霍乱弧菌实验室检测
霍乱弧菌检测
用于霍乱弧菌的鉴定试验有：①霍乱红试验:霍乱弧菌的 两种生物型均呈阳性反应，但是，本反应并非霍乱弧菌 特有，许多能分解色氨酸和还原硝酸盐的细菌，均能产 生阳性反应；②糖发酵试验:霍乱弧菌分解葡萄糖、蔗糖、 甘露醇产酸不产气，不发酵阿拉伯糖；③粘丝试验:弧菌 属细菌除副溶血弧菌部分菌株外，均有此反应；④ O/129敏感试验：参照药敏试验方法进行。将O/129 10μg和150μg的纸片贴在接种有待测菌的琼脂平板上， 35℃孵育18～24h后，纸片周围出现任何大小的抑菌环 均为敏感；O1群和非O1群霍乱弧菌均敏感，但已有对 O/129耐药的菌株出现；O139群对O/129耐药，用此 试验作鉴定时需特别谨慎，需结合其他试验结果加以综 合考虑；⑤耐盐试验:霍乱弧菌可在不含氯化钠和含有6 ％氯化钠培养基中生长，氯化钠浓度高于6％则不生长。
样品分别接种一个9cm 直径的庆大霉素琼脂 或TCBS 琼脂平板和一个碱性琼脂平板进行划 线分离培养。
同时，以无菌吸管吸取0.2-0.5ml 增菌液接种 到新的碱性蛋白胨水中，进行二次增菌培养后， 再如上述步骤进行划线分离培养。
特别强调所有环境样品的增菌分离培养步骤必 须包括上述二次增菌和强、弱双平板分离。
霍乱弧菌（V.cholera）是人类霍乱的病原 体，霍乱是一种古老且流行广泛的烈性传 染病之一。曾在世界上引起多次（7次）大 流行。
主要表现为剧烈的呕吐、腹泻、失水，死 亡率甚高。属于国际检疫的烈性传染病。
霍乱弧菌实验室检测
水体分离流程及技术要点
▪ 水体的采集与保存运送
水体的采集一般用无菌的500ml水样瓶采集相对静止的表层水(深度为 30cm以内)500ml，密封加盖后于室温（20-25 ℃ ）3小时内送达实验室 检测。
▪ 分离培养要点（十倍浓缩碱胨水增菌培养法）：
标本（粪便等）
增菌培养（碱胨水） 6-8小时
分离培养 庆大霉素、4号、TCBS琼脂
第二次 增菌 （碱胨水）
10-20小时
玻片凝集阳性 （结合菌落、菌体形态）
凝集菌落或可疑菌落
纯培养 （营养琼脂或克氏双糖培养）
10-20小时
鉴定 分型
确诊报告
检测工作中应关注的事项
生物安全与个人防护（生物安全2级实验室操作，做好个人防护，整个培养流 程产生的实验培养废弃物和均应进行高压灭菌消毒）
注：快速检测并不能替代常规检测的进行， 只是作为辅助检测的一种手段
霍乱弧菌胶体金免疫层析检测
荧光PCR检测霍乱弧菌
病例标本检测 环境和食品调查的初筛方法
O1群、 O139群双色荧光检测试剂盒 深圳生科源生物技术有限公司
O1群和O139群霍乱弧菌的检验程序
直
胶体金、 荧光PCR 快速诊断 接
初步报告
O1群和O139群抗原构造与血清分型
霍乱弧菌诊断标准
霍乱弧菌是一种引起霍乱的细菌，其诊断标准包括以下几点:
流行病学史:患者是否有过与霍乱弧菌感染相关的接触史，如食用未经烹饪的水生动物或鱼类等。
临床表现:患者是否有腹泻、呕吐、腹痛等症状，且症状是否严重。
实验室检查:通过粪便培养和鉴定霍乱弧菌，以及血清学检测等方法进行诊断。
确诊依据:根据上述检查，如果患者被确诊为霍乱弧菌感染，则必须立即进行隔离治疗，以避免病毒传播。
霍乱弧菌的实验室
