实验5 高效液相色谱应用实验
高效液相色谱法测定饲料中环丙氨嗪的含量
高效液相色谱法测定饲料中环丙氨嗪的含量周灿谭美英杨彦宁张港关静渊魏唯周玉洁张瑞祺隆雪明*(湖南省兽药饲料监察所，湖南长沙410006)摘要：本实验建立饲料中环丙氨嗪含量的分析方法。
试样采用1%三氯乙酸/乙腈（20:80）溶液提取，经MCX 固相萃取柱净化，采用磷酸缓冲盐+甲醇+乙腈（93:5:2）为流动相洗脱，C18色谱柱（4.6×250mm，5μm）分离，在检测波长214nm下进行测定，外标法定量。
在浓度0.2-50.0mg/L范围内线性关系良好（R≥0.999），在0.5μg/kg、5μg/kg和50μg/kg添加水平下，平均回收率为75.3%-97.9%，相对标准偏差均少于10%，方法定量限0.5mg/kg。
该方法灵敏、简单、重复性好，适用于饲料中环丙氨嗪的测定。
关键词：高效液相色谱法；饲料；环丙氨嗪1概述环丙氨嗪（Cyromazine，Cyr）又名灭蝇胺，其化学名为2-环丙氨基-4，6-二氨基三嗪，结构式如图1所示，属三嗪类化合物[1-2]，是一种高效抑制昆虫生长剂类杀虫剂，抑制蝇类幼虫的生长发育和羽化，1994年获农业部批准作为杀虫剂在我国上市。
2002年农业部将环丙氨嗪批准为三类新兽药。
近年来，为改善畜禽养殖场环境卫生，许多养殖户把环丙氨嗪长期应用于产蛋期饲料和肥育猪饲料中而没有休药期，易造成鸡蛋、奶和肉等动物性产品中的药物残留[3]。
环丙氨嗪被认定为具有潜在致癌性的化合物，同时研究发现环丙氨嗪在环境中具一定的迁移性，且在土壤中比较稳定，土壤中的环丙氨嗪通过环境转归再次进入食物链，对基金项目:《兽药饲料中非法添加物快速筛查方法学研究与应用》（2022JJ90055）*通信作者34不同营养级生物和人体的健康造成潜在隐患[4]。
目前测定环丙氨嗪药物的检测方法有薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法[5-6]和质谱法[7]。
暂无饲料中环丙氨嗪的检测方法。
本文拟建立一种利用高效液相色谱法快速测定饲料中环丙氨嗪的方法，为有效监控饲料中环丙氨嗪药物提供简便、快速、高效的检测方法，杜绝动物源性食品潜在风险产生，保障食品安全。
高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂
高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂张 丰（萍乡市食品药品检验所，江西萍乡 337000）摘 要：以从市场购买的15种月饼样品为研究对象，采用高效液相色谱法测定月饼中3种常见防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）的含量。
结果表明，3种防腐剂的标准曲线方程线性相关系数均在0.99以上，说明该方法可以应用于月饼中防腐剂的检测。
15种月饼样品中，有8种检出山梨酸，含量为0.016 2～0.746 0 g·kg-1；有9种检出脱氢乙酸，含量为0.080 3～0.250 0 g·kg-1；有3种未检出防腐剂；15种月饼样品中均未检出苯甲酸。
市售的15种月饼样品中3种防腐剂含量均符合最新的食品安全国家标准。
关键词：高效液相色谱法；月饼；苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸Determination of Three Preservatives in Mooncakes by HPLCZHANG Feng(Pingxiang Food Medicines Inspection Office, Pingxiang 337000, China) Abstract: Using 15 mooncake samples purchased from the market as the research object, the content of three common preservatives (benzoic acid, sorbic acid, dehydroacetic acid) in mooncakes was determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear correlation coefficients of the standard curve equations of the three preservatives were all above 0.99, indicating that the method could be applied to the detection of preservatives. Among the 15 kinds of moon cake samples, 8 kinds of sorbic acid were detected, and the content was 0.016 2～0.746 0 g·kg-1; 9 kinds of dehydroacetic acid were detected, and the content was 0.080 3～0.250 0 g·kg-1; three preservatives were not detected; benzoic acid was not detected in 15 kinds of moon cake samples. The contents of three preservatives in 15 kinds of moon cake samples sold in the market all met the latest national food safety standards.Keywords: high performance liquid chromatography; mooncake; benzoic acid; sorbic acid; dehydroacetic acid月饼又称月团、丰收饼、团圆饼等，是中秋节不可或缺的美食[1]。
高效液相色谱法实验报告
高效液相色谱法实验报告高效液相色谱法实验报告导言：高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）是一种重要的分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
本实验旨在通过HPLC技术对某种药物样品进行分析，并探讨其应用的可行性和优势。
实验方法：1. 仪器设备：HPLC仪、色谱柱、样品溶液、流动相、检测器等。
2. 实验步骤：a. 样品制备：将药物样品粉末溶解于适当的溶剂中，制备成一定浓度的样品溶液。
b. 色谱柱准备：根据样品特性选择合适的色谱柱，并进行柱平衡处理。
c. 流动相制备：根据样品特性选择合适的流动相组成，并进行气泡排除和气体除湿处理。
d. 参数设置：根据样品特性和实验要求，设置适当的流速、温度、检测波长等参数。
e. 样品注射：使用自动进样器或手动注射器将样品溶液注入色谱柱。
f. 数据采集：通过检测器采集样品在色谱柱中的峰值信号，并记录相关数据。
g. 数据处理：利用计算机软件对采集的数据进行峰面积计算、峰高度计算等处理。
实验结果：通过HPLC技术对药物样品进行分析，得到了以下结果：1. 样品在色谱柱中产生了明确的峰值信号，峰形对称且峰高度适中。
2. 根据峰面积计算，得到了样品的浓度为X mg/mL。
3. 通过与标准品的比对，确认了样品的成分和含量。
讨论：1. HPLC技术在药物分析中的应用优势：a. 高灵敏度：HPLC技术能够检测到极低浓度的物质，对于药物分析中微量成分的检测非常重要。
b. 高选择性：通过调整流动相的组成和色谱柱的特性，可以实现对复杂样品中不同成分的分离和检测。
c. 高分辨率：HPLC技术能够有效地分离样品中的各个成分，提供准确的分析结果。
d. 自动化程度高：HPLC仪器配备了自动进样器和数据采集系统，能够实现实验过程的自动化操作和数据处理，提高了实验效率和准确性。
2. 实验中可能存在的误差和改进方法：a. 样品制备过程中的误差：药物样品的溶解度、稳定性等因素可能会对实验结果产生影响。
实验5 高效液相色谱分析HBIW产品纯度
高效液相色谱分析HBIW产品纯度一、实验目的1.理解高效液相色谱原理；2.了解高效液相色谱站工作原理；3.掌握HBIW的纯度分析方法。
二、实验原理高效液相色谱（high performance liquid chromatography，HPLC）是20世纪60年代末，在经典也想色谱和气象色谱的基础上发展起来的一种具有高灵敏度、高选择性的高效快速分离分析技术。
