第二章鉴别薄层色谱法 ppt课件
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薄层色谱讲义ppt课件
氧化铝、离子交换纤维素、硅藻土、乙酰 化纤维素及聚酰胺等。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
25
9
54 426
8
中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
8
提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
16
2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
2〕薄层板的制备
将1份吸附剂加3份左右的粘合剂 〔0.2%-0.5%羧甲基纤维素钠〕在研钵中向 一个方向充分研磨，使成均匀的糊状物， 然后再倒入已预备好的涂布器中，在玻璃 板上平稳地以直线方向挪动涂布器，使硅 胶浆均匀平整地涂布。室温枯燥后置烘箱 活化，普通在105-110℃加热30min，置枯 燥器中备用。薄层厚度普通为0.2-0.3mm
增修订工程
项目 类别
鉴别
检查
含量测定
特征
或指
纹图
显微
TLC
HP LC
GC
理化
通则
重金属 有害元
素
毒性 成分
其 他
谱
HPLC
TL CS
UV GC
其 他
10版 新增
259
1818
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54 426
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中成药
05版 收载
2811144ຫໍສະໝຸດ 1116102 627
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提取物
10版 新增
05版 收载
21
3
2
5
1
11
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2〕溶解样品的溶剂均有不同程度的洗 脱力，所以在上样的同时，样品在原位置 就呈环形展开，原点直径的分散促进了这 种展开，即所谓“上样环形色谱效应〞。 如样品在溶剂中溶解度很大，原点将变成 空心圈，这种效应对随后的线性展开呵斥 不利的影响，因此应选择样品在溶剂中溶 解度不宜太大的溶剂。
3〕供试液的溶剂在原点的残留，也会 改动展开的选择性，特别是供试液的溶剂 极性与展开剂的溶剂极性相差较大时更为 明显；因此，上样时同步枯燥或上样后枯 燥以除去原点残存的溶剂。如甲醇点后， 有残存甲醇时，就参与了流动相。所以应 该枯燥除去甲醇。
《薄层色谱法》PPT课件
2019/3/26 16
连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。 二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
8.2 7.4 10.2 9.1 9.1 9.8 9.4 12.4 12.9 17.9
29
2019/3/26
流动相选择时需考虑溶剂的下列情况 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作 保护剂，有时需重蒸除去乙醇。 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致， 导致实验难以重现。 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注 意出厂日期。 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相 互作用。 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流 动相。要求操作格外小心，同时混合流动相 不应重复使用。
2
1
原点
2019/3/26 17
离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。 锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶 剂 前 沿
薄层被刮 掉部分
2019/3/26
2019/3/26 10
薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例： 硅胶板（粒度10 ～40um） 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅 速研磨均匀，立即涂铺。 硅胶CMC——以CMC为黏合剂。配制 0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬 浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀 浆。
连续展开——使到达薄层上缘的溶剂不断蒸 发，连续展开以增加展开距离。因无溶剂前 沿，需要有个参照物同时展开，以计算相对 保留值。 二维展开——在两个垂直的方向上进行展开。 将样品点在薄层板的一个角上，展开适当距 离后，挥干溶剂，再将薄层板以与原展开方 向成90 的方向进行展开。
8.2 7.4 10.2 9.1 9.1 9.8 9.4 12.4 12.9 17.9
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流动相选择时需考虑溶剂的下列情况 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作 保护剂，有时需重蒸除去乙醇。 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致， 导致实验难以重现。 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注 意出厂日期。 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相 互作用。 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流 动相。要求操作格外小心，同时混合流动相 不应重复使用。
