、-70℃）、Microsep 100 K columns（PALL公司）、Centriprep YM-50（Millipore公司）、洗脱液（BE-0.05Gly pH7.0）、PBS (pH7.2)、离心机、氯仿、丁醇。
2.2操作方法
2.2.1过滤装置准备
（1）使用无菌的镊子将滤膜放在滤器架上，滤膜有3层，型号分别为Millipore HA filter、AP15和AP20，放置顺序为Millipore HA filter →AP15 →AP20。
注意：暴露出滤膜表面使其能与水样接触，请将滤膜光滑表面的那边向下。所有的玻璃器皿应干净无菌。每批水样使用不同的漏斗。
（2）将滤膜置中，将有刻度的漏斗放在滤器的上边。
（3）使用不锈钢滤器夹进行水的密封。
（4）真空泵连接1 000 ml的锥形瓶。
注意：为防止气溶胶的污染，应在无菌的环境中过滤，在生物安全柜进行操作。
（5）向滤器中倒入20 ml无菌水（DEPC水）检查滤膜的密封情况。
（6）打开泵，调整水的流速至形成缓慢的细流。
2.2.2 水样品的过滤
（1）向玻璃漏斗里倒水样，当水样完全滤过立刻关闭真空泵。
（2）用不锈钢的滤器夹，小心移开滤膜上的刻度漏斗。
2.2.3 用酸漂洗滤膜
将膜用无菌的镊子夹放在有200 ml0.05 mM H2SO4（pH3.0）的无菌500 ml烧杯中进行漂洗滤膜去除Mg2+。
2.2.4 洗脱
（1）将膜夹出放在无菌的60mm培养皿中，加5ml 洗脱液。盖上铝箔。
注意：要将滤膜的上边向下（倒置）放在锥形瓶里。
（2）将锥形瓶放在恒温摇床上，转速0.01g（45rpm），室温（23℃± 3℃），15min。
（3）关闭摇床，将洗脱液（大约5ml）转移到管子里。
2.2.5 中和洗脱液
用1 N HCl或1 N NaOH调整洗脱液的pH到7.0－7.4。检测前，洗脱液在－70℃储藏。
2.2.6 二次浓缩
方法一：用Microsep 100 K columns或Centriprep YM-50浓缩病毒
（1）为防止病毒的附着，先用无病毒粒子的洗脱液浸湿过滤器。
（2）将水标本滤膜洗脱液（大约5 ml）加入到浓缩柱中，2 400 g离心5 min。
（3）吸取浓缩液（约150 µl），转移至1.5 ml离心管中。
方法二：PEG沉淀
（1）向标本洗脱液中加入NaCl终浓度是0.3 mol/L（若洗脱液为5ml加0.08775g的NaCl）, 有助于病毒的沉淀，再等量加入PEG-6000终浓度为12.5％（w/v）（若洗脱液为5 ml，加0.0625g的PEG-6000。4 ℃过夜。
（2）4 ℃，9 600 g离心30 min，收集沉淀；
（3）Millipore HA filter，倾倒并弃掉上清液。每个离心管添加150－500 µl pH7.2（±0.2）PBS重悬沉淀物。将离心管放置在离心管架上，为更好的让缓冲液与沉淀物接触，将离心管架成一定角度放置。室温放置30 min。
注意：如果沉淀物没有溶解，可用缓冲液反复的轻轻吹打沉淀物。吹打过力会产生气泡。
（4）向悬液中加入等体积的氯仿/丁醇（1:1 vol/vol）混合。去除病毒悬液中的抑制剂。
（5）4 ℃，9 600 g，离心20 min。
（6）分离出水相（上清液），－80℃储藏。
（7）取200 µl上清液进行核酸提取。
3.环境涂抹样
将棉签在PBS里蘸湿，用力涂抹待测表面（最大面积100 cm2）后，立即浸入核酸提取试剂盒裂解缓冲液中，将棉签用力压EP管的侧壁，释放棉签中的液体。重复浸入和压侧壁的步骤3~4次，确保病毒最大释放量，直接进入核酸提取步骤。
4.食品
4.1贝类
4.1.1设备和材料:诺如病毒质控样（中国食品药品检定研究院）、高速离心机（可离心15ml~50 ml体积）、台式离心机、碎花制冰机、生物安全柜、实时荧光定量PCR检测系统、眼科剪、眼科镊、一次性无菌培养皿、恒温摇床、高压灭菌器、电磨均质器（LX134MO）、一次性研磨杵（上海生工）、15 ml去RNAase离心管、1.5 ml 去RNAaseEppendorf 管、20 µl、200 µl、1 000 µl微量移液器、 PBS溶液 pH7.2 （Gebico）、蛋白酶K（PCR级 Roche）。
4.1.2 贝类样品处理程序
采集贝类样品，进行解剖，剪取消化腺和肠道后均质，最后提取RNA。
4.1.3 解剖方法
5个贝类个体作为一件样品，分别解剖，取其消化腺和肠道，用于检测。如果一件样品的消化腺和肠道的总质量不够2.0 g，应适当增加取样量，使得每件样品检验的总质量达到2.0 g。