细胞染色方法

细胞染色方法大全

细胞染色方法大全 The manuscript was revised on the evening of 2021

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合 (主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察

效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种 hoechsts33258，

hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

染色步骤

PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！

annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

细胞染色操作步骤及注意事项

概述

细胞染色是一种常用的实验手段，它可以通过标记细胞的某些

特定结构或分子，帮助研究者观察和研究细胞的结构和功能。本文

档将介绍细胞染色的常用操作步骤及注意事项。

操作步骤

步骤一：细胞固定

1. 取出培养皿中的细胞载玻片。

2. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除培养基中的残留物质。

3. 使用细胞固定液（如4%的甲醛溶液）固定细胞，通常固定

时间为15-30分钟。

4. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除固定液中残留的甲醛。

步骤二：细胞渗透

1. 取出细胞载玻片中的细胞。

2. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除固定剂中的残留物质。

3. 在细胞载玻片上滴加渗透液（如0.1% Triton X-100），孵育10-15分钟。

4. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除渗透液中的残留物质。

步骤三：染色

1. 取出细胞载玻片中的细胞。

2. 在细胞载玻片上滴加适当浓度的染色液（如DAPI染料），

孵育时间根据实验需要而定（通常为5-15分钟）。

3. 用PBS缓冲溶液洗涤细胞载玻片，去除染色液中的残留物质。

步骤四：显微观察

1. 将细胞载玻片翻转到显微镜载玻片上。

2. 加入一滴适当的封片液（如甘油/丙酮溶液）。

3. 用显微镜观察和拍摄细胞。

注意事项

1. 操作时要注意佩戴实验手套和眼部防护设备，避免接触有毒

或有害物质。

2. 细胞固定液需要根据实验需要和细胞类型进行选择，避免使

用具有细胞毒性的固定液。

3. 染色液要根据需要选择，确保染色剂与研究对象的亲和力。

4. 操作过程中要注意细胞的温度和湿润度，避免细胞损伤。

细胞染色法介绍

吉姆萨（Giemsa）染色法：吉姆萨染液由天青，伊红组成。染色原理和结果与瑞特染色法基本相同。

嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结果，染粉红色，称为嗜酸性物质；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性，与碱性染料美蓝或天青结合，染紫蓝色，称为嗜碱性物质；中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染淡紫色，称为中性物质。

PH对细胞染色有影响。细胞各种成分均不蛋白质，由于蛋白质系两性电解质，所带电荷随溶液PH而定，在偏酸性环境中下在电荷增多，易与伊红结合，染色偏红；在偏三性环境中负电荷增多，易与美蓝或天青结合，染色偏蓝。因此细胞染色对氢离子浓度十分敏感，染色用正经片必须清洁，无酸碱污染。配制顼特液必须用优质甲醇，稀释染色必须用缓冲液，冲洗用水应近中性，否则可导致各种细胞染色反应异常，以致识别困难，甚至造成错误。

一般性操作技术血涂片制备；细胞染色；显微检查；血液病诊断；染色不良；瑞特（Wright）染色法；酸性染料；伊红；碱性染料；亚甲蓝；吸附作用；PH对细胞染色的影响；甲醇；吉姆（Giemsa）染色法春天要常用润肤剂，它含有松香油脂酸和丰富维生素a，常用可加快皮肤血液循环，剌激面部细胞分泌，有效改善皮肤生理环境，减少气候对皮肤的危害。

第二节血涂片的制备和细胞染色

血涂片的显微检查是血液细胞学检查的基本方法，临床上应用极为广泛，特别是对于各种血液病的诊断具有重要的价值，近年来血细胞分析仪的广泛应用，血涂片的观察也可作为判断仪器结果的简易方法。比台观察10个高倍视野血涂片中白细胞和血小板数大致估计血内这些细胞的数量，借以作为仪器结果分析后质控的参考。

细胞染色方法大全

欢迎阅读Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色.Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

染色步骤

PI

用于细

核染红.用PI

PI单一

外

翻

色荧光。

JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以

欢迎阅读

多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membranepotential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。

