γ-氨基丁酸受体和甘氨酸受体在大鼠丙泊酚麻醉中的作用

分析卜氨基丁酸（ＧＡＢＡ）受体和甘氨酸受体在丙泊酚麻醉中的作用。方法 断头法分离ｗｉｓｔａｒ大
鼠（１３～１９ ｄ）海马半脑，切出４００ ｐｍ厚度的海马脑片，全细胞膜片钳技术记录ＣＡｌ区锥体神经元
ＥＰＳＣ。８０张脑片分为八组：脂肪乳剂组，５０ ｔ－ｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组，１００ ｔｕｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组，２００／２ｍｏｌ／Ｌ丙
结
果
在膜钳制电压为一７０ ｍＶ条件下，９０肛１脂肪乳 剂对ＣＡｌ区锥体神经元细胞ＥＰＳＣ幅值无影响，加 入４５０弘ｌ脂肪乳剂３０～４０ ｍｉｎ仍然不影响突触传 递，ＥＰＳＣ幅值为０．９９１±０．０１２。丙泊酚呈剂量依 赖性的抑制ＥＰＳＣ幅值，２５～３０ ｍｉｎ左右达最大抑 制效果，５０、１００、２００ ｔ生ｍｏｌ／Ｌ丙泊酚分别抑制ＥＰＳＣ 幅值为１４．４％、５２．３％、６７．８％，与加入丙泊酚前比
表１八组脑片ＥＰＳＣ幅值的比较（ｉ士ｓ）
与基础值比较，’Ｐ＜Ｏ．０５与脂肪乳剂组比较，＃Ｐ＜Ｏ．０５
０
ｓｎ
１００
１５０
２（１０
丙泊酚浓度（¨ｍｏｌ／１．）
图１不同剂量丙泊酚对ＥＰＳＣ幅值的影响
讨
论
很多静脉麻醉药都主要通过增强ＧＡＢＡＡ受体 功能而发挥麻醉作用［３“］。Ｏｒｓｅｒ等口１发现：低浓度 （２～１００／ｚｍｏｌ／Ｌ）丙泊酚增强ＧＡＢＡ诱发的全细胞 电流；中间浓度（１０～２ ０００ Ｆｍｏｌ／Ｌ）丙泊酚能够直 接激活ＧＡＢＡＡ受体［２１；极高浓度（＞２ ０００ ｔｌｍｏｌ／Ｌ） 丙泊酚对ＧＡＢＡＡ受体起非竞争性抑制作用。很多 实验都证明了丙泊酚的这种作用［６’７］。
临床麻醉学杂志２００６年９月第２２卷第９期Ｊ Ｃｌｉｎ Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌ，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００６，Ｖ０１．２２，Ｎｏ．９
了一氨基丁酸受体和甘氨酸受体在大鼠丙泊酚 麻醉中的作用
· ６９１ ·
．实验研究．
谢玉波徐林刘敬臣
【摘要】 目的研究丙泊酚对大鼠海马ＣＡｌ区电刺激诱发兴奋性突触后电流（ＥＰＳＣ）的影响，
丙泊酚又称２，６一二异丙基苯酚，具有麻醉作用 快和恢复迅速等特点，已广泛用于麻醉诱导与维持、 ＩＣＵ患者镇静、癫痫持续状态的治疗等‘¨。尽管如
基金项目：本课题为国家自然科学基金（３９９３００８０）、广西青年基 金（０５４２０５４）资助项目
作者单位：５３００２１南宁市，广西医科大学第一附属医院麻醉科 （谢玉波、刘敬臣）；中国科学院昆明动物研究所学习与记忆实验室 （徐林）
ｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇａｂａｚｉｎｅ，１００ ｕｍｏｌ／Ｌ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｄｉｄ ｎｏｔ ｄｅｃｒｅａΒιβλιοθήκη Baiduｅ ＥＰＳＣ．Ｈｏｗｅｖｅｒ。
ａｆｔｅｒ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ，１００／ｕｔｍｏｌ／Ｌ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｓｔｉｌｌ ｒｅｄｕｃｅｄ ｔｈｅ ａｍｐｌｉ— ｔｕｄｅ ｏｆ ＥＰＳＣ ｂｙ ３４．７％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｃｏｕｌｄ ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＡＢＡＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ
泊酚组·，ＳＲ９５５３１组，士的宁组，ＳＲ９５５３１＋１００／ｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组，士的宁＋１００／ｌｍｏｌ／Ｌ丙？自酚组，每