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原点
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离心展开——薄层板以适当转速旋转时，流动 相以适当速率转移到薄层上。该技术主要用于 制备色谱。 锲尖技术——圆形离心展开具有分辨率高的优 点，但需要有一定的仪器装置。采用锲尖技术 可以在一般的展开室中进行类似展开。
溶 剂 前 沿
薄层被刮 掉部分
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2019/3/26 10
薄层板涂铺要求：均匀、平整、无气泡引起 的凹坑和龟裂。例： 硅胶板（粒度10 ～40um） 硅胶G——将硅胶置研钵中，加入少量水， 研磨均匀，至无结块和气泡，再加入比 例量的水(一般为1份固定相与3份水)，迅 速研磨均匀，立即涂铺。 硅胶CMC——以CMC为黏合剂。配制 0.2% ～ 0.7%CMC水溶液,放置过夜,使悬 浮的纤维沉降,取上层用来配制吸附剂匀 浆。
中药制剂的鉴别技术 理化鉴别法 薄层色谱鉴别法
硅 胶 G( 含 粘 合 剂 煅 石 膏 ) ， GF254( 含 254nm 荧 光 剂 ) ， 硅 胶 H(不含粘合剂)，硅胶HF254
硅胶：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带酸性；
氧化铝：常用极性吸附剂，具表面活性中心，略带碱性；
•硅藻土：中性吸附剂；
•纤维素：液-液分配色谱担体（水为固定液），具一定粘性；
（四）薄层色谱鉴别法
2.仪器与材料
（1） 薄层板 具有一定机械强度、化学惰性、耐一定温度、表面平整、厚
度均匀，价格合理，常用为玻璃板。 玻璃板的常用规格：5cm ×20cm、10cm×20cm、20cm×20cm，
要求光滑、平整、洗净后不附水珠、干燥。
（四）薄层色谱鉴别法 2.仪器与材料 （2） 固定相
荧光淬灭法的GF254薄层板
荧光淬 灭斑点
日光检视
紫外光365nm或254nm下检视
（四）薄层色谱鉴别法
4.注意事项 制备薄层板应清洁干燥后制板； 预制薄层板选择符合要求的产品； 使用新鲜溶剂配制展开剂； 配制多元展开剂时，各种溶剂应分别量取后再混合。
（四）薄层色谱鉴别法
例：首乌丸的薄层色谱鉴别 提取方法：甲醇提取 固定相：硅胶G+0.5%NaOH 展开剂：甲苯-乙酸乙酯-甲酸 （15:2:1）
首乌丸的薄层色谱
1 大黄素 2 大黄素甲醚 3-4 何首乌对照药材 5 首乌丸
第二章 中药制剂的 鉴别技术
3
理化鉴别
（四）薄层色谱鉴别法 1.概述 薄层色谱法是将适宜的吸附剂或载体涂布于玻璃板、塑料或 铝基片上，成一均匀薄层，在同一块薄层板上点加供试品和对照 品，在相同条件下展开，显色剂显色，检出色谱斑点，对比供试 品与对照品的色谱图进行定性鉴别。
薄层色谱鉴别介绍 ppt课件
不稳定的脂和内酯等化合物
氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸 附能力小。
活性级别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
含水量% - 3 6 10 15
PPT课件
33
纤维素
纤维素分子中带有许多羟基，亲水性 强，分离原理与纸色谱相似，但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳，可以代替纸色 谱.
PPT课件
34
纤维素的种类有：
O [-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C-N-]n
H
酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。
应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。
PPT课件
36
葡聚糖
葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有
机相中，加入交联剂交联聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团，则可成为亲脂性
溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强
在当一块 种薄 溶层 剂板不上能进很行好试地验展： 开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先 性用过 一若强 种所； 极选性展较开小剂的使溶混剂合为物基中础所溶有剂的展组开分混点合都物移，到若了展溶开剂不前好沿，，用此极溶性剂较的大极 的若溶所剂选与展前开一剂溶几剂乎混不合能，使调混整合极物性中，的再组次分试点验移，动直，到留选在出了合原适点的上展，开此剂溶组 剂合的 。极性过弱。
17
影响展开的因素 A 相对湿度的影响
B 溶剂系统的影响 C 溶剂蒸汽的影响 D 薄层板类型的影响 E 温度的影响 F 展距的影响
PPT课件
18
A 相对湿度的影响
吸附剂的活度随相对湿度的增大而降低。
20cm×20cm的硅胶薄层板在50%的相对湿度中： 放置3分钟 失去活性一半 放置15分钟 吸附水分达最大值 薄层在相对湿度为1-80%的情况下展开，Rf值可 以相差3倍。 最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性，极 性越大，相对湿度范围也相应增大。
氧化铝的活度与其含水量有关，含水量大，则吸 附能力小。
活性级别 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
含水量% - 3 6 10 15
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33
纤维素
纤维素分子中带有许多羟基，亲水性 强，分离原理与纸色谱相似，但分离效果 和分离速度均比纸色谱佳，可以代替纸色 谱.
