实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
苯酚硫酸法测多糖
采用硫酸-苯酚法测定多糖含量[10-11]。
标准曲线的制作：精确称取经干燥至恒重的标准葡萄糖10mg，用蒸馏水定容至100mL，分别吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8mL，各以蒸馏水补至2mL，然后加入6%苯酚水溶液1.0mL，再迅速加入浓硫酸5.0mL，水浴15分钟后显色彻底，在冷水中冷却，至室温后在波长490nm处测定吸光度，以水代替糖溶液作空白对照，以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标制作标准曲线。
样品测定：取定容液1mL于试管中，稀释10倍即加入蒸馏水9mL得样品液，吸取该多糖样品溶液1mL按标准曲线制作步骤操作，测吸光度，以标准曲线计算多糖含量。
表2 葡萄糖标准曲线设计方案
根据以上表格数据作葡萄糖标准曲线，如下：。
苯酚-硫酸法测多糖含量[新版]
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苯酚-硫酸法测多糖含量000原理000多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
000试剂0001．浓硫酸：分析纯，95.5% 0002． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
0003． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）00 04．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
0005． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
0006． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
0007． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
0008． 6mol/L 盐酸000操作0001．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
000 2．样品含量测定：000①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
000②离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。
因为其脂肪含量大容易夹带残渣。
）000③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
苯酚硫酸法测定多糖含量
苯酚-硫酸法1. 对照品的溶液的制备取干燥至恒重的无水葡萄糖0.1g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
供试品的溶液的制备精密量取本品50ml，置250ml量瓶中，加30%硫酸锌溶液5ml，在水浴中加热5分钟后，在振摇下立即加入亚铁氰化钾试液5ml，冷却后加水至刻度，摇匀，滤过，弃取初滤液，取续滤液25ml，置500ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。
测定方法精密量取对照品溶液与供试品溶液各2ml，分别置10ml量瓶中，各加2%苯酚溶液0.5ml，硫酸5ml，摇匀，置水浴中加热15分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，照分光光度法测定。
2.标准曲线的绘制：精密称取千燥恒重的葡萄糖100mg，用水溶解并稀释至100ml，备用。
精密吸取备用液10ml 加水稀释至100ml定容，得葡萄糖标准液。
精密吸取标准液100、200、…700微升，分别置于试管内，各加水使成2ml，再各加5%苯酚试剂1.0ml，各管迅速滴加浓硫酸5.0ml，立刻摇匀。
沸水加热15分钟，迅速冷却，另取2ml水，同法操作加入试剂作空白对照．用紫外可见分光光度计在入=490nm测定吸光度。
以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程海藻酸钠样品1g,用100mL蒸馏水溶解并定容。
壳聚糖溶液的配制：①先将50mL冰醋酸溶于1000mL的蒸馏水中制成5%的乙酸水溶液1000mL待用。
②称取壳聚糖5g溶于500mL5%的乙酸水溶液中配成10g/L的壳聚糖乙酸溶液。
或精密称取壳聚糖40 mg于100 mL量瓶中，用0. 5 mol·L-1’醋酸溶解并定容。
几丁质不溶于水、稀酸、稀碱及绝大部分溶剂中，据目前所知，几丁质仅能溶于少数溶剂，如六氟异丙酮，六氟丙酮水合物、吡咯烷酮的氯化锂溶液，一些氯醇和浓酸等。
多糖含量标准曲线。
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸法是常用的多糖含量测定方法之一。
该方法基于多糖在硫酸的作用下，与苯酚产生颜色反应的原理，利用光度计测定反应产物的吸收值，从而计算出多糖的含量。
步骤如下：
1. 取样品0.1g，在50ml锥形瓶中加入5ml去离子水，振荡
20min溶解。
2. 加入2ml 5%苯酚水溶液，振荡均匀。
3. 加入5ml浓硫酸，使用磁力搅拌器搅拌1-2min。
