(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告
动物细胞传代培养试验报告
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篇一:细胞传代培养实验报告
细胞传代培养
一.实验目的
初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本
操作过程,为生物技术在医学上的
应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞,模拟体内生理条件,在人工培养条件下使其生存、生
长、繁殖或传代,这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察
活细胞,并在有控制的环境条件下进行实验,避免了体内实验时的许多复杂因素,还可以与
体内实验互为补充,可同时提供大量生物性状相同的细
胞作为研究对象,耗费少,比较经济,
因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为
原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散
后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传
代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受
温度、渗透压、ph值、无机盐影响,消毒、配液等均有严格的规范和要求,特别是无菌操
作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂
1、细胞:293细胞株
2、试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)
3、仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、电动枪,培养板,吸液枪,5ml玻璃吸管、酒精
灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1〜2m10.25%胰酶溶液,使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液,再次加入2ml左右的胰酶,同样马上吸去,再加入几滴胰酶放入培养箱中消化几分钟
细胞培养实验报告
动物细胞造就
一.实验目标.
1.控制无菌操纵技巧.
2.控制原代和传代细胞造就.
3.控制细胞冷冻和苏醒技巧.
4.懂得造就成纤维细胞的形态.
二.实验道理.
将动物机体的组织从机体中掏出,经各类酶(经常运用胰蛋白酶).螯合剂(经常运用EDTA)或机械办法处理,疏散成单细胞,置适合的造就基中造就,使细胞得以生计.发展和滋生,这一进程称原代造就.
细胞在造就瓶长成致密单层后,已根本上饱和,为使细胞能持续发展,同时也将细胞数目扩展,就必须进行传代(再造就). 传代造就也是一种将细胞种保管下去的办法.同时也是运用造就细胞进行各类实验的必经进程.悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才干分瓶.
对具有移动特征的稳固细胞系或细胞株进行长期保管,一方面可以作为细胞研讨的实验材料,另一方面可以做细胞成品的临盆材料.今朝普遍运用的细胞保管办法是低温冷冻保管法,.细胞的冷冻保管的原则是慢冻快融,如许做是为了防止细胞因为冷冻进程中产生了冰晶而产生细胞决裂.
三.实验器材及药品.
器材:怀孕的小白鼠.造就箱.造就瓶.造就皿.移液器.眼科剪.镊子.酒精灯.离心计心情.水浴锅.倒置显微镜.CO2造就箱.超
净工作台.离心管.高压灭菌锅.试管架等.
药品:小牛血清.DMEM合成造就基.抗生素.DMSO冷冻剂.胰酶.PBS 缓冲液等.
四.实验操纵.
1.消毒灭菌.
将实验所需用到的对象(如枪头.造就皿.眼科剪.镊子以及每小我的实验服等)分散灭菌.烘干.配制75%的酒精以备实验时所需.
2.造就基的配制.
分别取10ml的小牛血清.90ml的DMEM合成造就基,将两种造就基混杂在一路,再向个中参加1ml的抗生素,吹打混匀就得到了细胞造就的造就液.
