PEG诱导的细胞融合实验
实验十 PEG法诱导鸡血细胞融合
（7）詹纳绿染液。
四、方法与步骤
（一）鸡血细胞的体外融合
1.鸡血细胞的获得 用肝素溶液润洗注射器，从家鸡的翼根静脉用注射器采血，
注入试管后，速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合，制 成抗凝全血。 2.鸡血细胞储备液的制备 在抗凝全血的试管中，加入4倍体积的0.85%NaCl溶液，制 成红细胞储备液，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
• 影响原生质体融合的因素。 （1）首先是酶解条件： 渗透压稳定剂 Ca2+ 、Mg2+、蔗糖 可保持原生质体稳定利于再生；随着酶解时间的增加原生 质体的释放量增大；酶解浓度到达一定浓度后，原生质体 的再生率下降；再就是酶解温度。 （2）原生质体的脱壁是否完全会影响融合效果。有的原生质 体会很快再生细胞壁，因此在洗去酶液后，应立即进行融合 处理。 （3）原生质体的悬浮状况也会影响融合，如果两亲本原生质 体密度相差较大，就难以混和均匀，接触机会减少，这时应 用离心方法强迫它们密集
实验 十 PEG法诱导鸡血细胞融合
College of Life Science and Technology, XINJIANG Univercity
一、实验目的
了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合 的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验， 初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理
荧光标记的细胞融合
三．实验仪器、材料和试剂
仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心 机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微 镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、 酒精灯等。
材料：成年家鸡。
■ 试剂
（1）0.85%NaCl溶液:
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG诱导细胞融合原理。
细胞融合是指两个或两个以上的细胞融合成一个细胞的现象，它在生物学研究中具有重要的意义。
PEG（聚乙二醇）是一种常用的细胞融合剂，通过PEG诱导细胞融合可以实现不同细胞的融合，从而产生新的细胞群体。
本文将介绍PEG诱导细胞融合的原理及其在细胞生物学研究中的应用。
首先，PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG的高渗透性和毒性，使细胞膜受到破坏，从而促使细胞融合。
在实验中，将两种不同类型的细胞分别与PEG混合，PEG能够破坏细胞膜，使得两种细胞的质膜融合在一起，形成一个新的细胞。
这种方法可以用于融合不同细胞系，或者将外源基因导入目的细胞中。
其次，PEG诱导细胞融合在细胞生物学研究中有着广泛的应用。
通过细胞融合技术，可以将两种不同类型的细胞融合在一起，从而研究它们的互补性和相互作用。
例如，将癌细胞与正常细胞融合，可以研究癌细胞的恶性特性和调控机制；将干细胞与成熟细胞融合，可以研究干细胞的分化能力和再生潜力。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞杂交技术，将两种不同细胞的染色体融合在一起，研究染色体的配对和重组。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于细胞治疗和再生医学研究。
通过将患者的细胞与健康捐赠者的细胞融合，可以修复患者受损的组织和器官。
例如，将患者的干细胞与健康捐赠者的成熟细胞融合，可以使干细胞具有更强的分化能力，从而用于治疗各种疾病和损伤。
此外，PEG诱导细胞融合还可以用于再生医学研究，研究干细胞的再生潜力和分化机制，为再生医学的发展提供重要的实验基础。
综上所述，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞生物学技术，通过破坏细胞膜促使细胞融合，具有广泛的应用价值。
在细胞生物学研究中，PEG诱导细胞融合可以用于研究细胞互补性和相互作用，染色体配对和重组，以及细胞治疗和再生医学研究。
相信随着科学技术的不断发展，PEG诱导细胞融合技术将会在细胞生物学和医学领域发挥越来越重要的作用。
实验四 PEG介导的细胞融合
实验四 PEG介导的细胞融合一、实验目的：（1）通过PEG介导的鸡血细胞融合实验，对体细胞融合有一个清楚的概念。
（2）初步掌握利用PEG介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理：利用PEG介导动物细胞融合的原理到目前为止还没有完全定论。
学者们一般认为，PEG改变各类细胞的膜结构，使两细胞相互接触部位的膜脂双层中磷脂分子发生疏散，进而使其结构发生重排，再加上膜脂双层的相互亲和以及彼此间表面张力的作用，引起相邻的重排质膜在修复时相互合并在一起，使两细胞的胞质沟通，从而造成相互接触的细胞之间发生融合。
利用PEG介导细胞融合，其融合效果受以下几种因素的影响。
1、PEG的分子量与浓度细胞融合效果与PEG的分子量及其浓度成正比；但PEG得分子量越大、浓度越高，对细胞的毒性也就越大。
