HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立影响因素研究
肉桂多酚改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用研究
42第15卷 第2期 2013 年 2 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 2 Feb .，2013肉桂多酚改善HepG2细胞胰岛素抵抗作用研究卢兆莲1，黄才国2（1.济南军区总医院实验诊断科，山东 济南 250031；2.第二军医大学生物化学与分子生物学教研室，上海 200433）摘 要：目的：探讨肉桂多酚对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。
方法：将HepG2细胞分为空白组、模型组、二甲双胍组（剂量10 μg/mL）和肉桂多酚组（剂量分别为5、10和15 μg/mL），用四甲基偶氮唑盐（MTT）的方法检测肉桂多酚对细胞活性的影响；采用高胰岛素诱导的方法建立胰岛素抵抗的细胞模型，研究肉桂多酚对胰岛素抵抗的HepG2细胞葡萄糖消耗的影响。
结果：肉桂多酚浓度大于15 μg/mL 时，对HepG2细胞的生长活性具有抑制作用；肉桂多酚可促进HepG2细胞和胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖的消耗，且呈明显的剂量依赖性。
结论：肉桂多酚能明显促进HepG2细胞和胰岛素抵抗的HepG2细胞对葡萄糖的消耗，提高了细胞对胰岛素的敏感性，对高浓度的胰岛素诱导的胰岛素抵抗具有明显的改善作用。
关键词：肉桂多酚；HepG2细胞；胰岛素抵抗中图分类号：R284.1 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 02- 0042- 03收稿日期：2012-08-01作者简介：卢兆莲（1980-），女，山东日照人，主管技师，硕士，研究方向：分子生物学。
Effects of Cinnamon Polyphenols Improving HepG2 Cells Insulin Resistance LU Zhaolian 1，HUANG Caiguo 2（1.Department of Laboratory Medicine，General Hospital of Ji'nan Military Area，Ji'nan 250031，Shandong,China ；2.Deparment of Biochemistry and Molecular Biology，Second Military Medical University，Shanghai 200433，China）Abstract ：Objective ：To study the influence of the cinnamon polyphenols on HepG2 cells insulin resistance. Methods ：HepG2 cells were divided into control group，model group，metformin group （10 μg/mL）and cinnamon polyphenols groups with different doses（5，10，15 μg/mL）. The effect of cinnamon polyphenols on viability of HepG2 cells was determined by 3-（4，5-dimethylthiazol-2-yl）-2，5-diphenylterazolium bromide（MTT）assay ；insulin resistance cell model was induced by high concentrations of insulin，the hypoglycemic effect of cinnamon polyphenols in HepG2 cells was detected. Results ：At the concentrations（1~15 μg/mL），the cinnamon polyphenols had no depressant effect on the cells activity. Cinnamon polyphenols could significantly promote extracellular glucose consumption in the HepG2 cells and the insulin resistance，moreover，with the increase of concentration，cinnamon polyphenols had more apparent hypoglycemic effect. Conclusion ：Cinnamon polyphenols could significantly promote extracellular glucose consumption and the insulin resistance in the normal HepG2 cells，the low concentration can significantly enhance the cell sensitivity to insulin and improve the insulin resistance state.Key words ：cinnamon polyphenols ；HepG2 cells ；insulin resistance 未病”就发挥了其防患于未然的作用。
高糖高脂诱导胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立及活性成分的功能评价