与经典液相色谱相比较，HPLC采用微球填料（5-10μm），使用了高压输液泵，所以传质快、柱效高（可达20000-80000塔板/米），能分离多组分复杂混合物或性质及相近的同分异构体，并可实现快速分离。
高效液相色谱还可以称为高压液相色谱（high pressure liquid chromatography），高速液相色谱（high speed liquid chromatography）、高分力度液相色谱（high resolution liquid chromatography）或现代液相色谱（modern liquid chromatography）。
HPLC法原理：一固液色谱法为例。
固定相是固相吸附剂，它们是一些多孔性的极性微粒物，如硅胶、氧化铝等。
它们的表面存在着分散的吸附中心，溶质分子流动相分子在吸附剂表面呈现的吸附活性中心上进行竞争吸附，这种作用还存在于不同荣哲分子间，以及同一溶质分子中不同官能团之间。
由于这些竞争作用，便形成不同溶质在吸附剂表面的吸附、解吸平衡，这就是液相色谱具有选择性分离能力的基础。
本实验所采用的HPLC就是液相色谱。
HPLC色谱仪简介：高效液相色谱仪分为分析型和制备型，虽然它们的性能各异，应用范围不同，但其基本组件类似。
主要部件如下：储液罐、高压输液泵、进样装置、色谱柱、检测器数据处理装置等。
HPLC法的特点：高效液相色谱采用液体流动相，流动相也影响分离过程，这对分离的控制和改善提供了额外的因素，它能分析气象色谱不能分析的高沸点有机物、高分子和热稳定性差的化合物以及具有生物活性的物质。
高效液相色谱-串联质谱法检测动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量
高效液相色谱-串联质谱法检测动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量陈 盛（上海必诺检测技术服务有限公司，上海 201114）摘 要：建立高效液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量的方法。
样品采用QuEChERS法净化，以0.1%甲酸水溶液（含10 mmol乙酸铵）及乙腈为流动相进行梯度洗脱，通过Poroshell 120 EC-C18液相色谱柱分离，以电喷雾正离子（ESI+）多反应监测模式对目标物进行定性定量分析。
该方法在2～200 μg·L-1线性良好，相关系数均＞0.992，方法检出限为0.01 mg·kg-1，定量限为0.03 mg·kg-1。
在加标水平为0.03 mg·kg-1、0.10 mg·kg-1、0.30 mg·kg-1时，方法的回收率为80.3%～94.3%，RSD在4.3%～8.7%。
该方法操作简便、检测效率高，分离目标物效果好，可以满足动物性食品中氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯残留量的检测。
关键词：高效液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）；动物性食品；氟吡菌胺；氟吡菌酰胺；螺虫乙酯High Performance Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry for the Determination of Fluopicolide, Fluopyram and Spirotetramat Residues in Animal FoodCHEN Sheng(Shanghai Bino Testing Service Co., Ltd., Shanghai 201114, China)Abstract: Establish a method for the determination of residues of fluopicolide, fluopyram and spirotetramat in animal food by high-performance liquid chromatography tandem mass spectrometry. The sample was purified using the QuEChERS method, with 0.1% formic acid aqueous solution (containing 10 mmol ammonium acetate) and acetonitrile were used as mobile phases for gradient elution, separated by Poroshell 120 EC-C18 liquid-phase column, and the target substance was qualitatively and quantitatively analyzed by electrospray positive ion (ESI+) multi reaction monitoring mode. This method had good linearity in the linear range of 2～200 μg·L-1, and the correlation coefficients were＞0.992, the detection limit of the method is 0.01 mg·kg-1, and the quantitative limit is 0.03 mg·kg-1. At the spiking levels of 0.03 mg·kg-1, 0.10 mg·kg-1, and 0.30 mg·kg-1, the recovery rate of the method is 80.3% to 94.3%, and the RSD is 4.3% to 8.7%. This method is easy to operate, has high detection efficiency, and has good separation effect of the target substance, which can meet the detection of residues of fluopicolide, fluopyram, and spirotetramat in animal food.Keywords: high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS); animal food; fluopicolide; fluopyram; spirotetramat氟吡菌胺、氟吡菌酰胺、螺虫乙酯均属于广谱类杀菌剂。
高效液相色谱法在化妆品检测中的应用研究
62《轻工标准与质量》2019年第3期捍卫生活品质 推动产业升级高效液相色谱法在化妆品检测中的应用研究刘敬玄（广东产品质量监督检验研究院，广东广州 510670）摘要：化妆品当中有很多对人皮肤及身体有危害的物质成分，如含量超高或是使用了禁用物质都会严重影响皮肤健康，通常使用的检测方法是高效液相色谱法。
为此本文章主要对高效液相色谱法其在化妆品各项物质含量检测中的具体应用实施了深入的研究和分析，并同时对这一检测法中存在的优点和缺点进行了汇总和总结，望可以为化妆品的质量提升提供相应的参考依据。
关键词：高效液相色谱法；化妆品；有害物物质含量；应用中图分类号：TQ658 O657.7+2 文献标识码：A DOI：10.19541/ki.issn 1004-4108.2019.03.016计量与检测在高效液相色谱仪构成部分中的储液器构件当中，运行时流动相会在高压泵的作用下而进入到系统中，随后样品溶液会途经进样器构件而流到流动相内，之后，通过流动相，进入色谱柱当中，利用检测仪，可以检测出样品成分的浓度。
现时期因为化妆品需求的不断提升，市场对于产品功效需求也在不断提高，特别是防紫外线、美白祛斑功效的化妆品受到很多人的喜爱。
因为化妆品是与皮肤直接接触的，如禁止使用的一些着色剂和雌激素用在化妆品当中，一定会造成反作用，对人的皮肤产生损害，为此对于这类物质含量的检测便显得特别重要。
1化妆品中多种着色剂检测在化妆品当中，含有很多化学成分，因为着色度和遮盖度都非常强，为此合成的色素被大量的应用在化妆品当中，还有更为严重的，有些化妆品当中还含有禁止使用的色素成分。
这种物质通常具有较大毒性，严重的情况下会致癌和造成畸形等现象。
结合化妆品的相关规范和用料标准，对一到四类着色剂禁止使用，在化妆品的生产过程中，较易形成着色剂超标使用的情况，因此对于这几类着色剂的用量进行检测是非常有必要的。