动物细胞培养实验
动物细胞培养实验
实验⼀:实验器材准备
【实验原理】
细胞培养技术与其他⼀般实验室⼯作的主要区别在于要求保持⽆菌操作,避免微⽣物及其他有害因素的影响。⼀般标准的细胞培养室应包括配液室、准备室和培养室。三室既相互连接⼜相对独⽴,各⾃完成培养过程中的不同操作。
【实验⽬的】
①培养室的设置和设备。
②⽆菌概念和⽆菌操作要领。
【操作步骤】
1.实验室设置
(1)配液室
(2)准备室
(3)培养室
培养室内要完全密闭,保持恒定的温度,在设计上要注意以下⼏点:
①培养室的位置最好设在阴⾯,阳光不能直接照射的地⽅,防⽌室内温度增⾼。
②天花板的⾼度不要超过2⽶,以保证紫外灯的有效杀菌效应,
③门⼀般⽤拉门,以防⽌空⽓流动。
④天花板、地板和四周墙壁要光滑⽆死⾓,要镶瓷砖或涂油漆,这样设计,⼀是便于清洗和消毒,另外也不易在墙⾓堆积灰尘。
2.实验室常⽤设备
(1)准备室的设备
①双蒸馏⽔蒸馏器:制备双蒸⽔。
②酸缸:盛洗液,浸泡玻璃器具。
③⼲燥箱:洗涤完的玻璃器⽫⽤⼲燥箱烘⼲。
④⾼压锅:玻璃器⽫、解剖⽤具、部分液体、塑料器具等灭菌。不同物品其有效灭菌压
⼒和时间不同。
⑤储品柜1:放置未消毒物品。
⑥储品柜2:放置已消毒物品。
准备室注意事项:
①预防蒸馏器被烤⼲。
②勿将酸液溅到⾐物或地⾯。
③勿将⾼压锅排⽓阀和安全阀堵塞。
④已消毒物品应与未消毒物品分柜存放。
(2)配液室的设备
①天平(扭⼒天平和电⼦天平):称量⽤
②pH计。
③磁⼒搅拌器。
(3)细胞培养室的设备
①超净⼯作台:
超净⼯作台的种类很多,有单⾯单⼈、单⾯双⼈、双⾯双⼈或双⾯四⼈等,其⼯作原理是利⽤⿎风机,使通过⾼效滤⽓的空⽓,徐徐通过台⾯,这样使⼯作环境中具⽆菌⽽均匀的空⽓。
细胞培养实验报告.docx
动物细胞培养
一、试验目的。
1、掌握无菌操作技术。
2、掌握原代和传代细胞培养。
3、掌握细胞冷冻和复苏技术。
4、了解培养成纤维细胞的形态。
二、试验原理。
将动物机体的组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用EDTA )或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
对具有移动特性的稳定细胞系或细胞株进行长期保存,一方面可以作为细胞研究的试验材料,另一方面可以做细胞制品的生产材料。目前广泛应用的细胞保存方法是低温冷冻保存法,。细胞的冷冻保存的原则是慢冻快融,这样做是为了防止细胞由于冷冻过程中产生了冰晶而发生细胞破裂。
三、实验器材及药品。器材:怀孕的小白鼠、培养箱、培养瓶、培养皿、移液器、眼科剪、镊子、酒精灯、离心机、水浴锅、倒置显微镜、CO2 培养箱、超净工作台、离心管、高压灭菌锅、试管架等。
药品:小牛血清、DMEM 合成培养基、抗生素、DMSO 冷冻剂、胰酶、PBS 缓冲液等。
四、实验操作。
1、消毒灭菌。
将实验所需用到的工具(如枪头、培养皿、眼科剪、镊子以及每个人的实验服等)集中灭菌、烘干。配制75%的酒精以备实验时所需
2、培养基的配制。
分别取10ml 的小牛血清、90ml 的DMEM 合成培养基,将两种培养基混合在一起,再向其中加入1ml 的抗生素,吹打混匀就得到了细胞培养的培养液。
动物细胞培养、计数、冷冻与复苏实验
动物细胞培养、计数、冷冻和复苏
实验报告
由于本次实验分三天进行,日期分别为10月31日(周一)、11月2日(周三)、11月4日(周五),实验内容分别为动物细胞培养、结束,动物细胞冷冻以及最后的动物细胞的复苏,又因为冷冻和复苏可视为连续环节,故本报告分成两个部分来记录本次实验,具体内容如下:
I. 动物细胞的培养和计数
一、实验目的
由动物细胞表达和合成的蛋白质除了具有正确的氨基酸序列之外,在加工过程中还能以正确的方式进行折叠和修饰,且大多能以天然形式分泌到培养基中,从而确保了所生产的蛋白质具有与天然产物一致的生物活性、免疫原性和体内寿命,这些特点使得动物细胞成为工业化生产诊断和治疗用生物产品的理想宿主,如各类重组蛋白质和单克隆抗体等。另外,目前方兴未艾的组织工程、干细胞工程等也是和细胞培养技术密切相关的,因此,可以说细胞培养技术是细胞工程、组织工程等研究领域的基础。
本实验的目的是让学生学习和了解动物细胞培养的基本操作,以及相关的细胞培养前准备工作、细胞培养的环境条件和其他有关注意事项;用血球计数板对培养瓶中的细胞进行计数以及用台盼蓝计细胞的存活率。
二、基本原理
动物细胞与组织培养是从动物体内取出细胞或组织,模拟体内的生理环境,在无菌、适温和丰富的营养条件下,使离体的细胞或组织生存、生长并维持结构和功能的一门技术,是动物细胞工程的基础。
体外培养可分为原代培养和传代培养,原代培养是指将机体取出的细胞或组织进行实效培养的过程,这样的细胞称为原代细胞,原代细胞通常只能培养10-50代左右即退化死亡;由原代细胞通过变异、分化等手段筛选出来具有无限次代培养能力的细胞群称为细胞系,这类细胞的培养称为传代培养。
细胞培养实验报告
动物细胞培植之阳早格格创做
一、考查脚段.
