兽医药理学实验课件

空白肉汤100μl 药液100μl
空白肉汤100μl
空白肉汤100μl
空白肉汤100μl
空白肉汤100μl
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3. 再在每一孔中加入稀释好的菌液100μl,这样 就形成测定一个药物MIC值的三次重复（ A/B/C三排样品）。此时每孔药物浓度即最 终药物浓度从左到右依次为(浓度: 单位/mL 或µg/mL)：
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6 实验结果
【结果判定】 以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药
物浓度为MIC。当阳性对照孔内细菌明显 生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法 出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长 的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则不 应报告结果，需重复试验。
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【结果列表】
表1 四种药物对大肠杆菌的MIC值（μg/mL或IU/mL）
抗菌药物最小抑菌浓度（MIC）的测定
兽医学院实验教学中心
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1 实验目的
1. 掌握微量肉汤二倍稀释法测定抗菌药物MIC 的基本步骤，能准确测出各种抗菌药物的 MIC值，了解单药的抗菌活性；
2. 为后面棋盘法设计棋盘做准备，求取棋盘法 的中心浓度。
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2 实验原理
最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）：药物在培养基中通 过连续两倍稀释，眼观可见待检测细菌在培 养基中生长受到抑制的最低浓度即为该药的 最小抑菌浓度。
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３ 实验材料
【实验药品及菌株】 1.药品
氨苄西林（中国药品生物制品检定所，含量：86％） 阿米卡星（齐鲁制药有限公司， 效价：650u/mg） 四环素（中国药品生物制品检定所，含量：95%） 粘菌素（中国药品生物制品检定所，含量：99.5％）
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３ 实验材料
【实验药品及菌株】 2.培养基 MH营养肉汤、LB营养肉汤、麦康凯琼脂 生理盐水 3. 菌株 大肠杆菌标准菌株ATCC25922，由中国兽 医药品监察所提供。
H 阴性对照200µL肉汤
操作完成后放于培养箱中培养16-24小时
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5 注意事项 1. 无菌操作
① 所有用具都需经过灭菌处理。 ② 超净台使用前后都需用新洁尔灭擦拭，开紫外
灯进行消毒；不能拿酒精棉球擦挡板。 ③ 操作前，用酒精棉球擦手。 ④ 每次枪头过瓶口，瓶口都要经火焰烧过；移液
枪和枪头不准在酒精灯上烤！ ⑤ 操作过程中尽可能不将96孔板盖完全打开 。
受试菌株
药物（μg/mL或IU/mL） 氨苄西林 阿米卡星 四环素 粘菌素
大肠杆菌
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7 作业
1. 讨论微量肉汤二倍稀释法应注意哪些环节 才能准确测定MIC？
2. MIC试验对临床选药的意义以及它的局限 性？
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2. 在A/B/C三排的第1孔加配好的药液(浓度为512单 位/mL或μg/mL)100μl，然后对药物进行二倍稀释。 此时每孔药物浓度从左到右依次为(单位:IU/mL或 μg/mL)：
256，128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125
取100μl
弃去100μl
②100µL药物
最后加100µL菌液
B 同A
2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
100µL 100µL 100µL 100µL 100µL 100µL 100µL 100µL 100µL 100µL 100µL
C 同A
D
步骤同A， 更换药物
E
同D
F
同D
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阳性对照100µL肉汤
+100µL菌液
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5 注意事项
2. 移液器的使用
① 调刻度。 ② 不倒立。 ③ 准确吸取液体。 ④ 换枪头。
3、其他注意事项
① 培养板上做好标记（班级、姓名、时间、药物名称及 浓度）。
② 每药做三个重复，每个板做一个阴性对照和一个阳性 对照。
③ 超净台内用过的不需要的东西都必须放到废液缸内。 ④ 实验完后要收拾好台面。
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３ 实验材料
【实验器材】 96孔细胞培养板、移液枪1mL、200μl 各 一支、枪头1mL、200μl、小试管、锥形瓶 、试管架、酒精灯、平皿、酒精棉; 分析天平、自动高压灭菌锅、超净工作台、 37℃恒温培养箱。
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４ 实验步骤 1. 在96孔板的前三排即A/B/C三排每孔中各 加入空白肉汤100μL
128，64，32，16，8，4，2，1，0.5，0.25，0.125，0.06
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4. 另外在同一块板上做一排阴性对照（仅加 空白肉汤不加菌液）和一排阳性对照（加 菌液肉汤不加药液）；
5. 将96孔板放入37℃恒温培养箱培养16~20 小时后，观察结果。
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1
A
①100µL肉汤