第二章鉴别薄层色谱法 ppt课件
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薄层色谱讲义ppt课件
2.经常会出现拖尾景象，它会 使斑点间界限模糊，分别不好。产 生这种景象常与点样量、展开剂的 pH值等要素有关。
ⅰ点样过量，会导致超载拖尾， 处理的方法是选择适宜的点样量。ⅱ 展开剂的pH值，会影响中药材点样液 中酸、碱性成分在其中的解离方式， 不同方式的物质极性不同，在薄层板 上挪动的速度就不同，即会产生拖尾， 抑制方法是根据化合物的性质，选择 不同的pH值的展开剂；
例如：参苓白术散中的人参和甘
草的薄层鉴别，用甲醇直接提取有两 个扩斑点〔黑红色〕掩盖了人参很多 斑点。甲醇提取液用正丁醇处置后， 糖点去除后，图谱好多了。再经上注 后，那么斑点分别更明晰了，可得到 质量高的薄层色谱。
样品供试液净化的方法通常有：
1)单一溶剂萃取法：如浙贝母、平 贝母、洋金花等均利用在碱性介质下用 氯仿或苯将其所含的生物碱有选择地萃 取出来，而舍弃其他成分，使供试液得 以净化.
50 16
17
7
1 56
9
115
14 31
412 3 17 9 34
17 71
175 13 20 7 30
40 243 22 1138 15 25 16 32
28 217 1
505 47 37 31 34
操作方法
• 薄层色谱就是将吸附剂均匀地铺 在玻璃板上，把欲分析的样品加到薄 层上，然后用适宜的溶剂展开而到达 分别、鉴别和定量的目的，由于层析 是在薄层上进展，所以称它为薄层色 谱法
薄层色谱鉴别介绍 ppt课件
剂按一定比例混合后，以丙酮、乙醇或水等溶剂 调成匀浆，涂成薄层，经高温烧结而成。
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38
吸附剂及预制板包装上的符号及含义
G——加入一定的煅石膏作粘合剂 H——不加粘合剂，供制各种软板用 F254——加入对254nm波长能发荧光的物质 F254s——加入抗酸性荧光指示剂
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凝胶。 在葡聚糖凝胶上引入羧甲基、磺乙基等，则制成
具有离子交换性质的葡聚糖凝胶离子交换剂。 应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离
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37
薄层板的种类
载板材料：玻璃片、铝箔、塑料片等 薄层板类型：
1. 硬板：在固定相中加入粘合剂（煅石膏、淀粉）; 2. 软板：不加粘合剂; 3. 烧结玻璃板：将玻璃粉与硅胶、氧化铝等吸附
却后使用。
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8
固定相（吸附剂）的选择
纤维素、淀粉
硅酸镁
硫酸钙
硅胶 佛罗里硅土 氧化镁 氧化铝
对极性有机物的吸附作用增强
活性PP炭T课件
9
2 供试品的制备：按照各药品质量标准规
定的方法进行提取分离。制得的供试品应放 置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样 量。
3 对照品溶液的制备：可按质量标准规定
薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能
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吸附剂及预制板包装上的符号及含义
G——加入一定的煅石膏作粘合剂 H——不加粘合剂，供制各种软板用 F254——加入对254nm波长能发荧光的物质 F254s——加入抗酸性荧光指示剂
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凝胶。 在葡聚糖凝胶上引入羧甲基、磺乙基等，则制成
具有离子交换性质的葡聚糖凝胶离子交换剂。 应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离
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薄层板的种类
载板材料：玻璃片、铝箔、塑料片等 薄层板类型：
1. 硬板：在固定相中加入粘合剂（煅石膏、淀粉）; 2. 软板：不加粘合剂; 3. 烧结玻璃板：将玻璃粉与硅胶、氧化铝等吸附