1、掌握无菌支配技能.
2、掌握本代战传代细胞培植.
3、掌握细胞热冻战复苏技能.
4、相识培植成纤维细胞的形态.
二、考查本理.
将动物肌体的构造从肌体中与出,经百般酶(时常使用胰蛋黑酶)、螯合剂(时常使用EDTA)或者板滞要领处理,分别成单细胞,置符合的培植基中培植,使细胞得以存正在、死少战繁殖,那一历程称本代培植.
细胞正在培植瓶少成致稀单层后,已基础上鼓战,为使细胞能继承死少,共时也将细胞数量夸大,便必须举止传代(再培植). 传代培植也是一种将细胞种保存下去的要领.共时也是利用培植细胞举止百般真验的必经历程.悬浮型细胞曲交分瓶便不妨,而揭壁细胞需经消化后才搞分瓶.
对于具备移动个性的宁静细胞系或者细胞株举止少久保存,一圆里不妨动做细胞钻研的考查资料,另一圆里不妨搞细胞造品的死产资料.暂时广大应用的细胞保存要领是矮温热冻保存法,.细胞的热冻保存的准则是缓冻快融,那样搞是为了预防细胞由于热冻历程中爆收了冰晶而爆收细胞破裂.
三、真验器材及药品.
器材:有身的小黑鼠、培植箱、培植瓶、培植皿、移液器、眼科剪、镊子、酒粗灯、离心机、火浴锅、倒
置隐微镜、CO2培植箱、超洁处事台、离心管、下压
灭菌锅、试管架等.
药品:小牛血浑、DMEM合成培植基、抗死素、DMSO热冻剂、胰酶、PBS缓冲液等.
四、真验支配.
1、消毒灭菌.
将真验所需用到的工具(如枪头、培植皿、眼科剪、镊子以及每部分的真验服等)集结灭菌、烘搞.配造75%的酒粗以备真验时所需.
2、培植基的配造.
分别与10ml的小牛血浑、90ml的DMEM合成培植基,将二种培植基混同正在所有,再背其中加进1ml的抗死素,吹挨混匀便得到了细胞培植的培植液.