常用细胞染色方法

常用的细胞染色方法包括：

1.吉姆萨染色法：使用吉姆萨染料染色，可用于观察细胞核和细胞质的形态结构。

2.荧光染色法：使用荧光染料，通过荧光显微镜观察细胞内的特定结构、蛋白质或核酸等。

3.伊诺金染色法：使用伊诺金染料，主要用于显微镜下观察和鉴别细菌和真菌等微生物。

4.嗜酸染色法：使用嗜酸染料，能够染色细胞内的酸性结构和胞质。

5.嗜碱染色法：使用嗜碱染料，能够染色细胞内的碱性结构和胞质。

6.免疫组化染色法：利用特异性抗体与细胞中的特定蛋白质结合，再使用染料标记抗体来观察和定位细胞内的特定蛋白质。

7.核酸染色法：使用DNA或RNA特异性的染料，能够染色细胞内的核酸，常用于细胞周期和细胞分裂等研究。

8.血液细胞染色法：包括委氏染色法、中日染色法等，用于观察和鉴定血液细胞

类型和形态变化。

以上是一些常用的细胞染色方法，根据需要和研究目的的不同，可以选择合适的方法来观察和研究细胞。

血细胞的染色方法

血细胞的染色方法有以下几种：

1. Wright染色法：这是最常用的一种染色方法。首先将薄片

经过固定、脱水、清洁等处理，然后放置在含有Wright染料

的溶液中染色，之后再用清水洗去多余的染料。这种方法可以使红细胞呈粉红色，细胞核呈紫色。

2. Giemsa染色法：这种染色方法与Wright染色法类似，但染

料的浓度和染色时间稍有不同。这种方法可以使红细胞呈橙红色，细胞核呈紫色。

3. 苏木精-伊红染色法：首先将薄片经过固定、脱水、清洁等

处理，然后将薄片放入苏木精溶液中染色，之后再用酒精漂洗，最后用伊红染料染色。这种方法可以使红细胞呈红色，细胞核呈蓝色。

4. 嗜酸性染色法：这种方法可以用来染色嗜酸性粒细胞。常用的嗜酸性染料有尤伯霉素、柠檬酸镉等。

5. 免疫染色法：这是一种利用抗体与细胞特定抗原的特异性结合来标记细胞的染色方法。它可以用来检测一些特定的细胞类型或疾病标志物。

以上是一些常用的血细胞染色方法，在实际应用中选择染色方法会根据具体需要和目的来决定。

细胞染色方法大全

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

染色步骤

PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！

annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

十五种细胞染色技术

1、酸性品红：酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容於水，略溶於酒精（0。3％)。是良好的细胞制染色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁.它跟甲基绿同染，能显示线粒体。组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用,所以染色过度,易在自来水中褪色。

2、刚果红：刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶於水和酒精,遇酸呈蓝色。它能作染料，也用作指示剂。它在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也可用作类淀粉染色，由於它能溶於水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速

3、甲基蓝：甲基蓝是弱酸性染料，能溶於水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。它跟伊红合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料.它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易氧化，因此用它染色后不能长久保存。

4、固绿：固绿是酸性染料，能溶於水（溶解度为4％)和酒精（溶解度为9%)。固绿是一种染含有浆质的纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广.它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。它和苏木精、番红并列为植物组织学上三中最常用的染料。

5。苯胺蓝：是一种混合酸性染料，平常所用很难有一定的标准。此染料一般很难溶於水，也不易溶於酒精（1.5%）。植物制片中可与番红合用，作为组织染色;也可作藻类植物染色。因为这种染料的成分很不一致，染色效果不易掌握。

一、形态学观察方法

1、HE染色、光镜观察：凋亡细胞呈圆形，胞核深染，胞质浓缩，染色质成团块状，细胞表面有“出

芽”现象。

2、丫啶橙（AO)染色，荧光显微镜观察：活细胞核呈黄绿色荧光，胞质呈红色荧光。凋亡细胞核染色

质呈黄绿色浓聚在核膜内侧，可见细胞膜呈泡状膨出及凋亡小体。

3、台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂，台盼蓝染料进入细胞，细胞变蓝，即为坏死。如果细胞膜

完整，细胞不为台盼蓝染色，则为正常细胞或凋亡细胞。此方法对反映细胞膜的完整性，区别坏死细胞有一定的帮助。

4、透射电镜观察：可见凋亡细胞表面微绒毛消失，核染色质固缩、边集，常呈新月形，核膜皱褶，胞

质紧实，细胞器集中，胞膜起泡或出“芽”及凋亡小体和凋亡小体被临近巨噬细胞吞噬现象。

二、DNA凝胶电泳

（一）、检测原理

细胞发生凋亡或坏死，其细胞DNA均发生断裂，细胞内小分子量DNA片断增加，高分子DNA减少，胞质内出现DNA片断。但凋亡细胞DNA断裂点均有规律的发生在核小体之间，出现180－200bpDNA片断，而坏死细胞的DNA断裂点为无特征的杂乱片断，利用此特征可以确定群体细胞的死亡，并可与坏死细胞区别。

（二）结果判断

正常活细胞DNA 电泳出现阶梯状（LADDER)条带；坏死细胞DNA电泳类似血抹片时的连续性条带。

三、酶联免疫吸附法（ELISA)核小体测定

凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成，可由ELISA 法检测。

（一）检测步骤

1、将凋亡细胞裂解后高速离心，其上清液中含有核小体；

2、在微定量板上吸附组蛋白体’

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Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst 有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