却后使用。
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固定相（吸附剂）的选择
纤维素、淀粉
硅酸镁
硫酸钙
硅胶 佛罗里硅土 氧化镁 氧化铝
对极性有机物的吸附作用增强
活性PP炭T课件
9
2 供试品的制备：按照各药品质量标准规
定的方法进行提取分离。制得的供试品应放 置于密塞的小瓶中，防止溶剂挥发影响点样 量。
3 对照品溶液的制备：可按质量标准规定
薄层板点样后，应待溶剂挥发完，再放人展开室中展开。 展开应密闭，展距一般为8～15cm。薄层板放入展开室时，展开剂不能
薄层色谱法TLC—最为常用的鉴别方法
第二章 中药制剂的鉴别
【目的要求】
❖掌握如何建立中药制剂的薄层色谱定性鉴别方法 ❖熟悉中药制剂的显微鉴别、荧光鉴别、可见紫外 光谱鉴别方法 ❖了解中药制剂的GC、HPLC定性鉴别方法
§1 性状鉴别
一、性状鉴别的内容 颜色、形态、形状、气、味、其他(水试，火试) 二、各种剂型的性状描述
左金丸： 本品为黄褐色的水丸；气特异，味苦、辛。 伤湿止痛膏：本品为淡黄绿色至淡黄色的片状橡胶膏；气芳香。 甘草浸膏： 本品为棕褐色的固体，有微弱的特殊臭气和持久
1、供试品溶液的制备及净化 2、薄层色谱法使用的材料 薄层板 、涂铺器、点样器材、展开槽、显色装置 3、操作方法 薄层板的制备→点样→展开→检测→薄层板的记录和保存
§3 理化鉴别
四、色谱法（专属性强） （二）薄层色谱法TLC—最为常用的鉴别方法 4、影响薄层色谱分析的主要因素
（1）样品的预处理和供试品溶液的制备 （2）薄层色谱的点样技术 （3）吸附剂的活性和相对湿度的影响 （4）温度的影响
5、对照物的选择
（1）对照品对照 （2）阴阳对照 （3）采用对照品和对照药材同时对照
§3 理化鉴别
四、色谱法（专属性强） （二）薄层色谱法TLC—最为常用的鉴别方法
12 3456
首乌丸薄层色谱鉴别 提取方法：甲醇提取 薄层板：硅胶
G+0.5%NaOH 展开剂：甲苯-乙酸乙酯甲酸（15:2:1） 检测波长：365nm 1、大黄素 2大黄素甲醚 3、4对照药材 5、6样品
【目的要求】
❖掌握如何建立中药制剂的薄层色谱定性鉴别方法 ❖熟悉中药制剂的显微鉴别、荧光鉴别、可见紫外 光谱鉴别方法 ❖了解中药制剂的GC、HPLC定性鉴别方法
§1 性状鉴别
一、性状鉴别的内容 颜色、形态、形状、气、味、其他(水试，火试) 二、各种剂型的性状描述
左金丸： 本品为黄褐色的水丸；气特异，味苦、辛。 伤湿止痛膏：本品为淡黄绿色至淡黄色的片状橡胶膏；气芳香。 甘草浸膏： 本品为棕褐色的固体，有微弱的特殊臭气和持久
1、供试品溶液的制备及净化 2、薄层色谱法使用的材料 薄层板 、涂铺器、点样器材、展开槽、显色装置 3、操作方法 薄层板的制备→点样→展开→检测→薄层板的记录和保存
§3 理化鉴别
四、色谱法（专属性强） （二）薄层色谱法TLC—最为常用的鉴别方法 4、影响薄层色谱分析的主要因素
（1）样品的预处理和供试品溶液的制备 （2）薄层色谱的点样技术 （3）吸附剂的活性和相对湿度的影响 （4）温度的影响
5、对照物的选择
（1）对照品对照 （2）阴阳对照 （3）采用对照品和对照药材同时对照
§3 理化鉴别
四、色谱法（专属性强） （二）薄层色谱法TLC—最为常用的鉴别方法
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首乌丸薄层色谱鉴别 提取方法：甲醇提取 薄层板：硅胶
G+0.5%NaOH 展开剂：甲苯-乙酸乙酯甲酸（15:2:1） 检测波长：365nm 1、大黄素 2大黄素甲醚 3、4对照药材 5、6样品
薄层色谱方法课件
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(四) 定位 采用适当的方法对被分离物质进行定位。定位方法1、 光学检出法 化合物对可见光和紫外光有吸收， 在色谱上可观察到不同颜色的斑点；对可见光和紫外光都不吸收， 也没有合适的显色方法的化合物可以用荧光猝灭技术
展开后的薄层板需挥干表面多余的展开剂，然后
进行检测。
36
光学检出法的使用范围：光学检出法使用方便，被检出物质不被破坏， 适用于双向展开，多次展开等的定位，也宜应用于
①纤维素按其用途不同分为普通纤维素 (天然纤维素、高纯度纤维素、微晶纤维素) 、乙酰化纤 维素和离子交换纤维素。②另外还包括聚酰胺，葡聚糖凝胶 (亲水性葡聚 糖凝胶、亲脂性葡聚糖凝胶和葡聚糖凝胶离子 交换剂) 和硅藻土等固定相。11