1、动物细胞传代培养与观察实验报告
1、动物细胞传代培养与观察实验报告
动物细胞传代培养与观察实验
实验目的
了解动物细胞传代培养的基本原理,熟练掌握动物细胞传代培养的基本操作。
实验原理
传代培养是组织培养常规保种方法之一。贴壁细胞生长增殖形成单层细胞后,会进一步扩展汇合,覆盖整个培养瓶底,细胞会因生存空间不足或密度过大,发生接触抑制,并引起营养物质枯竭和代谢产物积累,发生细胞中毒,影响正常生长。这时需要进行分离培养,细胞由原培养瓶按一定比例稀释后,分种到新的培养瓶中继续培养,这一过程就叫细胞传代。
胰酶是一种蛋白酶,通过在特定位置上降解蛋白,将细胞膜和培养皿壁结合处蛋白降解,使两者分离,贴壁的单层细胞脱离下来,形成分散的细胞悬液,然后用新鲜的培养液进行稀释、分装和培养。
传代要在严格的无菌条件下进行,每一步都需要认真仔细的无菌操作。
实验材料与用品
1、材料:培养皿,移液枪,枪头,移液管,废液缸,75%酒精棉球,酒精灯,酒精喷壶,HELA细胞。
2、药品:培养基(DMEM含10%胎牛血清),0.25%胰蛋白酶。
3、仪器:二氧化碳培养箱(37℃,5%C02),倒置显微镜,超净工作台。
实验步骤
1、进入无菌室前准备:在进入无菌室之前穿好实验服,用肥皂洗手,75%酒精擦拭消毒双手,进入无菌室之后双手带上乳胶手套,用酒精消毒。
2、观察细胞状态:于倒置显微镜下观察细胞形态,确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。
3、预热培养基:将培养基和胰蛋白酶置37℃水浴锅内提前预热。
4、超净台紫外消毒:超净台台面应整洁,打开超净台的紫外灯照射台面20 min左右,关闭超净台的紫外灯,打开抽风机清洁空气,除去臭氧,点燃酒精灯。
细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
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细胞生物学小鼠细胞培养实验报告
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广州大学
综合设计性实验报告
学院生命科学学院
课程细胞生物学实验
实验项目细胞培养
实验题目小鼠肝细胞的原代培养
专业生物技术
年级、班别生技142
姓名徐嘉宽
学号 1414300030
任课教师陈鲲
细胞培养
——小鼠细胞的原代培养
摘要目的探讨体外分离和培养小鼠肾、脑、心肌细胞的方法。方法采用脱臼法处死新生小鼠,结合酶消化法和组织块法对新生小鼠肾、脑、心肌细胞进行了体外分离、培养。(用眼科剪把新生小鼠心肌细胞组织剪成小于1mm³大小的植块,然后用胰蛋白酶消化5~10min,最后将心肌组织块接种于培养瓶中进行体外培养。脑和肾直接进行组织块培养。)结果比较成功地进行了原代肾、脑、心肌细胞培养,并进行了形态学观察。结论采用该方法能够实现对小鼠心肌、肾、脑细胞的体外原代培养,较好观察到心肌、脑、肾细胞的形态。
关键词原代培养小鼠细胞组织块法酶消化法
1前言
初步了解动物细胞原代培养的基本方法、原理和基本操作过程,初步掌握无菌操作方法。学习植块培养法、营养液的配置及酸碱度的调节。细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。当
前,细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域,已发展成为一种重要的生物技术。了解动物细胞培养的技术的基本操作过程,观察体外培养细胞的生长特征,并对原代培养有一个基本概念。结合酶消化法和组织块法通过无菌操作培养新生小鼠细胞。
动物细胞培养技术实验
实验十五动物细胞培养技术及其应用
一.实验目的
通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。
二. 实验内容
1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术;
2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术;
3.细胞污染检测方法与技术;
4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。
三.实验用品
1. 材料:Sf 细胞、Hi5 细胞等
2. 器材:CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH
计、液氮罐(含液氮)、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液
管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、
24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH
试纸、酒精棉球等
3. 试剂与药品:Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗(青霉素、链霉素)100 u/ml、
Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris
碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉(电泳用)、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、
DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit (Qiagen)等。
四.实验方法与步骤
(一)培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏
1. 缓冲液及培养基配制
Hank’s液:KH2PO4 0.06g,NaCl 8.0g,NaHCO3 0.35g,KCl 0.4g,葡萄糖1.0g,Na2HPO4·H2O 0.06g,加H2O至 1000ml,高压灭菌。4℃下保存。
第三节动物细胞培养
我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的?
有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无 限增殖能力同时具备呢?