标本采集，送检和保存 霍乱的病原学检查 病原分离技术要点
标本采集，送检和保存
粪便：标本的采集以病人粪便为主，水样便采取1-3ml.成 形便采取指甲大小的粪便，亦可用直肠拭子（要求棉拭子 插入直肠3-5cm处采取）。接种于碱性胨水培养基，37增 菌6-8h后，划线接种于4号琼脂培养基。 如是高度怀疑的疑似病人或急诊病人可在接种碱性胨水培 养基的同时直接再接种于4号琼脂培养基一个。 不能立即检查的，要把采集标本放入碱性胨水培养基或文 腊二氏保存液或采集标本插入Cary-Blair半固体保存培养 基中。
霍乱菌株的管理，保存与上送
对首发病例分离的霍乱菌株需送上一级实验室作进一步鉴 定或复合。 送前应按要求完成相应霍乱弧菌的常规鉴定：o1/o139群 霍乱诊断血清玻片凝集试验，革兰氏染色与形态，氧化酶 试验，动力观察等。 按《感染人类高致病微生物菌毒种或标本运输管理规定》 要求，存放菌种，常温下运输。 送交上一级CDC复核鉴定前，应填写好菌种转送记录单。
病原分离技术要点
霍乱是烈性传染病，对首发病人的病原学诊断要做到快速， 准确并及时作出检测报告（阳性报告不超过24h) 因是用玻片凝聚试验作出鉴定，所以要求平板分离要有单 个菌落，要求用9cm的平板分离，不允许9cm的平板分离 二份以上样品。 因o139和o1群抗原性不一样，所以血清凝集必须要分别 用用o1群霍乱弧菌多价诊断血清和o139群诊断血清作玻 片凝集试验，不能只用一个，同时要作生理盐水对照。
霍乱医学观察病例诊断标准
霍乱医学观察病例诊断标准
霍乱（Cholera）是一种由霍乱弧菌（Vibrio cholerae）引起的严重肠道传染病。以下是根据世界卫生组织（WHO）的指南提供的霍乱病例的诊断标准：
1.临床表现：
●急性腹泻：持续阵发性或水样稀便，导致水和电解质丧失。
●脱水：主要表现为进行性的、迅速发展的脱水，可伴有血压
下降、皮肤弹性减弱、心跳加快等。
2.流行病学特征：
●病例接触史：患者是否有接触疫区、流行病区的水源或患者
的历史。
●流行病地区：病例是否来自或近期在霍乱流行病区。
3.实验室检测：
●从病例的粪便样本、血清或组织中分离出霍乱弧菌。
●通过PCR等分子生物学方法检测霍乱弧菌的DNA。
诊断霍乱的关键是临床表现和实验室确认。如果临床症状和流行病学特征符合，同时从患者的样本中分离出霍乱弧菌或通过分子生物学方法检测到霍乱弧菌的DNA，那么诊断可被确认。
传染病检测SOP工作手册-霍乱弧菌[2]
![传染病检测SOP工作手册-霍乱弧菌[2]](https://img.taocdn.com/s3/m/eecf24f0f90f76c661371a18.png)
霍乱弧菌实验室检测SOP手册
1.标本的采集和送检
1.1.标本的采集：采集标本的好坏，对检验工作的质量影响很大。为尽快获得细检查结果，应在发病早期、在服用抗菌药物之前尽快采集标本和及时送到检验室。
标本以病人大便为主。采便方法用灭菌的棉拭采集排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或用采便管由肛门插入
3㎝～5㎝采集。一般要求水样便采集1ml～3ml，固形便采取蚕豆大小粪量。有时病人的呕吐物、沾染大便的衣物和尸体的肠内容物亦可作为检材。带菌者的大便可用棉拭或直肠棉拭采取。
