口腔上皮细胞的显微镜观察

特性
嵌入核酸双链间,只能标记死细胞.用于 染色 体,细胞观察,分辨死活细胞和细胞周期研究 嵌入核酸双链间,只能标记死细胞.用于电泳 分析,染色体观察
半通透细胞,结合于DNA的AT碱基对.用于细 胞周期的研究,染色体和细胞核的观察 结合于DNA的AT碱基对,可进入活细胞,用于 细胞周期的研究,染色体和细胞核的观察
实验六 细胞核和线粒体的荧光观察
一、实验目的
学习荧光显微镜的工作原理及使用方法 了解荧光探针Rhodamine 123 和Hoechst33342 与细 胞成分的结合特性和光谱特性
二、实验原理
1.荧光显微镜
常用荧光探针介绍
细胞参量 DNA和RNA 荧光探针 吸收/发射 nm
Propidum iodide(PI) 535/617 红色荧光 Ethidium bromide(EB)518/605 红色荧光 DAPI 358/461 蓝色荧光 Hoechst33342 350/461 蓝色荧 光
实验步骤
将肿瘤细胞和正常组织细胞培养到小盖玻片上, 至细胞进 入对数生长期 配制Ho.33342和罗丹明123 工作液: Ho.33342 (10μg/mL), 罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液，pH7.4） 将盖玻片上的细胞用PBS缓冲液轻轻漂洗2次， 分别滴加Ho.33342和罗丹明123工作液各10L， 室温暗处孵育10min 用 PBS缓冲液轻轻漂洗2次，放在载玻片上制成 的小室上
Hoechst33342和Rhodamine 123
Ho.33342是一种亲脂性物质，能与DNA特异性 结合的荧光探针，所以被大量用于活细胞的观察和定 量的研究。荧光激发和发射特性分别为350nm和 461nm。 罗丹明123是一种亲脂性的阳离子荧光探针。用 它来标记线粒体是由于线粒体的基质对于膜间隙具有 负电荷，而罗丹明123具有正电荷，二者电性相吸。 所以能较好地观察线粒体的形态变化。荧光激发和发 射特性为507nm和529nm。

三、仪器、材料与试剂
仪器 荧光显微镜，倒置显微镜 材料 A549、WI-38 pc-3、载玻片，盖片，滴管，滤纸 试剂 PBS缓冲液pH7.4 Ho.33342储存液:1mg/mL(溶于PBS) 罗丹明123储存液: 1mg/mL(溶于甲醇)
四、实验步骤
1.将肿瘤细胞和正常组织细胞培养到小盖玻片上 2.配制Ho.33342和罗丹明123 工作液:Ho.33342 (10μg/mL), 罗丹明123(10μg/mL)（溶于PBS缓冲液， pH7.4） 3.将盖玻片上的细胞用PBS缓冲液轻轻漂洗2次 4.在parafilm 膜上分别滴加Ho.33342和罗丹明123工作 液各10L，将盖玻片上的细胞倒扣在parafilm 膜上室温 暗处孵育10min。 5.在parafilm 膜上加PBS缓冲液，待盖玻片被冲起后， 再轻轻揭下盖玻片,用PBS缓冲液轻轻漂洗2次。 6.利用荧光显微镜观察细胞核、线粒体。
利用荧光显微镜观察细胞核、线粒体
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1. 荧光显微镜的工作原理，及使用时应注意 的问题。 2. 细胞核的形态的变化与功能的关系
蛋白和抗体的 FITC 494/518 绿色荧光 耦联探针
Texas red 595/615 红色荧光
染死细胞,对PH值变化不敏感 多参量细胞标记 探针微偏碱性,可标记溶酶体等酸性细 胞器 可进入活细胞,阳离子性,摄入快,淬灭快, 无毒性
溶酶体 线粒体
Neutral red 541/640 红色荧光 Rhodamine 123 507/529 黄绿色荧光