高糖高脂诱导胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立及活性成分的功能评价一、本文概述随着现代生活节奏的加快和饮食结构的改变，高糖高脂饮食已成为导致胰岛素抵抗（IR）等代谢性疾病的重要因素。
胰岛素抵抗是指胰岛素在靶组织（如肝脏、肌肉和脂肪组织）中的生物学作用受损，导致血糖调节失衡，是2型糖尿病和心血管疾病的主要发病机制之一。
研究高糖高脂诱导的胰岛素抵抗机制及防治策略具有重要意义。
本研究旨在通过建立高糖高脂诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗模型，模拟人体内的代谢环境，为深入研究胰岛素抵抗的分子机制提供实验基础。
同时，通过对活性成分的功能评价，筛选出具有改善胰岛素抵抗潜力的天然产物或药物，为开发新型抗糖尿病药物提供候选物质。
本文首先介绍高糖高脂饮食对胰岛素抵抗的影响及其机制，阐述建立胰岛素抵抗细胞模型的重要性和必要性。
接着，详细描述高糖高脂诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立过程，包括细胞培养、高糖高脂处理、胰岛素抵抗指标检测等。
在此基础上，对活性成分进行筛选和功能评价，探讨其作用机制。
总结本文的主要研究内容和成果，展望未来的研究方向和应用前景。
通过本研究，不仅有助于深入了解高糖高脂诱导胰岛素抵抗的分子机制，还可为开发新型抗糖尿病药物提供理论支持和实验依据，对预防和治疗代谢性疾病具有重要意义。
二、材料与方法高糖DMEM培养基、胎牛血清（FBS）、胰蛋白酶、青霉素-链霉素双抗溶液、MTT、DMSO等购自Gibco公司；棕榈酸、油酸购自Sigma 公司；胰岛素、葡萄糖测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所；其他常用化学试剂均为国产分析纯。
CO2培养箱（Thermo Fisher Scientific）、倒置显微镜（Olympus）、酶标仪（Bio-Rad）、低速离心机（Eppendorf）、超净工作台（苏州净化设备公司）等。
HepG2细胞用含10% FBS、1%青霉素-链霉素双抗溶液的高糖DMEM 培养基，在37℃、5% CO2的饱和湿度培养箱中培养。
高糖高脂诱导胰岛素抵抗HepG2细胞模型的建立及活性成分的功能评价
*通讯作者 收稿日期：2011-08-06 作者简介：柳嘉(1985—)，女，福建人，博士研究生，研究方向为功能性食品。
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食品开发
食品科技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 2012年 第 37卷 第 3期
absorption, glycogen and triglyceride levels were tested. HepG2 cell model of insulin resistance was established with 0.5 mmol/L free fatty acids, and four components were evaluated. The results showed that puerarin, stevioside, ursolic acid and epicatechin could effectively alleviate the insulin resistance. Moreover, stevioside and epicatechin had better effects. Key words: insulin resistance; HepG2 cells; puerarine; stevioside; ursolic acid; epicatechin
HepG2胰岛素抵抗细胞模型的诱导及其在生物活性评价中的应用
天然产物研究与开发！"$&()+,2018,30:1469-1475,1468文章编号：1〇〇1'880(2018)8-1469'8H.G2胰岛素抵抗细胞模型的诱导及其在生物活性评价中的应用宋皓，牛庆川，李玉萍！江西科技师范大学生命科学学院，南昌330013摘要:胰岛素抵抗是一种多因素诱发和多基因调控疾病。
为了阐明胰岛素抵抗产生的机制，国内外学者建立 了多种胰岛素抵抗细胞模型，其中H.G2肝癌细胞是应用较多的细胞模型。
本文就H.G2肝癌细胞胰岛素抵 抗模型的诱导方法及其在生物活性评价中的应用进行综述，以期为外周靶组织的胰岛素抵抗研究提供一定的 理论参考。
关键词：H.G2肝癌细胞;胰岛素抵抗;细胞模型;生物活性评价中图分类号：R96 文献标识码：A DOI：10.16333/j.1001-6880.2018.8.031 The Application of HepG2I nsulin Resistance CellModel in the Evaluation of BioactivitiesS O N G H a o，N I U Q i ng-c h u a n，LI Y u-p i n g1**School o f Life Science, Jiangxi Science & Technology Norm al University ,N anchang 330013, China Abstract：I nsulin resistance i s a multigene regulatory disease which also induced by multifactor.Researchers have estab-l i s l i e d many kinds o f insulin resistant cell model t o clarify the mechanism of insulin resistance，including He p G2cells which are a wide-accepted model cell.This