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34
纤维素的种类有：
O [-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-C-N-]n
H
酰胺中心的酰胺基可与酚类、酸类、硝基类等 化合物形成氢键而对这些物质产生吸附作用。
应用：蛋白质、肽、多糖、核苷酸等的分离。
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36
葡聚糖
葡聚糖是一种由葡萄糖残基构成的多糖物质。 葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖悬浮于有
机相中，加入交联剂交联聚合而成。 在葡聚糖分子上引入有机基团，则可成为亲脂性
溶剂的洗脱能力随溶剂的极性增大而增强
在当一块 种薄 溶层 剂板不上能进很行好试地验展： 开各组分时，常选择用混合溶剂作为展开剂。先 性用过 一若强 种所； 极选性展较开小剂的使溶混剂合为物基中础所溶有剂的展组开分混点合都物移，到若了展溶开剂不前好沿，，用此极溶性剂较的大极 的若溶所剂选与展前开一剂溶几剂乎混不合能，使调混整合极物性中，的再组次分试点验移，动直，到留选在出了合原适点的上展，开此剂溶组 剂合的 。极性过弱。
17
影响展开的因素 A 相对湿度的影响
B 溶剂系统的影响 C 溶剂蒸汽的影响 D 薄层板类型的影响 E 温度的影响 F 展距的影响
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18
A 相对湿度的影响
吸附剂的活度随相对湿度的增大而降低。
20cm×20cm的硅胶薄层板在50%的相对湿度中： 放置3分钟 失去活性一半 放置15分钟 吸附水分达最大值 薄层在相对湿度为1-80%的情况下展开，Rf值可 以相差3倍。 最佳相对湿度范围决定于溶质和溶剂的极性，极 性越大，相对湿度范围也相应增大。
薄层色谱鉴别介绍课件
薄层色谱法用于药物成分的分析和鉴别， 可分离和鉴定药物中的有效成分和杂质。
食品安全
环境监测
薄层色谱法用于食品中农药残留、添加剂 、毒素等的检测和鉴定，保障食品安全。
薄层色谱法用于环境样品中污染物的分离 和鉴定，如水体、土壤、空气中的有害物 质等。
02
薄层色谱法的实验操作
实验材料准备
薄层板
选择合适规格的薄层板 ，确保其质量可靠且无
定量分析
通过测量斑点的大小或使用紫 外可见光谱等方法，计算待测
物质的质量或浓度。
03
薄层色谱法的优缺点
优点
快速分离
薄层色谱法可以在短时间内完成样品的分离 ，特别适合于大量样品的快速分析。
操作简便
薄层色谱法的操作相对简单，不需要复杂的 设备，容易掌握。
高分离效能
薄层色谱法具有较高的分离效能，可以分离 复杂混合物中的各个组分。
改进方向
提高重现性和定量精度
联用技术
通过改进操作方法和技术手段，提高 薄层色谱法的重现性和定量精度。
将薄层色谱法与其他分析技术联用， 如质谱、光谱等，以提高分析效果和 分离效能。
拓展应用范围
研究和发展适用于大分子和极性物质 分离的薄层色谱技术，谱法的实际应用 案例
绿色环保
采用环保型溶剂和低毒性的分离 材料，降低对环境的负面影响。
感谢您的观看
THANKS
薄层色谱鉴别介绍课件
目录 CONTENT
• 薄层色谱法简介 • 薄层色谱法的实验操作 • 薄层色谱法的优缺点 • 薄层色谱法的实际应用案例 • 薄层色谱法的未来发展与展望
01
薄层色谱法简介
定义与原理
定义
薄层色谱法是一种常用的分离和 分析技术，用于分离和鉴定混合 物中的化合物。
薄层色谱法PPT精选文档
– 点样量应适中，过载会引起斑点拖尾，分离 度变差，以最小检测量的几倍～几十倍为宜。
– 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）， 微量注射器。
37
展开
• 展开方式：上行展开 • 展开过程： • 展开缸预先用展开剂饱和，平衡系统，
薄层板浸入展开剂展开（距边缘0.51cm），挥干展开剂
38
• 检测
塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后 进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的 对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫 描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别， 检查或含量测定等。
2
• TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特 别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变 化的物质的分离。
• 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样 和展开剂用量少，展开速度快。
0.75
Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
0.5
0.25