4. 将混合物放置在冷水中冷却10min。
5. 用紫外分光光度计在490nm处测定吸光度A，同时以含有相同试验液体积的去离子水为对照。
6. 计算样品中多糖含量。
该方法测定简便，精度高，适用于多糖含量较高的样品。
但此法不能区分多糖的种类及其组成，不能应用于含非多糖的样品中。
硫酸苯酚法测多糖
一、总糖含量标准曲线的绘制
准确称取无水葡萄糖10 mg，溶解后转入100 mL容量瓶定容。
按表4所示操作。
表4 总糖含量标准曲线绘制方法
管号0 1 2 3 4 5
标准葡萄
糖溶液
（mL）
0 0.2 0.6 1.0 1.4 1.8
蒸馏水
（mL）
2.0 1.8 1.4 1.0 0.6 0.2 6%苯酚各1.0 mL
浓硫酸各5.0 mL
检测
摇匀后沸水加热10 min，冷却至室温后于490 nm处以0号管为空白对照，测光密度值，以葡萄糖含量为横坐标，吸光值为纵坐标作标准曲线：Y=aX+b（Y为吸光值,X为葡萄糖质量/ug）。
二、试液总糖含量的测定
用移液枪从总体积V中吸取一定体积V1ml的待测液，用蒸馏水补至体积为2 mL，加入6%苯酚1.0 mL，浓硫酸5.0 mL，空白对照以蒸馏水代替待测液，摇匀后沸水加热10 min，冷却后，在490 nm处测定吸光值为A。
查标准曲线，算出总糖含量。
m(g)=V(A−b)/a
1000000V1。
实验一硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸苯酚法测多糖含量The pony was revised in January 2021实验一硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求? 测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2．2．方法原理3．糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
4．3．主要实验仪器及材料5．浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
6．４．掌握要点7．硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
8．５．试剂配制9．1）葡萄糖标准液的配制10．准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
11．2）90%苯酚液的配制12．?准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤7.管号 0? 1 2 3 4 5 6 78.葡萄糖9.10.苯酚液11.浓硫酸?12.取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL 软件求得回归方程13.2）待测样品多糖的测定与计算14.将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
苯酚-硫酸法测多糖含量
苯酚-硫酸法测多糖含量原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
试剂1．浓硫酸：分析纯，95.5%2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8． 6mol/L 盐酸操作1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。
因为其脂肪含量大容易夹带残渣。
）③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1. 目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2•方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3•主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
5 .试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL,即得90 %苯酚液，棕色瓶中避光保存3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1标准曲线的制作步骤AvV 口吕号0 1 2 3 4 5 6葡萄糖0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表 2方法在操作，先在冰水浴中加入 0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20mi n, 取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零，在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用 exceL软件求得回归方程2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
硫酸苯酚法测多糖含量
硫酸－苯酚法测多糖含量1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量，如1型。
