乙肝病毒核酸定量检测临床价值
乙肝定量检测试剂临床意义
六、和
和抗定量检测在抗病毒治疗中的重要意义主要体现在以下几个方 面: ①抗病毒治疗起点的选择:2005年的《慢性乙型肝炎防治指南》 中明确指出:治疗前应检查病毒学标志: 包括、、抗 和 的基线状 态或水平。广州南方医院的临床资料和国际上的资料还显示,定 量对确定阳性慢性乙肝患者的抗病毒起点(是否需要抗病毒治疗) 具有重要性。如果患者>2,应每个月检查和,若明显下降,可能 为自然转化,不需抗病毒治疗;若两者持续升高,则应开始抗病 毒治疗。
(二)慢性乙型肝炎抗病毒治疗目标
最大限度地长期抑制或消除,减轻肝细胞炎症、坏死及肝纤维化, 延缓和阻止疾病进展,减少和防止肝脏失代偿、肝硬化、肝癌及 其并发症的发生,从而改善生活质量并延长生存时间。
(三)慢性乙型肝炎抗病毒治疗的药物 目前,已有 及α 两大类药物用于慢性乙型肝炎()治疗。
类(核苷(酸)类似物):我国已批准拉米夫定、阿德福韦酯、 恩替卡韦及替比夫定用于 治疗。
乙肝定量检测试剂临床意义
目录
一、背景知识 二、乙肝感染的自然史 三、抗病毒药物治疗 四、 五、 六、和 七、 八、临床乙肝标志物组合模式
时间分辨荧光免疫分析() 乙肝试剂临床意义
一、背景知识
感染可引起肝脏炎症和纤维化,严重者可发展为肝硬化甚至肝癌, 已经成为严重的社会和公共卫生问题。 感染呈世界性流行,不同 地区 感染的流行强度不同,全世界共约3.5 亿人感染,每年死于 感染所致的终末期肝病和肝癌的人数超过100万。我国 感染率较 高,1-59 岁人群携带率为7.18%,1-4岁人群携带率为 0.96%,与以前流行病学调查结果相比,携带率大幅下降。
乙肝五项定量检测及意义
一、乙肝五项定量检测指标
1、乙肝表面抗原(HBsAg)定量检测:
1)参考值:mL
2)临床意义:
(1)可作为HBV携带者乙肝病毒复制的参考指标
(2)评价拉美呋定的治疗效果
(3)监测应用alpha-干扰素治疗病人的乙肝病毒复制
(4)确定肝移植病人免疫球蛋白的使用剂量
2、乙肝表面抗体(抗-HBs)定量测定:
是HBsAg刺激机体产生的特异性抗体,是一种保护性抗体,能中和HBV。
(1)抗-HBs含量在0-10mIU/ml,表示不具有保护性,需要注射乙肝疫苗(3针:0-1-6方案)。
(2)抗-HBs含量在10-100mIU/ml,表示具有保护性,但较弱,需要乙肝疫苗强化注射(1针)。
(3)抗-HBs含量大于100mIU/ml,表示具有很强的保护性,不需要注射乙肝疫苗。
3、乙肝病毒e抗原(HBeAg)
HBeAg增高说明病毒复制,具有很强的传染性。
4、乙肝病毒e抗体(抗-HBe)
抗-HBe阳性说明病毒复制减少,传染性弱,但并非没有传染性。抗HBe不是保护性抗体。
5、乙肝病毒核心抗体(抗-HBc)
抗-HBc:不是中和抗体,有IgG和IgM两种形式。IgM在早期出现,而IgG在恢复期出现,可持续多年或终身存在。
二、乙肝五项定量检测的优点
由于乙肝病毒容易发生变异,再加上乙肝定性检测方法的局限性,会出现假阴性结果,导致不能及时发现乙肝的感染,也就不能得到及时的治疗,对医护人员和其他患者也存在着被感染的威胁。
乙肝五项定量应用目前最先进的化学发光法检测,避免了假阴性和漏检的问题,而且准确,尤其对乙肝病人的疗效观察提供了依据,这是检验发展的趋势。
慢性乙肝实验室检测及临床意义
(S区变异) ③ 低水平感染
单项抗HBc(﹢)乙型肝炎
HBV DNA检测的临床意义
⒉ 疗效判断: HBV DNA是目前判断乙肝抗病毒药
物疗效最敏感的指标 ⒊ 预后判断
HBV DNA水平与病情有一定的关系
HBV DNA检测的临床意义
调查表明并不是所有“大三阳”的 病人都处于HBV复制期,具有传染性; 也不是所有“小三阳”的病人HBV都 无复制。因此,要准确知道HBV是否 处于复制状态,最准确的方法还是通 过检测HBV DNA来决定。
7 尿常规:
尿胆红素和尿胆原的检测是早 期发现肝炎的简易有效方法,同时 有助于黄疸的鉴别诊断。肝细胞性 黄疸时两者均阳性,溶血性黄疸时 以尿胆原为主,梗阻性黄疸以尿胆 红素为主。妊娠急性脂肪肝患者尿 胆红素常阴性,有助于与妊娠急重 型肝炎鉴别。
8 电解质 重型肝炎常见低K+、低Na+,低