组１０张。ＳＲ９５５３１＋１００／ｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组和士的宁４－１００／ｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组先在循环液中加入１０
ｕｍｏｌ／Ｌ ＳＲ９５５３１或４／ｕ￡ｍｏｌ／Ｌ士的宁预孵脑片３０ ｍｉｎ。八组均记录基础ＥＰＳＣ １０ ｍｉｎ，然后加入不同
变；士的宁＋１００ ｕｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组加入丙泊酚后，ＥＰＳＣ幅值仍然下降，最大抑制程度为３４．７％。结
论丙泊酚主要通过增强ＧＡＢＡ一受体功能使兴奋性突触活动降低，甘氨酸受体在其中起到协同和
调节作用。
【关键词】
兴奋性突触后电流；ｙ－氨基丁酸；甘氨酸；受体；丙泊酚
Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＧＡＢＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｇｌｙｃｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ
万方数据
些壅窒醛堂盘查！！！！生！旦箜！！鲞蔓！塑』里！ｉ！垒坠塑！垒！！！！！！量！旦堡翌！坚！！！！：∑！！：！！！型！：！
材料与方法
脑片制备同文献Ｅ≯．－Ｉ，将４５只１３～１９ ｄ雄性 ｗｉｓｔａｒ大鼠（体重４０～６０９，成都军区昆明总医院动 物中心提供）快速断头，切出４００ ｐｍ厚度的海马脑 片。
药物，继续记录ＥＰＳＣ ４０ ｍｉｎ。膜钳制电压为一７０ ｍＶ。结果脂肪乳剂、ＳＲ９５５３１和士的宁对ＥＰ－
ＳＣ幅值无影响；丙泊酚呈剂量依赖性的抑制ＥＰＳＣ幅值，５０、１００、２００／ｚｍｏｌ／Ｌ丙泊酚最大抑制ＥＰＳＣ
幅值为１４．４％、５２．３％、６７．８％；ＳＲ９５５３１＋１００／ｔｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组加入丙泊酚后，ＥＰＳＣ幅值基本无改
电生理学记录 同文献［２］。８０张脑片（咒一 ８０）随机分为八组：脂肪乳剂组，５０ ｔＬｍｏｌ／Ｌ丙泊酚 组，１００ ｔＬｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组（１００ Ｆｍｏｌ／Ｌ丙泊酚的容 积为９０ ｕ１），２００ ｔ２ｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组，ＳＲ９５５３１组，士 的宁组，ＳＲ９５５３１＋１００ ｔｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组和士的宁 ＋１００ ｔｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组，每组１０张。八组均记录 基础ＥＰＳＣ １０ ｒａｉｎ，脂肪乳剂组先加入９０弘１脂肪乳 ’剂，记录ＥＰＳＣ ４０ ｒａｉｎ，继续加大脂肪乳剂至４５０ ｕｌ， 观察ＥＰＳＣ的变化；５０、１００、２００ ｔｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组、 ＳＲ９５５３１组和士的宁组分别加入５０、１００、２００ ｕｍｏｌ／Ｌ丙泊酚、１０／Ｊ￡ｍｏｌ／Ｌ ＳＲ９５５３１、４ Ｆｍｏｌ／Ｌ士 的宁，继续记录ＥＰＳＣ ４０ ｒａｉｎ。ＳＲ９５５３１＋１００ ｔｚｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组和士的宁＋１００ ｂｔｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组 先在循环液中加入１０／２ｍｏｌ／Ｌ ＳＲ９５５３１或 ４ Ｆｍｏｌ／Ｌ士的宁预孵脑片３０ ｍｉｎ后，记录基础 ＥＰＳＣ １０ ｒａｉｎ，然后加入１００，ｕｍｏｌ／Ｌ丙？白酚，继续记 录ＥＰＳＣ ４０ ｒａｉｎ。膜钳制电压为一７０ ｍＶ。 ＳＲ９５５３１（ｇａｂａｚｉｎｅ）为ＧＡＢＡＡ受体竞争性拮抗药， 士的宁（ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ）为甘氨酸受体竞争性拮抗药。
责任作者：谢玉波