2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，用蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存可达半年。
3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6. 实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖原理硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法，其原理是利用硫酸和苯酚与多糖发生反应，在酸性条件下生成有色产物，通过测定产物的吸光度来计算多糖含量。
硫酸苯酚法测多糖的原理及操作步骤如下：1. 原理。
多糖是一类碳水化合物，其分子中含有多个糖基，如葡萄糖、果糖、半乳糖等。
硫酸苯酚法利用硫酸的强酸性和苯酚的还原性，与多糖发生反应生成有色产物，然后通过比色法测定产物的吸光度，从而计算出多糖的含量。
2. 操作步骤。
（1）将待测样品溶解于水中，得到适当浓度的溶液。
（2）取一定量的样品溶液，加入硫酸混合均匀，然后在冰水浴中冷却至4℃左右。
（3）加入苯酚溶液，再次混合均匀，放置在水浴中加热10分钟。
（4）冷却后，用稀释的硫酸稀释至恒定体积，摇匀后，测定产生的有色产物的吸光度。
（5）根据标准曲线，计算出多糖的含量。
3. 注意事项。
（1）在操作过程中要注意安全，硫酸具有强腐蚀性，苯酚具有毒性，操作时需戴防护眼镜和手套。
（2）操作过程中需严格按照操作步骤进行，特别是加入硫酸和苯酚时，要注意避免溅出。
（3）测定吸光度时，要选择合适的波长，并校准好光度计，确保测定结果准确可靠。
4. 应用范围。
硫酸苯酚法测多糖是一种简便、快速、准确的方法，适用于各种多糖的测定，如淀粉、糖类、藻多糖等。
在食品、医药、生物化学等领域有着广泛的应用。
5. 结论。
硫酸苯酚法测多糖原理简单，操作方便，准确可靠，是一种常用的多糖测定方法。
在实际应用中，需要严格按照操作步骤进行，并注意安全和准确性。
通过该方法测定多糖含量，可以为相关领域的研究和生产提供重要的参考数据。
实验一、硫酸苯酚法测多糖含量
实验一硫酸-苯酚法测多糖含量1.目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量2.方法原理糖在浓硫酸作用下,水解生成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚缩合成橙黄色化合物,且颜色稳定,在波长490 nm处和一定的浓度范围内,其吸光度与多糖含量呈线性关系正比,从而可以利用分光度计测定其吸光度,并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量,本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3.主要实验仪器及材料浓硫酸,苯酚,蒸馏装置,分光光度计,电子天平,坐标纸或电脑等。
4.掌握要点硫酸显色的安全、准确操作,单糖到多糖的转换系数。
5.试剂配制1)葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg,蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液,摇匀后准确吸取10 mL该溶液,蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100ug/mL的葡萄糖标准液。
2)90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL,蒸馏水定容至100 mL,即得90%苯酚液,棕色瓶中避光保存3)6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%,即一体积储存液对应十四体积纯水,临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0取8支干净的具塞试管按表2方法在操作,先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液,震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸,以不放热或微量放热为宜,摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处(490nm)测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标(ug/mL),吸光度Y为纵坐标,从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程2)待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解,定容至100 mL,取溶解后的溶液,按标准曲线中的测定方法,以样液为参比液,测定溶液的吸光值,按回归方程计算待测溶液的多糖浓度,注意乘换算系数。
苯酚硫酸法测多糖含量
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。
2．样品含量测定：
①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）
最佳答案 苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。
[操作]