可使用HPLC 来对I 类着色剂实施检测，通过净化、离心和萃取等环节，选择使用柱分离和DAD 检测，获得十种着色剂及质量浓度系数。
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度
高效液相(HPLC)荧光法同时测定人血浆中4种硫醇物的浓度杨涛;沈杰【摘要】目的建立同时测定人血浆中半胱氨酸(cysteine,Cys)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、半胱氨酰甘氨酸(cysteinylglycine,CysGly)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)等4种硫醇物的高效液相色谱法(highperformance liquid chromatography,HPLC).方法血浆经磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline,PBS)稀释后,用三(2羧乙基)膦盐酸盐[tris (2 carboxyethyl) phosphine hydrochloride,TCEP]还原,用三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)溶液进行蛋白沉淀,再用7氟苯呋咱4硫酸铵盐(7 fluorobenzofurazan-4 sulfonic acidammonium salt,SBD F)进行衍生化反应,荧光检测器检测.色谱条件:色谱柱为Kromasil C18 (250 mm×4.6mm,5 μm),柱温29℃;流动相为甲醇:0.1 mol/L醋酸盐缓冲液(pH=4.5,3.5:96.5,V/V),流速为0.8 mL/min,等度洗脱.激发波长385 nm,发射波长515 nm.采用外标法定量.结果 Cys、Hcy、CysGly和GSH的线性范围分别为50～800 μmol/L、4～64 μmol/L、10～160 μmol/L和2.5～40μmol/L.Cys、Hcy、CysGly和GSH的最低检测浓度分别为2.5 μmol/L、1.0 μmol/L、1.0 μmol/L和1.0 μmol/L.各组分日内、日间精密度RSD均＜12％.平均回收率为95.01 ％～116.17％.结论该方法具有检测时间短、灵敏性高、精密度和准确度好的特点,适用于临床人血浆中硫醇物浓度的常规检测.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2014(041)005【总页数】6页(P679-684)【关键词】高效液相色谱法(HPLC);同型半胱氨酸(Hcy);半胱氨酰甘氨酸(CysGly);半胱氨酸(Cys);谷胱甘肽(GSH)【作者】杨涛;沈杰【作者单位】复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040;复旦大学附属华东医院药剂科上海200040;上海市老年医学研究所老年临床药理研究室上海200040【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2生物硫醇，如半胱氨酸（cysteine，Cys）、同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）、半胱氨酰甘氨酸（cysteinylglycine，CysGly）和谷胱甘肽（glutathione，GSH），在生物组织和体液中广泛分布，并且在生物系统中起着非常重要的作用［1-2］。
高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量
高效液相色谱法测定清肺颗粒中甘草酸的含量引言清肺颗粒是一种中药颗粒剂，常用于治疗咳嗽、喘息等呼吸系统疾病。
其中的甘草酸作为主要有效成分之一，具有镇咳、平喘、化痰等功效。
准确测定清肺颗粒中甘草酸的含量对于保证其药效，具有重要意义。
本文将利用高效液相色谱法对清肺颗粒中甘草酸的含量进行测定。
实验方法1. 仪器和试剂本实验使用的仪器主要包括: 高效液相色谱仪、电子天平、PH计等；试剂有：甘草酸标准品、乙腈、甲醇、磷酸、二甲基亚砜等。
2. 样品制备取清肺颗粒0.5g，加入50ml的乙醇水溶解液中，超声提取3次，每次15分钟，离心，取上清液，合并，浓缩至1ml，称取1ml装入10ml量瓶，加纯水至刻度。
3. 色谱条件色谱柱：C18色谱柱；流动相：甲醇-0.05%磷酸溶液（25:75）；检测波长：254nm；柱温：25℃；流速：1.0ml/min。
4. 色谱峰识别用甘草酸标准溶液进行色谱峰识别，测定其保留时间。
5. 色谱峰积分将制备好的清肺颗粒提取液进行色谱测定，测得其峰面积值。
6. 含量计算由色谱峰面积值和标准曲线得出清肺颗粒中甘草酸的含量。
结果与分析通过上述实验方法，我们测定了清肺颗粒中甘草酸的含量。
例如：得到清肺颗粒中甘草酸的含量为Xmg/g。
根据国家药典规定的标准范围，我们可以判断该批次的清肺颗粒中甘草酸的含量是否符合要求。
通过对多个批次的清肺颗粒进行测试，得出结果稳定可靠。
讨论通过本次实验，我们成功地利用高效液相色谱法对清肺颗粒中甘草酸的含量进行了测定。
该方法简单、精确、灵敏，能够满足对清肺颗粒中甘草酸含量的要求。
该方法还可以应用于其他中药颗粒剂中甘草酸含量的测定，具有重要的实际应用意义。
高效液相实验报告
篇一：高效液相色谱实验报告高效液相色谱实验报告一、实验目的1了解液相色谱的发展历史及最新进展 2 学习液相色谱的基本构造及原理3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过hplc分离测定来对目标化合物的分析鉴定。
二、实验原理液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。
当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。
液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。
高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。
80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。
三、高效液相色谱的分类吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法四、高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。
1 输液系统：包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。
贮液装置用于存贮足够量、符合hplc要求的流动相。
高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。
2 进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。
液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。
进样系统包括取样、进样两项功能。
3 分离柱：色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。
商品化的hplc微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。
高效液相色谱法测定糕点和果汁中纳他霉素的方法学验证
高效液相色谱法测定糕点和果汁中纳他霉素的方法学验证卢 薇，周美丽（宝鸡市食品药品检验检测中心，陕西宝鸡721000）摘 要：为了验证宝鸡市食品药品检验检测中心是否有能力开展纳他霉素新方法《食品安全国家标准食品中纳他霉素的测定》（GB 5009.286—2022）的检测项目。
本文使用高效液相色谱仪，对糕点和果汁中纳他霉素进行分析，外标法定量，验证了本方法的线性关系、方法检出限、精密度和回收率。
结果表明，纳他霉素在0.5～10.0 μg·mL-1呈现良好的线性关系，方法检出限、精密度和回收率均能达到标准方法要求。
因此，本实验室具备检测纳他霉素的能力。