Cl-,亦可有低Ca2+、低Mg2+、低P2等。肝肾综合征时可出现高K+。
9 血糖 超过40%重型肝炎患者有血糖
降低,临床上应注意低血糖昏迷与 肝性脑病的鉴别。
10 血浆胆固醇 60-80%的血浆胆固醇来自肝
脏,肝细胞严重损伤时,胆固醇 在肝内合成减少,故血浆胆固醇 明显下降,胆固醇愈低,预后愈 险恶。梗阻性黄疸时胆固醇升高 。
乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测对临床诊断的意义
乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测对临床诊断的意义
摘要:目的分析乙肝病毒DNA(HBV-DNA)的荧光定量PCR(FQ-PCR)检测对
临床诊断的意义方法对我院2015年3月到2016年3月收治的420名乙肝患者
作为研究对象,抽取420名患者的临床血清标本通过ELISA法进行定性检测,根
据乙肝两对半定性结果进行分组,最后采用荧光定量PCR技术进行定量检查。结
果95份乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb标本中有89份HBV-DNA为阳性,阳性率为93.7%,荧光定量PCR拷贝数为(4.19±1.16)×10 7 /ml;130份乙肝病
毒标志物HBsAg、HBeAb、HBcAb标本有92份HBV-DNA阳性,阳性率达到71.7%,荧光定量PCR拷贝数为(4.73±2.49)×10 5/ml;38份乙肝病毒标志物HBsAg、HBcAb标本中有13份 HBV-DNA为阳性,阳性率为34.2%,荧光定量PCR拷贝数
为(2.13±1.37)×10 4/ml;75份乙肝病毒标志物 HBsAb的标本HBV-DNA阳性23例,阳性率为3.1%,荧光定量PCR拷贝数为(6.07±0.86)×10 3;82份乙肝病毒
标志物全阴性的标本 HBV-DNA阳性11例,阳性率为1.3%,荧光定量PCR拷贝数(2.77±0.79)×10 4 /ml.结论荧光定量PCR测定 HBV DNA在多种模式的乙肝病
毒标志阳性血清或阴性血清都可查出,能较真实反映体内HBV感染、复制和病毒
载量情况,具有一定的临床早期诊断的价值。
乙肝病毒血清学标志物定量检测的临床应用价值
乙肝病毒血清学标志物定量检测的临床应用价值
【Abstract】Objective 探讨乙肝病毒血清学标志物定量检测的临床应用价值。方法2010年1月至2010年6月申请做乙肝两对半的血清样本204例,进行定量TRFIA法和定性的ELISA法检测乙肝病毒血清学标志物。结果两种检测方法乙肝病毒血清学标志物各项阳性率比较,P<0.05,差异有统计学意义。结论乙肝定量检测的临床应用价值明显,可以检出低水平复制的标本,避免漏检,可以解决隐源性肝炎HBV标志物的诊断难题;量化的乙肝病毒血清学标志物指标对临床诊治起到良好的指导作用。
【关键词】乙肝病毒;血清学标志物定量检测;应用价值
我国是乙型病毒性肝炎(下称乙肝)感染率较高的国家10%以上为乙肝携带者,感染率非常高,而低浓度在人群中的分布率为0.53%。目前采用标记免疫学方法检测乙肝病毒(HBV)五项血清学指标是诊断HBV感染的主要手段。传统的酶联免疫吸附试验(ELISA)法只能定性测定,时间分辨荧光免疫分析(time resolved fluoroimmuno assay,TRFIA)技术是一种新型免疫标记技术[1],是一种能定量检测HBV标志物新的检测方法,为了能够全面了解乙肝定量检测的临床应用价值,作者进行了研究,现汇报如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料采取2010年1月至2010年6月申请做乙肝两对半的血清样本204例。其中男124例,女80例;年龄14~68岁。
1.2 标本采集对204例采集晨起空腹肘静脉血3 ml,于当日分离血清,-70度保存,并于24 h内检测。
实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义
实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义