1.2.标本的送检：采取的标本应立即接种培养基，典型病人的水样便含有大量病菌（106/ml～109/ml），可直接做分离培养并同时增菌培养。不需做直接分离的均可接种碱性蛋白胨水增菌。并立即送检验室。
1.3.标本运送途中较远，也可将标本放入文腊氏保存液或卡里—布莱尔运送培养基。标本与保存液的比例为8ml～10ml保存液加1ml～3ml水样便或蚕豆大的固形便。也可用厚吸墨纸条吸饱水样便放入小塑料袋内封好送检。
送检标本时，必须认真填写送检单，标本必须妥善包装，专人送检，并防止污染，注意安全，送检箱用后要严密消毒。
2.检验方法
2.1.培养方法
2.1.1.增菌培养：所有标本都应经过增菌，尤其是恢复期病人、带菌者或用过抗生素的病人标本，需增菌后再分离。碱胨水接种后放37℃6～8小时，夏日可将运送时间计算在内。保存液内的标本取1ml种入碱胨水中。培养后慢慢地从碱胨水生长的菌膜下，取一接种环表层培养物接种于4号或庆大霉素琼脂平板。
标本含菌少时，可实行二次增菌。取第一次碱胨水增菌后的表层液0.1～0.2ml，接种于另一碱胨水中，37℃6～8小时再做分离。
霍乱弧菌国标标准方法
霍乱弧菌国标标准方法
霍乱弧菌是一种引起霍乱的弧菌属细菌。为了有效防控霍乱疫情，国家制定了
相关的标准方法来监测和检测霍乱弧菌的存在和潜在威胁。以下是关于霍乱弧菌国标标准方法的介绍。
霍乱弧菌国标标准方法主要包括样品采集、实验室分析和结果解读三个方面。
1. 样品采集：根据国家标准方法，样品的采集需要遵循严格的卫生规范。一般
来说，水样、食物样品和环境表面样品是常见的采集对象。采集时需要使用无菌容器，避免样品污染。同时，应根据实际情况选择合适的采集方法和采样点，确保能够准确反映被测对象的情况。
2. 实验室分析：实验室分析是判定霍乱弧菌是否存在的重要环节。通常采用培
养法进行分析，包括选择适当的培养基、温度和时间等。在培养过程中，需要注意避免其他细菌的污染，保证结果的准确性。此外，也可以使用分子生物学技术如PCR检测方法进行快速和准确的分析。
3. 结果解读：根据国家标准方法，对于从采集到的样品中检出霍乱弧菌的，应
根据相应的标准或参考值来进行解读。结果解读需要根据实验室分析的结果，结合相关的卫生标准来判断是否存在风险，以及是否需要采取相应的控制和预防措施。
综上所述，霍乱弧菌国标标准方法是一种用于监测和检测霍乱疫情的重要手段。准确采集样品、实验室分析和结果解读是该方法的关键步骤。通过执行国家标准方法，我们能够及时发现和控制霍乱弧菌的传播，从而保障公众的健康和安全。
传染病学指导：霍乱的实验室检查
霍乱常⽤的实验室检查有：
（1）直接镜检：
①直接涂⽚染⾊：将标本涂⽚，固定后⽤1∶10稀释⽯炭酸复红染⾊和⾰兰⽒染⾊，镜检有⽆典型弧菌。典型霍乱弧菌互相连接平⾏排列，有如“鱼群”。
②悬滴标本：将标本制成悬滴，镜检细菌动⼒，⽤暗视野显微镜。霍乱弧菌运动活泼，呈⼩鱼穿梭状。
（2）分离培养：将吐泻物直接或先经碱性胨⽔增菌后，接种于庆⼤霉素琼脂等培养基，容易检出霍乱弧菌。应⽤荧光抗体检测粪便中霍乱弧菌，可于1～2⼩时内获得结果。
