基因操作技术

1.载体的定义？

载体：指携带外源基因进入受体细胞的运载工具，它的本质是DNA复制子。

2.载体必须具备的3个基本条件?载体的碱基对越多越好？

（1）基本条件：1具有复制子，能在宿主细胞内自主复制，并携带重组DNA分子一同扩增；2具有单一限制性内切酶的酶切位点或多克隆位点；3有合适的选择标记基因，用来筛选重组DNA。

（2）载体的碱基对越少越好，能够更好的控制目的基因

3.目前研究最深，使用最多的载体有？

目前研究最深、使用最多的载体是经过改造的质粒载体和噬菌体载体。

4.按功能分，有哪些载体？克隆载体的概念？表达载体的概念？

（1）按功能分，可分为克隆载体、表达载体、测序载体、转化载体、穿梭载体、多功能载体等。（2）克隆载体：携带插入外源片段的质粒或噬菌体，从而产生更多物质或蛋白质的产物。（3）表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件（如启动子、PBS、终止子），使目的基因能够表达的载体。

5.选择标记有哪些？插入失活、a-互补是什么意思？

（1）选择标记有插入失活和a-互补（2）插入失活:若把外源DNA片段插入到载体的选择标记基因中而使基因失活，丧失其原有的表性特征。（3）a-互补：单独存在的a及w片段均无β半乳糖苷酶活性，只有宿主细胞与克隆载体同时共表达两片段时，宿主细胞内才有β半乳糖苷酶活性，使特异性作用物变为蓝色化合物。

6.列举常用的质粒载体名称？

PBR322质粒、PUC载体、TA克隆载体

7.噬菌体的溶原状态是指？

噬菌体感染大肠杆菌时，可能进入一个溶菌循环，结果导致细胞的裂解，释放出噬菌体颗粒；或者进入与宿主不同程度的稳定状态。

8.噬菌体DNA由哪三个部分组成？目的基因插入哪个部分？

（1）噬菌体DNA由左臂、中臂、右臂三部分组成。（2）目的基因插入中臂（非必须区）部分。

9.超级载体的特点？有哪些超级载体？

1）超级载体的特点：运载量大（2)超级载体：YACs、BACs

10.表达载体与克隆载体有什么最大的区别？

表达载体有强大的启动子和SD序列，而克隆载体没有

11.限制性内切酶

限制性内切酶：能识别DNA分子上的特定位点并将双链DNA切断的酶

12.DNA连接酶，T4连接酶

DNA连接酶：一种能够在两条DNA链之间催化5’-P和3’-OH形成磷酸二酯键的酶T 4连接酶：连接黏性末端或平末端的酶

13.DNA聚合酶，Taq聚合酶

DNA聚合酶：催化脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）聚合成DNA的酶

Taq聚合酶：从嗜热水生菌中分离纯化出来的

14.逆转录酶

逆转录酶：又称依赖于RNA的DNA聚合酶，是分子生物学中最重要的核酸酶之一。

15.核酸酶，DNase,Rnase

核酸酶：通过切割相邻两个核糖酸残基之间的磷酸二酯键，从而导致核酸分子发生水解断裂的蛋白酶

DNase:即脱氧核糖核酸酶，特异水解断裂DNA分子的酶

RNase:即核糖核酸酶，专门水解断裂RNA分子的酶

16.碱性磷酸酶，细菌性/小牛肠碱性磷酸酶

碱性磷酸酶：有两种不同来源的碱性磷酸酶：一种是从大肠杆菌中纯化出来的，叫做细菌碱性磷酸酶；一种是从小牛肠中纯化出来的，叫做小牛肠碱性磷酸酶。它们能催化核酸分子脱掉5’磷酸基团，从而使DNA或RNA片段的5’-P末端转换成5’-OH末端。

细菌碱性磷酸酶：一种是从大肠杆菌中纯化出来的，叫做细菌碱性磷酸酶

小牛肠碱性磷酸酶：一种是从小牛肠中纯化出来的，叫做小牛肠碱性磷酸酶

17.DNA与基因的区别？

基因是有遗传功能的DNA片段

18.DNA的链是通过什么方式连接的？两条DNA单链是通过什么键连接在一起的？

（1）磷酸二酯键；（2）氢键

19.DNA中四种碱基对的名称？

A（腺嘌呤）、G（鸟嘌呤）、C（胞嘧啶）、T(胸腺嘧啶）

20.DNA和RNA的区别？

（1）DNA是脱氧核酸；RNA是核糖核酸；（2）这两种核糖的区别在于脱氧核糖2’-碳原子上的羟基被脱了氧，只剩下H，这个区别使得DNA比RNA更具有化学稳定性

21.遗传信息是如何表达（翻译、传递）的？

P18

22.mRNA,tRNA,rRNA的功能分别是什么？

mRNA功能：信使

tRNA功能：转运

rRNA功能：仓库

23.基因突变有哪几种类型？

染色体突变，特点突变

24.操纵子的概念？

概念：在细菌中，一组基因受一个启动子控制，被转录成一个长的RNA分子，这样的一组基因成为操纵子。

25.简述乳糖操纵子的作用机理？

26.增强子的概念？沉默子的概念？

增强子的概念：能强化转录起始的一段DNA序列为增强子或强化子

沉默子的概念：也称为沉默子元件，能够同反式因子结合从而阻断增强子及反式激活因子的作用，并最终抑制该基因的转录活性。

27.真核生物，原核生物，病毒的基因组特点？

真核生物基因组的特点：1基因组通常比较大2）含有内含子序列3）有大量重复序列4）表达调控较复杂

原核生物基因组的特定：1)染色体不与组蛋白结合2)不同生活习性下原核生物基因组大小与GC含量有关

病毒基因组的特点：1）种类单一2）单倍数基因组，每个基因在病毒中只出现一次3）形式多样4）大小不一5）基因重叠6）动物、细菌病毒与真核、原核基因相似，内含子7）具有不规则的结构基因8）基因编码区无间隔，通过宿主及病毒本身酶切9）无帽状结构10）结构基因没有翻译起始序列

28.基因操作基本步骤？