关键词：纳他霉素；外标法；高效液相色谱仪；方法学验证Methodological Validation of High Performance Liquid Chromatography for the Determination of Natamycin inPastries and Fruit JuiceLU Wei, ZHOU Meili(Baoji Food and Drug Inspection and Testing Center, Baoji 721000, China) Abstract: In order to verify whether the Baoji Food and Drug Inspection and Testing Center has the ability to carry out the testing project of the new method GB 5009.286—2022 for natamycin. This article uses a high-performance liquid chromatography to analyze natamycin in pastries and fruit juice. The external standard method is used for quantification to verify the linear relationship, detection limit, precision, and recovery rate of this method. The results showed that natamycin exhibited a good linear relationship within the range from 0.5 μg·mL-1 to 10 μg·mL-1, and the detection limit, precision, and recovery rate of the method can meet the requirements of the standard method. Therefore, our laboratory has the ability to detect natamycin.Keywords: natamycin; external standard method; high-performance liquid chromatography; methodology validation纳他霉素，又名匹马霉素，是一种外观呈近白色或奶油黄色，无臭无味的结晶粉末，它是天然的多烯大环内酯类物质，对大部分的霉菌和酵母菌都具有极强的抑制作用[1]。
高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量
高效液相色谱串联质谱法测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量宋祯彦1，何攀2，李富周1，贺春香1，余婧萍1，成绍武11.中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室，湖南中医药大学，湖南长沙 410208；2.中南粮油食品科学研究院有限公司，湖南粮食集团有限责任公司，湖南长沙 410005摘要：目的 建立测定当归芍药散提取物和含药血清中3种活性成分含量的高效液相色谱串联质谱方法。
方法 药物提取物样品经甲醇-水（1∶1，V/V）溶液溶解、离心、净化后过0.45 μm滤膜，血清样品适当稀释、过膜后用高效液相色谱串联质谱法测定。
色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18（100 mm×2.1 mm，2.7 μm），茯苓酸流动相为乙腈-0.5 mmol/L乙酸铵水溶液（9∶1，V/V），阿魏酸和芍药苷以乙腈-5 mmol/L乙酸铵水溶液为流动相梯度洗脱，流速0.4 mL/min，柱温35 ℃，进样量5 μL，采用电喷雾离子源，负离子模式，干燥气温度350 ℃，干燥气流速12 L/min，检测方式为多反应监测。
结果 当归芍药散中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸分别在0.1～20.0 μg/mL、1～100 μg/mL、0.1～20.0 μg/mL范围内线性关系良好，加样回收率高，重复性好。
当归芍药散提取物中阿魏酸、芍药苷和茯苓酸含量分别为（127.6±14.9）μg/g、（6081.8±468.0）μg/g和（14.7±0.75）μg/g，当归芍药散含药血清中阿魏酸和芍药苷含量分别为（0.026±0.004）μg/g和（0.61±0.07）μg/g。
结论 本研究建立的方法样品处理简单，方法特异性强，精确度高，重复性偏差小，回收率高，可用于当归芍药散提取物和含药血清中活性成分的质量控制。
关键词：高效液相色谱串联质谱法；阿魏酸；芍药苷；茯苓酸；当归芍药散；含药血清中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1005-5304(2021)01-0092-08DOI：10.19879/ki.1005-5304.202005099 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Content Determination of Three Active Components in Danggui Shaoyao Powder Extractsand Its Drug-containing Serum by HPLC-MS/MSSONG Zhenyan1, HE Pan2, LI Fuzhou1, HE Chunxiang1, YU Jingping1, CHENG Shaowu11. Key Laboratory of Hunan Province for Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Prevention andTreatment of Cardio-cerebral Diseases, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha 410208, China;2. Research Institute of Zhongnan Grain and Oil Foods, Hunan Grain Group Co., Ltd, Changsha 410005, ChinaAbstract:Objective To establish a method for the determination of three active components in Danggui Shaoyao Powder extracts and its drug-containing serum by HPLC-MS/MS. Methods The extract samples were dissolved in methanol-water (1:1, V/V) solution, centrifuged and purified, and then passed through a 0.45 μm filter membrane. Serum samples were appropriately diluted, passed through the membrane and determined by HPLC-MS/MS. The column was Agilent Poroshell 120 EC-C18 (100 mm × 2.1 mm, 2.7 μm). The mobile phase of porcine acid was acetonitrile- 0.5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution (9:1, V/V), and the mobile phase of ferulic acid and paeoniflorin was acetonitrile- 5 mmol/L ammonium acetate aqueous solution (gradient elution). The flow rate was 0.4 mL/min; the column temperature was 35 ℃; the injection volume was 5 μL. Electrospray ion source and negative ion mode were used; drying gas temperature was 350 ℃; drying gas flow rate was 12 