（3）⾎清学检查：可作⾎清凝集试验。在发病第1～3⽇及第10～15⽇各取1份⾎清，若第2份⾎清的抗体效价⽐第1份增⾼4倍或4倍以上，有诊断参考价值。
（4）制动试验——快速诊断：在急性病⼈的⽔样便中含有⼤量弧菌，如悬滴检查阳性，再滴加不含防腐剂的霍乱多价⾎清（使⽤浓度为1∶64），⼏分钟内细菌运动停⽌，凝集成块即为阳性。
若具备下列条件之⼀者，可确诊为霍乱：
①凡有腹泻、呕吐等症状，⼤便培养霍乱弧菌阳性者；
②霍乱流⾏期间，在疫区有典型霍乱症状，⼤便培养阴性，⽽⽆其他原因可查者；
③有吐泻症状，霍乱弧菌培养阴性，作⾎清凝集试验第2份⾎清抗体效价呈4倍以上增⾼者。
在⾮疫区，凡有典型泻吐症状，在病原学检查未确定时，或在霍乱流⾏期间，曾接触过霍乱患者，有腹泻症状⽽⽆其他原因可查者，均应⾼度怀疑为霍乱，在给予积极处理的同时，应作⼤便培养，隔⽇1次，连续3次阴性者，才可以否定诊断，并作出疫情更正报告。
霍乱实验室检测
O1群和O139群抗原构造与血清分型
群特异性抗原 型 别 A 小川 + O139 B + C +少量 型特异性抗原
稻叶
彦岛 O139
+
+ — +
—
+ —
+
+ —
国内商品化的霍乱检测血清
国外血清：日本生研，泰国S&A血清等
进一步实验
氧化酶试验 1％盐酸对氨基二甲基苯胺或盐酸 二甲基对苯二胺水溶液
胶体金检测条 荧光PCR检测
检测工作中应关注的事项
样品的采集和运输
采集：
病例：粪便、肛拭子、呕吐物 未使用抗生素之前 “健康”人：粪便、肛拭子 其他传播环节的标本：食物、水、环境类样品…… 监测：水样，水产品等
运输：
一般要求在3小时内室温（20-25 ℃ ）条件下送达实验室检测 C-B运输培养基（pH8.4）; （或文腊二氏保存液） 碱性蛋白胨水（pH8.4-9.2） ：不是最佳的，尤其6小时内还不能进 行培养时，尽量采用 C-B运输培养基。
霍乱的实验室检测
霍乱概述
什么是霍乱?
霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae） 引起的急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波 及范围广、危害严重的甲类传染病。
古典生物型 O1群 埃尔托生物型 霍乱弧菌 O139群（Bengal） 非O1群 O2-O200群 腹泻病原菌 小川型 Ogawa (AB) 稻叶型 Inaba (AC) 彦岛型 Hikojim (ABC) 霍乱病原菌
霍乱弧菌实验室检测完整版
中、重型病例 。 临床诊断病例：符合下列任一类病例均为临床诊断病例。 临床表现为轻、中、重型或中毒型病例，并在腹泻病患者日常生活用品或家居环境中
检出O1群或/和O139群霍乱弧菌；
在一起确认的霍乱暴发疫情中，暴露人群中临床表现为轻、中、重型或中毒型病例。 实验室确诊病例： 临床病人并粪便、呕吐物或肛拭子细菌培养分离到O1群或/和O139群霍乱弧菌 ； 在疫源检索中，粪便培养检出O1群或O139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。
Variant B
Outbreak
C
关系? 关联? 溯源：
- 流行病学证据? - 实验室证据?
