牦牛MOET技术研究进展

中国牛业科学2011,37(1):58 60,64

China Cattle Science综 述

牦牛M OET技术研究进展

姬秋梅,张成福,信金伟,达娃央拉

(西藏自治区青稞种质改良与牦牛繁育重点实验室培育基地,西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所,西藏拉萨850009)

摘 要:本文对近10年有关牦牛同期发情、超数排卵以及胚胎移植研究的相关报道进行了

总结,对国、内外有关牦牛在MOET技术研究中应用的方法和效果,对该技术研究进展进行

了综述。

关键词:牦牛;超数排卵;体外受精;胚胎移植

中图分类号:S814.8 文献标识码:A 文章编号:1001 9111 (2011)01 0058 03

牦牛(Bos gr unniens)作为牛属动物中能适应高寒环境的原始品种,主要分布在以青藏高原为中心的周边国家和地区,终年放牧条件下为当地人民提供肉、乳、役、毛、皮等生活和生产资料,养殖数量庞大(1600万头左右),但其生产力低下,尤其是母牦牛的繁殖力较低,繁活率在21.072%~45.51%之间,平均为32.28%[1]。高原气候寒冷干旱,牧草生长期短,枯草期长达7~8个月,冷季基本无补饲条件,造成牦牛营养严重匮乏,这是牦牛低繁殖力的重要因素之一[2]。自然放牧条件下,母牦牛一般为两年一胎(85%左右),部分为三年一胎(10%左右),少数有一年一胎(低于10%)。产后母牦牛在当年发情季节有90%以上表现为不发情,一方面,因家畜繁殖对营养状况非常敏感,低营养状况能延迟家畜性成熟,中断动物发情周期,延缓产后发情周期的恢复,同时低营养对家畜的性行为也有负效应[3];另一方面,张寿等[4]研究认为牦牛卵巢上较少的原始卵泡数在一定程度上也可能影响了它们的繁殖力。提高母牦牛繁殖力是牦牛生产的重要环节之一,国内外学者相继在牦牛超数排卵、人工输精、胚胎移植及M OET技术等方面做了研究工作。

M OET技术就是超数排卵(multiple o vulation)和胚胎移植(em br yo tr ansfer)技术的简称。通过超数排卵和胚胎移植,使母畜的繁殖力提高几十倍,应用于单胎动物在提高育种进展和育种效益方面具有较大的潜力。目前在国内,M OET技术已成功地用于良种肉牛的生产,其生长速度的遗传进展增长速度比常规育种体系高100%[5]。M OET技术相继在牦牛方面也得以应用,并取得了一定成果。现就M OET技术在牦牛方面的研究进展作一系统分析,为相关研究提供参考。

1 牦牛同期发情研究

牦牛是季节性发情的家畜,发情时间一般集中在6~9月份,又因海拔、气温、光照等条件不同而异,海拔在4500m左右的高原,牦牛发情高峰期在7月下旬到8月下旬。

在上世纪80年代,使用三合激素或三合激素与孕马血清促性腺激素(PM SG)进行牦牛同期发情较为普遍,但效果不是很理想,主要是由于成熟卵少[6]。近年来,人们开始使用多种激素组合进行牦牛的同期发情,结果不尽相同。权凯等[7,8]研究表明,自然发情的牦牛,两次PG法(在第一次颈部注射氯前列烯醇0.4mg后的第11d注射等量的PG)牦牛发情率(100%)显著高于一次注射(75%),并且发情的时间基本集中在24~48h之间(约占50%左右),两次PG注射法对半野血牦牛处理,在25~48 h内的发情率达到100%。同样Amag ash[9]采用两种不同的PGF2 制剂对母牦牛每日分两次注射(剂量为20m L,50mL),结果发情高峰期的8月份的受精率分别达到77.9%和78.9%。字向东等[10]应用LRH A3(促性腺素释放激素类似物,国营南京动物激素厂,300 g/头)对全奶母牦牛进行诱导发情,发情率和受胎率显著提高(21.4%)。王应安等[11]用FSH+PGF2 处理,牦牛同期发情率可达到73.3%。马晓宁等[12]用LH RH A3+PM SG处理,可使6~9岁牦牛的发情率达到93.3%,10~12岁

*收稿日期:2010 11 05 修回日期:2010 12 08

作者简介:姬秋梅(1965-),女,藏族,西藏拉萨市人,博士,研究员,主要从事牦牛放牧系统研究。

牦牛达60.0%,发情率跟牦牛的年龄有差异。字向东等[13]利用阴道孕酮释放器(CIDR,新西兰)+ PGF2 +PMSG诱导发情后,96h内的发情率达到100%。以上各种处理方法对半奶牦牛结果比全奶的效果要好。张君等[14]对产后牦牛进行激素(0d 注射PG CL,7d后连续3d注射LH RH A3)诱导发情、补饲(围产期)加激素诱导发情和只补饲(围产期)三组试验,其发情率分别为26.67%,45.45%和20%。张君[15]在对高原型牦母牛促发情试验研究表明,营养因素是当年产犊母牛不发情的主要因素。鉴此,牦牛为季节性发情家畜,发情期进行同期处理相比其他时间处理,其效果要好。