为了兼顾二者，在实验时常常采用的PEG分子量一般为1000-4000，浓度一般为40%-60%。
2、PEG的pH值经验证，PEG的pH值在8.0-8.2之间融合效果最好。
3、PEG的处理时间处理时间越长，融合效果越好，但对细胞的毒害作用也就越大。
故一般将处理时间限制在1分钟之内。
本实验中那个细胞融合后无需继续培养，故处理时间可适当放宽至数分钟。
4、融合时的温度由于生物膜的流动性与温度成正比，故细胞的融合效果也与温度成正比。
因此，为了获得更好的融合效果，在细胞可能承受的温度范围内可适当提高处理的温度。
对于哺乳动物的细胞，一般采用的温度为38℃-40℃。
本实验所用材料为鸡的血细胞，这是因为：①鸡血细胞具有细胞核，便于对融合细胞进行鉴别；②实验材料便宜、易得。
细胞融合与否，可通过观察细胞内核的数目来进行鉴别。
细胞内只有1个核，定为未融合细胞；有2至多个核，定为融合细胞。
三、实验用品：1、材料：新鲜鸡血；2、试剂：（1）Alsever液：葡萄糖（2.05g）枸椽酸钠（0.8g）氯化钠（0.42g）重蒸水（至100mL）（2）生理盐水（0.85%）（3）GKN液：氯化钠（8g）氯化钾（0.4g） Na2HPO4•2H2O（1.77g）Na2HPO4•H2O（0.69g）葡萄糖（2g）酚红（0.01g）溶于1000mL重蒸水中（4）50%PEG液（现用现配）：根据实验需要，称取适量PEG（Mr.4000）放入刻度离心管内，在酒精灯上将其融化，待冷却至50℃，加入等体积的已预热的GKN液并充分混匀。
实验5诱导细胞融合——聚乙二醇法
10.进行多个视野的测定，统计细胞平均融合率。
五、结果与分析
1、绘制观察到的融合细胞图，计算观察到的细胞 融合率；
2、简述聚乙二醇法诱导细胞融合的原理及影响融 合的关键因素。
六、注意事项
如抗凝血要保存在冰箱，抗凝剂预先要进行 灭菌，采血在无菌条件下进行。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构， 使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组， 由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼 此的表面张力作用，从而使细胞发生融合。
细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融 合的细胞其细胞核总数与该视野内所有细胞(包括 已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比 表示。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用从而使细胞发生融合
实验五 诱导细胞融合——聚乙二醇法
一、实验目的 了解细胞融合的原理，初步掌握用PEG诱导
细胞融合的方法。 二、实验原理 聚乙二醇（PEG）结构为： CH2(OH)-(CH20CH2)n-CH2OH； 相对分子质量在2000-6000均可用作细胞融合剂。
6.取悬液1mL到7ml离心管中，加入0.5～0.8 mL预热 的50％PEG （慢慢沿着离心管壁逐滴加入，边加边 轻摇离心管,使其混匀），38℃水浴中温浴30min。
7.缓慢加入Hanks液5ml以终止PEG的作用，轻轻吹 打混匀，38℃水浴中静止5min。
8.1000r/min离心5min，去上清，指弹使细胞团分散 9.取细胞悬液1滴滴于载玻片上，盖上盖玻片直接镜
PEG诱导的细胞融合实验
【实验操作】
1、调整肿瘤细胞浓度：处死小鼠，抽取腹水，计数 细胞浓度，用Hanks液稀释成个107个/ml
2、配2％鸡红细胞悬液：肝素抗凝鸡血1000rpm离 心5min，去血浆；按红细胞压积用Hanks液配成2 ％悬液（约108个/ml）。
【实验目的】
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别融合细胞。
【实验材料及用品】
一、实验材料： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞 二、实验器材 普通离心机 水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂
1、180IU/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产 单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus） ，主要用于动
物细胞融合。
2、电融合：用电融合仪诱导融合，主要用于植物细 胞。
3、聚乙二醇（polythyleneglycol，PEG）诱导：分 子量200－6000都可用，以1000较好。用于诱 导植物原生质体融合和多种动物细胞融合。 优点：材料易得、操作方法简单、效果稳定。
计数200个细胞计算异细胞融合率融合细胞核数占细胞核总数的百分率融合细胞核数100融合细胞核数未融合的细胞核数peg处理时间不宜过长否则会造成细胞破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合经peg处理后加液混匀时应轻轻吹打以免刚刚融合的细胞分开
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
PEG是聚乙二醇的缩写，是一种具有高分子量的线性聚合物。
PEG在