reviewgives a detailed discussion on of insulin resistance Hep G2cell model，as well as the evaluation of bioactivities in insulin resistance，providing a reference in improving insulin resistance.Key words：Hep G2；insulin resistance；cell model；evaluation of bioactivities胰岛素抵抗（Insulin resistance，I R)是指机体的 脂肪、肝脏、肌肉靶组织对一定量的胰岛素与其特异 性受体结合后生物效应低于正常的一种病理生理状态，即生理条件下的胰岛素不能维持正常水平的血 糖浓度，与多种疾病的发生、发展密切相关，包括糖 尿病、肥胖症、高血压和动脉粥样硬化等[1，2]。
胰岛素抵抗细胞模型研究进展
Ｌ ） 胰岛素培养液 中 ３ ， ｅＧ ６ｈ Ｈ ｐ ２细胞对胰 岛素 的抵抗作 用 更 为明显 ， 该特性 可维 持 ４ ， ８ｈ 并未发现细胞形态学变化 。目 前 也有学者利用 Ｓ ７ Ｗ８ ２细 胞建 立 Ｉ Ｒ模 型 ， 但关 于该 种细 胞 的研究报道很少 。吴汉荣 等 采 用 （ ５ ５ ｏ ・ ’ 葡萄 ２ 、０ｍｍ ｌ Ｌ。）
现 中度胰岛素抵抗 ， 证实脂联素能拮 抗胰 岛素 抵抗 … 。 由于
建立胰 岛素抵 抗模 型 。张召锋等 采用地塞米松 诱导 Ｌ ６肌
细胞产生 胰岛素抵抗 。同时 发现 地塞 米松 刺激 ２ ４ｈ后 能 显 著 降低胰 岛素刺激后 的 Ｉ 肌细胞葡萄糖转 运 ， Ｊ ６ 另外 还发现地 塞米松 作用 ２ ４ｈ后 将引 起细胞 胰 岛素受体底 物一 １的 Ｓｒ０ ｅ３ ７
（ ａｊ ｇＵ ｉ ｒｔ Ｃ Ｎ ｎｎ ２ ０２ ，ｈｎ ） Ｎ ｎ ｎ ｎ ｅ ｉ ｏ Ｔ Ｍ， ａｊ ｇ １０ ９ Ｃ ｉａ ｉ ｖ ｓｙ ｆ ｉ
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｉ ｓ ｌ ｅ ｉｔ ｎ ｅ ｉ ａ ｍｐ ｒａ ｔ ａｈ ｐ ｙ ｉ ｌｇｃ ｌ ａ ｉ ｏ ｐ ｉｂ ｔ ｓａ ｄ ｉ ｏ ｎ ｎ ｅ ｔ ｒ ｏ ｔｂ ｌ ｙ ｄ ｏ ． ｓ ｒ ｃ ：ｎ ｕｉ ｒ ｓｓａ ｃ ｓ ｎ ｉ ｏ ｔ ｎ ｔｏ ｈ ｓｏｏ ｉａ ｓｓ ｆｔ ｅ２ ｄ ａ ｅｅ ｎ ｓａ ｄ ｍｉ ａ ｔｆａｕ ｅｆｒｍｅａ ｏ ｉ ｓ ｎ ｒ ｍｅ ｎ ｐ ｂ ｙ ｃ
通讯作者 ： 国荣 ， ， 江 男 教授 ， 主任 中药师 ， 研究方 向 ： 中药 内分泌及代谢
药 理 ，－ ｉ：ｕｒｎｊ ｎ ＠ ｈｔ ｉ ｔｍ Ｅ ｍａ ｇｏｏｇｉ ｇ ｏｍａ ．ｏ ｌ ａ ｌ
姜黄素对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用研究
的胰岛素作用于 Ｈｅ ｐ Ｇ ２细胞 ２ ４ ｈ ，葡萄糖 消耗量明显减少 （ Ｐ＜ Ｏ ． ０ １ ） ，可成功诱导 出稳定的胰 岛素抵抗模型 ，表明姜黄素能明显
改善 Ｈｅ ｐ Ｇ２细胞胰 岛素抵抗状 态增加对葡萄糖的消耗 量。
【 关键词 】 姜黄素 ；胰岛素抵抗 ；Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞
ｆ ｏ ｒ ２ ４ ｈ ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ｎ ｓ ｍ ｐ ｕ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｇ ｌ ｕ ｃ ｏ ｓ ｅ ｄ ｅ ｃ ｒ ｅ ａ ｓ ｅ ｄ ｓ ｉ ｇ ｎ ｉ ｉ ｆ ｃ ａ ｎ ｔ ｌ ｙ ＜ ０ ． ０ １ ） ａ ｎ ｄ ａ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ ｍｏ ｄ ｅ １ ｏ ｆ ｉ ｎ ｓ ｕ ｌ ｉ ｎ ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｃ ａ ｎ ｂ ｅ ｓ ｕ ｃ ｃ ｅ ｓ ｓ ｆ ｕ ｌ ｌ ｙ ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ． Ｉ ｔ
临京医学工 程２ ０ １ ３ 年５ 月 第２ ０ 卷第５ 期
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５ ４ ３・
论著・
（ 实验 研 究 ）
姜黄素对 Ｈ ｅ ｐ Ｇ ２ 细胞胰岛素抵抗的作用研究
李莹 ，周银霞 ，封 亮 。 ，陈金梅
Ｉ 江 苏省 镇江市 第 二人 民医院 ，江 苏 镇江 ２ １ ２ ０ ０ １ ； 江苏 省 中医药研 究 院 ，江苏 南 京 ２ １ ０ ０ ２ ８ ）
Ｓ ｅ ｃ ｏ ｎ ｄＰ ｅ ｏ ｐ ｌ ｅ Ｈ ｏ ｓ ｐ ｉ ｔ ａ ｌ ， Ｚ ｈ ｅ ｎ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ２ １ ２ ０ ０ １ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ｏ ， ＂ Ｊ ｉ ａ ｎ ｇ ｓ ｕ Ｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｎ ｃ ｅ Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｙｏ ｆＴ ｒ ｄｉ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ ， Ｎ ａ ｎ ｊ ｉ ｎ ｇ ２ １ ０ ０ ２ ８ ， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