(3) 其他固定相
2、粘合剂及添加剂 (1) 粘合剂理想的粘合剂要求亲水性好、粘结力强 且具有化学惰性。 常用粘合剂有：煅石膏(CaSO4) 、羧甲基高聚物。
5
三、薄层色谱法的基本操作
薄层板的准备
定性与定量
样品处理
定位
展开
6
( 一) 薄层板 制备薄层板的载板包括有：玻璃板、塑 为制了薄使层薄板 定附相着有在在：： 上化便铝 素素，，、需聚要酰时胺 凝定胶相等中中，， 色的谱粘法 需在固定相中加入某些添加剂。
薄层板活化的原因
20
在点样前，应将薄层板在日光或紫外光下检查板面有无损坏或污染。
薄层色谱鉴别介绍课件
薄层色谱鉴别介绍课件
目录 CONTENT
• 薄层色谱法简介 • 薄层色谱法的实验操作 • 薄层色谱法的优缺点 • 薄层色谱法的实际应用案例 • 薄层色谱法的未来发展与展望
01
薄层色谱法简介
定义与原理
定义
薄层色谱法是一种常用的分离和 分析技术，用于分离和鉴定混合 物中的化合物。
原理
薄层色谱法的原理基于不同化合 物在固定相和流动相之间的分配 平衡，从而实现化合物的分离。
发展历程与重要性
发展历程
薄层色谱法自20世纪50年代发展至 今，经历了多个阶段，不断改进和完 善。
重要性
薄层色谱法在化学、生物、医学等领 域具有广泛的应用，是分离和鉴定化 合物的重要手段之一。
薄层色谱法的应用领域
化学分析
药物分析
薄层色谱法用于分离和鉴定有机化合物、 无机离子等，可用于化学反应的产物分析 、混合物的分离纯化等。
利用薄层色谱法检测水、 土壤等环境样品中的污染 物。
生物医药
用于药物成分分析、蛋白 质和生物大分子的分离与 检测。
食品安全
用于食品中农药残留、添 加剂等物质的检测。
未来发展方向与趋势
智能化与自动化
提高薄层色谱法的自动化程度， 减少人为误差，提高分析效率。
多组分分析
发展多组分同时分离分析的方法 ，满足复杂样品分析的需求。
05
目录 CONTENT
• 薄层色谱法简介 • 薄层色谱法的实验操作 • 薄层色谱法的优缺点 • 薄层色谱法的实际应用案例 • 薄层色谱法的未来发展与展望
01
薄层色谱法简介
定义与原理
定义
薄层色谱法是一种常用的分离和 分析技术，用于分离和鉴定混合 物中的化合物。
原理
薄层色谱法的原理基于不同化合 物在固定相和流动相之间的分配 平衡，从而实现化合物的分离。
发展历程与重要性
发展历程
薄层色谱法自20世纪50年代发展至 今，经历了多个阶段，不断改进和完 善。
重要性
薄层色谱法在化学、生物、医学等领 域具有广泛的应用，是分离和鉴定化 合物的重要手段之一。
薄层色谱法的应用领域
化学分析
药物分析
薄层色谱法用于分离和鉴定有机化合物、 无机离子等，可用于化学反应的产物分析 、混合物的分离纯化等。
利用薄层色谱法检测水、 土壤等环境样品中的污染 物。
生物医药
用于药物成分分析、蛋白 质和生物大分子的分离与 检测。
食品安全
用于食品中农药残留、添 加剂等物质的检测。
未来发展方向与趋势
智能化与自动化
提高薄层色谱法的自动化程度， 减少人为误差，提高分析效率。
多组分分析
发展多组分同时分离分析的方法 ，满足复杂样品分析的需求。
05
薄层色谱鉴别
薄层色谱鉴别法：
1.制备薄层板：将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基
片上，形成一层均匀的薄层。
2.点样：待点样、展开后，根据比移值（Rf）与适宜的对照
物按同法所得的色谱图的比移值（Rf）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。
薄层色谱法PPT参考课件
18
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
16
四、操作方法
①薄层板的制备