获得一个细菌染色体DNA的指纹图谱:
细菌染色体DNA 限制性内切酶 凝胶和专用电泳仪
电泳图谱
BioNumerics --- 数据管理和分析
实验室网络化监测的作用：暴发的发现和溯源
S
SS
流行特征：
➢ 发病急 ➢ 传播快 ➢ 波及范围广 ➢ 能引起大流行
霍乱诊断标准
带菌者：
无霍乱临床表现，但粪便或肛拭子细菌培养检出O1群或/和O139群霍乱弧菌者。
疑似病例：下列任一类病例均为疑似病例。 与霍乱病人或带菌者有密切接触史或共同暴露史，临床表现为轻型病例 ； 临床表现为轻型病例 或中毒型病例，并粪便、呕吐物或肛拭子标本霍乱毒素基因
霍乱的实验室检查
霍乱的实验室检查
(一)血液检查红细胞和血红蛋白增高，白细胞计数
（10~20）×109/L或更高，中性粒细胞及单核细胞增多。血清钾、钠、氯化物和碳酸盐降低，血pH下降，尿素氮增加。治疗前由于细胞内钾离子外移，血清钾可在正常范围内，当酸中毒纠正后，钾离子移入细胞内而出现低钾血症。
(二)尿检查少数病人尿中可有蛋白质、红白细胞及管型。
(三)病原菌检查
1.常规检查
(1)粪便镜检可见黏液和少许红、白细胞。取粪便或早
期培养物涂片作革兰染色镜检，可见革兰阴性稍弯曲的弧菌，无芽孢，无荚膜。O139群弧菌除了可产生荚膜外，其余与
O1群弧菌同。
(2)悬滴检查将新鲜粪便作悬滴或暗视野显微镜检，可
见运动活泼呈穿梭状的弧菌。 2.培养
(1)增菌培养所有疑为霍乱病人的粪便，除作显微镜检外，均应作增菌培养。粪便留取应在使用抗菌药物之前，且应尽快送到实验室作培养。增菌培养基一般用pH8.4的碱性蛋白胨水，36~37℃培养6～8小时后表面能形成菌膜。应进一步作分离培养、动力观察和制动试验。
(2)分离培养常用庆大霉素琼脂平皿或碱性琼脂平板。前者为强选择性培养基，36~37℃培养8~10小时霍乱弧菌即可长成小菌落。采用后者则需培养10~20小时。选择可疑或典型菌落，用霍乱弧菌“O”抗血清作玻片凝集试验，若阳性即可出报告。近年来国外亦有应用霍乱毒素基因的DNA探针作菌落杂交，可迅速鉴定出产毒素O1群霍乱弧菌。
3.免疫学试验
制动试验取急性期病人的水样粪便或碱性胨水增菌培养6小时左右的表层生长物，先作暗视野显微镜检，观察动力。如有穿梭样运动物时，则加入O1群多价血清一滴，若是O1群霍乱弧菌，由于抗原抗体作用，则凝集成块，弧菌运动停止。如加O1群血清后，不能制止运动，应再用O139血清重复试验。
霍乱弧菌检测
提高检测方法的特异性，降低假阳性率，避免误诊和过度治疗。
快速检测方法的研发
分子生物学方法
利用基因扩增技术（PCR）等分子生物学方法，实现快速、准确检测霍乱弧菌。
免疫学方法
开发特异性强、灵敏度高的免疫学检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）、 免疫荧光技术等。
检测技术的国际合作与交流
共享技术资源
新发霍乱弧菌检测案例
背景
新发霍乱弧菌出现，对人 类健康构成新的威胁，需 要进行检测和防控。
检测方法
针对新发霍乱弧菌的特点 ，采用特殊的细菌培养、 核酸检测和免疫学检测等 方法进行检测。
结果
及时发现新发霍乱弧菌， 采取有效防控措施，降低 疫情传播的风险。
霍乱弧菌检测
汇报人：可编辑 2024-01-11
目录 CONTENTS
• 霍乱弧菌简介 • 霍乱弧菌检测方法 • 霍乱弧菌检测的临床意义 • 霍乱弧菌检测的挑战与展望 • 案例分析
01
霍乱弧菌简介
霍乱的起源和传播
霍乱起源于印度，通过贸易路 线和Biblioteka Baidu争传播到世界各地。
霍乱弧菌通过污染的水或食物 经口摄入，在胃酸中存活并进 入小肠，进而引起腹泻和呕吐 等症状。
评估疫苗接种效果
监测抗体水平
通过检测接种者的抗体水平，了解疫苗的保护效果，为制定 免疫策略提供依据。