此，丙泊酚的作用机制迄今仍未阐明。本研究采用 全细胞膜片钳技术分析丙泊酚对大鼠海马ＣＡｌ区 电刺激诱发的兴奋性突触后电流（ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ｐｏｓｔｓ— ｙｎａｐｔｉｃ ｃｕｒｒｅｎｔ，ＥＰＳＣ）的影响，探讨卜氨基丁酸 （ＧＡＢＡ）受体和甘氨酸（ｇｌｙｃｉｎｅ）受体在丙泊酚麻醉 中的作用。
较，差异有显著意义（Ｐ＜ｏ．０５）；加药后与脂肪乳剂 组比较，差异亦有显著意义（Ｐ＜ｏ．０５）（表１，图１）。
ＳＲ９５５３１组或士的宁组加入ＳＲ９５５３１或士的 宁对ＥＰＳＣ幅值基本无影响。ＳＲ９５５３１＋１００ Ｆｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组加入１００ ｔｌｍｏｌ／Ｌ丙泊酚后，ＥＰＳＣ 幅值基本无改变；加药后与脂肪乳剂组比较，差异无 显著意义，与１００ ｕｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组比较，差异有显 著意义（Ｐ＜Ｏ．０５）。士的宁＋１００ ｐｔｍｏｌ／Ｌ丙泊酚组 加入１００ ｇｍｏｌ／Ｌ丙泊酚后，ＥＰＳＣ幅值仍然下降， 最大抑制程度为３４．７％（Ｐ＜Ｏ．０５）；加药后与脂肪 乳剂组比较，差异有显著意义（Ｐ＜０．０５）（表１）。
Ｘｉｅ Ｙｕｂｏ，Ｘｕ Ｌｉｎ，Ｌｉｕ
Ｊｉｎｇｃｈｅｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ０，Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ，Ｆｉｒｓｔ Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｇｕａｎｇｘｉ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｎａｎｎｉｎｇ ５３００２ １ ＣＨＩＮＡ
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｏｎ ｔｈｅ ｗｈｏｌｅ－ｃｅｌｌ ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ｐｏｓｔｓ— ｙｎａｐｔｉｃ ｃｕｒｒｅｎｔ（ＥＰＳＣ）ｉｎ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ＣＡｌ ｐｙｒａｍｉｄａｌ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅ ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＧＡＢＡＡ ｒｅｃｅｐ－ ｔｏｒ ａｎｄ ｇｌｙｃｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ａｎｅｓｔｈｅｓｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔｓ（１３—１９ ｄ）ｗｅｒｅ ｋｉｌｌｅｄ ｂｙ ｃｅｒｖｉｃａｌ ｄｉｓｌｏｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅｓ（４００ Ｕｒｎ）ｗｅｒｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ．ＥＰＳＣｓ ｗｅｒｅ ｒｅｃｏｒｄｅｄ ｂｙ ｗｈｏｌｅ－ｅｅｌｌ ｐａｔｃｈ－ ｃｌａｍｐ ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｔｈｅ ｓｌｉｃｅｓ（ｎ一８０）ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ｅｉｇｈｔ ｇｒｏｕｐｓ．Ａｆｔｅｒ １０ ｍｉｎ ｂａｓｅｌｉｎｅ ｏｆ ＥＰＳＣｓ ｗａｓ ｒｅｃｏｒｄｅｄ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｒｕｇｓ ｗｅｒｅ ａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄ ｉｎ ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ ｆｏｒ ａｎｏｔｈｅｒ ４０ ｍｉｎ．