L/min; detection method was multiple reaction monitoring. Results The linear relationship of ferulic acid, paeoniflorin and基金项目：国家自然科学基金（81774129、82004184）；湖南省自然科学基金面上项目（2018JJ2296）；湖南省自然科学基金青年基金（2019JJ50441）；湖南省高校创新平台开放基金项目（19K065）；湖南省教育厅科学研究项目（18B246）；湖南创新型省份建设专项（2019RS1064）通讯作者：成绍武，E-mail：****************.cnpachymic acid in Danggui Shaoyao Powder was good in the range of 0.1–20.0 μg/mL, 1–100 μg/mL, and 0.1– 20.0 μg/mL, respectively. The standard recovery was high and the repeatability was good. The contents of ferulic acid, paeoniflorin and pachymic acid in Danggui Shaoyao Powder extracts were (127.6±14.9)μg/g, (6081.8±468.0)μg/g, and (14.7±0.75)μg/g, respectively. The contents of ferulic acid and paeoniflorin in Danggui Shaoyao Powder- containing serum were (0.026±0.004) μg/g and (0.61±0.07) μg/g, respectively. Conclusion The method established in this study is simple in sample processing, strong in method specificity, high in accuracy, small in repeatability deviation, and high in recovery rate, and can be used for the quality control of the active components in the Danggui Shaoyao Powder extracts and drug-containing serum.Keywords: HPLC-MS/MS; ferulic acid; paeoniflorin; pachymic acid; Danggui Shaoyao Powder; drug-containing serum当归芍药散出自《金匮要略》，全方由当归、芍药、川芎、茯苓、白术和泽泻6味药组成，具有滋补肝肾、活血化瘀、化痰通络功效。
高效液相色谱法测定面包、糕点及饼干中脱氢乙酸及其钠盐的含量
分析检测高效液相色谱法测定面包、糕点及饼干中脱氢乙酸及其钠盐的含量夏林林，双 杨，陈银华，吴磊磊，朱 婷*（十堰市食品药品检验检测所，湖北十堰 442000）摘 要：目的：建立快速、简便地检测面包、糕点及饼干中脱氢乙酸及其钠盐含量的高效液相色谱法。
方法：参照并优化《食品安全国家标准食品中脱氢乙酸的测定》（GB 5009.121—2016）中的前处理方法，采用C18色谱柱对样品进行分离，紫外检测器进行检测。
结果：脱氢乙酸在1.0～200.0 μg·mL-1质量浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系，相关系数为1.000 0；方法检出限为0.001 g·kg-1，定量限为0.003 g·kg-1；在3个加标水平下，回收率为97.3%～102.1%，RSD为0.21%～1.42%，均满足标准要求。
结论：该方法具有快速、简便、准确度高等特点，适用于面包、糕点及饼干中脱氢乙酸及其钠盐含量的检测。
关键词：脱氢乙酸；高效液相色谱；面包；糕点；饼干Determination of Dehydroacetic Acid and Its Sodium Salt in Bread, Pastries and Cookies by High Performance LiquidChromatographyXIA Linlin, SHUANG Yang, CHEN Yinhua, WU Leilei, ZHU Ting*(Food & Drug Inspection and Testing Institute in Shiyan, Shiyan 442000, China) Abstract: Objective: To establish a high performance liquid chromatography (HPLC) method for the rapid and simple determination of dehydroacetic acid and its sodium salt in bread, pastries and cookies. Method: The pretreatment method in GB 5009.121—2016 was referred to and optimized, and the samples were separated on a C18 column and detected by an ultraviolet detector. Result: Dehydroacetic acid showed a good linear relationship with the peak area in the mass concentration range of 1.0～200.0 μg·mL-1 with a correlation coefficient of 1.000 0. The limit of detection of the method was 0.001 g·kg-1, and the limit of quantification was 0.003 g·kg-1. The recoveries ranged of 97.3%～102.1% with RSD of 0.21%～1.42% at three spiked levels, all meeting the standard requirements. Conclusion: The method is rapid, simple, accurate and suitable for the determination of dehydroacetic acid and its sodium salt in bread, pastries and cookies.Keywords: dehydroacetic acid; high performance liquid chromatography; bread; pastry; cookie脱氢乙酸，别名α,γ-二乙酰基乙酰乙酸，固态呈白色或淡黄色结晶粉末，无臭、无味，是一种低毒高效防腐、防霉剂。
实验五 层析实验
分子量适用范围为1，500～30，000。
血红蛋白本身有红色，鱼精蛋白无色，故将黄色的DNP（2，4–二 硝基氟苯）偶联于鱼精蛋白，使其着色，便于观察。
【操作步骤】 1．凝胶的准备 称取l g Sephadex G–50，置于锥形瓶中，加蒸馏水30ml， 沸水浴中放置1小时，冷至室温备用。 2．装柱 取直径0.8～1.2cm，长25～30cm的层析柱一支，垂直安装于铁 架台上。底部填少许玻璃纤维，下部装一“再”形夹以调节流速（见 图4-1）。首先关闭“再”形夹，自顶部缓缓加入上述备用的 Sephadex G–50 悬液，待底部凝胶沉积1～2cm时，打开“再”形夹， 并边缓加Sephadex G–50悬液，边调整适当流速，至凝胶层积集约 18cm高，停止加Sephadex G–50悬液，连通洗脱液，进行平衡（调整 流速）。操作过程中，应防止气泡进入和凝胶分层现象。 3．样品制备 临上样前，将0.3ml血红蛋白溶液和0.5ml DNP–鱼精蛋白溶 液混匀即可。 4．加样与洗脱 切断洗脱液，当层析柱中液面下降与凝胶表层平齐时， 即用滴管将样品液缓缓沿柱壁加入，不使凝胶表层扰动，待样品液面 与凝胶表层平齐时，再加少许蒸馏水，开始洗脱。注意观察层析柱中 红色的血红蛋白与黄色的DNP–鱼精蛋白分离的情况，记录现象。
【操作步骤】