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
硫酸苯酚法测定多糖含量
硫酸苯酚法测定多糖含量哎呀，今天咱们聊聊一个挺有趣的话题——硫酸苯酚法测定多糖含量。
听上去有点复杂，其实不然。
多糖就像是我们日常生活中的“隐形大侠”，虽然平常不太引人注目，但它们可是在很多食物里默默奉献。
你想想，面条、米饭、甚至那些看似普通的蔬菜，都是多糖的好朋友。
它们给我们的身体提供能量，让我们有劲儿做事儿，真是不可或缺。
硫酸苯酚法听上去像个高大上的实验室名词，其实就像是为多糖量身定制的“测量神器”。
想象一下，把多糖放在硫酸和苯酚的“怀抱”里，它们开始翩翩起舞。
这种舞蹈可不是普通的舞蹈，而是一场科学的“化学派对”。
在这个过程中，多糖会变得五光十色，咱们的测量仪器就能看出来它们的“舞技”如何。
说白了，就是通过颜色的变化来判断多糖的含量。
你知道吗？在这场派对上，硫酸可是个“捣蛋鬼”，它会把多糖中的一些结构给破坏掉，生成新的物质，而这时候的苯酚就像个好朋友，迅速介入，帮忙让变化变得更加明显。
这种“搭档组合”实在是绝了。
要说这种方法简单易懂，真不为过。
只要几步操作，就能得出结果。
不过，要注意的是，这个过程可是需要一点小技巧的。
毕竟，科学实验可不是随便玩玩的。
进行这项测定的时候，温度和时间可得控制得当。
想象一下，如果你不小心让硫酸和苯酚的温度过高，那就有可能让你的实验结果大打折扣，真是得不偿失呀。
反正我觉得，做实验就像做菜，火候掌握得好，才能做出美味的菜肴，反之则是个大麻烦。
所以呀，心细如发是搞科学的必备素质。
很多朋友可能会问了，为什么要用硫酸苯酚法来测定多糖呢？这个方法的优点就像一位好老师，清晰、简单、直观。
对于那些想了解食物成分的朋友来说，它简直就是一把“钥匙”，打开了食物营养的大门。
它的成本也不算高，适合各种实验室使用，真的是平易近人，友好无比。
当然了，任何好东西都有它的短板，硫酸苯酚法也不例外。
有些特殊的多糖，可能在这个方法下表现得不太好，颜色变化不明显，测量结果也就不那么准确。
这就像是每个人都有自己的特点，有些人适合某种工作，有些人则不然。
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖是一种常用的多糖测定方法，其原理基于多糖与硫酸苯酚反应产生显色化合物的特性。
在测定中，首先将待测样品中的多糖加入到试管中。
然后，向试管中逐渐加入浓硫酸，并快速而彻底地混合。
硫酸的加入会引发多糖与硫酸之间的酸水解反应，生成大量的醛基。
随后，加入苯酚试剂，苯酚与醛基反应生成的有色化合物会根据多糖的种类和含量而呈现出不同的颜色。
颜色的深浅可以通过分光光度计进行测量，从而得到多糖样品中多糖含量的定量结果。
该方法的优点是简单、快速，且对多糖具有较好的选择性。
然而，需要注意的是，在进行测定时应严格控制硫酸和苯酚试剂的加入量和混合程度，以避免反应过程中的误差产生。
总结起来，硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法，通过多糖与硫酸和苯酚的反应生成有色化合物来实现多糖的测量。
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法是一种常用的多糖测定方法，通过将多糖与硫酸和苯酚反应生成一种蓝色产物，然后利用分光光度计对其吸光度进行测定，从而得到多糖的含量。
这种方法简单、快速，且对各种多糖均适用，因此在生物化学和食品科学等领域得到广泛应用。
多糖是由多个单糖分子通过糖苷键连接而成的碳水化合物，常见的多糖包括淀粉、糖原、纤维素等。
测定多糖的含量对于食品加工、医药生产等领域具有重要意义，因此需要准确、快速的测定方法来进行分析。
硫酸苯酚法的原理是基于多糖与硫酸和苯酚在高温条件下发生反应生成蓝色产物的化学反应。
具体步骤如下：
首先，将待测样品中的多糖溶解并加入硫酸。
在加入硫酸的过程中，需要严格控制温度，通常在冰水浴中缓慢滴加硫酸，以防止样品发生糊化或者糖类被分解。
这一步骤是为了将多糖分解成单糖。
接着，将苯酚溶液加入样品中，在高温条件下，苯酚与硫酸中的碳水化合物发生反应，生成蓝色产物。
这个产物对于多糖的含量与种类有一定的选择性，因此可以用来测定多种多糖。
最后，利用分光光度计对产生的蓝色产物进行吸光度测定，根据标准曲线或者已知浓度的对照品来计算出待测样品中多糖的含量。
需要注意的是，硫酸苯酚法测定多糖的过程中需要严格控制温度和时间，以免产生误差。
另外，对于不同种类的多糖，可能需要针对性地调整试剂配比和操作条件，以获得准确的测定结果。
总的来说，硫酸苯酚法是一种简单、快速、准确的多糖测定方法，通过化学反应产生的蓝色产物进行吸光度测定，可以广泛应用于食品科学、生物化学等领域。
在实际操作中，需要严格控制实验条件，以获得可靠的测定结果。
苯酚硫酸法测多糖含量
一、硫酸苯酚法测多糖含量 1、试剂配制1. 浓硫酸：分析纯，95.5%2. 5%苯酚：取苯酚5 g ，置100 ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀后，置棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏储存备用。
3. 标准葡聚糖（Dextr a n,瑞典Pharm a cia ）或分析纯葡萄糖。
准确称取20m g 经105℃干燥至恒重的葡萄糖标准品于500ml 容量瓶中，蒸馏水溶解定容。