市售薄层板（预制板） 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不 许活化。预制薄层板分常规薄层板及高效板两种，由于商品供应来源不一， 需注意并记录生产厂家及生产批号，必要时需测定板效，以保证较好的重 现性。在质量保证的前提下，应尽量选用预制薄层极，以提高时效和色谱 的重现性。 自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相（如硅胶G）和3份左右的水（或 加有粘合剂的水溶液，如0.2%-0.5%的CMC-Na水溶液，或规定浓度的改 性剂溶液）在研钵中沿同一个方向充分研磨混合，去除表面的气泡后，倒 入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器，使硅胶浆均匀地涂布，薄层厚 度一般为0.2～0.3mm，涂布好的薄层板于室温下水平台上晾干，再于 110℃加热活化约30分钟，置干燥器中备用。使用前应在反射光和透射光下 检查板面及纹理是否均匀，如不均匀，有气泡或有麻点、有破损或已污染 （如灰尘、纤维）者应弃去不用。
③展开 点样后的薄层板置入加有展开剂的薄层展开箱中，密闭，一般采用上行展
开，薄层板浸入展开剂深度一般要求溶剂最初的前沿距原点约5mm，展开至规 定展开距后立即将薄层权取出，晾干，以备检测。展开距离为8-15cm为宜，高 效板5-8cm为宜。
如规定需用展开剂或其他溶剂的蒸气预平衡者可在双槽展开箱的一侧加入 适量的溶剂，密闭，一般保持15-30分钟。溶剂蒸汽预平衡后，应迅速放入载有 供品的薄层板，立即密闭。如需达到饱和状态，可在展开箱内壁贴一被溶剂湿 润的滤纸使展开箱易于被蒸气平衡。如规定薄层板需要同时预平衡者，应将薄 层板放入箱内没有溶剂的一侧槽中，平衡后再将溶剂倾入此糟中展开（如图）。
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四、操作方法
①薄层板的制备
市售薄层板（预制板） 临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不 许活化。预制薄层板分常规薄层板及高效板两种，由于商品供应来源不一， 需注意并记录生产厂家及生产批号，必要时需测定板效，以保证较好的重 现性。在质量保证的前提下，应尽量选用预制薄层极，以提高时效和色谱 的重现性。 自制薄层板 除另有规定外，将1份固定相（如硅胶G）和3份左右的水（或 加有粘合剂的水溶液，如0.2%-0.5%的CMC-Na水溶液，或规定浓度的改 性剂溶液）在研钵中沿同一个方向充分研磨混合，去除表面的气泡后，倒 入涂布器中，在玻板上平稳地移动涂布器，使硅胶浆均匀地涂布，薄层厚 度一般为0.2～0.3mm，涂布好的薄层板于室温下水平台上晾干，再于 110℃加热活化约30分钟，置干燥器中备用。使用前应在反射光和透射光下 检查板面及纹理是否均匀，如不均匀，有气泡或有麻点、有破损或已污染 （如灰尘、纤维）者应弃去不用。
薄层色谱法概述PPT课件【共52张PPT】
*
薄层色谱参数
保留参数（Rf值） 用来表征斑点位置的基本参数是保留因子，通常称作比移值，用Rf表示。 Rf=Ls/L。，
原点
S
R
W
Ls
L。
Lr
原点
参比
样品
前沿
*
*
注意： 同一物质在不同展开方式中得到的比移值是不相同的。 在同样溶剂的重复n次的多次展开后的比移值(Rf)n=1-(1-Rf)n 。 相对比移值（Rx） Rf测量中一个重要的误差来源是难以确定溶剂前沿的位置，因此，引入相对比移值（Rx）。 Rx=Ls/Lr
*
*
点样 要求配制样品的溶剂高度挥发性和尽可能非极性，否则易使斑点扩展。 采用多次点加法，第二次点加时应待前一次点加的溶剂挥发后再进行。 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul），微量注射器。
*
*
自动点样 Limomat IV 喷样仪——样品溶液通过气流成雾状喷向薄层，移动板台，使在薄层上流下样品条带。 特点：适合于大量稀样品溶液的喷加；条带宽度不超过2mm，有利于改善分辨率；便于狭缝式光密度计扫描；要求薄层板强度高。 自动薄层色谱点样仪——由计算机控制。 药典规定：点样基线距底边2.0cm, 样点直径2-4mm, 点间距离约为cm。
检测 物理方法——紫外光下显示荧光或荧光淬灭 化学方法——加化学试剂显色，要求显色稳定、持久、专属、灵敏、线性良好。 斑点定位方法 碘蒸气法——灵敏、简便，为通用显色法。将碘结晶放在密封的展开缸中，碘的升华，使缸内充满紫色的碘蒸气。将展开后的板挥干溶剂置碘缸中至薄层色谱上出现棕色斑点。放置时间不宜太长，否则背景吸附剂也吸附碘，使信噪比降低。用针头将斑点标记下来，放在通风处使碘挥发。
薄层色谱法 ppt课件
ppt课件
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2.7其他因素影响
• 如果喷显色剂后,整板均不显 色,那么要考虑显色剂有问题.