以上研究表明,多种激素组合进行牦牛同期发情处理已得到普遍的应用,但是组合的效果和各激素剂量标准还有待进一步研究。

2 牦牛超数排卵技术研究

超数排卵是胚胎移植技术中的重要环节,超数排卵的效果直接影响到可用胚胎的数量和质量。近年来有关牦牛超数排卵有一些研究报道,主要方法有CIDR B+FSH+PG[16];CIDR B+FSH法[17]; FSH+PG+H CG法[18];FSH递减法,FSH+LH 法,FSH+H CG法[19];两次PG+FSH法[8];Cu M ate+FSH+PGF2 法,PGF2 +FSH递减+ PGF2 法[20],其中最后一种超排法取得过一头牛冲到可用胚胎5枚的较好结果。另外,权凯等[8]用2次PG进行发情处理,第9d用FSH超排(8.8g),结果为平均每头冲胚数5.7枚,可用胚胎4枚,与姬秋梅等[20]报道的研究结果相近,与普通牛的超数排卵效果相似,是目前有关研究报道中最好的结果。

国内外用于超数排卵的药品和栓剂品种较多,但在牦牛超排的结果上有较大的差异。不同厂家生产的同一种药品其应用效果也不同。由于牦牛应急反应较强,加之子宫颈较细,操作难度较大,获得可用卵母细胞的难度也较大。

笔者通过近3年的试验,发现在发情期同一超排处理条件下,可用卵母细胞的数量具有显著的个体差异。樊江峰等[17]对牦牛超排过程中卵泡闭锁研究认为,在超排早期阶段,卵巢发育良好,有大量的选择卵泡被募集而增大成为优势卵泡,而这些优势卵泡的发展去向不同,有些个体中可以充分发育最后排卵形成黄体,另外有些个体优势卵泡的发育不充分,也不能排卵,而经过一段时间的生长期后体积逐渐缩小,始终没有黄体形成,超排处理的失败。这可能与超排处理开始时牦牛所处的繁殖周期阶段、营养水平及当地的气候条件等因素有关。

3 卵母细胞的采集及体外成熟培养

常用的卵母细胞采集方法为活体采卵和屠宰牛获得卵巢采集。因牦牛野性较大,加之生殖道比黄牛小,活体采卵较为困难,目前大多是通过屠宰牛获得卵巢,通过抽取和卵巢切割冲洗获得。一般屠宰牛后在30m in内取出卵巢,并置于30~37 的PBS或生理盐水(含青霉素和链霉素),在6h以内运(2h以内效果最好)回实验室。卵巢切割法获得的可用卵母细胞比抽取法提高1~ 1.5倍,但总体数量比黄牛、奶牛少,可能是种间差异[21]。张寿等[22]研究表明,处于乏情期牦牛的卵巢上仍有卵泡发育,而且有一部分还是优势卵泡,大部分为选择卵泡和替补卵泡,而且右侧卵巢上的优势卵泡和选择卵泡显著多于左侧。

卵母细胞体外成熟(IVM)是体外受精的关键环节,因此体外成熟培养液的选择与配制显得尤为重要。迄今为止,有关牛羊体外成熟培养系统有多种,很多研究者(旭日干,1989;江金益,1989;Sing h 1989;刘泽隆1999)利用LH、H CG、FCS、17 E2、FSH等激素促进卵母细胞体外成熟,但结果不尽一致。阎萍等[23]使用培养液M199(缓冲体系为Earles盐)+10%FBS+5.0m g/L LH+1.0m g/L FSH+1.0mg/L E2+双抗(青霉素100U/mL和链霉素100 g/mL)培养可使牦牛卵母细胞体外成熟率达到81.33%,卵裂率达49.33%,是较为理想的牦牛体外培养系统。卵泡期卵母细胞体外成熟率显著高于黄体期卵母细胞的体外成熟率(P<0.05),这可能牦牛是季节性发情的生态生理特征有关[24]。牦牛的卵母细胞体外成熟培养系统的仍需要做进一步的研究。

4 卵母细胞体外受精(IVF)和体外培养(IVC)研究

哺乳动物的体外受精的关键在于卵母细胞的成熟、受精液及受精方式的选择。在牛的体外受精过程中,目前大多使用的是BO液和改良的Ty rode's 液两种受精体系,两种液中均加入肝素钠和咖啡因使精子获能。在BO液体系中,先用含10m mol/L 咖啡因的BO液,离心洗涤(1500r/min),5m in)2次,再用含5m mol/L咖啡因的BO液,离心洗涤(1 500r/min),5m in)1次,把精子的浓度调至1106 ~2106个/m L。何俊峰等[25]对牦牛体外受精研究表明,使用BO液和改良的T yro de s液受精6h

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