霍乱弧菌的检验程序
霍乱弧菌的检验程序
临床细菌实验室接到高度疑似患者标本，应尽快地进行检验。具体处理方法如下。
1.临床标本（患者排泄物、呕吐物、肛拭、肛管内容物及残留、
剩余食物等）直接涂片，观察动力，再做制动试验以及革兰染色，镜检发现革兰阴性、细小、直的、微弯、逗号状的杆菌。疑似者即予电话报告
2.标本直接接种：①血琼脂平板；②弧菌鉴别性平板（4号琼脂
平板、碱性琼脂平板）；③接种碱性胨水
3.保留原始标本（不可置于冰箱冷藏）
4.35℃孵育上述所有平板及胨水
5.6~8h后：①取碱性胨水培养物涂片（直接观察动力、做制动
试验）染色镜检；②移种鉴别性琼脂平板和血琼脂平板；③霍乱红试验；④观察血琼脂平板，见有微小菌落生长。立即涂片染色，霍乱多价血清凝集，氧化酶试验。如符合霍乱弧菌的推断性鉴定，可作出早期初步报告。
6.继续孵育过夜后，做玻片凝集试验。自分离平板上挑取可疑
菌落与霍乱多价诊断血清做玻片凝集试验，所用血清的效价应在1：80～1：160，如过浓，则稀释后再做凝集。将稀释血清滴加在洁净的载玻片上，挑取可疑菌落混悬于血清内，即刻（一般不超过10s）出现肉眼可见的明显凝集者为阳性。菌落应以生理盐水作对照，不发生凝集。为了提高阳性检出率，
应多挑可疑菌落进行玻片凝集。将O1群霍乱多价血清凝集阳性菌落再做氧化酶、涂片染色镜检，初步推断性鉴定，将此高度疑似菌株，报告当地疾病控制中心做最后鉴定。
霍乱弧菌的检测
1.涂片检查：取新鲜送检标本涂片2张，干燥后，用乙醇或甲醇固定，分别用革兰染色剂1：10稀释的石碳酸复红染色，用油镜检查，观察有无革兰阴性呈鱼群排列的弧菌。
霍乱弧菌的分离与鉴定
3 分离培养 3.1 增菌后分离培养：所有标本均应接种碱性蛋白胨水培养基置 37℃增菌 6h～ 8h 后，从菌膜下表层取一接种环培养物，划线接种于强、弱选择性培养基各一 个置 37℃培养 18h-24h。必要时进行二次增菌培养。 3.2 直接分离培养：对急性期病人水样便标本在进行增菌培养的同时可取一接种 环或用肛拭子直接接种在选择性培养基上置 37℃培养 18h-24h。 3.3 常用强选择性培养基包括庆大霉素琼脂、TCBS 琼脂和四号琼脂等。弱选择性 培养基一般使用碱性营养琼脂等。 3.4 不同分离培养基上生长的霍乱弧菌典型菌落特征不同，常见分离培养基的 37℃18h～24h 培养物的菌落特征如下： 3.4.1 碱性营养琼脂：霍乱弧菌在碱性营养琼脂上生长的菌落呈现为无色、圆形、
明胶素
+++++++- - - - -
在不同盐量胨水中生长试验
0% NaCl
++------ - - - -
3% NaCl
++++++++ + + + +
6% NaCl
+/- +/- + +/- + +/- + + +/- + + +
霍乱诊断的方法有哪些
霍乱诊断的方法有哪些
霍乱（cholera）是一种由霍乱弧菌（Vibrio cholerae）感染引起的急性消化道传染病。诊断霍乱的方法包括以下几种：
1. 症状分析：医生会询问患者的病史以及出现的症状，如急性腹泻、呕吐、腹痛等。
2. 实验室检查：通过采集患者的粪便样本，进行霍乱弧菌的培养和鉴定。同时，还可使用PCR（聚合酶链反应）检测霍乱弧菌的DNA。
3. 肠道涂片检查：通过显微镜观察患者的肠道涂片，寻找霍乱弧菌的存在。这是一种快速的诊断方法，但可靠性较低。
4. 血液检查：霍乱会导致脱水和电解质紊乱，医生可能会要求进行血液检查，检查患者的电解质水平和肾功能等指标。
5. 传染病监测：当有霍乱疫情时，可通过监测患者群体的发病情况和病原学特征，及时发现和诊断霍乱。
需要注意的是，虽然上述方法可用于诊断霍乱，但确诊霍乱的最可靠方法是将病原学检测与临床表现相结合。因此，若怀疑自己或他人患有霍乱，应及时就医寻
求专业的诊断和治疗。
霍乱的确诊标准
霍乱的确诊标准