• 如果显色后斑点在原点未动, 那么要考虑溶剂有问题.
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2.8分离较好的色谱图
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• 总之：薄层色谱是一个分离机制 复杂，而影响因素较多的过程。 因此，我们在操作过程中要注意 影响质量的因素，出现问题查找 原因，做好系统实用性试验，以 得到满意的分离效果。
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2.4吸附剂的活性与相对湿度的影响
• 吸附剂的活性是由表面能与表面积决定的。表 面积越大，吸附力越大，活性越高。硅胶之所 以有吸附力，是由于表面有众多硅醇基，硅醇 基的活泼羟基及游离羟基与极性化合物或不饱 和化合物形成氢键所致。但硅醇基是亲水性基 团，很容易吸水形成水合硅醇基而失去活性。 因此相对湿度对其影响很大（如图）
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氨蒸气饱和的影响
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展开剂相差极性大出现解混现象(或分层)
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展开剂予平衡的影响
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2.6温度的影响
• 在相对湿度恒定的条件下，一般在较高 温度时，Rf值高；反之，Rf值低（如图 ）。如:人参在低温时（10℃以下）分离 效果好，甘草在高温时（28℃以上）分 离效果好。
第二章薄层色谱分离技术详解演示文稿
硅胶
硅胶H：不含黏合剂的硅胶 硅胶HF254：不含黏合剂，含有一种无机荧光剂
（如锰激活的硅酸锌），在254nm波长紫外光下呈
强烈黄绿色荧光
硅胶GF254：含有煅石膏黏合剂，含荧光剂， 在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光
硅胶HF254+366：不含粘合剂，在254与366nm波长 有荧光
硅胶PF254：制备型的，在254nm有荧光（有荧光剂，
适用于不发光不易显色物质的制备与分离）
第16页，共99页。
2．氧化铝：在薄层中其应用仅次于硅胶。由氢 氧化铝400－500℃煅烧而成。广泛的用于萜类， 生物碱，脂肪类，芳香类化合物的分离。因制法 和处理方法不同可分为碱性，酸性，中性三类
⑴ 碱性氧化铝：PH 9－10适于中性、碱性化合 物的分离
第26页，共99页。
1，煅石膏 将石膏（CaSO4.2H2O） 在120－140℃
烤2－4小时，过200目筛，备用。用煅石 膏作粘合剂的优点是能使用腐蚀性的显 色剂；但其缺点为薄层的硬度不够，且 不利于无机物的分离。
第27页，共99页。
2，羧甲基纤维素钠 CMC-Na 先将羧甲基纤维素钠调成糊状，再加
所以表现为吸附性能。硅胶吸附水分形成水合硅醇基，降低吸附能 力。通常在150℃活化后失水提高活度，此时约有4－6个硅醇基/nm2,。
（温度大于500℃，硅胶脱水形成硅醚（Si－O-Si）,而失去吸附能 力）。
硅胶H：不含黏合剂的硅胶 硅胶HF254：不含黏合剂，含有一种无机荧光剂
（如锰激活的硅酸锌），在254nm波长紫外光下呈
强烈黄绿色荧光
硅胶GF254：含有煅石膏黏合剂，含荧光剂， 在254nm波长紫外光下呈强烈黄绿色荧光
硅胶HF254+366：不含粘合剂，在254与366nm波长 有荧光
硅胶PF254：制备型的，在254nm有荧光（有荧光剂，
适用于不发光不易显色物质的制备与分离）
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2．氧化铝：在薄层中其应用仅次于硅胶。由氢 氧化铝400－500℃煅烧而成。广泛的用于萜类， 生物碱，脂肪类，芳香类化合物的分离。因制法 和处理方法不同可分为碱性，酸性，中性三类
⑴ 碱性氧化铝：PH 9－10适于中性、碱性化合 物的分离
第26页，共99页。
1，煅石膏 将石膏（CaSO4.2H2O） 在120－140℃
烤2－4小时，过200目筛，备用。用煅石 膏作粘合剂的优点是能使用腐蚀性的显 色剂；但其缺点为薄层的硬度不够，且 不利于无机物的分离。
第27页，共99页。
2，羧甲基纤维素钠 CMC-Na 先将羧甲基纤维素钠调成糊状，再加
所以表现为吸附性能。硅胶吸附水分形成水合硅醇基，降低吸附能 力。通常在150℃活化后失水提高活度，此时约有4－6个硅醇基/nm2,。
（温度大于500℃，硅胶脱水形成硅醚（Si－O-Si）,而失去吸附能 力）。
《薄层色谱法》PPT课件
薄层色谱法
2019/6/21
1
2019/6/21
2
1概述
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。
相对比移值（Rx） Rf测量中一个重要的误差来源是难以确 定溶剂前沿的位置，因此，引入相对比 移值（Rx）。
Rx=Ls/Lr
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分离效能参数
理论塔片数 n=16[Ls/W] 2 ，考虑静 态扩散引起的起始斑点半峰宽的影 响引入真实塔片数（n真实 ）
n真实 =5.பைடு நூலகம்4[Ls/（b0.5 - b0 ）] 2
此外还有：化学键合相反相展开、化学 键合相正相展开、离子交换、离子对色 谱、凝胶、胶束、手性展开。
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溶剂强度参数和选择性
溶剂的强度参数
定义：溶剂强度参数用表示。流动相 强度越高，表示它与吸附剂相互作用 力强。溶质的Rf值就越大。为得到满意 的分离，选用的流动相使溶质的Rf值在 0.3 – 0.7之间为宜。
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1概述
1938年俄国人首先实现了在氧化铝薄层上分离一 种天然药物。1965年德国化学家出版了“薄层色 谱法”一书，推动了这一技术的发展。
因TLC法设备简单，分析速度快，分离效率 高，结果直观，很快被用作定性和半定量的 方法。
70年代中后期发展了高效薄层色谱。80年代 以后发展了薄层色谱光密度扫描仪，和各步 操作的仪器化，并实现了计算机化。