染色步骤

PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！

annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

细胞染色方法大全

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合(主要为凋亡活细胞)在紫外光下将核染为蓝色. Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342和hoechst33258两种hoechsts33258，hoechst33342二者区别不大，但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，所以一般来说hoechsts33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色！

宇文皓月

染色步调

PI(Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细

胞核染色试剂，经常使用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不克不及透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能暗示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI 亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不敷！

annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标记发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻 ,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与

其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,暗示细胞处于

早期凋亡状态.Annexin-V结合分歧的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标识表记标帜发绿色荧光；如果用PE 标识表记标帜就发红色荧光。

实验室做细胞常用染色

实验室做细胞常用的细胞固定与染色方法

一、爬片前盖玻片处理方法

对于悬浮培养的细胞;在进行各种染色前常需先制备成涂片..为了保证细胞在长时间的染色过程中不从载玻片脱落;必须使其牢固贴附于载玻片上..在载玻片上涂布一层有助于细胞黏附的物质是经常采用的方法之一..能促进细胞黏附的物质主要有多聚赖氨酸、铬矾明胶等;这里介绍多聚赖氨酸的涂布方法..

1、将载玻片用玻璃专用洗涤剂如Decon浸泡5min;间或振荡..

2、用自来水冲洗5min..

3、以1％盐酸—70％乙醇溶液浸泡5min..

4、烤箱干燥至此即可用于普通染色..

5、多聚L-赖氨酸1:10溶于去离子水浸泡5min;振荡..

6、入60℃烤箱1 h;或室温过夜干燥用于细胞化学、免疫细胞化学及原位杂交细胞化学..

二、细胞固定常用方法

固定细胞的目的在于把组织和细胞的原有结构尽可能完整地保存下来;避免组织和细胞发生降解、自溶、腐败和变形等;使细胞和组织内的各种酶失去活性;防止细胞和组织的各种分子变性、解离;使细胞的化学物质和酶能准确定位;并在以后的处理和制片过程中亦不发生改变和破坏..同时;固定还可使细胞的各部分易于着色;适于观察、长期保存和分析..

1.固定组织、细胞的基本原则：尽可能选用新鲜培养物；根据检测工具、对象、目的和要求选择固定剂和固定方法..

2.培养物的准备和固定前处理：各种细胞培养物;如双盖片悬滴培养物、悬液培养物、单层培养物和盖片单层培养物都可作固定材料..对双盖片悬滴培养物和悬液培养物来说;常通过离心收集细胞;PBS漂洗2～3次后;备固定制片；对盖片单层培养物来说;将盖片从培养器皿中取出后;PBS液漂洗2～3次;以洗去血清和附着于细胞表面的残渣;备固定用..

卢卡斯快蓝染色方法

卢卡斯快蓝染色方法是一种常用的细胞染色方法，可用于检测细胞活

力和细胞死亡。该方法利用卢卡斯快蓝染料（Lucas' blue dye）染色细胞，通过观察染色程度来判断细胞的代谢活性和细胞死亡。下面将详细介

绍卢卡斯快蓝染色方法的步骤和注意事项。

材料准备：

1.卢卡斯快蓝染料：该染料可通过购买或实验室内部配制获得。

2.预培养的细胞：将需要染色的细胞预先培养在含有适宜培养基和10%胎牛血清（FBS）的培养皿中，培养至80%以上的细胞与。

步骤：

1.细胞处理：将细胞从培养皿中收集，可以使用胰酶消化细胞层来释

放细胞。

2.细胞计数：使用血细胞计数板或显微镜下的细胞计数室对细胞进行

计数。计算细胞密度，使得每个培养皿上包含需要染色的目标细胞数量。

3.细胞复悬液的制备：将细胞计数到的细胞用含适宜培养基的离心管中，并在合适的转速下离心细胞10分钟，以平均沉降细胞和去除上清液。

4.细胞复悬液的制备：将细胞计数的细胞用含适宜培养基的离心管中，并在合适的转速下离心细胞10分钟，以平均沉降细胞和去除上清液。

5.染色：将细胞沉积沉积在离心管底部，轻轻地加入适量的卢卡斯快

蓝染料，使其完全覆盖细胞。将离心管放置在37摄氏度的培养箱中，染

色时间为30分钟。

6.染料去除：将染过色的细胞与同等体积的PBS缓冲液混合，轻轻地摇动离心管，使细胞充分洗涤。然后进行一次离心，以去除洗涤液。

7.观察和图像采集：将离心管中的细胞再次悬浮在PBS缓冲液中。用显微镜观察染色细胞的形态和颜色，使用显微镜目镜拍摄细胞图像。

注意事项：

细胞核染色方法及原理

细胞核染色是生物学领域中常用的实验技术之一，用于研究细胞核的结构和功能。目前常用的细胞核染色方法包括苏木精-

伊红染色法、甲苯胺蓝染色法和荧光染色法等。

苏木精-伊红染色法是最常见的细胞核染色方法之一。其原理

是将标本固定后，用苏木精染料染亮细胞核，然后用伊红染料染暗胞质细胞器。染色后的样本可以通过显微镜进行观察。苏木精主要染色DNA，使细胞核呈现为紫红色，而伊红主要染