目的:制备单克隆抗体. 原理: B淋巴细胞能产生抗体,骨髓瘤细胞能无 限增殖,杂交瘤细胞既能产生抗体又能无 限增殖。 设计方案: 一个B淋巴细胞--只分泌一种特异性抗体
小鼠骨髓瘤细胞--能无限增殖
植物、动物细胞融合的比较
比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合
细胞融合的原理 细胞融合的方法
诱导方法
细胞膜的流动性、 细胞膜的流动性 植物细胞全能性 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 物理(离心、振 荡、电刺激) 使细胞分散后诱 导细胞融合 物理、化学方法 (同左)
化学(聚乙二醇) 灭活的病毒 用 途 获得杂种植株 主要用于制备 单克隆抗体
代谢产物
植物体细胞杂交
植物细胞A
去细胞壁
原生质体融合
杂种细胞
植 物 组 织 培 养
植物细胞B
愈伤组织
植物细胞融合
杂种植株
这个过程中涉及的原理是? 细胞膜的流动性 植物细胞的全能性
动物细胞工程
常用技术 动物细胞培养 动物组织培养 细胞核移植 体细胞克隆 动物细胞融合 单克隆抗体
动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技 术的基础。
第二次筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细这样融合成的杂交瘤细胞继承了双亲细胞的遗传物质不仅具有细胞分泌抗体的能力而且还有无限增殖的本领因而可以获得大量单克隆抗体主要用于制备单克隆抗体获得杂种植株物理化学方法同左灭活的病毒物理离心振荡电刺激化学聚乙二醇诱导方法使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞全能性细胞融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目比较项目下图为某同学根据杂交瘤技术的方法设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案过程常用作为诱导剂该细胞继承的遗传特性既能淋巴细胞抗体细胞融合双亲细胞分泌抗体无限增殖体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中正确的是淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成
(完整word版)动物细胞培养技术实验报告
一、实验目的
1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理
细胞培养(cell culture):细胞在体外条件下生长,细胞不再形成组织。
动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力,为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养(primary culture)即直接从动物机体分离、获得组织细胞,在无菌条件下,用胰蛋白酶消化或机械分散等方法,将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养(subculture)当细胞生长增值达到一定密度,用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞,将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体,在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的,但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究,则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料,对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制,也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性,因此,动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段,被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料
1、细胞培养室
无菌操作区:只限于细胞培养及其它无菌操作,与外界隔离。
细胞培养实验报告
细胞培养实验报告
引言:细胞培养是一项关键的实验技术,被广泛运用于生物医学研究以及产业生产领域。本实验旨在通过培养小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)并观察其生长、形态特征以及细胞增殖情况,探究细胞培养技术的应用和原理。
实验方法:本实验通过收集小鼠胚胎,将其胚体分离为单个细胞,并在含有完善的培养基的培养皿中进行培养。细胞培养过程需要细致地调节温度、湿度和培养基组分的浓度,以提供细胞正常生长所需的环境条件。
结果与讨论:
1. 细胞形态观察:在培养7天后,我们观察到细胞呈现典型的长条状形态,细胞质呈深染的圆形,细胞核体积大且显著染色。这些形态特征与前人研究得出的成纤维细胞特征相符,表明成功培养的细胞为成纤维细胞。
2. 细胞增殖情况:为了观察细胞增殖情况,我们定期记录细胞的数量。结果显示,在培养的前3天内,细胞数量迅速增加,呈
指数增长趋势。然而,在培养达到第4天后,细胞数量的增长速
度下降,呈现对数增长趋势。这与前人研究中发现的细胞生长曲
线相吻合,即细胞在培养初期呈现快速增殖,随后进入平台期。
3. 细胞死亡情况:我们也检测了细胞的死亡情况。结果显示,
在培养的前3天内,细胞死亡率较低,细胞具有良好的存活率。
然而,随着培养时间的延长,细胞死亡率逐渐升高。这可能是由
于细胞寿命受到限制,受到培养基中营养物质的消耗和毒性物质
的积累的影响。
4. 细胞传代:为了延续细胞的生长,我们进行了细胞传代的实验。在细胞密度达到一定水平后,我们对细胞进行了传代,并观
察到新传代的细胞能够生长并形成典型的细胞群。这证实了我们
成功地培养出了具有传代潜能的细胞。
细胞培养技术实验报告
细胞培养技术实验报告
细胞培养技术实验报告
细胞培养技术是现代生物学研究中不可或缺的重要手段之一。通过细胞培养技术,研究人员可以在实验室中培养和研究各种类型的细胞,以便更好地了解细胞的结构、功能和生理特性。本文将从细胞培养的原理、培养基的配制和培养条件的控制等方面,详细介绍细胞培养技术的相关内容。
一、细胞培养的原理
细胞培养的原理是将细胞从生物体中分离出来,置于含有适当营养物质的培养基中,提供适宜的温度、湿度和气体环境,使细胞能够在体外生长和繁殖。细胞培养的关键是培养基的配制,培养基中必须包含细胞所需的营养物质,如氨基酸、糖类、维生素等,同时还需要添加生长因子、激素和抗生素等物质,以促进细胞的生长和增殖。
二、培养基的配制
培养基的配制是细胞培养中的重要环节。不同类型的细胞需要不同的培养基,因此在进行细胞培养实验时,需要根据具体的细胞类型选择适当的培养基。一般来说,培养基主要包括基础培养基和补充物两部分。
基础培养基是指提供细胞生长所需的基本营养物质的培养基,如DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium)、RPMI 1640(Roswell Park Memorial Institute 1640)等。补充物则是指在基础培养基中添加的各种生长因子、激素和抗生素等物质。常见的补充物有胎牛血清、胰岛素、转铁蛋白、乳酸等。在配制培养基时,需要注意各种成分的浓度和比例。浓度过高或过低都会对细胞的生长和增殖产生影响。此外,培养基的pH值也是一个重要的参数,一般
细胞培养的pH值在7.2-7.4之间。
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告
实验目的
本实验的目的是通过培养和观察动物细胞,了解细胞的结构和功能。
实验材料和设备
•动物细胞培养基
•细胞培养皿
•细胞培养罩
•无菌移液器
•显微镜
•离心机
实验步骤
步骤一:准备工作
1.将工作台、实验室器材和手部清洗消毒,确保无菌环境。
2.准备所需的实验材料和设备。
步骤二:细胞培养基的制备
1.将细胞培养基倒入细胞培养皿中,每个培养皿倒入适量的培养基。
2.用无菌移液器将细胞培养基均匀涂布在培养皿内表面。
3.将培养皿放入细胞培养罩中,用透明膜封闭。
步骤三:细胞的收获
1.从实验动物体内提取所需的组织样本,保持组织样本的完整性和无菌状态。
2.将组织样本置于离心管中,加入少量的预先准备好的细胞培养基。
3.使用无菌移液器将组织样本与细胞培养基充分混合。
4.将混合液转移到培养皿中,确保液体均匀覆盖培养皿表面。
步骤四:细胞培养
1.将培养皿放入孵化器中,设置合适的温度和湿度,提供细胞生长所需的最佳环境条件。
2.定期观察培养皿内细胞的生长情况,记录细胞的数量和形态变化。
步骤五:细胞观察
1.从培养皿中取出一小部分细胞,放入显微镜载玻片上。
2.将载玻片放入显微镜下,使用适当的倍率观察细胞的形态特征和细胞
器的结构。
3.记录细胞的形态特征、大小和细胞器的分布情况。
实验结果和讨论
通过以上步骤,我们成功地进行了动物细胞的培养实验,并观察到了细胞的生
长和形态变化。在显微镜下观察到的细胞形态特征和细胞器的结构,可以帮助我们更好地理解细胞的组成和功能。
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段,通过培养和观察细胞,我们可以深
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告
动物细胞培养实验报告
引言:
动物细胞培养是一项重要的实验技术,广泛应用于生物医学研究、药物开发和
生物工程等领域。本实验旨在通过培养动物细胞,观察细胞的生长、分裂和功
能表达,以及研究细胞在不同环境条件下的生理和生化特性。
材料与方法:
1. 细胞培养基:选择适合培养动物细胞的培养基,如DMEM或MEM等。
2. 细胞培养器具:细胞培养瓶、细胞培养皿、离心管、显微镜等。
3. 细胞株:选择合适的细胞株,如人类肺癌细胞株A549。
4. 细胞培养条件:温度、湿度、CO2浓度等。
5. 细胞培养试剂:胎牛血清、抗生素等。
实验步骤:
1. 细胞传代:将细胞株从冻存管中取出,加入培养基中,将细胞传代至合适的