0 0.1 0.3
Rf
0.5 0.7 0.9 1
13
流动相与固定相
• 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留 和分离选择性决定于三个因素：
流动相
溶 解 能 力
竞争
吸附 剂
溶质 相互作用
14
固定相
要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
24
• 流动相选择时需考虑溶剂的下列情况
– 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂， 有时需重蒸除去乙醇。
– 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致，导致实 验难以重现。
– 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注意出厂 日期。
– 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相互作用。 – 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流动相。
– 手工点样工具：定容玻璃毛细管（1 –5ul）， 微量注射器。
37
展开
• 展开方式：上行展开 • 展开过程： • 展开缸预先用展开剂饱和，平衡系统，
薄层板浸入展开剂展开（距边缘0.51cm），挥干展开剂
38
• 检测
塑料或铝基片上，成一均匀薄层。干燥后 进行点样，展开，斑点定位；或与适宜的 对照物随行对照比较，或用薄层扫描仪扫 描，用于药物或其他化合物的分离，鉴别， 检查或含量测定等。
2
• TLC是一种简单、快速的色谱技术。TLC法特 别适用于挥发性较小或在较高温度易发生变 化的物质的分离。
• 薄层色谱不需要特殊设备，操作简单，试样 和展开剂用量少，展开速度快。
0.75
Rf﹤0.1或﹥0.7,R下降
0.5
0.25
0 0.1 0.3
Rf
0.5 0.7 0.9 1
13
流动相与固定相
• 液-固吸附 ——在该色谱中，溶质的保留 和分离选择性决定于三个因素：
流动相
溶 解 能 力
竞争
吸附 剂
溶质 相互作用
14
固定相
要求：纯度高，含杂质少； 粒度，结构均匀一致，有一定的比表
可加入一定比例的酸或碱,使斑点集中。
24
• 流动相选择时需考虑溶剂的下列情况
– 一些溶剂如氯仿、乙醚一般含有微量乙醇作保护剂， 有时需重蒸除去乙醇。
– 许多溶剂有吸湿性，使溶剂含水量不一致，导致实 验难以重现。
– 溶剂储藏时间和条件对溶剂质量影响，应注意出厂 日期。
– 混合流动相组分之间（或杂质）可能发生相互作用。 – 对于易挥发的溶剂，难于配制稳定组成的流动相。
中药材薄层层析ppt课件
3）对照品和对照药材同时对照(“双对照”) 为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照
品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。 例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品
来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
2）薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3）吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
中药材的薄层色谱法鉴别
薄层色谱法：在中药材及其制剂的定性鉴 别中得到广泛的应用，这主要是由于其具有分 离分析双重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏 度和专属性，成为中药鉴别的重要方法。
薄层色谱法还可用于药品的杂质检查和含 量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法， 少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝薄层色谱
3、对照物的选择
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单体， 也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下三种方式： 1）对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制成 对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一颜 色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置一 种或数种对照品。 2）对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
第二章薄层色谱分离技术详解演示文稿
第23页，共99页。
6. 离子交换剂 葡聚糖凝胶离子交换剂 在 G—25或G—50葡聚糖凝胶上引入