色胞质蛋白质，使胞质呈现为粉红色。

甲苯胺蓝染色法主要用于观察细胞核的细胞形态和染色体结构。其原理是将标本固定后，用甲苯胺蓝染料染色，然后对其进行脱水、透明化等处理，最后用显微镜观察。甲苯胺蓝染料可以与DNA结合，使细胞核呈现出深蓝色。

荧光染色法是一种利用荧光染料标记细胞核的方法。其中，常用的荧光染料有荧光素、荧光素同工异构体和DAPI等。这些

染料可以与DNA结合，在荧光显微镜下观察细胞核。荧光染

色法可以提供更高的分辨率和更准确的定位信息，常用于细胞核的三维结构研究和基因表达等研究领域。

细胞核染色方法的选择要根据实验的目的和需要来决定，不同的染色方法有不同的优缺点。细胞核染色的目的是为了更好地观察和研究细胞核的结构、功能和变化，从而揭示细胞核在生物体内扮演的关键角色。

细胞各种染色方法

细胞培养后,需要对其生长情况、形态甚至生物学性状进行连续地观察。由于细胞小而复杂，若不借助适当的手段，则难以观察其形态、结构，更难发现细胞内各种组分的分子组成及功能。目前,已有多种研究细胞的技术,从光镜到电子显微镜，从一般细胞化学法到免疫化学法,本章将重点介绍一些常用的观察和检测方法。

第一节培养细胞的常规检查和观察方法

细胞在体外培养过程中需要每天进行常规检查和显微镜观察，及时了解细胞生长状态、数量改变、细胞形态、细胞有无移动、有无污染、培养液pH是否变酸、变黄是否更换等.细胞常规检查观察的内容为：

一、肉眼观察

一般常规检查用肉眼即可观察,主要看培养液的颜色和透明度的变化.正常情况下，培养液pH介于7.2～7.4之间，呈桃红色清亮透明。加入细胞在培养瓶中置一般温箱培养时，随着细胞生长时间的延长，细胞代谢产生的酸性产物会使培养液pH值下降,引起颜色变浅变黄。在超越缓冲范围后培养液酸化变黄，如不及时调节pH，会影响细胞的生长，甚至造成细胞退变死亡。所以，一旦发现培养液变黄，应及时换液传代。一般更换培养液的时间，依营养物的消耗而定，正常情况生长稳定的细胞2～3天换液一次，生长缓慢的细胞3~4天换液一次。培养液中加Hepes或用5%CO2温箱培养可使pH维持稳定，利于细胞生长。用含磷酸盐缓冲系统培养时，可因瓶及塞子漏气，CO2溢出，也可能由于培养瓶塞洗刷不洁、残留碱性物,使培养液变碱发红,只致使细胞难以生长，甚至死亡。细胞换液传代后，若发现培养液很快变黄,要注意是否有细菌污染或培养器皿没有洗干净。贴壁细胞培养时若出现混浊,多为污染.悬浮培养的细胞,应将瓶竖起静置1小时，若培养基混浊示为污染,也可在显微镜下仔细观察有无污染现象出现。

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染色步骤

PI (Propidium Iodide碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂，常用于细胞凋亡检测.碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料(红色），它不能透过完整的细胞膜，但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红.用PI单一染色观测培养细胞，只能表示细胞的坏死情况，而不是凋亡（当然晚期凋亡PI亦可着色）。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况，而不是仔细区分坏死或凋亡，那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡，那么PI单一染色显然不够！

annexin-v染色细胞凋亡早期,细胞膜标志发生改变.其中,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V 在Ca+存在的条件下与其高亲和力特异性结合.这样,Annexin-v 染色阳性,表示细胞处于早期凋亡状态.Annexin-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。Annexin V用FITC标记发绿色荧光；如果用PE标记就发红色荧光。

JC-1染色JC-1是一种阳离子染料，可以在线粒体内聚集，低浓度时主要以单体(monomer)存在，发射光以绿光(～525nm)为主；而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation)，发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性(polarization)，其外膜为负极，内膜为正极。电位差由Ca2+、Na+和H+流调控。当线粒体状态良好时对JC-l摄取量少，因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化(depolarization)时，线粒内JC-l的浓度较高，多以多聚体的形式存在，绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势(membrane potential)，而与线粒体的形态、体积和密度都无关，因而能更好地反映线粒体的功能状态。由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性，因此，JC-1染色被用于检测凋亡的早期发生。其实验方法如下。