密度。
2. 细胞培养:将细胞悬浮液均匀地加入细胞培养器具中,放入培养箱中培养。
3. 细胞观察:使用显微镜观察细胞的形态、数量和分裂情况。
4. 细胞染色:使用荧光染料或细胞染色剂对细胞进行染色,观察细胞内部结构。
5. 细胞功能表达:通过Western blot、PCR等技术,检测细胞中特定基因或蛋
白的表达情况。
6. 细胞处理:在特定条件下处理细胞,如药物处理、温度变化等,观察细胞的
反应和变化。
7. 细胞计数:使用细胞计数板或细胞计数仪等工具,统计细胞的数量。
结果与讨论:
1. 细胞生长:观察到细胞在培养基中呈现出典型的生长曲线,包括潜伏期、对
数期和平台期。
2. 细胞形态:细胞在培养基中呈现出典型的形态特征,如细胞核的形状、细胞
质的颜色等。
3. 细胞分裂:观察到细胞在培养基中进行有丝分裂或无丝分裂,并计算细胞分
细胞培养的实验报告
细胞培养的实验报告
细胞培养的实验报告
引言:
细胞培养是生物学研究中常用的技术手段之一,它可以为我们提供大量的细胞供应,从而进行各种实验研究。本实验旨在通过细胞培养技术,观察细胞的生长和分裂情况,并探究不同培养条件对细胞生长的影响。
实验材料与方法:
1. 细胞培养基:含有营养物质、生长因子和抗生素的培养基。
2. 细胞培养器:培养细胞的容器,如培养皿、细胞培养瓶等。
3. 细胞培养物:实验中使用的细胞株。
4. 培养箱:提供适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
5. 显微镜:观察细胞生长和形态的工具。
实验步骤:
1. 准备培养基:按照说明书的要求,将培养基与适量的培养液混合均匀。
2. 细胞接种:将细胞株取出,加入培养基中,并使用移液器进行充分混合。
3. 培养条件调节:将培养器放入培养箱中,设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
4. 观察细胞生长:每隔一段时间,用显微镜观察细胞的生长情况,并记录细胞数量和形态变化。
5. 细胞分裂观察:在细胞生长到一定程度后,进行细胞分裂观察,记录细胞分裂的时间和方式。
6. 培养条件对比:将不同培养条件下的细胞生长情况进行对比分析,探究不同
条件对细胞生长的影响。
结果与讨论:
通过实验观察,我们发现细胞在培养基中能够良好地生长和分裂。在适宜的培
养条件下,细胞数量逐渐增多,并呈现出正常的形态。细胞分裂的时间和方式
也符合细胞生长的规律。而在不适宜的培养条件下,细胞生长受到抑制,数量
较少且形态异常。
进一步的对比分析发现,温度、湿度和二氧化碳浓度是影响细胞生长的重要因素。过高或过低的温度会导致细胞代谢异常,影响细胞的生长和分裂。湿度过
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一、实验目的
1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。
2、学习并掌握细胞传代培养的方法。
3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。
二、实验原理
细胞培养(cell culture):细胞在体外条件下生长,细胞不再形成组织。
动物细胞培养(animal cell culture)就是从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞(使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶)然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力,为细胞体外培养和研究提供可能。
动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。
原代培养(primary culture)即直接从动物机体分离、获得组织细胞,在无菌条件下,用胰蛋白酶消化或机械分散等方法,将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。
传代培养(subculture)当细胞生长增值达到一定密度,用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞,将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。
高等生物是由多细胞构成的整体,在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的,但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究,则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料,对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制,也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性,因此,动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段,被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。