羧甲基、磺乙基、磺丙基、二乙基氨乙 基及季铵乙基等而制成的既具凝胶的优 点又具离子交换性质的载体，在生化及 天然化合物方面得到广泛应用。
第24页，共99页。
7．硅藻土 硅藻土商品名 celite，是高度多孔的，比
第21页，共99页。
5．葡聚糖凝胶 分子筛的原理
(1) 亲水性葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖(右旋糖苷， dextran)悬浮于有机相中，加入交联剂使葡聚糖交联 聚合而成．其商品名为Sephadex，加入交联剂量不 同可制成不同交联度的凝胶．
交联度越大，网状结构越紧密，吸水时膨胀体积越 小．
(3) 离子交换薄层色谱 由含有交换活性基团的纤维素铺成薄层。
(4) 分子排阻薄层色谱 也称凝胶薄层。利用样品中分子大小 不同、受阻情况不同加以分离。
(5) 亲和薄层色谱 利用酶、受体、抗原抗体特异性识别作用。
第3页，共99页。
二、TLC 的技术参数 1. 比移值: 一个化合物在薄层板上上
溶液（0.5％）（1：3），研成糊状，倒入板上铺 布。
第34页，共99页。
0.5％CMC-Na配制： 取适量CMC-Na + 蒸馏水加热煮沸，完全融解，
放冷静置。铺板时取其上清液使用。
铺板时为了防止由于搅拌而带入气泡，常常加 入少量乙醇或丙酮或将吸附剂糊首先置于真空干 燥器中减压脱气，以免薄层表面出现气泡，影响 分离效果。
度，与传递阻滞有关；
表面积越大，表明其吸附力越大，有较强的保留。
第13页，共99页。
第14页，共99页。
4）硅胶薄层板的厚度 普通薄层厚度为250μm, 高效薄层板为200μm， 制备薄层板厚度 0.5-2 mm
6. 离子交换剂 葡聚糖凝胶离子交换剂 在 G—25或G—50葡聚糖凝胶上引入
羧甲基、磺乙基、磺丙基、二乙基氨乙 基及季铵乙基等而制成的既具凝胶的优 点又具离子交换性质的载体，在生化及 天然化合物方面得到广泛应用。
第24页，共99页。
7．硅藻土 硅藻土商品名 celite，是高度多孔的，比
第21页，共99页。
5．葡聚糖凝胶 分子筛的原理
(1) 亲水性葡聚糖凝胶
葡聚糖凝胶是由一定分子量的葡聚糖(右旋糖苷， dextran)悬浮于有机相中，加入交联剂使葡聚糖交联 聚合而成．其商品名为Sephadex，加入交联剂量不 同可制成不同交联度的凝胶．
交联度越大，网状结构越紧密，吸水时膨胀体积越 小．
(3) 离子交换薄层色谱 由含有交换活性基团的纤维素铺成薄层。
(4) 分子排阻薄层色谱 也称凝胶薄层。利用样品中分子大小 不同、受阻情况不同加以分离。
(5) 亲和薄层色谱 利用酶、受体、抗原抗体特异性识别作用。
第3页，共99页。
二、TLC 的技术参数 1. 比移值: 一个化合物在薄层板上上
溶液（0.5％）（1：3），研成糊状，倒入板上铺 布。
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0.5％CMC-Na配制： 取适量CMC-Na + 蒸馏水加热煮沸，完全融解，
放冷静置。铺板时取其上清液使用。
铺板时为了防止由于搅拌而带入气泡，常常加 入少量乙醇或丙酮或将吸附剂糊首先置于真空干 燥器中减压脱气，以免薄层表面出现气泡，影响 分离效果。
度，与传递阻滞有关；
表面积越大，表明其吸附力越大，有较强的保留。
第13页，共99页。
第14页，共99页。
4）硅胶薄层板的厚度 普通薄层厚度为250μm, 高效薄层板为200μm， 制备薄层板厚度 0.5-2 mm
第二章 薄层色谱
3、展开 、 吹干样点， 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖展开 瓶中。薄层色谱的展开， 瓶中。薄层色谱的展开，需要在密闭容器中进行 为使溶剂蒸气迅速达到平衡， 。为使溶剂蒸气迅速达到平衡，可在展开槽内衬 一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂， 一滤纸。在层析缸中加入配好的展开溶剂，使其 高度不超过1cm。将点好的薄层板小心放入层析 高度不超过 。 缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。 缸中，点样一端朝下，浸入展开剂中。盖好瓶盖 观察展开剂前沿上升到一定高度时取出， ，观察展开剂前沿上升到一定高度时取出，尽快 在板上标上展开剂前沿位置。晾干，观察斑点位 在板上标上展开剂前沿位置。晾干， 计算Rf值 展开剂要接触到吸附剂下沿， 置，计算 值。展开剂要接触到吸附剂下沿，但 切勿接触到样点。盖上盖子，展开。 切勿接触到样点。盖上盖子，展开。待展开剂上 行到一定高度（由试验确定适当的展开高度）， 行到一定高度（由试验确定适当的展开高度）， 取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。 取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。
第二章 食品分析中常用仪器 检测方法
1
薄层色谱法