1、流行病学资料：在发病前一周内，患者曾在疫情区域生活或与患有本病的人及其排泄物有过接触。
2、临床表现：如果患者出现剧烈的“米泔水”样腹泻、呕吐和严重脱水等症状，应考虑到本病的可能性。此外，在疫情期间，对于没有其他原因解释的腹泻和呕吐患者，应将其视为疑似病例进行处理。对于离开疫区不足5天即发生腹泻的患者，也应按照上述诊断标准进行考虑。
3、实验室检查：霍乱的确诊有赖于实验室的检查结果。通过实验室检查，可以检测到患者体内是否存在霍乱弧菌，以及其是否产生毒素等关键指标。这些指标可以帮助医生确诊患者是否患有霍乱。
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革兰染色
电镜负染色—鞭毛
2020/2/29
• 霍乱弧菌动力视频链接 http://v.youku.com/v_show/id_XNTg3MTczNTY4.html
2020/2/29
三、霍乱弧菌常规检验
样本采集、送检和保存 标本的检验流程
2020/2/29
样本采集、送检和保存
• 粪便：标本的采集以病人粪便为主，水样便采取1～
2020/2/29
• 血清制动试验包括4瓶血清。第1瓶为O1群多价，第2、3 瓶为小川、稻叶型单价。第4瓶为O139群抗血清。当观察 到动力阳性，首先进行O1群多价的制动试验。如为阴性， 接着做O139群的制动试验。两者均阴性，可初步排除霍 乱弧菌病感染。如O1多价制动试验阳性，则进一步进行 第2、3瓶的制动试验，即进行小川、稻叶型单价血清的制 动试验
弧培养。最后一步，点“建单”。
2020/2/29
建单完成后，如下图
2020/2/29
• 5.取粪便标本在高倍镜暗视野下看动力，看完动力后，在 “初步动力”栏录入结果（阴性或阳性），并审核打印报 告。同时粪便标本转种到碱性胨水中并放入35℃孵箱中培 养,在化验单上记录转种时间。
2020/2/29
2020/2/29
2020/2/29
注意：门诊在上午11：00之前收到的大便弧培标本，需要将 转种好的胨水和患者化验单一起转运至微生物室，后续步 骤由微生物室来完成：门诊在上午11：00以后收到的标本， 需将转种好的胨水和患者化验单一起放置门诊35°C的培 养箱中培养，门诊拖班人员需跟当晚住院部夜班人员交班， 夜班人员需在转种胨水6-8h后看动力和转种庆大平板，记 录并审核结果，第二天由师傅将平板和化验单转运至微生 物室，后续步骤由微生物室来完成。
1. 左键单击微生物检验，进入微生物检验窗口。
2020/2/29
2.单击标本号（左键、右键均可），会出现下拉框。单击“其它”
2020/2/29
3.该标本会由lis自动生成编号，如1505970005。
2020/2/29
4.编号由lis自动生成后，根据病人实际信息，先选择“患者类别”，然 后输入患者编号（门诊号或住院号），项目类别自动显示为大便力霍乱
2020/2/29
霍乱弧菌检验流程图
2020/2/29
2020/2/29
•谢谢！！
2020/2/29
霍乱实验室检测
2020/2/29
检验科
霍乱病原菌发现
• 1883年德国科学家Koch发现霍乱弧菌 • 1905年埃及埃儿托检疫站首次分离到ElTor弧菌，与霍乱
弧菌甚为相似，但经过多年的观察并不致病或仅引起轻度 腹泻，直到1937-1958年发生4次爆发后才逐渐认识到 ElTor弧菌致病性 • 1992年10月印度马德拉斯发现了新菌型O139霍乱弧菌
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一、霍乱概述
• 霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌（V．cholerae百度文库引起的