发布时间:2023-02-02T07:29:34.103Z 来源:《医师在线》2022年30期作者:孙丽
[导读] 目的:探究实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义。方法:本次研究选取我院2021年3月
孙丽
松原市中西医结合医院邮编:138000
【摘要】目的:探究实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义。方法:本次研究选取我院2021年3月-2022年3月收治的乙型肝炎患者180例作为研究目标,所有患者均进行标准的abbot 药盒检测,其中大三阳100例,小三阳80例。所有患者入院后都采集空腹静脉血,然后采用全自动化学发光技术测定和荧光PCR技术测定,对两种检测技术检测乙肝类型的阳性检出率进行对比。结果:荧光PCR测定组大三阳、小三阳的阳性检出率均高全自动化学发光技术测定组P<0.05,差异存在统计学意义。结论:实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义较高,可以准确诊断出乙肝类型,为临床诊断提供有效依据,值得推广。
【关键词】荧光PCR检测;乙肝病毒DNA;检测;临床意义
乙肝是一种比较常见的传染性的肝病,致病病原体为乙型肝炎病毒,属于嗜肝DNA病毒。临床上表现症状大多数有食欲减退、疲倦乏力、厌食油腻、恶心、呕吐、腹胀、肝区不适或隐痛、腹泻等[1]。还有患者可能出现黄疸发热和肝功能损害,严重者甚至发展成肝硬化,少数患者可发展为肝癌[2],严重影响了患者的身体健康和生活质量。所以,要对患者应用具有高度准确度的检测方法来确诊乙肝病毒的类型,从而针对患者的乙肝病毒类型进行对症治疗,因此本次研究选取我院2021年3月-2022年3月收治的乙型肝炎患者180例作为研究目标,均实施全自动化学发光技术测定和荧光PCR技术技术测定,对两种检测技术的检测效果进行研究,并分析荧光PCR技术检测乙肝病毒DNA 的临床意义,情况如下:
高敏度乙型肝炎病毒DNA定量检测 项目简介
高敏度乙型肝炎病毒DNA定量检测简介该项目对乙肝病毒DNA定量检测的灵敏度可达10 IU/ml,远高于常规乙肝病毒DNA定量检测(常规检测下限为500 IU/ml),且该检测的线性范围可达20 IU/ml~2.0×109 IU/ml。通过本项目的检测可有效减少由于检测灵敏度不足导致的“假阴性”和漏检,避免了乙型肝炎患者提早停药、病情复发及重复检验等问题,对乙肝的诊疗具有重要的应用价值。
临床意义
①高敏度乙型肝炎病毒DNA定量检测,可作为抗病毒治疗患者治疗终点和复发再治判断的依据,以及隐匿性病毒性肝炎的诊断;
②帮助评估患者抗病毒治疗效果,监测耐药;确定更符合临床的治疗方案,实现优化的个体化治疗;
③通过检测病毒载量来反映人体内乙肝病毒是否存在及病毒复制活跃程度,HBV DNA载量越高复制越活跃,传染性也越高。
筛查时期
1.抗病毒治疗半年时;
2.巩固治疗期没半年检测一次;
3.停药患者每3个月检测一次;
4.隐匿性乙肝病毒感染诊断。
标本采集要求
干燥管取血,及时分离血清1.5ml,2-8℃保存。
临床项目收费标准
乙肝检测的意义
正确理解乙肝实验室检测结果
乙型肝炎病毒(HBV)感染的实验室检测是目前国内最为常用的检验项目,也是医患纠纷产生较多的领域之一。正确理解和解释乙肝实验室检验项目的临床意义,对于这些检验项目的实际应用有重要价值。下面就几个方面重点谈一谈。
一、乙肝“两对半”检查的意义
国内人群中,二十世纪八十年代中期以前出生的,乙肝病毒的感染率超过了10%,因而时至今日,乙肝“两对半”仍是目前国内医院最常用的乙肝病毒感染检测的血清标志物,也是医生和患者经常挂在嘴上的检验项目。在很多时候,甚至是体检,都会用到这些检验项目。乙肝“两对半”顾名思义,就是有五项判断乙肝感染的乙肝病毒抗原及其抗体的检验指标,即乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(抗HBs)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝e抗体(抗HBe)和乙肝核心抗体(抗HBc)等。尽管这五项指标使用得非常多,但对其真正的含义,由于认识过程的原因,仍有不少误解。