一、原理 最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱 固吸附色谱。 最常用的薄层色谱也属于液 固吸附色谱。吸 附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂层。 干燥后在涂层的一端点样 涂层的一端点样， 干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少 量展开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂 量展开剂的的有盖容器中。 涂层，借毛细作用向上移动。 涂层，借毛细作用向上移动。经过在吸附剂和展 开剂之间的多次吸附 溶解作用， 多次吸附-溶解作用 开剂之间的多次吸附 溶解作用，将混合物中各组 分分离成孤立的样点，实现混合物的分离 分离。 分分离成孤立的样点，实现混合物的分离。
薄 层 色 谱 ppt课件
ppt课件
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如果需要点多个样，点之间距离不小于1～1.5cm。
ppt课件
10
3.展开
薄层色谱的展开是在密闭容器中进行的。
将展开剂（6mL环己烷和2mL苯的混合物）倒入层析缸中， 待层析缸中充满溶剂蒸气后，将点好样的层析板放入缸中展开。
点样的位置必须在展开剂液面之上。当展开剂展开至距顶 端0.5～1cm时，取出层析板用铅笔画出溶剂前沿位置，晾干。
5.将点好样的板放入层析缸，展开，在展开剂离顶 部1cm 的时刻取出，用铅笔画出前沿的位置， 并划出斑点的位置。
6.在另一块板上重复一次实验。 7.计算顺反偶氮苯的的比移值，并确定哪个斑点是
顺式偶氮苯。
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注意事项
1．层析缸不要洗，废液要倒入废液缸 2．薄板要放平。 3．注意观察展开剂的位置，作好标记。
溶剂前沿 分离的组分
8
实验步骤
1. 薄层板的制备与活化
将1.5g硅胶G在搅拌下加入到盛有5ml去离子水的小烧杯中， 调成有粘稠度的浆料(5-10min)立即倒在玻璃板上，用手指夹 住两边，沿水平方向轻轻振荡，使浆状物表面光滑且均匀地附 在载玻片上，水平放置。用同样的方法再制一块。要求薄层板 的厚度为0.25mm。
经过薄层层析后，没有经过光照的偶氮苯在薄层板上只有一 个斑点，而经过光照的偶氮苯有两个斑点。
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比移值
在薄板上混合物的各个组分 上升的高度与展开剂上升的 前沿之比称为该化合物的比 移值，用Rf表示。
前沿线
色斑 起始线
薄层色谱示意图
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实验装置
吸附剂薄层 原样点
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2
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薄层色谱应用课件.pptx
一、 实 验 目 的
❖ 了解薄层色谱的应用原理 ❖ 掌握薄层色谱的应用方法
二、实 验 原 理
二、实 验 原 理
应用薄层色谱检验、鉴定化合物的原理：
图1 365 nm下观察的结果
图2 硫酸乙醇显色结果
注：两边的是标准品，中间的是样品
二、实 验 原 理
➢ 固定相：硅胶，氧化铝，等。 ➢ 支持板：玻璃板，涤纶布，等。 ➢ 展开剂：根据样品的极性及溶解度选择，可采用单一溶剂，但更常用的
四、实 验 过 程
比移值（ Rf 值）的计算：
五、 注 意 事 项
1. 制作薄层所用玻璃板要平滑、干净。 研磨要充分，保证所制的薄层面应平整均匀 存放薄层板时要注意保持干燥及避免污染。
五、 注 意 事 项
2. 样品浓度（浓度为0.01-0.1%）： 太大，容易出现拖尾；
太小则会导致斑点不明显，难以观察。
五、 注 意 事 项
5. 标记斑点时：要轻轻勾画，避免铅笔将斑点处的硅胶碰掉，从而 影响后续显色结果的观察。
是混合溶剂。
三、实 验 试 剂 与 仪 器
点样样品 香草醛
间苯二酚
展开剂 石油醚 丙酮
四、实 验 过 程
薄层板 的制备
点样
展开
显色、定位
UV灯、显色剂
测定比移值
（Rf 值）
四、实 验 过 程
显色和定位 一般包括：一看、二照、三碘和四显四步。
❖ 一看：指先在自然光下观察 ❖ 二照：指分别在 254 nm 和 365 nm 下观察有无暗斑或荧光斑点 ❖ 三碘：对在自然光和紫外下均无斑点的物质可以用碘蒸汽显色 ❖ 四显：用显色剂显色 ➢ 实际操作中根据需要选择其中的两到三步。
五、 注 意 事 项
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一般操作步骤为：供试液的制备→制备薄层板（制板）→点
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱图象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
四、对照物的选择 3.对照品和对照药材同时对照(“双对照”)