生物学研究中被广泛应用，其中最常见的应用之一就是诱导细胞融合。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合成一个单独的细胞。
这种技术被
广泛应用于生物学研究中，例如制备杂交瘤细胞、制备单克隆抗体和
产生转基因动物等。
PEG诱导细胞融合的原理是利用PEG分子与细胞膜相互作用，使得两个或多个不同类型的细胞在PEG存在下发生融合。
具体来说，PEG通过以下机制促进了细胞融合：
1. 破坏细胞膜结构
PEG分子可以与水形成氢键，并且可以与亲水性区域结合。
当PEG溶液与细胞接触时，它会插入到细胞表面，并破坏部分磷脂双层结构，
从而使得两个或多个不同类型的细胞暴露出其内部的细胞质。
2. 促进细胞膜的接触
PEG分子可以通过两种方式促进细胞膜的接触。
首先，PEG可以降低水的表面张力，使得两个或多个细胞之间的距离缩小。
其次，PEG可以与细胞膜表面的亲水性区域结合，从而增加了两个或多个细胞之间的吸引力。
3. 促进细胞融合
当两个或多个不同类型的细胞表面接触时，PEG会形成一个临时性的孔道，使得两个或多个细胞质混合在一起。
这些孔道很快就会关闭，并且新形成的单一细胞会拥有所有原始细胞中所包含的遗传物质和生物学特性。
总之，PEG诱导细胞融合是一种简单、有效、广泛应用于生物学研究中的技术。
它利用PEG分子与细胞膜相互作用来促进不同类型细胞之间发生融合，并且可以产生许多重要的研究工具和应用。
PEG诱导细胞融合
实验十一 PEG诱导细胞融合一、实验目的1．了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术。
2．学会鉴别融合细胞。
二、实验原理细胞融合又称细胞杂交，是指两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的现象。
细胞融合技术是细胞工程骨干技术，除了用于一些基础性研究外，在植物方面主要用于合成新种；动物方面主要用于生产单克隆抗体。
细胞融合的诱导因素主要有以下三种：1、生物融合因子：如病毒。
2、物理因素：如电融合仪,主要用于植物细胞。
3、化学因素：如聚乙二醇（PEG），分子量200－6000都可用，以1000较好。
聚乙二醇最早用于诱导植物原生质体的融合，现已普遍用于多种细胞。
其优点是:材料易得、操作方法简单、效果稳定。
病毒介导的细胞融合常用灭活的仙台病毒，主要用于动物细胞融合。
其优点是融合率高，对各种动物细胞都适宜；缺点是不稳定，在保存过程中融合活性降低，并且制备过程繁琐。
细胞融合，即在自然条件下或利用人工法 (生物的、物理的、化学的)，使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程。
人工诱导细胞融合始于20世纪50年代，并迅速成为一门新兴技术。
由于不仅同种细胞可以融合，种间远缘细胞也能融合，甚至于动植细胞也能合二为一，因此细胞融合技术目前较广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域，并且取得显著的成绩。
聚乙二醇(PEG)结构为：HOH2C(CH20CH2)nCH2OH，相对分子质量在200-6000均可用作细胞融合剂。
普遍认为聚乙二醇分子能改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处质膜的脂类分子发生疏散和重组，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲和以及彼此的表面张力作用，从而使细胞发生融合：细胞融合率是指在显微镜的一个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。
该方法的优点是：用法简单，容易获得融合体，融合效果好。
三、实验材料及用品实验材料：鸡红细胞、鸡白细胞实验器材：普通离心机，水浴锅：50ºC，37ºC，细胞计数板四、实验步骤1、配50％PEG：称取10gPEG，加入带盖离心管中；将带盖离心管放入电炉上的沸水中，加热使PEG熔化；待冷却至50ºC时，加入等体积预热至50ºC的HanKs液或不加血清的培养液混匀，保存于37ºC水浴中。
PEG法诱导细胞融合
PEG法诱导细胞融合PEG法诱导细胞融合是一种常用的细胞生物学实验技术，通过聚乙二醇（PEG）作为诱导剂，促进两个或多个细胞之间的融合。
这种方法常用于制备单克隆抗体、诱导染色体加倍、诱导基因转移等研究领域。
以下是PEG法诱导细胞融合的详细步骤和注意事项。
一、实验准备1.细胞株：选择需要进行融合的细胞株，可以是两种或多种不同种类的细胞。
2.培养基：选择适合细胞生长和繁殖的培养基，一般采用含10%胎牛血清的DMEM或RPMI-1640培养基。
3.聚乙二醇（PEG）：选择合适浓度的PEG，根据实验需求选择PEG分子量。
常用的PEG分子量有4000、6000、8000等。
4.抗体：选择适当的抗体进行融合后检测，如抗细胞表面抗原的单克隆抗体、抗细胞内抗原的单克隆抗体等。
5.仪器设备：细胞融合仪、显微镜、离心机、培养箱等。
二、实验步骤1.细胞传代：将待融合的细胞株按照常规方法进行传代，使细胞生长到对数生长期。
2.细胞洗涤：将传代后的细胞洗涤两次，去除培养基中的杂质和未贴壁的细胞。
3.细胞融合：将两种或多种细胞按照一定的比例混合在一起，加入适量的PEG，充分摇匀，使细胞充分融合。
4.细胞洗涤：将融合后的细胞洗涤两次，去除未融合的细胞和PEG残留。
5.细胞培养：将融合后的细胞接种到培养基中，加入适量的抗生素和生长因子，置入培养箱中培养。