1.HBsAg
HBsAg于1963年由Blumberg在澳大利亚土著人血中发现,称为澳大利亚抗原(即以前所谓的“澳抗”),后又称为肝炎相关抗原(HAA),1974年正式定名为乙型肝炎表面抗原(简称为HBsAg),存在于HBV的外壳部分。HBsAg有一个特异的共同抗原决定簇“a”和至少两个亚型决定簇“d/y”和“w/r”,最常见的血清型为adw、adr和ayw。我国绝大多数地区以adr为主,adw次之(于长江以南诸省与adr混存);新疆、西藏、内蒙古自治区的本地民族几乎全为ayw。血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一,出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2—8周,至恢复期HBsAg滴度逐步降低乃至消失,抗HBs出现。但有部分患者HBsAg在血清中可持续存在,原因可能是编码HBsAg的HBV的s区段和肝细胞DNA整合。在这种情况下,即使HBV已从人体内消除,肝细胞仍能不断地复制HBsAg。
乙肝病毒标志物定量检测的临床价值分析
ml 。如表 1 所 示, 乙肝病毒标 志物定 量结果既 可以直接反 映乙 肝病毒( H B V ) 在人体 内的免疫 反应状 态 , 又可 以反 映 H B V在 患者体内的复制情况。 表1 2 0 0例 乙肝 标 志物 与 其 D N A定 量 检 测 的 结 果 分 析
时间分辨荧 H B V— D N A定量检测 光仪检测 H B V— D N A阳性( %) 高复制组 低复制组
8 0
内蒙古 中 医药
乙肝 病 毒 标 志 物定 量检 测 的 临床 价 值 分 析
湛 昌文
关键词 : HB V—D N A; 乙肝病毒标 志物 ; 定量检 测; 临床分析
中 图分 类 号 : R 4 4 6 文 献 标 识码 : B 文章编号 : 1 0 0 6— 0 9 7 9 ( 2 0 1 3 ) 1 6— 0 0 8 0— 0 2
 ̄ I . l J V~ I ) N A> 5 . 0  ̄ 1 0 E 3为 阳性 , 在l O E 3— 1 0 E 5为低 复制组 , >1 0 E 5为高复制
组
2 . 2 荧 光定量 P C R中复制率强 度与 H B S A G定量结果 高低的 分析 : 按荧光定量 P C R检测 复制率 的高低 分为高 (>XI O E 5 ) 、 低(<X I O E 5 ) 两组 ,荧光定 量 P C R阳性 中高复 制组共 5 7例 ,
乙肝hbv-dna病毒数量标准
乙肝hbv-dna病毒数量标准
乙肝(HBV)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的一种肝炎疾病。HBV-DNA是HBV病毒所含的一种核酸,HBV-DNA病毒数量标准是可以评估乙肝患者病情严重程度的指标之一。本篇文章将重点阐述乙肝HBV-DNA病毒数量标准、治疗方法以及注意事项。
一、乙肝HBV-DNA病毒数量标准
HBV-DNA病毒数量可以通过PCR扩增技术测定,计量单位为“国际单位/ml”(IU/ml),也可以用“拷贝数/ml”(cp/ml)表示。目前,国内外对于HBV-DNA病毒数量的划分标准不尽相同。根据中国抗病毒治疗指南2019年版,“HBV-DNA<500IU/ml”被认为是阴性,”HBV-DNA≥500IU/ml“被认为是阳性。根据美国国立卫生研究院(NIH)建议标准,“HBV-DNA≥2000IU/ml”属于阳性。
HBV病毒的复制速度与其病毒数量呈正比关系。一般来说,患者血清中HBV-DNA病毒数量越高,说明患者的乙肝病情越严重,肝细胞受损的程度也就越明显。因此,通过测定HBV-DNA病毒数量的高低,可以评估乙肝的病程严重程度,以指导下一步的治疗方案。
二、乙肝HBV-DNA阳性的治疗方法
1. 治疗目标
乙肝的治疗旨在抑制HBV病毒复制,降低肝炎的病情恶化,减少肝损伤,同时通过肝功能的改善,提高患者的生活质量,降低肝癌的发生率。
2. 抗病毒治疗