为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照 品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。
例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品 来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
被分离物质的Rf值和物质的相互分离度不一致，影响薄层色谱 的重现性。
六、仪器与材料（略） 七、操作步骤
原点起 始线
≥5mm
展开剂 液面
≥8mm
（展开距离）
8~15cm
1~1.5cm (点样位置)
4.展开（略） 5.显色与检视
颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。 无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色， 或再加热使之显色。 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在紫外灯 （365nm）下观察荧光色谱。 有的成分可用试剂的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）熏蒸显色。 无色有紫外吸收且不产生荧光的成分可用荧光淬灭法显色。 即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下四种方式： 1.对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制 成对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一 颜色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置 一种或数种对照品。 2.对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
2.薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
点样开始直展开前，薄层板都是暴露在空气中，其活性取决于 空气的相对湿度，薄层板在不同的相对湿度条件下，其吸附活 性亦不同，致使薄层色谱重现性较差。
分离度（R）的计算公式为：
R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；
d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。
A
B
W1
W2
d1
d2
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
1.薄层色谱法定性的基础 基于相同物质在同一色谱条件下，表现出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对，且采
用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 三、系统适用性试验(05版药典新增) 1.检测灵敏度
主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释 若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一 块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。 2.分离度
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点， 应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时， 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外， 分离度应大于1.0。
第二章 中药制剂的鉴别 第二节 理化鉴别
三、色谱法 --------------薄层色谱法
薄层色谱法在中药制剂的定性鉴别中得到 广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双 重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属 性，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。薄 层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，
样→展开→显色与检视 1.供试液制备：包括提取和净化（除去杂质，消除干扰） 常用的预处理方法有：溶剂提取法（包括冷浸、回流、超声
提取）；萃取法，升华法，蒸馏法小型层析柱的柱色谱法、离 子交换法等。
2.制备薄层板（略） 3.点样 定量点样
.
溶剂前沿
4.阴阳对照 由于中药制剂中许多化学成分和有效成分不明确，或有
效成分虽已明确但又无对照品，此时可采用阴阳对照法进行 鉴别。
阳性对照液制备：把制剂中要鉴别的某味原药材，按制 剂的制法处理后，以制剂相同的比例、条件、方法提取，制 成该味药的阳性对照液。