葛根上调肝胰岛素抵抗HepG2细胞OB—R IRS2,GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢的研究
葛根上调肝胰岛素抵抗HepG2细胞OB—R IRS2，GLUT1和GLUT2蛋白调节糖代谢的研究研究中藥葛根对人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗（IR）模型糖代谢的改善作用并初步探讨葛根降糖的分子作用机制。
该实验采用课题组优化方法，1×10-9 mol·L-1胰岛素加3.75×10-6 mol·L-1地塞米松联合给药HepG2细胞48 h建立稳定的IR模型；CCK-8法检测葛根含药血清对细胞活性的影响；葡萄糖氧化酶法检测多个时间点（12，15，18，21，24，30，36 h）IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量；蒽酮法检测细胞内糖原含量；Western blot法检测胰岛素受体底物2（IRS2）、瘦素受体（Ob-R）、葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）和GLUT2蛋白表达水平。
研究结果显示葛根含药血清（5%，10%，15%）对IR-HepG2细胞的活力没有明显的影响；5%和10%葛根含药血清在给药18，21，24 h均显著上调IR-HepG2细胞葡萄糖消耗量（P＜0.01），15%葛根含药血清除给药15 h上调葡萄糖消耗量较弱（P＜0.05），18，21，24，30 h都显著上调葡萄糖消耗量（P＜0.01），呈现一定程度剂量依赖性。
葡萄糖消耗时效实验确认24 h是最佳时间点，进一步研究发现葛根含药血清作用24 h增加胞内糖原含量（P＜0.01）；上调IRS2，Ob-R，GLUT1和GLUT2蛋白表达量。
葛根含药血清降糖作用可能部分通过上调Ob-R 和IRS2蛋白表达来调节以PI3K/PDK为中心的胰岛素信号通路；上调IR-HepG2细胞GLUT1和GLUT2表达量，加速葡萄糖转运进入肝细胞中并增加糖原合成来增强IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性来实现的。
标签：胰岛素信号通路；胰岛素受体底物2（IRS2）；瘦素受体（Ob-R）；葡萄糖转运蛋白1（GLUT1）；GLUT2[Abstract] To observe the anti-hyperglycemic effect of Puerariae Lobatae Radix in hepatocyte insulin resistance（IR）models，and investigate its preliminary molecular mechanism. IR-HepG2 cell model was stably established with 1×10-9 mol·L-1 insulin plus 3.75×10-6 mol·L-1 dexamethasone treatment for 48 h according to optimized protocol in our research group. After IR-HepG2 cells were treated with different concentrations（5%，10% and 15%）of Puerariae Lobatae Radix-containing serum，cell viability was detected by CCK-8 assay；the glucose consumptions in IR-HepG2 cells were separately detected at different time points （12，15，18，21，24，30，36 h）by using glucose oxidase method；intracellular glycogen content was detected by anthrone method；and the protein expression levels of leptin receptor （Ob-R），insulin receptor substrate-2 （IRS2），glucose transporter 1（GLUT1）and GLUT2 were detected by Western blot assay. The results showed that Puerariae Lobatae Radix-containing serum （5%，10% and 15%）had no significant effect on IR-HepG2 cell viability；5% and 10% Puerariae Lobatae Radix-containing serum significantly increased glucose consumption of IR-HepG2 cells （P＜0.01）at 18，21 and 24 h；15% Puerariae Lobatae Radix-containing serum elevated the glucose consumption of IR-HepG2 cells at 15 h （P＜0.05），and significantly elevated the glucose consumption at 18，21，24 and 30 h （P＜0.01）in a dose-dependent manner. The optimized time of anti-hyperglycemic effect was defined as 24 h，and further study showed that Puerariae Lobatae Radix-containing