急性肠道传染病，发病急、传播速度快、波及范围广、危 害严重的甲类传染病。 • 是国内交通检疫传染病之一。
• 也是当今三种国际检疫传染病中最严重的一种。
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二、霍乱病原学
• 霍乱的病原学分类 • 霍乱的病原学特征
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二、非01群霍乱弧菌：本群弧菌鞭毛抗原与01群相同，而菌体 （0）抗原则不同，不被01群霍乱弧菌多价血清所凝集，依O 抗原之异，本群可分为137个血清型。以往认为本群仅引起散 发的胃肠炎性腹泻，一般此类弧菌感染不作霍乱处理，但 1992年在印度及孟加拉等地发生霍乱暴发流行，后证实流行 菌不被01群和137个非01群霍乱弧菌诊断血清所凝集。乃定为
0139霍乱弧菌，并认定为真正的霍乱弧菌。
三、不典型01群霍乱弧菌：可被多价01群血清所凝集，但该群 菌不产生肠毒素，因此无致病性
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霍乱病原学特点
• 形态与染色
– 弧状或逗点状 – 革兰染色阴性 – 有一根单鞭毛，细菌运动非常活泼，呈鱼群穿梭样或流星状
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• 6.增菌培养6-8小时后，需要取胨水生长物再次观察动力， 进行6-8小时动力报告。并转种到庆大霉素平板并放入 35℃孵箱中培养。在进行6-8小时动力报告时，需要先取 消之前的审核，在原报告单上进行审核（1505970005）。
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疑似菌落初步鉴定：
7.庆大平板培养18-24h后挑取可疑菌落进行动力观察， 如动力阴性，可进行最终阴性报告，如下图。
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• 注意：
• 1.动力试验阴性，无需进行血清制动试验。 • 2.任何一次动力阳性，都需进行血清制动试验并
在LIS上记录和审核试验结果。 • 3.当动力和血清制动试验同为阳性时，为疑似霍
乱弧菌感染，要立即通知开单科室和医务处，对 病人采取相应的隔离治疗等必要措施。
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霍乱弧菌抗原结构及分类
• 抗原结构 霍乱弧菌有耐热的菌体（O）抗原和不耐热 的鞭毛（H）抗原。H抗原为霍乱弧菌属所共有；O抗 原有群特异性和型特异性两种抗原，是霍乱弧菌分群 和分型的基础。
• WHO腹泻控制中心将霍乱弧菌分为三群。
一、01群霍乱弧菌：包括古典生物型霍乱弧菌（vibrio cholerde） 和埃尔托生物型（vibrio cholerde EL-Tor biotype）。01群的 特异抗原有A、B、C三种，其中A抗原为01群所共有， A 抗原与其他B与C抗原结合则可分为三型，即：原型——AC （稻叶，Inaba）、异型——AB（小川，Ogawa）和中间 型——ABC（彦岛，Hikojima）。
3mL，亦可用棉拭或采便管由肛门插入直肠内3～5cm 处采取。急性期病人取水样便标本在增菌培养的同时 可取其粘液絮片或用棉拭子直接接种于碱性琼脂、 TCBS琼脂培养基。不能立即检查的粪便标本，要放入 碱性蛋白胨水中。
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检验流程
• 接收到大便动力弧菌培养标本，请先建单。方法如下
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