2、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）10mg 于250ml 容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8及0.9ml ，各以蒸馏水补至1.0ml ，然后加入5%苯酚1ml 及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20min 以后于490n m 测光密度，以1.0ml 水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
12 3 4 5 6 7 8 0 标准葡萄糖溶液（mL ） 0.20.30.40.50.60.70.80.9蒸馏水（mL ） 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 1.0 5%苯酚（mL ） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸（mL ） 2.52.52.52.52.52.52.52.52.5葡萄糖标准曲线y = 54.353x + 0.0018R 2 = 0.999400.10.20.300.0010.0020.0030.0040.0050.006葡萄糖浓度（mg/ml）吸光值3 注意事项（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg 数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
硫酸苯酚法测多糖原理
硫酸苯酚法测多糖原理硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法。
它基于多糖与硫酸在高温下反应生成脱水缩合物的原理。
本文将详细介绍硫酸苯酚法的测定原理及操作步骤。
一、原理多糖与硫酸在高温下反应生成脱水缩合物，同时伴随着苯酚的生成。
苯酚在测定中以红色产物的形式存在，其吸光度与多糖的含量成正比。
因此，通过测定红色产物的吸光度，就可以确定多糖的含量。
二、操作步骤1. 样品处理：将待测的多糖样品溶解于适量的水中，并进行适当的稀释，使得多糖浓度在硫酸苯酚法的线性范围内。
确保样品中没有其他干扰物质的存在。
2. 反应体制：将样品溶液与硫酸苯酚试剂混合，加入适量的浓硫酸，混匀后放置于水浴中加热。
加热时间一般为5-10分钟，加热温度为100-110摄氏度。
3. 冷却与测定：将反应体系冷却至室温后，使用紫外可见光谱仪或分光光度计测量红色产物的吸光度。
根据预先建立的标准曲线，可以计算出多糖的含量。
三、注意事项1. 操作过程中要注意安全，避免与浓硫酸直接接触，避免产生有毒气体。
2. 硫酸苯酚试剂需保存在避光的环境中，避免暴露于阳光下。
3. 加热过程中要控制温度，避免过高温度导致产物分解。
4. 测定前要校准光谱仪或分光光度计，确保准确测量吸光度。
四、优缺点硫酸苯酚法作为一种测定多糖含量的方法，具有以下优点：1. 简单易行：只需准备少量试剂和仪器设备，操作简便。
2. 灵敏度高：对于大多数多糖具有较高的灵敏度，可以检测到低浓度的多糖。
3. 可靠性好：经过多次验证，该方法的准确性和可重复性较高。
然而，硫酸苯酚法也存在一些局限性：1. 只适用于含有醛基的多糖：该方法只对具有醛基的多糖有效，对于其他类型的多糖则不适用。
2. 反应条件严格：反应温度和时间需要严格控制，否则会影响测定结果的准确性。
3. 有干扰物：一些其他物质可能与硫酸苯酚反应产生类似红色产物，从而干扰多糖的测定。
硫酸苯酚法是一种常用的测定多糖含量的方法，其原理基于多糖与硫酸在高温下反应生成脱水缩合物的特性。
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实验一
硫酸－苯酚法测多糖含量
1．目的要求
测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量
2．方法原理
糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。
3．主要实验仪器及材料
浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
４．掌握要点
硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。
５．试剂配制
1）葡萄糖标准液的配制
准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。
2）90%苯酚液的配制
准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存
3）6%苯酚液的配制
将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。
6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤
管号0 1 2 3 4 5 6 7
葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0
苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0
取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。
以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。
用exceL软件求得回归方程