1．填料的预处理：在一只100ml烧杯中，置约10g树脂，加2M HCl 25ml，
搅匀，放置2小时，倾弃上层酸液，蒸馏水洗3次，再加2 M NaOH 25ml， 搅匀，放置2小时，倾弃上层碱液，用蒸馏水洗至中性（pH试纸检查）。 将树脂悬浮于大约50ml pH 2.2的0.1M柠檬酸缓冲液中备用。
影响氨基移换过程的观察，因此在反应体系中添加一碘醋酸(或 一溴醋酸)以抑制谷氨酸和丙酮酸的其他代谢过程。
高效液相色谱法测定抗体偶联药物中盐酸三-(2-羧乙基)膦残留量
高效液相色谱法测定抗体偶联药物中盐酸三-(2-羧乙基)膦残留量浙江博锐生物制药有限公司浙江台州318000摘要：目的建立一种检测抗体偶联药物中盐酸三-(2-羧乙基)膦（TCEP-HCl）残留量的高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography ，HPLC），并进行验证。
方法采用Luna Omega 5µm Polar C18 100Å色谱柱（4.6*250mm 5μm）；流动相A：20Mm磷酸二氢钾水溶液（pH2.2）,流动相B:乙腈；流速：1.0ml/min；检测器/波长：VWD/214nm；进样量：20μl。
对该方法的系统适用性、专属性、准确度、线性、检测限、定量限及耐用性进行验证。
应用建立的方法检测4批抗体偶联药物原液/成品中盐酸三-(2-羧乙基)膦（TCEP-HCl）的残留量。
结果试验的系统适用性目标峰理论塔板数均在 16000 以上，拖尾因子在1.0~1.2范围内；含 TCEPO的原液与H2O2溶液反应后的色谱图保留时间在 7 min 处出现吸收峰，不含 TECPO的原液未见该峰；TCEP 标准液的浓度在0.25~ 250μg / ml 范围内，与峰面积呈良好线性关系，回归方程为Y=5.6715x+0.5890，r=1.0000；加 TCEP 的 4 种浓度的原液与H2O2溶液反应后的回收率为 97% ~ 115%，RSD 为 4.6%；检测限为0.85 μg /ml，定量限为2.5μg / ml；溶液配制后放置0、7、14和24小时后测定主峰面积RSD为0.5%；加入不同体积H2O2氧化，方法耐用性良好。
结论该方法具有良好的线性、专属性、准确性及耐用性，具有更简单的样品前处理方法和更好的可普及性，可用于抗体偶联药物中 TCEP残留量的检测。
关键词：高效液相色谱法；抗体偶联药物；盐酸三-(2-羧乙基)膦；残留量Determination of residual EDTA disodium salt content in antibody-conjugated drugs by high performance liquid chromatographyBioRay Pharmaceutical Co., Ltd，TaiZhou 318000，ZheJiangProvince,ChinaAbstract: Objective To establish and verify a High Performance Liquid Chromatography (HPLC) method for the detection of tri -(2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP-HCl) residues in antibody - coupled drugs.Methods Luna Omega 5µm Polar C18 100Å column (4.6*250mm 5μm) was used. Mobile phase A: 20Mm potassium dihydrogen phosphate aqueous solution (pH2.2), mobile phase B: acetonitrile; Flow rate: 1.0ml/min; Detection and wavelength: VWD/214nm; Sample size: 20μl. The system applicability, specificity, accuracy, linearity, detection limit, quantitative limit and durability of the method were verified. The established method was used to detect tri -(2-carboxyethyl) phosphine hydrochloride (TCEP-HCl) residues in 4 batches of antibody-coupled drug stock/finished product.Results The number of theoreticalplates at the target peak of system applicability is more than 16000, and thetrailing factor is in the range of 1.0~1.2.The chromatographic retention time of TCEPO containing stock solution and H2O2solution showed an absorption peak at 7 min, which was not found in the stock solution without TECPO. The concentration of TCEP standard solution is in the range of 0.25~ 250μg/ml, and has a goo d linear relationship with the peak area. The regression equation is Y=5.6715x+0.5890,r=1.0000. The recoveries of 4 concentrations of stock solution with TCEP and H2O2 solution were 97% ~ 115%, RSD were 4.6%. The limit of detection was 0.85 μg /ml, and the limit of quantification was 2.5μg /ml. The main peak area RSDS of 0.5% were measured at 0, 7, 14 and 24 hours after the solution was prepared. Adding different volumes of H2O2 oxidation, the method has good durability.Conclusion The method has good linearity, specificity, accuracy and durability, and has a simpler sample pretreatment method and method universality, which can be used for the detection of TCEP residues in antibody coupled drugs.Key Words:High Performance Liquid Chromatography ;Antibody-conjugateddrugs;TCEP-HCl; Residual content抗体偶联药物（antibody drug-conjugates，ADC）是采用特定的连接子将抗体和具有生物活性的小分子细胞毒药物连接起来，其主要组成成分包括抗体、连接子和小分子细胞毒药物。
高效液相色谱法测定黄体酮及有关物质
第51卷第5期 辽 宁 化 工 Vol.51，No. 5 2022年5月 Liaoning Chemical Industry May，2022基金项目： 2019 年扬州工业职业技术学院校级科研课题（项目编号：2019xjzk016）。
收稿日期： 2021-10-13高效液相色谱法测定黄体酮及有关物质陈丽萍，周慧，张信，尤兴田（扬州工业职业技术学院 化学工程学院，江苏 扬州 225127）摘 要： 采用Agilent 1260色谱柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm），以甲醇-乙腈-水（25∶35∶40）为流动相，流速1.0 mL ·min -1，柱温30 ℃，检测波长200 nm，高效液相色谱法测定黄体酮的含量及有关物质。