三、细胞培养相关设施及材料
1、细胞培养室
无菌操作区:只限于细胞培养及其它无菌操作,与外界隔离。
孵育区:培养箱设定的条件为37℃,5%CO2。
制备区:培养液及有关培养用液体的制备,液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。
储藏区:包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。
清洗区和消毒灭菌区:清洗区为相对污染区,消毒灭菌区与清洗区分开。
2、细胞培养常用基本设施:
荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。
细胞培养常用器皿:培养瓶、培养板、培养皿,玻璃瓶、吸管,离心管、冻存管,注射器,烧杯、量筒等。
3、细胞培养用品的清洗、消毒
新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡,以中和其表面碱性物质:刷洗:
硫酸清洁液浸泡:浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水;
冲洗:流水冲洗15-20次,蒸馏水冲洗3次,三蒸水漂洗1-3次。
所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装,防止灭菌后污染。使用时放入超净工
作台后打开包装。
消毒灭菌:高压蒸汽灭菌(120℃,20min);紫外线消毒:主要用于实验室房间空气及操作台。
四、细胞培养用液及培养基
1、培养用液:水(高度纯净);缓冲液:平衡盐溶液,维持渗透压,调节PH值,供给细胞生存所需能量和无机离子成分;消化液:胰蛋白酶液,EDTA,胶原酶等。
2、培养基:维持体外细胞培养生存和生长的溶液。
(1)天然培养基:血清(胎牛血清、小牛血清、马血清、兔血清、人血清等)、血浆和组织提取液(如鸡胚和牛胚浸液)水解乳蛋白;
(2)合成培养基:根据细胞生存所需物质的种类和数量,用人工方法模拟合成。如TC199、BME、MEM等。主要成分:氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其他一些辅助物质。
五、动物细胞培养的条件
(1)无菌、无毒的环境:对培养液和所有培养用具进行无菌处理,通常还要在培养液中加入一定量的的抗生素,以防被污染。此外应定期更换培养液,以便清除代谢产物防止细胞代谢产物累积对细胞自身产生危害。
(2)营养物质:无机物(无机盐、微量元素等),有机物(糖、氨基酸、促生长因等)血清和血浆,但血清和血浆不是营养物质。
(3)温度和PH:36.5±0.5℃,7.2-7.4。
所需要的特殊条件:
(4)血清:动物细胞离体培养常常需要血清。最常用的是小牛血清。血清提供生长必需因子,如激素、微量元素、矿物质和脂肪。在细胞培养中的主要功能:1)提供维持细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或量很少的营养物以及主要的低分子营养物等;
2)提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等,能结合或调整改变它们所结合的物质活力;
3)有些情况下其结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用;
4)新生牛血清是细胞贴壁、铺展在塑料、玻璃等培养基质上所需因子的来源;
5)构成缓冲系统,调节酸碱平衡;
6)提供蛋白酶抑制剂,在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害;
(5)支持物:大多数动物细胞有贴壁生长的习惯。离体培养常用玻璃、塑料等作为支持物。
(6)气体交换:二氧化碳和氧气的比例要在细胞培养过程中不断进行调节,不断维持所需要的气体条件(95%的空气+5%的CO2混合气体),其中5%CO2气体是为保持培养液的PH稳定。
六、实验内容
1、用倒置荧光显微镜观察细胞形态
2、动物细胞传代
(1)培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代;
(2)准备好所需材料,先将手及超净工作台用酒精消毒,点燃酒精灯,将滴管用火焰烧,将PBS、培养基、胰酶准备好,要避免滴管交叉污染;
(3)将培养基喷酒精消毒,拿入超净工作台,用滴管把原有培养基吸掉;
(4)加入PBS吹洗培养皿(由于培养基中血清对胰酶消化有抑制作用,所以先用PBS洗),不要使劲吹,细胞贴壁不好,然后吸出PBS;
(5)加入适当的胰蛋白酶(使成单细胞悬液),消化30s,可快速在荧光显微镜下观察细胞形态,吸出胰酶;
(6)加入含有血清的培养基终止胰酶消化,用滴管吹打细胞,让细胞悬浮起来;
(7)根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中,一般癌细胞分5个,正常细胞传3个,放入孵箱继续培养;
(8)把超净工作台消毒收拾干净,将用过的滴管拿出超净工作台。
七、实验数据及分析
倒置荧光显微镜下HaCaT细胞形态