目前临床应用的抗病毒药物有拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦等,这些药物都可以有效地抑制HBV病毒的复制。因此,高病毒载量的乙肝患者,可以选用抗病毒药物进行治疗,以取得抑制病毒复制的效果。
PCR项目及临床意义
PCR检验室常规项目简介
1. 乙型HBV-DNA定量
HBV-DNA定量检测方法的出现从根本上突破了免疫学方法间接检测的局限性,通过直接检测病毒的核酸水平真实地反映病毒的情况从而对于HBV的准确诊断、有效治疗、精确预后及新药研制等各个方面具有重大意义:
1)判断疾病的严重程度和传染性。HBV-DNA是直接反映HBV复制状态及传染性的最佳指标。
2)PCR定量结果与血清免疫学结果的综合评价。采用FQ-PCR定量检测乙肝病毒DNA,结合“二对半”检测结果,对于机体乙肝病毒感染状态尤其变异株发生和病人预后的评估更为科学。
3)观察抗病毒药物疗效,指导药物用量。直接检测血清中的HBV-DNA是监控HBV 传染和观察抗病毒药物疗效的最可靠的方法。根据《2000拉米夫定临床应用指导意见》,中国慢性乙型肝炎病人治疗的目的之一就是要降低血清HBV-DNA。同时血清HBV-DNA滴度的动态变化还可在临床上对用药的剂量、用药时间是否需要联合用药以及用药的效果等提供参考。
4)献血员窗口期病毒核酸的筛查及早期诊断。HBsAg在血清中的检出通常在乙肝病毒感染后的2-4月出现,平均为56天左右。而HBV-DNA的检出可以将该所谓″窗口期″提前6-15天,对于早期诊断和提高输血安全有着重要的意义。5)预测病情、判断预后。通常HBV-DNA持续阳性超过6个月的会转为慢性肝炎。抗-HBe阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝损严重。
6)对阻断母婴传播的监测。联合应用高价免疫球蛋白和乙肝疫苗有效地阻断母
婴传播,但仍有5-10%婴儿对疫苗呈低反应,荧光定量PCR可对此进行监测。7)器官移植中的作用。肝脏器官移植是目前肝硬化晚期治疗的唯一方法,定量检测HBV-DNA为肝移植术后的跟踪观测具有较好的临床价值。
荧光定量 PCR 法检测乙肝病毒 DNA 和乙肝病毒标志物检测的临床价值分析
me t h o d u s i n g HBV— M mo d e l f o r q u a l i t a t i v e d e t e c t i o n o f t h e b l o o d s a mp l e s , t h e d e t e c t i o n o r d e r : He p a t i t i s b v i r u s s u r f a c e a n t i g e n ( HBs Ag ) , He p a t i t i s B s u r f a c e An t i b o d y ( Hb s Ab ) , He p a t i t i s B e An t i g e n ( Hb e Ag ) , h e p a t i t i s B e a n t i b o d y ( Hb e Ab ) , h e p a t i t i s B c o r e
陈 海雁 , 张桂花 , 罗锦 彬 , 黄舒 婷
( 惠 州 市 惠 阳 区人 民 医 院 检 验 科 , 广 东惠 州 5 1 6 2 l 1 )
摘 要 : 目的 探 讨 荧光 定 量 P C R法 ( F Q — P C R ) 检 测 乙肝 病 毒 D NA( HB V - D NA) 和 乙肝 病 毒 标 志 物 ( HB V - M) E L I S A 法 检
乙肝病毒血清标志物检测与临床价值
乙肝病毒血清标志物检测与临床价值
摘要】使用探讨时间分辨荧光免疫测定法,进行定量检测乙型肝炎血清标志物
和酶联免疫吸附试验定性检测的关系,有着非常重要的临床应用意义。采用检测86份血清标本HBV-M方法,可以得出两种检测方法,同时具有较高一致性意义,但是利用TRFIA检测会明显高于ELISA。
【关键词】乙肝病毒;血清标志;检测;临床价值
乙型肝炎属于病毒性肝炎,也是流行最广泛和危害最严重的病毒肝炎,乙肝
血清标志物检查仍然是目前临床诊断和治疗病毒感染者传染非常重要的标志。血
清标志物检测是目前对于乙型肝炎检测最常用指标,临床上常用的免疫检测方法