6.检测和观察：在融合后的不同时间点进行细胞形态学观察和免疫学检测，如荧光染色、ELISA等方法，以评估融合效果。
三、注意事项1.细胞株的选择：PEG法诱导细胞融合适用于大多数动物细胞，但不同种类的细胞融合难度和最佳条件可能不同。
因此，在选择细胞株时需要考虑其种类、状态和生长特性等因素。
2.PEG浓度的选择：PEG浓度是影响细胞融合的关键因素之一。
不同浓度的PEG对细胞的毒性作用和融合效果也不同。
因此，需要根据实验需求和细胞特性选择合适的PEG浓度。
3.细胞的活性：在进行细胞融合之前，需要确认细胞的活性和数量。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理
PEG诱导细胞融合原理
细胞融合是指两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞的过程。
细胞融合技术在生物医学领域有着广泛的应用，尤其在细胞治疗和生物医学研究中发挥着重要作用。
PEG（聚乙二醇）诱导细胞融合是一种常用的细胞融合方法，其原理是利用PEG的特殊性质将细胞膜融合在一起，促使细胞融合。
PEG是一种聚合物，具有疏水性和亲水性双重特性。
在细胞融合实验中，PEG可以渗透细胞膜，打破细胞膜的完整性，从而促使细胞融合。
具体来说，当两个细胞暴露在含有PEG的溶液中时，PEG会与细胞膜上的脂质分子相互作用，降低了细胞膜的表面张力，使细胞膜之间更容易发生融合。
在实际操作中，研究人员首先将待融合的细胞分别悬浮在含有PEG 的溶液中，然后通过离心等方法将两种细胞混合在一起。
接着，将混合后的细胞放回培养皿中进行培养，待细胞融合完成后，可以观察到形成了融合细胞。
PEG诱导细胞融合的优点在于操作简单、效率高、适用于多种类型的细胞。
然而，也存在一些局限性，比如融合后的细胞可能存在细胞周期不同、染色体数目不同等问题，需要在实验设计和数据解读时进行考虑。
除了在生物医学研究中的应用，PEG诱导细胞融合还被广泛应用于融合细胞疫苗的制备、融合抗体的生产等领域。
通过探究PEG诱导细胞融合的原理，可以更好地理解细胞融合的机制，为相关领域的研究和应用提供理论支持。
总的来说，PEG诱导细胞融合是一种重要的细胞融合方法，通过利用PEG的特殊性质促使细胞融合，为细胞治疗、生物医学研究等领域提供了重要的技术手段。
随着科学技术的不断发展，相信PEG诱导细胞融合技术将在未来发挥更加重要的作用。
PEG介导的细胞融合
实验七 PEG介导的细胞融合一、实验目的1、理解PEG介导细胞融合的原理，掌握实验方法与技能。
2、了解影响细胞PEG介导融合的因素。
二、实验原理2个或以上的细胞合并为1个细胞的现象，称为细胞融合。
细胞融合的主要方法有病毒法、聚乙二醇（PEG）法和电融合方法。
PEG是乙二醇的多聚化合物，一般常用分子质量为MW 4000—6000的50%PEG溶液，首先引起细胞的集聚与粘连，然后改变各类细胞膜的结构，使两细胞接触点处脂分子双层发生疏松和重排，由于两细胞接口处双分子层质膜的相互亲合以及彼此的表面张力作用，使细胞发生融合，胞质流通，最后形成融合细胞。
细胞融合频率和活力与所用PEG的分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
三、实验器材1、材料：新鲜鸡血红细胞2、器具：光学显微镜，离心机，恒温培养箱或恒温水浴锅，电磁炉、离心管、烧杯、容量瓶、木夹子、载玻片，盖玻片等。
3、试剂与配制：1．0.85 % NaCl 溶液2．GKN液：8.0g NaCl，0.4g KCl，3.56 g Na2HPO4·12H2O，0.78 g NaH2PO4·2H2O，2.0g葡萄糖，0.01g酚红，溶于1000ml重蒸水中。
3．33%（W/V）PEG溶液1. 取10g PEG（分子质量=4000）放入50ml 瓶中，在电磁炉水浴锅中加热熔化后，再边搅拌继续加热6min。
2. 让PEG冷却至50℃，勿让其凝固。
3. 边搅拌边加入15ml预热至50℃的GKN液，再充分混匀，置37℃水浴锅中待用。
4．肝素钠：100ml 0.85%生理盐水中溶解0.04g肝素钠（125U/mg），加入40ml全血。
可先配100倍母液：用0.85%生理氯化钠盐水配成1%肝素溶液（200mg /10ml）。
再稀释：按1：40，用0.85%氯化钠溶液将母液稀释好，再采鸡血。
四、实验方法1. 鸡血的获得：从在烧杯中事先加入配好的肝素钠（100U 肝素/ 5ml全血），到菜市场采集鸡血，按1：4体积比制成抗凝全血，置于4℃冰箱内可供一周内使用。
PEG法诱导细胞融合
实验十PEG法诱导细胞融合一、实验目的1.了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合的基本原理。
2.通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验，初步掌握细胞融合的基本方法。
二、实验原理细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交，是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞，随后，异核体同步进入有丝分裂，核膜崩溃，来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞（hybrid cell）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