相对比移值（Rx） Rf测量中一个重要的误差来源是难以确 定溶剂前沿的位置，因此，引入相对比 移值（Rx）。
Rx=Ls/Lr
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分离效能参数
理论塔片数 n=16[Ls/W] 2 ，考虑静 态扩散引起的起始斑点半峰宽的影 响引入真实塔片数（n真实 ）
n真实 =5.பைடு நூலகம்4[Ls/（b0.5 - b0 ）] 2
此外还有：化学键合相反相展开、化学 键合相正相展开、离子交换、离子对色 谱、凝胶、胶束、手性展开。
2019/6/21
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溶剂强度参数和选择性
溶剂的强度参数
定义：溶剂强度参数用表示。流动相 强度越高，表示它与吸附剂相互作用 力强。溶质的Rf值就越大。为得到满意 的分离，选用的流动相使溶质的Rf值在 0.3 – 0.7之间为宜。
色谱概论及薄层色谱法PPT课件
显色与定波长扫描
显色剂
根据待分离组分的性质选择合适的显色剂，以便观察和记录色谱斑点。
定波长扫描
使用紫外可见分光光度计在特定波长下扫描薄层板，记录各组分的吸收光谱，以 便进行定量分析。
04
薄层色谱法的实验结果 分析
定性分析
斑点位置
斑点形状
通过观察斑点的位置，判断被分离物 质是否在薄层板上出现。
观察斑点的形状是否规则，判断被分 离物质在薄层板上的纯度。
质量控制
薄层色谱法可用于质量控 制，如药品生产过程中的 质量控制、化妆品质量控 制等。
03
薄层色谱法的实验技术
薄层板的制备
玻璃板
选择清洁、干燥、无划痕 的玻璃板，切割成适当的 大小，并使用磨砂纸将其 磨平。
涂布器
使用涂布器将固定相均匀 涂布在玻璃板上，确保薄 层厚度一致。
活化
将涂布好的薄层板在适宜 的温度下活化，以除去残 余溶剂和水分。
分配平衡
组分在固定相和流动相之间的分 配平衡是色谱分离的依据，组分 在两相之间的分配系数不同，导 致它们在色谱柱上的滞留时间不
同，从而实现分离。
色谱法的应用
混合物分离
色谱法广泛应用于混合物的分 离，如天然产物、药物、石油
、环境样品等。
化合物纯化
在化学合成、药物制备等领域 ，色谱法用于纯化化合物，提 高产品的纯度和结晶度。
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一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
1.薄层色谱法定性的基础 基于相同物质在同一色谱条件下，表现出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。
2.特点 简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下四种方式： 1.对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制 成对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一 颜色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置 一种或数种对照品。 2.对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
第二章 中药制剂的鉴别 第二节 理化鉴别
三、色谱法 --------------薄层色谱法
薄层色谱法在中药制剂的定性鉴别中得到 广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双 重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属 性，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。薄 层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
被分离物质的Rf值和物质的相互分离度不一致，影响薄层色谱 的重现性。
六、仪器与材料（略） 七、操作步骤
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱Байду номын сангаас象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
原点起 始线
≥5mm
展开剂 液面
≥8mm
（展开距离）
8~15cm
1~1.5cm (点样位置)
4.展开（略） 5.显色与检视
颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。 无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色， 或再加热使之显色。 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在紫外灯 （365nm）下观察荧光色谱。 有的成分可用试剂的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）熏蒸显色。 无色有紫外吸收且不产生荧光的成分可用荧光淬灭法显色。 即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯
用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 三、系统适用性试验(05版药典新增) 1.检测灵敏度
主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释 若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一 块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。 2.分离度
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点， 应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时， 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外， 分离度应大于1.0。
2.薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