主要就是放射性技术,时间分辨荧光免疫分析法的研究分析更加突出其优越性,
本文通过对于酶联免疫吸附和时间分辨测定检测差异性进行一定临床价值分析。
一、乙型肝炎检测方法
1、一般资料显示,于2007年我中心对于患有乙肝患者进行检测,其中男士42例,女44例,年龄是5~58岁之间,采用静脉血分离血清置-70℃进行保存。
2、试剂使用上海新波生物技术有限公司的HBSag和抗-HNE定量检测试剂盒,另外还有卫生部临检中心提供的乙肝病毒血清标志物质控品,然后按照操作,严
格按照作业指导书进行测试。
3、仪器是Anytest2000型时间分辨荧光免疫分析仪,判定结果方法是参照实
际说明书判定,经过本室严格进行检测工作,不同浓度标准对应不同法定性检测
结果,抗-HBc大于或者等于0.6NCU/ml判定为阳性,反之是阴性。
使用TRFIA法和ELOSA法检测HBVM结果相互比较,86例血清标本中,除了对于抗-HBE检测结果也是两种方法,可以很好分别出差异性,其他的单个项目检
HBV DNA荧光定量PCR检测及临床意义
HBV DNA荧光定量PCR检测及临床意义
血清HBV-DNA浓度与乙型肝炎病毒感染的严重程度和传染性有关,可用于判断病情和预后,以及观察抗病毒药物的治疗效果。通常血清 HBV-DNA持续阳性超过6个月会转为慢性肝炎。抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA持续阳性常提示肝受损严重,50%以上抗-HBc阳性慢性活动性
肝炎患者,经平均4.5年发展为肝硬化,常与HBV-DNA持续阳性有关。因此,采用荧光定量PCR检测方法,对乙肝早期诊断、准确判断乙肝患者的带毒状态及药物治疗观察就显得及其
重要。
1 资料与方法
1.1 一般资料选取 2008年10月~2009年10月,就诊患者检查200例HBVm全阴者血清样本。
1.2 血清标本的采集采用灭菌的一次性带盖塑料管,清晨空腹抽取静脉血5ml,离心分离
血清,-20℃冻存备用,集中检测。
1.3 方法荧光定量PCR法检测HBV-DNA,检测仪器为Roche LightˉCycle荧光PCR检测仪,按
照试剂盒说明书操作程序对上述血清标本进行检测。HBV-DNA提取: 血清100μl加DNA提取
液1100μl,13000r/min离心10min→弃上清→再加提取液Ⅱ 25 μl,振摇10 s→100 ℃10
min→13000 r/min离心10min,上清液备用。扩增取上清液2 μl,加入盛有扩增反应液38
μl(含引物,dNTPs,Taq酶及PCR缓冲液)的PCR反应管中,扩增40个循环,循环参数为37 ℃5min;95 ℃ 1min;60 ℃ 30s。定量结果采用计算对数平均值的方法来计算HBV-DNA平均拷
研究核酸检测法对血液标本内乙肝病毒的检测价值
研究核酸检测法对血液标本内乙肝病毒的检测价值
目的探究检测血液标本中的乙肝病毒采取核酸检验法的效果及价值。方法于2018年1月至2018年5月随机抽取1128份无偿献血者的血液标本,分别采取核酸检测法(NAT)以及酶联免疫吸附检测法(ELISA)进行乙肝病毒检测,对比两种检测方法对乙肝病毒诊断阳性率、特异性、敏感性、漏诊情况以及窗口期。结果NAT与ELISA对乙肝病毒诊断阳性率数据经统计学比较无意义(P>0.05);NAT对乙肝病毒诊断特异性、敏感性显著高于ELISA,窗口期及漏诊率则显著少于ELISA,数据差异有统计学意义(P<0.05)。结论NA T与ELISA 对乙肝病毒阳性诊断具有良好的一致性,且特异性和敏感性较高,能够有效缩短窗口期,有利于输血安全性。
标签:核酸检测;血液标本;乙肝病毒;检测效果
酶联免疫吸附法(ELISA)是常用血液检测方法,通过酶复合物与抗体相结合而显色,具有良好的保持免疫活性的功能,且灵敏性较高,价格低廉等优势在临床中应用广泛。核酸检测法(NAT)可有效缩短检测窗口期,针对隐匿性乙肝病毒具有良好的检测效果,还可降低输血时病原体的传播风险[1]。为明确两种检测方式对乙肝病毒诊断效果,特开展相应研究,现汇报如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
于2018年1月至2018年5月随机抽取1128份无偿献血者的血液标本,ALT 化学检测结果显示初筛合格。