依据融合过程采用的助融剂的不同，细胞融合可分为：①病毒诱导的细胞融合，如仙台病毒(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);②化学因子诱导的细胞融合，如聚乙二醇（polyethyleneglycol ,PEG）;③电场诱导的细胞融合；④激光诱导的细胞融合。
PEG是乙二醇的多聚化合物，存在一系列不同分子量的多聚体。
PEG可改变各类细胞的膜结构，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，引起细胞融合。
该方法应用相对分子质量为400~6000的PEG溶液引起细胞的聚集和粘连，产生高频率的细胞融合。
融合的频率和活力与所用PEG分子质量、浓度、作用时间、细胞的生理状态与密度等有关。
三、实验仪器、材料和试剂（１）仪器、用具：注射器、刻度离心管、离心机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
（２）材料：成年家鸡。
（３）试剂1）0.85%NaCl溶液。
2）GKN液：8.0gNaCl，0.4g KCl,1.77 g Na2HPO4·2H2O，0.69 g NaH2PO4·H2O,2.0g葡萄糖,0.01g酚红,溶于1000ml重蒸水中。
3）50%（m/v）PEG溶液：①取50gPEG （相对分子量=4 000）放入100ml瓶中，高压灭菌20min.②让PEG 冷却至50-60℃，勿让其凝固。
peg诱导细胞融合原理
peg诱导细胞融合原理PEG（Polyethylene glycol）是一种聚合物化合物，由重复的乙二醇单元组成。
在生物学中，PEG常被用作诱导细胞融合的工具。
细胞融合是指将两个或多个细胞融合在一起形成一个细胞，使其合并为一个细胞体。
PEG诱导细胞融合的原理是通过PEG的特殊性质，促进细胞膜的融合，使细胞内的物质互相交流和共享。
了解细胞融合的背景是很重要的。
细胞融合在生物学研究中有着广泛的应用，可以用于细胞的混合和杂交，从而产生新的细胞型态，用于研究细胞的功能和特性。
细胞融合还可以用于生物医学领域，例如将癌细胞与正常细胞融合，以研究癌细胞的特性和机制。
此外，细胞融合还可以用于克隆动物和干细胞研究等领域。
在细胞融合实验中，PEG起到了至关重要的作用。
PEG具有一种特殊的性质，即可以在细胞膜上形成孔道，促进细胞膜的融合。
这是因为PEG在水中具有很强的溶解性，可以与细胞膜上的脂质相互作用，改变膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短，从而促进融合。
具体而言，PEG诱导细胞融合的过程可以分为以下几个步骤。
首先，将需要融合的细胞分别收集，并用培养基或缓冲液洗涤干净，以去除细胞外的杂质。
然后，将细胞悬浮于含有PEG的溶液中，使PEG 与细胞膜相互作用。
PEG通过与细胞膜上的脂质相互作用，改变细胞膜的结构，使细胞膜之间的距离缩短。
此时，细胞膜上会形成孔道，细胞膜之间的融合就可以发生。
最后，将处理后的细胞培养在适当的培养基中，以促进融合细胞的生长和分裂。
PEG诱导细胞融合的原理并不复杂，但它在细胞融合实验中起到了至关重要的作用。
通过PEG的作用，细胞膜之间的距离缩短，细胞膜上形成孔道，从而促进细胞融合。
细胞融合的应用领域广泛，可以用于研究细胞的功能和特性，以及生物医学领域的应用。
同时，PEG诱导细胞融合的实验过程相对简单，只需要将细胞与含有PEG 的溶液接触即可。
因此，PEG诱导细胞融合成为了一种常用的实验方法。
PEG诱导细胞融合是一种重要的实验方法，通过PEG的特殊性质，可以促进细胞膜之间的融合，实现细胞的融合。
实验3 PEG介导的动物细胞融合技术
实验3 PEG介导的动物细胞融合技术
PEG介导的动物细胞融合技术是一种常用的体外融合细胞的方法，主要应用于融合一些生长速度缓慢或难以进行杂交的细胞。
该技术利用聚乙二醇（PEG）使两种不同细胞融合成一个细胞，从而产生一些杂合细胞，可以获得有趣的遗传组合。
技术原理
PEG确保了细胞融合的前提是细胞外膜的破裂。
PEG受到细胞表面膜过渡物质的吸引，然后与细胞表面膜结合，形成一个PEG-膜复合物。
虽然聚乙二醇是一种高分子，但由于其化学性质与细胞膜相似，在一定程度上可以渗透到细胞膜中，从而使细胞表面膜发生缺陷和破裂，从而产生细胞融合。
实验步骤
1.将需要融合的两种细胞分别进行繁殖和培育，并将其分离。
2.将细胞置于无血清的生长培养基中，进行24-48小时的饥饿处理，使细胞停止生长。
3.制备PEG溶液，将细胞加入到PEG中，进行处理。
4.将PEG处理后的细胞转移到培养基中，定期更换培养基供给其营养并观察其生长情况。
实验注意事项
1.选择渗透性强，尺寸相似的细胞，以利于融合。
2.通过显微镜观察细胞的形态和数量，确保细胞膜在PEG处理后的破裂和细胞融合情况。
3.注意PEG用量，一般为2-4 g/L，过多的PEG处理可能会导致不必要的副作用。
4.注意细胞的状态和健康程度，以保证实验的稳定性和可靠性。
实验应用
PEG介导的细胞融合技术被广泛应用于细胞融合和制备杂交瘤，可以产生一些具有较好生长特性和生物学功能的新型细胞。
此外，该技术也应用于基因转移、卵母细胞和体细胞融合技术，以及其他相关研究领域中。
实验六 PEG法诱导细胞融合
实验六PEG法诱导细胞融合【实验材料】1. 材料新鲜鸡血细胞。
2. 器材离心机、天平、显微镜、离心管、水浴锅、血球计数板、载玻片、盖玻片、离心管、容量瓶、烧杯和注射器等。
3. 试剂（1）0.85％生理盐水。
（2）双蒸水。