Ｉｎ ｔｈｅ ｇａｂａｚｉｎｅ ｗｉｔｈ １００ ｔｌｍｏｌ／Ｌ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｔｈｅ ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ ｗｉｔｈ １００ ｔ＿￡ｍｏｌ／Ｌ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ ｓｌｉｃｅｓ ｗｅｒｅ ｉｎｃｕｂａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｇａｂａｚｉｎｅ ｏｒ ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ ｆｏｒ ３０ ｒａｉｎ ｂｅｆｏｒｅ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ．Ｔｈｅ ｈｏｌｄｉｎｇ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｗａｓ 一７０ ｍＶ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｉｎｔｒａｌｉｐｉｄ，ＳＲ９５５３１ ａｎｄ ｓｔｒｙｃｈｎｉｎｅ ｄｉｄ ｎｏｔ ｃｈａｎｇｅ ｔｈｅ ａｍｐｌｉｔｕｄｅ ｏｆ ＥＰＳＣ，ｂｕｔ ５０， １００ ａｎｄ ２００ ｐｍｏｌ／Ｌ ｐｒｏｐｏｆｏｌ ｒｅｄｕｃｅｄ ＥＰＳＣ ｂｙ １４．４％，５２．３％ａｎｄ ６７．８％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ａｆｔｅｒ ｈｉｐｐ—
ｉｎｈｉｂｉｔ ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ．Ｇｌｙｃｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍａｙ ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ＧＡＢＡＡ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ ｔｈｅ ＣＡｌ ｏｆ ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ．
［Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ］
ＥＰＳＣ；ＧＡＢＡ；Ｇｌｙｃｉｎｅ；Ｒｅｃｅｐｔｏｒ；Ｐｒｏｐｏｆｏｌ
我们的实验发现：脂肪乳剂不影响突触传递，丙 泊酚呈剂量依赖性的降低ＥＰＳＣ幅值，ＳＲ９５５３１和 士的宁对ＥＰＳＣ无影响；以ＳＲ９５５３１预孵的脑片， 加入丙？自酚后ＥＰＳＣ幅值无改变，这说明ＧＡＢＡＡ 受体竞争性拮抗药ＳＲ９５５３１可完全阻断丙泊酚抑 制ＥＰＳＣ的作用；以士的宁预孵的脑片，加入丙泊酚 后ＥＰＳＣ幅值仍然下降，抑制程度小于丙泊酚组，这 说明甘氨酸受体竞争性拮抗药士的宁部分阻断了丙 ？白酚对ＥＰＳＣ的抑制作用。
甘氨酸受体是另一个重要的抑制性受体，对士
万方数据
堕压丛醛堂苤查！！！！至！旦箜；！鲞箜！塑』竺！堡垒璺！！！丛堑！！：曼！￡！！翌！竺！！！！：∑！！：！！：堕！：！
的宁敏感的甘氨酸受体在脊髓和脑干的抑制性突触 传递中起重要作用，而且这种受体也广泛分布于中 枢神经系统。有报道认为丙泊酚增强脊髓水平的甘 氨酸受体功能嘲，而Ｈａｒａ等卟３以急性分离的大鼠 海马神经元为实验材料，发现丙泊酚对甘氨酸受体 无直接激活及调节作用。Ｐａｔｔｅｎ等凹１的实验表明丙 泊酚增强视神经对甘氨酸的反应，但对大鼠海马神 经元上士的宁敏感的甘氨酸反应电流无影响。
试剂与药品 实验液体配方见文献Ｅｚ］。实验 所用丙泊酚（１０ ｍｇ／ｍ１）购自Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ公司（英 国），１０％脂肪乳剂购自乐山裕恒药业公司，其余所 用药品及试剂均购自Ｓｉｇｍａ公司（美国）。
统计分析 采用Ｃｌａｍｆｉｔ ８．０、Ｏｒｉｇｉｎ ５．０和 Ｅｘｃｅｌ ２０００软件进行数据分析。ＥＰＳＣ幅值做标准 化处理，即数据以相对于每组基线均值的比值或百 分率表示为均数或均数±标准差（ｚ±ｓ）。组内比较 采用单因素方差分析，组间比较采用独立ｔ检验。 Ｐ＜ｏ．０５为差异有显著意义。