结果表明：黄体酮与氢化物、水化物等杂质分离度良好，黄体酮在0.25 ~ 1 200 μg·mL -1的质量浓度范围内呈良好的线性关系（R 2 = 0.999 93，n =7），水解物在0.26 ~ 104 μg·mL -1范围内呈良好的线性关系（R 2 = 1.000 0，n = 6），氢化物在 0.26 ~ 105 μg·mL -1的质量浓度范围内呈良好的线性关系 （R 2 =1.000 0，n =6），各杂质的控制限度均达到定量限。
本法专属性强，方法准确、灵敏，操作简便，可作为黄体酮的质量控制方法。
关 键 词：高效液相色谱法；黄体酮；有关物质中图分类号：TQ460.7+2 文献标识码： A 文章编号： 1004-0935（2022）05-0730-03黄体酮是孕激素类药物，生理效应及临床治疗作用广泛，应用历史悠久。
目前，黄体酮在《中国药典》2015年版二部中已有收载，高效液相色谱法测定其含量与有关物质的检测波长为241 nm [1-2]。
鉴于黄体酮在生产中引入的中间体氢化物（5-孕甾烯-3β-醇-20-酮3-醋酸酯）和水化物（5-孕甾 烯-3β-醇-20-酮）在药典条件下不能检测，为保证各有关物质快速准确的测定，本文创建了高效液相色谱法波长200 nm 的检测方法，有利于更好地提高黄体酮质量和生产的稳定性，该方法未见药典收载，也未见文献报道。
高效液相色谱法测定马来酸、丁二酸和富马酸的含量
第 50 卷 第 5 期2021 年 5 月Vol.50 No.5May. 2021化工技术与开发Technology & Development of Chemical Industry高效液相色谱法测定马来酸、丁二酸和富马酸的含量原晓丽，夏伦超，恺 峰，李国栋，淡玄玄（新疆至臻化工工程研究中心有限公司，新疆 石河子 832000）摘 要：建立了高效液相色谱法测定马来酸、丁二酸和富马酸的方法。
采用Agilent XDB-C18色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相为0.1%磷酸水溶液和甲醇混合液（V∶V=88∶12），流速0.5mL·min -1，进样量10μL，柱温30℃，检测波长210nm，采用外标法定量。
结果表明，3种有机酸的分离度好，线性范围内，各酸的浓度与色谱峰面积的线性关系良好，相关系数为0.9991~0.9999，平均加标回收率为80%~10%，RSD（n =3）在1%以下。
该方法简便快速，分离效果好，精密度高，是同时分离测定3种有机酸的有效方法。
关键词：高效液相色谱法；有机酸；含量中图分类号： O 657.7+2 文献标识码：A 文章编号：1671-9905(2021)05-0064-03基金项目：第八师石河子市科技计划项目（2019ZH14）作者简介：原晓丽，E-mail:*****************收稿日期：2021-02-18丁二酸俗称琥珀酸，是一种重要的有机化工原料及中间体，主要应用于制药、农药、食品、合成塑料、橡胶、防护涂料、染料和其他工业中[1]。
丁二酸的纯度和品质对其应用领域有直接的影响，市场要求的丁二酸纯度一般大于95 %[2]，国标工业用丁二酸的优等品纯度≥99.7 %[3]，聚合级的纯度要求更高。
目前丁二酸的生产工艺主要有电解法、生物法、加氢法[4]，但这3种工艺在实际生产中往往副产一些其他的有机酸，导致丁二酸的纯度不足，成品质量不合格。
高效液相色谱法测定花生中β-_谷甾醇的含量
分析检测高效液相色谱法测定花生中β-谷甾醇的含量闫超杰1，章 程1，张旭东1，王诗琦1，孙晓东2*（1.锦州海关综合技术服务中心，辽宁锦州 121013；2.大连民族大学 环境与资源学院，辽宁大连 116600）摘 要：目的：建立超声波辅助萃取-高效液相色谱法快速检测花生中β-谷甾醇的分析方法，并应用该方法对辽宁、山东和河南3个花生种植大省不同品种花生中β-谷甾醇的含量进行分析测定。
方法：样品经85%乙醇溶液（乙醇∶水=85∶15，V∶V）超声提取，离心，中性氧化铝去色素和杂质后，经Agilient ZORBAX SB-C18色谱柱分离，二极管阵列检测器检测，外标法定量。
结果：β-谷甾醇在1.0～100.0 mg·L-1范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为y=10.070x+2.348（r=0.999 9）；平均加标回收率为88.5%～106.9%，相对标准偏差为2.31%～4.73%（n=6），检出限为0.5 mg/100 g。
运用该方法对30个花生样品进行检测，不同品种花生β-谷甾醇含量在31.6～77.0 mg/100 g。
结论：该方法简单快捷、重复性好、准确度和灵敏度较高，适用于花生中β-谷甾醇的快速检测。
关键词：花生；β-谷甾醇；超声波辅助萃取；高效液相色谱法（HPLC）Determination of β-Sitosterol in Peanuts by High PerformanceLiquid ChromatographyYAN Chaojie1, ZHANG Cheng1, ZHANG Xudong1, WANG Shiqi1, SUN Xiaodong2*(prehensive Technical Service Center of Jinzhou Customs, Jinzhou 121013, China; 2.College of Environmentand Bioresources, Dalian Minzu University, Dalian 116600, China)Abstract: Objective: To establish a rapid analytical method for the determination of β-sitosterol in peanuts by ultrasonic-assisted extraction-high performance liquid chromatography (HPLC).The method was applied to determine the contents of β-sitosterol in different peanut varieties from Liaoning, Shandong and Henan province. Method: The samples were extracted with 85% ethanol (ethanol∶water=85∶15, V∶V) by ultrasonic, after centrifugation and removing pigments and impurities with neutral alumina, separated by Agilient ZORBAX SB-C18 column, and then detected by diode array detector, and quantitated by external standard method. Result: β-sitosterol showed a good linear relationship with peak area in the range of 1.0～100.0 mg·L-1, and the regression equation was y=10.070x+2.348 (r=0.999 9). The average recoveries were 88.5%～106.9%, with RSD of 2.31%～4.73%, and the limit of detection was 0.5 mg/100 g. The method was used to detect 30 peanut samples, the content of the content of β-sitosterol in different peanuts ranged from 31.6 mg/100 g to 77.0 mg/100 g. Conclusion: The method has the advantages of simple, convenient, good repeatability, high accuracy and sensitivity, which can meet the requirements of rapid analysis of β-sitosterol in peanuts.Keywords: peanut; β-sitosterol; ultrasonic-assisted extraction; high performance liquid chromatography (HPLC)花生是我国重要的油料和经济作物[1]，目前我国花生种植面积排全球第二位，年总产量居世界首位[2-3]。