（3）肝素：肝素是一种抗凝剂，在体内外都有抗凝血作用。
（4）Hanks ：Hanks 液是生物实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液。
（5）50% PEG溶液：称取一定量的PEG(Mw= 4000)放入烧杯，沸水浴加热使之融化，待冷却至50℃时，加入等体积预热至50℃的Hanks 液，混匀，置于37℃备用。
可再配制60%和30%的PEG溶液做对比研究不同浓度PEG的融合效果。
（6）詹纳斯绿B染液。
【实验方法】1．把鸡杀掉取血，使血液与肝素的比例达1：4左右，混匀后待用。
2．取此贮存鸡血1 mL加入4 mL 0.85％生理盐水，充分混匀，1000 r/min 离心5 min，弃去上清，重复上述条件离心两次。
最后弃去上清，加Hanks 液4 mL，离心。
3．弃去上清，加Hanks 液，制成细胞悬液。
4．取上述细胞悬液镜检。
如果密度过大，用Hanks 液调整细胞间距离0.5至1倍细胞直径大小。
5．取以上细胞悬液l mL于离心管，放入37℃水浴中预热。
同时将50% PEG 液一并预热15 min。
6．将50% PEG溶液0.5 mL逐滴沿离心管壁加入到1 mL细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温30 min。
中途随时镜检观察细胞融合情况。
7．加入Hanks 液至8 mL，静置于水浴中15 min左右。
8．将詹纳斯绿B染液加入试管，混匀，10min后取少量悬浮液于载玻片上，盖上盖玻片，观察细胞融合情况。
在高倍镜下可以看到有两个或两个以上的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个异核体细胞。
要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。
细胞实验一 PEG介导细胞融合
实验三：聚乙二醇（PEG）介导的细胞融合摘要细胞融合(cell fusion)是在自发或人工诱导下，两个不同基因型的细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。
基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（离心，震动，电刺激）。
某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合，因此可以用紫外线灭活的此类病毒诱导细胞融合。
化学和物理方法可造成膜脂分子排列的改变，去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。
关键词细胞融合；人工诱导；PEG前言人工诱导的细胞融合，在六十年代作为一门新兴技术而发展起来。
由于它不仅能产生同种细胞融合，也能产生种间细胞的融合，因此细胞融合技术目前被广泛应用于细胞生物学和医学研究的各个领域。
基因型相同的细胞融合成的杂交细胞称为同核体（homokaryon）；来自不同基因型的杂交细胞则称为异核体（heterokaryon）。
细胞融合不仅可用于基础研究，而且还有重要的应用价值，在植物育种方面已经成功的有萝卜+甘蓝、粉蓝烟草+郎氏烟草、番茄+马铃薯等等。
细胞融合另一个重要应用就是制备单克隆抗体，单克隆抗体可以用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物，具有准确，高效，简易，快速等优点。
因此，融合细胞的研究为生物学无论在基础理论上或生产实践上开辟了一条新的道路。
这一技术已成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育的重要手段。
一．目的要求掌握细胞融合原理以及应用PEG 诱导细胞融合的方法。
二．实验原理两个以上的细胞合并成为一个双核或多核细胞称为融合细胞。
在通常情况下，两个细胞接触并不发生融合现象，因为各自存在完整的细胞膜，在特殊融合诱导物的作用下，两个细胞膜发生一定的变化，就可促进两个或多个细胞聚集，相接触的细胞膜之间融合，继之细胞质融合，形成一个大的融合细胞。
PEG诱导动物细胞融合
概述
细胞融合
• 细胞融合(cell fusion)是指两个或多个细胞通过质膜融合 形成单个双核或多核细胞的现象称为细胞融合,结果 产生杂交细胞(hybrid),亲本相同的融合细胞称为同核体 (homokaryon),反之称为异核体(heterokaryon). • 细胞融合在机体正常发育的各个时期都可以观察到. • 上世纪60年代首次体外人工诱导细胞融合获得成功 以来,由于其应用的广泛性和广阔前景,已逐步发展 成为重要的细胞工程技术. • 人工诱导细胞融合主要包括:病毒和化学融合剂以及 电融合和激光融合等方法.
细胞融合的意义
细胞融合能把亲缘关系较远，甚至毫无 亲缘关系的生物体细胞融合在一起，为 远缘杂交架起了桥梁，是改造细胞遗传 物质的有力手段。它的意义在于从此打 破了仅仅依赖有性杂交重组基因创造新 种的界限，扩大了遗传物质的重组范围。
实验原理
PEG诱导鸡血细胞融合
PEG是乙二醇的多聚物, 存在不同分子量的多 聚体,它可改变各类细胞的膜结构, 使两细胞 相互接触部位的膜脂双层中脂类分子发生疏 散和重组,此时相互接触的两细胞的胞质沟通 成为可能,从而造成细胞之间发生融合. PEG介导细胞融合, 其融合效果受以下几种因 素的影响:分子量及浓度、pH值、处理时间和 温度等. 以鸡血细胞为实验材料，经PEG诱导处理后， 形成具有二个或多个核的细胞，可视为融合 细胞.