2）待测样品多糖的测定与计算
将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。
二、实验原理
游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糠醛及己糖醛酸在浓硫酸的作用下脱水生成糠醛衍生物，糠醛衍生物与蒽酮缩合成蓝色的化合物，在620nm处有最大吸收，在一定糖浓度范围内（200ug/ml），溶液吸光度值与糖溶液的浓度成线性关系。
用酸将植物组织中没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，或直接提取植物组织中的还原糖，即可对植物组织中的总糖和还原糖进行定量测定。
三、实验材料
1．可见分光光度计、电子天平(1/100)、粉碎机、水浴锅、电炉。
研钵、量筒、三角烧瓶、烧杯、容量瓶、玻璃漏斗、试管1.5cm×15cm、刻度吸管、胶头滴管、pH试纸、坐标纸。
四、实验试剂
1．蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于l000ml体积分数为80％的硫酸中，当日配制使用。
2．标准葡萄糖溶液(0.1mg-m1)：称取100mg葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1 000ml（可滴加几滴甲苯作防腐剂）。
3．6mol-L HCl溶液：50ml盐酸，加水至100ml。
4．10％NaOH溶液：称取10g NaOH固体，溶于蒸馏水并稀释至100ml。
五、操作步骤
1．葡萄糖标准曲线的绘制
取干净试管6支，按下表进行操作。
以吸光度为纵坐标各标准液浓度(mg-m1)为横坐标做图。
2．样品中还原糖的提取和测定
称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约30ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温半小时（使还原糖浸出），取出，冷却后定容至100ml。
过滤，取lml滤液进行还原糖的测定：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
（样品液显色后若颜色很深，其吸光度超过标准曲线浓度范围，则应将样品提取液适当稀释后再加蒽酮显色测定）。
标准曲线的制作及样品测定参考表
1# 2# 3# 4# 5# 6# 7#（样品）8#（样品）
标准葡萄糖溶液(ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 还原糖总糖
蒸馏水(ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
样品液(ml) - - - - - - 1.0 1.0
糖溶液浓度(mg/ml) 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 待测待测
置冰水浴中冷却
蒽酮试剂(ml) 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
沸水浴中准确加热10min，取出，用自来水冷却，室温放置10min
A620nm
3．样品中总糖的提取、水解和测定
称取植物原料干粉0.1～0.5g，加水约3ml，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约12ml的蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
再向三角烧瓶中加入6mol/L 盐酸10ml，搅拌均匀后在沸水浴中水解半小时，冷却后用10％NaOH溶液中和pH呈中性。
然后用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml，用蒸馏水定容100ml，成稀释1000倍的总糖水解液。
取lml总糖水解液，测定其还原糖的含量：吸取lml总糖类溶液置试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出用自来水冷却后比色，其他条件与做标准曲线相同，测得的吸光度值由标准曲线查算出样品液的糖含量。
六、实验结果
按照下列公式分别计算植物原料干粉中还原糖和总糖的质量分数（ω）。
ω（还原糖）= （C1V1/m）×100％
ω（总糖）= （C2V2/m）×0.9①×100％
式中ω（还原糖）：还原糖的质量分数（％）；ω（总糖）：总糖的质量分数（％）；
C1：还原糖的质量浓度（mg/ml）；
C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/ml）；
V1：样品中还原糖提取液的体积（m1）；
V2：样品中总糖提取液的体积（m1）；
m ：样品质量（mg）。
注①：计算总糖含量的公式，在测定干扰杂质很少、还原糖含量相对总糖含量很少时适用，乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖量中，扣除水解时所消耗的水量。
七、注意事项
1．总糖：食品中的总糖通常是指具有还原性的糖（葡萄糖,果糖,乳糖,麦芽糖等）和在测定条件下能水解为还原性单糖的糖的总量。
2．本法适用于可溶性还原糖测定。
测定结果是还原性糖和能水解为还原性糖的总和。
3．如要求结果中不含淀粉，则样品处理不应用高浓度酸，而应改用80%乙醇。
4．如提取液中有较多的可溶性蛋白，必须先除去蛋白。
5．若样液较深，可用活性碳脱色。