常职院仪器分析测试技术教案5-6高效液相色谱法：分离条件的选择与优化
液相色谱分析法模块之任务6分离条件的选择与优化教学任务口进行多环类芳烧类混合物测定的分离条件选择试验口根据实验数据，归纳总结条件选择的方法，选择的最佳分离条件□评价色谱柱的性能，了解色谱柱性能的评价方法教学方法□引探和讲练结合教学学时□每20人为一个学习组，4人一台液相色谱仪，分组循环操作，整个任务需6学时。
教学设计问题：如何选择分离苯、禁、联苯的最佳分离条件？I汇总所查资料，师生共同讨论，教师总结实验步骤学生完成分离为件选择试验*分组讨论，选择苯、禁、联苯最佳的分离条件学生讨论并得出结论，教师总结讲解影响色谱分离度的因素I色谱柱性能评价方案的建立学生完成色谱柱性能的评价■学生根据实验讨论，教师总结色谱柱的评价方法I下次课程问题：果汁中防腐剂含量的测定？如何验证该方法的可行性？课程引入□问题：苯、蔡、联苯为芳烧类混合物，如何选择一个最佳的色谱分离条件，既能达到良好的分离度，又能在短时间内完成分析任务？（上次课结束后即布置并安排学生在课后查阅资料）□学生根据所查资料提出解决方案并进行现场讨论以确定每组的实验方案。
融师引导学生，指出分离条件包括的内容，如流动相比例、流速的调节、色谱柱的选择等。
）□根据学生已能熟练操作液相色谱仪，并有了系统的液相色谱知识，因此，本项目经分组讨论后，直接进行操作。
学生操作：苯、蔡、联苯最佳分离条件的选择（本过程教师学生自行操作，但在操作过程中，教师是辅导者，及时指正解惑）□改变流动相的比例，进行条件实验□改变流速，进行条件实验□记录下样品名对应的文件名，同时打印出经优化的色谱图和分析结果□通过处理数据，运用逻辑思维能力和判断能力对各组实验数据进行取舍学生对测定过程提问、相互讨论与教师的阶段总结（本过程教师对学生的疑惑进行解释）□在操作中，每改变一次流动相比例，仪器均需平衡后方可进样。
□分离度、理论塔板数和分析时间，作为判断分离条件合适的参考参数。
□学生根据实验数据，每组得出苯、蔡、联苯最佳的分离条件。
高效液相色谱法测定水中镁离子实验报告
高效液相色谱法测定水中镁离子实验报告一、引言水中镁离子的含量是衡量水质优劣的重要指标之一。
因此，准确测定水中镁离子的含量对于环境监测和水资源管理具有重要意义。
本实验旨在利用高效液相色谱法（HPLC）测定水中镁离子的含量。
二、实验方法及步骤1. 仪器与试剂准备：1.1 准备HPLC仪器设备，包括色谱柱、流速泵、进样器和检测器等。
1.2 购买或配制实验所需的色谱柱填料及镁离子的标准品（浓度为C1）。
1.3 配制用于样品前处理的溶液，如去离子水等。
2. 样品的前处理：2.1 收集待测水样，注意样品的采集应遵循标准采样方法。
2.2 将待测水样过滤，以去除悬浮物和颗粒杂质。
2.3 若水样中镁离子浓度较高，可采用稀释方法使其浓度适宜。
3. 样品注射与测定：3.1 将样品注入HPLC进样器中，确保注射量准确且稳定。
3.2 设置HPLC流动相，通常为纯水和有机溶剂的混合物。
3.3 根据实验需要，设置合适的流速和温度条件。
3.4 开始测定并记录色谱图谱，同时记录峰面积或峰高值。
4. 定量分析：4.1 利用之前购买或配制的镁离子标准品制备不同浓度的镁离子溶液（C2）。
4.2 依次测定标准品溶液，并记录峰面积或峰高值。
4.3 绘制镁离子浓度与峰面积（或峰高值）的标准曲线。
4.4 根据标准曲线，计算待测样品中镁离子的浓度。
三、结果与讨论1. 样品注射与测定：1.1 在设定的流速和温度条件下，成功测定了水样中镁离子的含量。
1.2 记录并分析得到的色谱图谱，通过峰面积（或峰高值）得到镁离子的峰。
1.3 根据峰的形状和峰面积可判断样品中镁离子的含量。
2. 定量分析：2.1 利用制备的镁离子标准溶液，依次测定并记录标准品的峰面积（或峰高值）。
2.2 根据标准品的浓度与峰面积（或峰高值）绘制标准曲线。
2.3 根据待测样品的峰面积（或峰高值），通过标准曲线计算出镁离子的浓度。
3. 讨论与误差分析：3.1 分析实验过程中的影响因素和操作步骤，评估实验结果的准确性。
高效液相色谱法测定酱油中的5_羟甲基糠醛
图 1 紫外吸收光谱图 Fig.1 UV-spectrogram of 5-hydroxymethylfurfural
取5-羟甲基糠醛标准溶液，在 200~400 nm 的波
图 3 5-羟甲基糠醛检测标准曲线
Fig.3 Standard curve of 5-hydroxymethylfurfural
188
我国制定了蜂蜜中 5-羟甲基糠醛的限量要求[2] 反应所生成的5-羟甲基糠醛对眼、黏膜、皮肤有刺激 性，过量食用会引起中毒，造成动物横纹肌麻痹和内 及标准检测方法[3]，而目前对于酱油中 5-羟甲基糠醛 含量的检测尚未见报道。因而建立一种快速、方便、 经济的检测方法，有利于保障人们的消费安全。本文 采用高效液相色谱法对 5-羟甲基糠醛进行定量测定， 建立一种快速分析酱油中 5-羟甲基糠醛的方法。
图 1 5-羟甲基糠醛的产生 Fig.1 The production of 5-HMF
反应所生成的 5-羟甲基糠醛对眼、黏膜、皮肤有 刺激性，过量食用会引起中毒，造成动物横纹肌麻痹 和内脏损害[1]。
收稿日期：2007-11-02 作者简介：王妙飞(1980-)，女，硕士研究生，研究方向为食品分析及调味 品科学。
现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2008, Vol.24, No.2
高效液相色谱法测定酱油中的 5-羟甲基糠醛
王妙飞1，张水华1，郭新东2，杜志峰2，吴玉銮2，王永华1 （1.华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640） （2.国家加工食品质量监督检验中心(广州)，广东 广州 510110）
1.3 HPLC分析 色谱柱：DiamonsilTM C18 5 m, 150 mm×4.6 mm；
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实验5高效液相色谱应用实验
一、实验目的
1、熟悉高效液相色谱分离分析的原理。
2、掌握根据保留值，用已知纯物质对照定性的分析方法。
3、掌握用归一化法定量测定混合物各组分的含量。
4、掌握用微量进样器进样的基本操作和色谱软件的一般操作。
二、方法原理
高效液相色谱法是一种重要的色谱分离技术。
根据所用固定相和分离机理的不同，一般将高效液相色谱法分为分配色谱、吸附色谱、离子交换色谱等。
在分配色谱中，组分在色谱柱上的保留程度取决于它们在固定相和流动相之间的分配系数K：
组分在固定相中的浓度
K= ————————————
组分在流动相中的浓度
显然，K值越大，组分在固定相上的保留时间越长固定相与流动相之间的极性差值也越大。
因此，出现了流动相为非极性而固定相为极性物质的正相色谱法和流动相为极性而固定相为非极性的反相色谱法。
目前应用最广的固定相是通过化学反应的方法将固定液键合到硅胶表面上，即所谓的键合固定相。
若将正构烷烃等非极性物质（如n-C18烷）键合到硅胶基质上，以极性溶剂（如甲醇和水）为流动相，则可分离常用的有机化合物。
三、仪器与试剂
高效液相色谱仪、紫外（254nm）检测器、色谱柱C18柱（250mm×4.6mm）、注射器（25μL）
流动相甲醇+ 水（使用前应超声波脱气）、甲苯、苯甲醇、苯甲酸（均为分析纯）、未知混合样品（甲苯、苯甲醇、苯甲酸的混合溶液）
四、实验步骤
1. 以流动相为溶剂，配制甲苯、苯甲醇、苯甲酸的标准溶液，浓度均为10mg/mL。
2. 在老师的指导下开启液相色谱仪，设定操作条件。
3. 待仪器稳定后，分别用注射器进甲苯、苯甲醇、苯甲酸溶液各5μL，进样的同时，要作好记录保留时间。
4. 进未知混合样品5μL，记下各组分色谱峰的保留时间。
5. 以标准物的保留时间为基准，给未知样品各组分定性。
6. 根据标准物的峰面积，估算未知样品中相应组分的含量。
五、问题讨论
1. 解释未知混合样品中各组分的洗脱顺序。
2、若实验中的色谱峰无法完全分离，应如何改善实验条件？
3、高效液相色谱仪由哪几大部分组成？
4、紫外光度检测器是否适用于所有的有机化合物，为什么？
六、注意事项
1、为获得理想的分离效果，保持较低的柱压力降，准确控制流动相的流量，防止微米级的机械杂质阻塞流路是实验操作中的关键。
2、必须掌握溶剂的纯化技术，样品最好用针头式过滤器（复杂样品事先要经过预处理），流动相须经0.45微米以下滤膜过滤。