点样开始直展开前，薄层板都是暴露在空气中，其活性取决于 空气的相对湿度，薄层板在不同的相对湿度条件下，其吸附活 性亦不同，致使薄层色谱重现性较差。
分离度（R）的计算公式为：
R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；
d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。
A
B
W1
W2
d1
d2
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
四、对照物的选择 3.对照品和对照药材同时对照(“双对照”)
为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照 品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。
例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品 来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
1.薄层色谱法定性的基础 基于相同物质在同一色谱条件下，表现出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对药品进行定性鉴别。
2.特点 简便、快速、易普及、具有分离和分析双重功能，且采
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下四种方式： 1.对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制 成对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一 颜色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置 一种或数种对照品。 2.对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
第二章 中药制剂的鉴别 第二节 理化鉴别
三、色谱法 --------------薄层色谱法
薄层色谱法在中药制剂的定性鉴别中得到 广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双 重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属 性，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。薄 层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
被分离物质的Rf值和物质的相互分离度不一致，影响薄层色谱 的重现性。
六、仪器与材料（略） 七、操作步骤
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱Байду номын сангаас象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
原点起 始线
≥5mm
展开剂 液面
≥8mm
（展开距离）
8~15cm
1~1.5cm (点样位置)
4.展开（略） 5.显色与检视
颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。 无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色， 或再加热使之显色。 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在紫外灯 （365nm）下观察荧光色谱。 有的成分可用试剂的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）熏蒸显色。 无色有紫外吸收且不产生荧光的成分可用荧光淬灭法显色。 即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯
用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 三、系统适用性试验(05版药典新增) 1.检测灵敏度
主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释 若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一 块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。 2.分离度
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点， 应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时， 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外， 分离度应大于1.0。
2.薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
点样开始直展开前，薄层板都是暴露在空气中，其活性取决于 空气的相对湿度，薄层板在不同的相对湿度条件下，其吸附活 性亦不同，致使薄层色谱重现性较差。
分离度（R）的计算公式为：
R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；
d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。
A
B
W1
W2
d1
d2
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
四、对照物的选择 3.对照品和对照药材同时对照(“双对照”)
为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照 品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。
例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品 来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：