取血细胞沉淀
镜检
滴加PEG(稀释液的1/2) 静置3分钟
实验结果
观察时注意不同程度的融合现象。通常分为 五个阶段： 两细胞（或多细胞）接触，粘连； 细胞膜形成穿孔； 两细胞（或多细胞）的细胞质连通； 通道扩大，两细胞（或多细胞）连成一体； 细胞完全合并，形成一个含有两个或多个核 的细胞。
实验二聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合
【结果观察】 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上 的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个同 核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠 的鸡红细胞。
【结果观察】 在高倍镜下可以看到有两个或两个以上 的鸡红细胞膜融合在一起，形成一个同 核体细胞。要注意辨别融合细胞与重叠 的鸡红细胞。
【实验报告】 l．在显微镜下按顺序绘制所观察到的细 胞融合各阶段，并注明主要特点。 2．什么是同核体、异核体? 细胞融合主 要有哪几种方法？简述细胞融合的应用。
【实验用品】 1．材料 鸡红细胞 2．器材和仪器：显微镜、离心机、水浴 箱、刻度离心管、试管、载玻璃片、盖 玻片 3．试剂 Alsver液(pH7.4)、0.85％生理盐 水、GKN液、50％PEG（MW 4000） Nhomakorabea
【方法步骤】 1．采血及鸡红细胞悬液的制备（同教材57页）。 2．（共2组）取鸡红细胞悬液1mL，移人10mL离心管， 加入4mL 0.85％生理盐水混匀。1000r／min离心5 min。 3．弃上清液(用吸管吸去)，加0.85％生理 盐水5mL，用 指弹法（或吸管轻吹）将细胞团块弹散，混匀后1000r ／min离心5min；重复上述条件，再离心洗涤1次。 4．收集最后1次离心沉淀的血细胞，加入适量（5－ 8mL）的GKN液，轻吹散，混匀。 5．（每4人）取悬液1mL到1个试管中，加入0.5 mL预 热的50％PEG混匀，置于30℃水浴中温浴3－5min；取 未融合和融合的血细胞悬液各1滴分别滴于载玻片上的 两侧，盖上盖玻片。 6．利用光学显微镜 (高倍) 以未融合细胞为对照观察2个 靠近细胞形成融合的过程。
实验二：聚乙二醇（PEG）介导 的细胞融合
【课前预习】 1．介导细胞融合的方法有哪些？ 2．细胞融合技术有哪些方面的应用？
PEG促细胞融合实验报告
PEG促细胞融合实验报告实验目的：通过PEG促细胞融合实验，探究细胞融合的原理和过程，以及利用细胞融合实验来研究细胞生物学和生物医学相关领域的应用。
实验原理：PEG（聚乙二醇）促进细胞融合是一种流行的实验方法。
PEG具有双亲性分子，在水溶液中既溶于水，又溶于脂质双层。
通过PEG融合神经元，可以融合细胞的细胞膜，使其形成一个大的细胞。
实验材料：1.神经元细胞系2.细胞培养培养基3.聚乙二醇（PEG）4.显微镜检查设备5.细胞培养相关试剂实验步骤：1.准备两个相同类型的细胞培养皿，将细胞预先培养至适当的密度。
2.将细胞培养基抽取掉，用无血清的培养基洗涤细胞。
并将细胞置于含有2g/LPEG的无血清培养基中。
3.轻轻撤离培养皿，将第一个细胞制备物转移到第二个相匹配的细胞制备物上。
4.将含有PEG的细胞悬液迅速转运到冷缓冲液中禁止PEG分子的扩散。
并禁止PEG浓度随温度变化引起细胞融合。
5.分离悬浮细胞，使用显微镜观察新形成的细胞结构。
实验结果与讨论：在经过实验之后，我们观察到了细胞融合的现象。
在尝试不同类型的细胞融合时，我们注意到不同类型的细胞在融合后可以形成具有新功能的细胞。
细胞融合可以通过PEG分子的作用，在较短的时间内实现细胞膜的融合。
PEG作为双亲性分子，能够同时溶解在水和脂质双层中，在融合时充当桥梁的作用。
实验的关键参数之一是PEG的浓度，不同浓度的PEG可能导致不同程度的细胞融合。
较低浓度的PEG可能只形成微小的细胞团，而高浓度的PEG则可能导致更大的细胞聚集。
细胞融合实验常用于细胞融合技术的开发和细胞混合实验的需要。
该技术可以应用于多个领域，包括研究免疫细胞抗原识别，细胞生物学和生物医学研究。
细胞融合的原理和实验方法的深入理解对于相关领域的研究和应用具有重要意义。
通过细胞融合实验，可以研究不同细胞类型之间的相互作用和交流，为细胞生物学和生物医学研究提供新的视角和手段。
综上所述，PEG促细胞融合实验是一种重要的实验方法，可以用于深入研究细胞融合的原理和应用。
PEG介导的动物细胞融合技术
中国海洋大学实验报告姓名：常天易系年级：海洋生命学院2012级专业：生物科学科目：分子细胞生物学实验学号：12050011006PEG 介导的动物细胞融合技术一、实验目的（１）、通过实验，对体细胞融合有一个清醒的认识（２）、通过ＰＥＧ介导鸡血细胞融合，初步掌握利用ＰＥＧ介导动物细胞融合的实验技术。
二、实验原理真核细胞通过介导和培养，两个或多个细胞合并成一个双核或多核的细胞的过程称为细胞融合，通过此技术可以实现不同种类的细胞的融合。
基因型相同的细胞融合称为同核体（ｈｏｍｏｋａｒｙｏｎ），基因型不同的细胞融合称为异核体（ｈｅｔｅｒｏｋａｒｙｏｎ）目前，诱导细胞融合的技术主要有三种：病毒，聚乙二醇（ＰＥＧ），电激。