阴性对照液制备：从制剂处方中除去要鉴别的该味药材， 剩下各味药则按制剂方法出理后，以制剂相同的比例、条件、 方法提取，制成该味药的阴性对照液。
（254nm）下观察板面上该成分形成的荧光淬灭色谱。
6.记录 薄层色谱图象可采用摄像
设备拍照，以光学照片或电子 图象的形式保存。也可以用扫 描仪记录相应的色谱图。 7.结果判断
通过样品和对照品的阳性对照液、阴性对照液在同一条 件下的色谱图可判断样品中有无该味药材，并可观察阴性对 照液中有无干扰来确定该鉴别的专属性。
实例：枳实导滞丸中黄连的薄层鉴别 P19
五、影响薄层色谱鉴别的主要因素 影响因素较多，例如供试液的净化程度，吸附剂的性能和
薄层板的质量、点样（原点）的质量、展开剂的组成和饱和情 况、对照品的纯度、展开的距离、相对湿度和温度等。主要的 有以下四个方面：
1.样品的预处理及供试液的制备 中药的成分复杂，未知成分多，在制剂中往往各种成分尽
可能多的提取出来，其中既有欲测成分也有“杂质”，常常由 于相互干扰或背景污染而难以得到满意的分离效果，甚至难以 辨认，因此供试液的净化程度就很关键。
为了得到较清晰的色谱图，供试液的制备要求：被测成分 尽可能多的提取出来，杂质要尽可能多的除去。
四、对照物的选择 3.对照品和对照药材同时对照(“双对照”)
为了准确检验制剂投料的真实性，有时仅用对照 品无法鉴别出来，这时可增加原药材作为对照药材。
例如含有黄连、黄柏的制剂，单用小檗碱对照品 来鉴别是不足足以说明的，此时应增加黄连作为对照 药材进行检视。
要求样品色谱图中的主要斑点应与对照品和对照 药材色谱图中的有关斑点相一致，从而大大提高了薄 层色谱鉴别法的专属性和整体性，可有效地检出药品 是否使用了假冒药材。
实验室可用适当浓度的硫酸溶液来控制展开时的相对湿度。 硫酸溶液的浓度越高其吸湿性越大，使得展开室中的相对湿度 越小；反之，则越大。
4.温度的影响 在其他条件相同时，展开时的温差较大会导致斑点扩散及
被分离物质的Rf值和物质的相互分离度不一致，影响薄层色谱 的重现性。
六、仪器与材料（略） 七、操作步骤
原点起 始线
≥5mm
展开剂 液面
≥8mm
（展开距离）
8~15cm
1~1.5cm (点样位置)
4.展开（略） 5.显色与检视
颜色较深的成分可直接在日光下检视其斑点。 无色或浅色的成分多用喷雾法或浸渍法以适宜的显色剂显色， 或再加热使之显色。 有荧光的物质或遇某些试剂可激发荧光的物质可在紫外灯 （365nm）下观察荧光色谱。 有的成分可用试剂的蒸气（如碘蒸气、氨蒸气）熏蒸显色。 无色有紫外吸收且不产生荧光的成分可用荧光淬灭法显色。 即在含有荧光剂的硅胶板（如硅胶GF254板），在紫外光灯
对照物分为对照品（主要为有效成分和特征性成分的单 体，也包括对照提取物）和对照药材两种。
对照物的设置有以下四种方式： 1.对照品对照：
用已知中药制剂某一种有效成分或特征性成分对照品制 成对照液，与样品在同一条件下层析，比较相同位置有无同一 颜色（或荧光）的斑点，来检测是否含有某原料药材。可设置 一种或数种对照品。 2.对照药材对照：缺乏对照品的情况下使用
2.薄层色谱的点样 点样是关键的一步，既关系到能否得到可重现的薄层色谱，
也关系到定量结果的准确与否，不良的点样是测定误差的主要 来源。
3.吸附剂的活性与相对湿度的影响 硅胶为亲水性吸附剂，其含水量越高，吸附活性越弱，自
点样开始直展开前，薄层板都是暴露在空气中，其活性取决于 空气的相对湿度，薄层板在不同的相对湿度条件下，其吸附活 性亦不同，致使薄层色谱重现性较差。
分离度（R）的计算公式为：
R=2(d2-d1)/W1+W2 式中 d1为相邻两峰中后一峰与原点的距离；
d2为相邻两峰中前一峰与原点的距离； W1及W2为相邻两峰各自的峰宽。
A
B
W1
W2
d1
d2
3.重复性 主要用于含量测定.即同一供试品溶液在同一块薄层板上
平行点样的待测成分的峰面积测量值的相对标准偏差(RSD)应 不大于3.0%；需显色后测量的相对标准偏差应不大于5.0%。 四、对照物的选择
少数使用聚酰胺薄层色谱法和氧化铝色谱法。
1.薄层色谱法定性的基础 基于相同物质在同一色谱条件下，表现出相
同的色谱行为这一基本规律，在同一块薄层板上 点加供试品和对照物，在相同条件下展开，显色 检出色谱斑点后，将所得供试品与对照物的色谱 图进行对比分析，从而对，且采
用共薄层对照分析法，故专属性亦较强。 三、系统适用性试验(05版药典新增) 1.检测灵敏度
主要用于限量检查.采用供试品溶液和对照品溶液与稀释 若干倍（10倍）的对照品溶液在规定的色谱条件下，于同一 块薄层板上点样、展开、检视，后者应显示清晰的斑点。 2.分离度
用于鉴别时，对照品溶液与供试品溶液中相应的主斑点， 应显示两个清晰分离的斑点。用于限量检查和含量测定时， 要求定量峰与相邻峰之间有较好的分离度，除另有规定外， 分离度应大于1.0。
第二章 中药制剂的鉴别 第二节 理化鉴别
三、色谱法 --------------薄层色谱法
薄层色谱法在中药制剂的定性鉴别中得到 广泛的应用，这主要是由于其具有分离分析双 重功能，大大提高了鉴别工作的灵敏度和专属 性，成为中药鉴别的重要方法和鲜明特色。薄 层色谱法还可用于药品的杂质检查和含量测定。
中国药典大多数品种采用硅胶薄层色谱法，