1.2 仪器设备与方法
检测方法:将每份标本平均分为两份,一份装入抗凝真空管中行ELISA检测;一份装入分离胶抗凝真空管中行NAT检测。每个试管均贴唯一条形码。使用离心机对标本进行离心处理,后将其放置于温度为4℃的环境中静置待检,所有标本检测均需于48 h内完成。
实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义
实时荧光PCR检测乙肝病毒DNA的临床意义[摘要]目的:对实时荧光定量PCR测定的472例HBV DNA结果进行分析,以探讨其临床价值。方法:对472份临床血清标本用ELISA法进行定性检测,并依据乙肝两对半定性结果进行归类分组,再用实时荧光PCR定量检测。结果:92份HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)标本中有89份HBV DNA为阳性,阳性率为96.7%,其PCR 定量拷贝数为(3.23±1.45)×107/ml;168份HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)标本有118份HBV DNA阳性,阳性率达到70.2%,PCR定量拷贝数为(4.65±2.10)×105/ml;32份HBsAg(+)、HBcAb(+)标本中有11份HBV DNA为阳性,阳性率为34.4%,PCR定量拷贝数为(1.92±1.54)×104/ml;62份HBsAb(+)的标本HBV DNA阳性2例,阳性率为3.2%,PCR定量拷贝数为(5.45±1.14)×103;60份全阴性的标本HBV DNA阳性1例,阳性率为1.7%,PCR定量拷贝数为(2.36±1.12)×104/ml。结论:PCR定量测定HBV DNA可以真实反映体内乙肝病毒感染和复制及病毒载量情况,更有利于临床治疗和疗效观察。
[关健词]实时荧光;PCR;乙肝DNA
乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病,它是由乙肝病毒(HBV)感染引起的。全世界乙肝携带者达5亿之多,我国是乙肝携带者高于人群的10%。急性乙肝中有20%会转为慢性,进而可能发展为肝硬化和肝癌,因此,准确、迅速诊断对乙肝的治疗和预后显得极为重要。荧光PCR技术融合了PCR和DNA探针杂交技术的优点,直接探测PCR过程中荧光信号的变化,而且整个实验过程均在完全封闭的状态下进行,不需要PCR的后处理和电泳检测,解决了PCR定量和防污染等问题,而且具有快速、准确、特异等优点。本文以472例血清标本分别用ELISA法和实时荧光PCR法分别对乙肝标志物和HBV进行检测,报告如下。
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乙肝病毒核酸定量测定的临床价值
贾中华1谢爱国2陈素花3
1,2江西省高安市人民医院检验科3江西省高安市灰埠中心卫生院
[摘要]目的:研究乙型肝炎患者HBV-DNA定量检测与血清学免疫标志物及丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平之间的关系.方法:用荧光定量PCR法检测326份乙肝表面抗原阳性标本中的HBV-DNA,同时检测血清免疫标志物和ALT.结果:326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326). 113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例,占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例,占24.73%(31/113),其它15例,占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.结论: HBV-DNA检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除,结合其它血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态,正确判断预后和治疗.