第一种方法是通过生物病毒的方式，诱导细胞与细胞之间的融合。
后两种方法通过化学物理的手段使得细胞膜的膜脂类分子的排列发生变化，去掉作用因素后，质膜分子的排列恢复原有的形态，在恢复的过程中，可以诱导相接触的细胞发生融合。
ＰＥＧ介导的细胞融合，其融合效果受到以下几个因素的影响①、ＰＥＧ的分子量与浓度ＰＥＧ的分子量及其浓度越大，细胞融合效果越明显，但对细胞的毒性也越大。
本实验使用的ＰＥＧ分子量为４０００Ｄ，浓度为５０％②、ＰＥＧ的ｐｈ值经验证，ＰＥＧ的浓度在８.０～８.２时，融合效果最好③、ＰＥＧ处理时间处理实验越长，融合效果越好，但对细胞的毒性也越大。
故一般将处理时间限制在１分钟以内。
本实验不涉及后续的细胞培养，所以处理时间可适当放宽至数分钟④、融合时的温度温度越高，细胞膜脂质的流动性越好，故在细胞可以承受的范围内，适当的提高温度有利于细胞的融合三、实验材料新鲜鸡血０.８５％生理盐水ＧＫＮ液５０％ＰＥＧ液四、实验步骤取出鸡血悬液1ml，加入0.85%生理盐水，4ml，混匀。
1200r/min离心5分钟，移除上清液加入4ml 0.85%生理盐水，重悬细胞，1200r/min，离心5min，移除上清加入4ml 0.85%生理盐水，重悬细胞，1200r/min，离心10min，移除上清向离心沉淀中加入2mlGKN，使之成为10%的细胞悬液五、实验结果本实验分为四个实验组，经PEG 处理的时间分别为：1,2,3,4分取血球悬液1ml ，加入0.5ml 50%的PEG 液，混匀，开始计时从计时开始，到盖上盖玻片在显微镜下观察为止。
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2、电融合：用电融合仪诱导融合，主要用于植物细 胞。
3、聚乙二醇（polythyleneglycol，PEG）诱导：分 子量200－6000都可用，以1000较好。用于诱 导植物原生质体融合和多种动物细胞融合。 优点：材料易得、操作方法简单、效果稳定。
病毒诱导细胞融合的原理及特点
• 原理：病毒导致两细 胞接触处胞膜破坏， 易于融合。
3、混合细胞并洗涤： 肿瘤细胞和鸡红细胞各1ml 混合，吸取0.2ml于EP 管中用作对照；另加6ml Hanks液，混匀后 1000rpm离心5min，弃上清； 再用8 ml Hanks液洗细胞一次，800 rpm离心 5min弃上清，约留0.1ml液体
【实验操作】
4、 PEG介导融合：用手指轻弹离心管底部，使沉 淀松散，然后将离心管放在37ºC水浴中； 吸取预 热至37℃的50％PEG 0.5ml ，逐滴加入到细胞沉 淀中，边加边振摇浑匀，使细胞在50％PEG 中总 时间控制在90秒之内；
融合细胞核数 ×100％ 融合细胞核数＋未融合的细胞核数
【注意事项】
• 保持PEG温度，否则易凝固 • PEG处理时间不宜过长，否则会造成细胞
破坏或有多个细胞彼此融合形成巨大的合 胞体。 • 经PEG处理后加液混匀时应轻轻吹打，以 免刚刚融合的细胞分开。
【参考书】
1、《体外培养的原理与技术》第一版，薛庆 善编，科学出版社。
• 了解聚乙二醇诱导细胞融合的原理与技术； • 学会鉴别融合细胞。
【实验材料及用品】
一、实验材料： 1、鸡红细胞 2、小鼠腹水瘤细胞 二、实验器材 普通离心机 水浴锅：50ºC，37ºC 计数板
三、实验试剂1、180来自U/ml肝素钠生理盐水溶液 2、Hanks溶液 3、50％PEG：将10gPEG加入带盖离心管中，
• 优点：融合率高 • 缺点：不稳定，在保
存过程中融合活性降 低；制备过程繁琐
电融合原理及特点
• 原理：高压电导致细 胞膜产生可恢复的穿 孔
【 PEG法原理】
• PEG可减少细胞间的游离水，使细胞相互 靠近并破坏细胞膜的磷脂双分子层，改变 膜的结构，使细胞相互接触处容易融合在 一起。
【实验目的】
沸水浴加热使PEG熔化；置50℃水浴使其 冷却至50ºC ，加入等体积预热至50 ℃ 的 HanKs液混匀，保存于37 ℃ 水浴中。
【实验操作】
1、调整肿瘤细胞浓度：处死小鼠，抽取腹水，计数 细胞浓度，用Hanks液稀释成个107个/ml
2、配2％鸡红细胞悬液：肝素抗凝鸡血1000rpm离 心5min，去血浆；按红细胞压积用Hanks液配成2 ％悬液（约108个/ml）。
PEG诱导的细胞融合实验
细胞融合（cell fusion）
• 又称细胞杂交（cell hybridization），是指 两个或两个以上的细胞合并成一个细胞的 现象。
用细胞融合方法培育的薯番茄
细胞融合抗盐碱耐干旱葡萄新品种
细胞融合生产 单克隆抗体
细胞融合的诱导
1、病毒诱导：如仙台病毒（Sendaivirus） ，主要用于动
2、《细胞生物学实验》第二版，杨汉民编， 高等教育出版社。
5、终止PEG作用并离心除去：向试管中缓慢滴加 9ml Hanks液轻轻吹打混匀，在37ºC水浴中静置 5min；1500rpm离心5min，弃上清；
【实验操作】
6、培养：向细胞沉淀中加入2ml 1640完全培养液 轻轻混匀，37℃水浴中培养30min。
7、染色、观察：在EP管中将0.2ml已进行融合处理 的细胞悬液及对照细胞悬液分别与等体积次甲基 蓝染液混合，染色5min；制片观察融合现象（有 无融合、多核融合、双核融合、同种融合、异种 融合）；计数200个细胞，计算异细胞融合率 （融合细胞核数占细胞核总数的百分率）