[关键词]乙型肝炎;乙肝病毒核酸(HBV-DNA);荧光定量聚合酶联反应(FQ-PCR);丙氨酸氨基转移酶(ALT)
1 材料与方法
1.1 对象2006年8月本院门诊和住院部乙肝病毒表面抗原携带者326例,年龄3-80
岁,平均25.80岁.男性231例,女性95例.
1.2方法
1.2.1 HBV-DNA检测采用杭州博日公司的line-gene检测分析系统进行实时荧光
定量PCR检测.试剂盒采用广州中山医科大学达安基因股份有限公司的乙型肝炎病毒(HBV)核酸扩增(PCR)荧光定量检测试剂盒.检测步骤按试剂盒使用说明书. 分别设阴性质控品,阳性质控品,空白对照以及阳性定量质控标准品梯度.检测结果>103拷贝/ml判断为阳性,否则为低于检测线下限.
1.2.2 HBV血清学免疫标志物检测用酶联免疫法(ELISA)检测HBsAg,抗
-HBs,HBeAg,抗-HBe,抗-HBc共5个项目.采用华美生物工程公司的乙型肝炎诊断试剂盒,测定步骤参照说明书. 分别设阴性,阳性,空白对照,用酶标仪读数,样品OD值≥阴性对照平均OD值×2.1判断为阳性,否则为阴性.
1.2.3 ALT检测采用生化自动分析仪检测,正常值<40U/L.
1.2.4 资料统计采用excel 2000 软件进行处理.
2 结果
2.1 326例乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,
阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326). 113例乙肝表面抗原阳、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例,占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例,占24.73%(31/113),其它15例,占
13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.
2.2 HBV-DNA定量与血清学免疫标志物检测结果比较见表1
2.3 HBV-DNA定量与ALT异常率比较见表2
3讨论
实时荧光定量PCR是目前临床检测血清HBV-DNA常用的分子生物学方法.本系统充分利用了Taqman酶独特的生物学活性和荧光激活、淬灭性质,合成了分别携有荧光集团和淬灭集团近距引物、探针,在循环进行中即可检测荧光强度并用软件与内参比进行定量分析.由于无需开盖检测PCR产物,避免了以往传统PCR易产生假阳性污染物的缺点.检测重复性好,而且实时荧光定量PCR还解决了抗病毒药物疗效观察的一大难题.
326份乙肝表面抗原携带标本中HBV-DNA定量高于103拷贝/ml血清有213例,阳性率为65.34%(213/326),ALT异常率为37.42%(122/326).其中,大三阳86例,阳性率100%(86/86),小三阳76例,阳性率53.15%(76/143), HBsAg、抗-HBc阳性率为60.27%(47/78),其它情况阳性率25.00%(5/20).本文中113例乙肝表面抗原阳性、HBV-DNA定量低于103拷贝/ml标本中小三阳67例, 占59.29%(67/113), HBsAg、抗-HBc阳性31例, 占24.73%(31/113),其它15例, 占13.27%(15/113).ALT异常率6.19%.可能是由于这些病例经过抗病毒治疗,使病毒复制减弱或停止,从而检测结果低于检测线下限.
血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态,具有很多临床价值, 但检测费用较高[1]、[2],而且不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态,HBV-DNA
检测低于检测线下限并不代表体内HBV-DNA已被完全清除,结合其它血清学免疫指标和生化学指标更能客观反映体内HBV病毒状态,正确判断预后和治疗.
参考文献
1曹红卫,卫国,冯文曦,等.乙肝病毒DNA荧光定量PCR检测及其意义.第三军医大学学报,2001,23,866-867.
2张立国,张琚.实时定量PCR持术的介绍.生物技术,2003,13:39.