serum could increase intracellular glycogen content after 24 h treatment （P＜0.01），and up-regulate IRS2，Ob-R，GLUT1 and GLUT2 protein expression levels. Our results indicated that Puerariae Lobatae Radix-containing serum could achieve the anti-hyperglycemic effect through important PI3K/PDK signaling pathway partially by up-regulating the expression levels of Ob-R and IRS2，GLUT1 and GLUT2 in IR-HepG2 cells，accelerating the glucose transport into hepatocytes and increasing hepatic glycogen synthesis to enhance the anti-hyperglycemic effect of IR-HepG2 cells.[Key words] insulin resistance （IR）；IRS2；Ob-R；GLUT1；GLUT2众多临床实践发现中药在降糖调脂及治疗2型糖尿病（type 2 diabetes mellitus，T2DM）中注重调节人体的整体机能，作用温和，长期使用具有较强的竞争优势[1]。
一种HepG2细胞高脂模型的构建方法及应用[发明专利]
![一种HepG2细胞高脂模型的构建方法及应用[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/fec88238f68a6529647d27284b73f242336c3136.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811089585.3(22)申请日 2018.09.18(71)申请人 南京财经大学地址 210046 江苏省南京市栖霞区文苑路3号(72)发明人 王立峰 李枝芳 姚轶俊 王博 (74)专利代理机构 南京业腾知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32321代理人 董存壁(51)Int.Cl.C12N 5/09(2010.01)C12N 5/071(2010.01)C12Q 1/02(2006.01)(54)发明名称一种HepG2细胞高脂模型的构建方法及应用(57)摘要本发明涉及一种HepG2细胞高脂模型的构建方法，将HepG2细胞接种于6孔板，孵育20-30h后取出，设置对照组和模型组；对照组加含8-10v％F B S的高糖DM E M 培养基，模型组加含终浓度2.5mmol/L油酸的8-10v％FBS高糖DMEM培养基；将6孔板置于37℃、5v％CO 2的培养箱孵育后去除培养液，再充分裂解细胞，得细胞裂解液；将细胞裂解液离心，取上清液测定TG和LDL -C含量，当模型组比对照组细胞的TG和LDL -C含量高时，HepG2细胞高脂模型构建成功。
本发明通过构建HepG2细胞高脂模型有效模拟人体高血脂的情况，可以更加简便快捷有效的来测定食物或药物是否能有效降脂。
权利要求书1页 说明书3页 附图3页CN 109112108 A 2019.01.01C N 109112108A1.一种HepG2细胞高脂模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将HepG2细胞接种于6孔板，孵育20-30h后取出，设置对照组和模型组；其中，对照组加含8-10v％FBS的高糖DMEM培养基，模型组加含终浓度2.5mmol/L油酸的8-10v％FBS高糖DMEM培养基；(2)将6孔板置于37℃、5v％CO 2的培养箱孵育20-30h后去除培养液，接着用PBS清洗，然后进行消化，消化后离心，弃去上清液，往沉淀中再次加入PBS清洗，然后离心，弃去上清液，得到细胞沉淀，充分裂解细胞，得到细胞裂解液；(3)将细胞裂解液离心，取上清液，测定TG和LDL -C含量，当模型组细胞比对照组细胞的TG和LDL -C的含量高时，模型组细胞即为HepG2细胞高脂模型。
鬼针草总黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响
鬼针草总黄酮对HepG2细胞胰岛素抵抗的影响作者：庞晓军卢琳琳黎东旺赵一宇刘国勇来源：《中国药房》2022年第08期中图分类号 R965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）08-0968-07DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.08.11摘要目的探究鬼针草总黄酮（TFB）对人肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗（IR）的影响。
方法取鬼针草，用80%乙醇回流提取，制得TFB。
利用棕榈酸体外诱导HepG2细胞复制IR模型，考察低、中、高质量浓度（20、40、80 mg/L）TFB对细胞葡萄糖消耗量的影响;以二甲双胍为阳性对照，考察低、中、高质量浓度（20、40、80 mg/L）TFB对细胞中胰岛素受体底物1（IRS-1）、c-Jun氨基端激酶（JNK）和蛋白激酶C（PKC）表达的影响。
采用分子对接技术探讨槲皮素、槲皮苷等8个TFB主要活性成分与IRS-1、JNK、PKC蛋白的相互作用。
结果TFB低、中、高质量浓度组细胞的葡萄糖消耗量均较模型组显著升高（P关键词鬼针草总黄酮;人肝癌HepG2细胞;胰岛素抵抗;胰岛素受体底物1、c-Jun氨基端激酶;蛋白激酶C;分子对接Effects of total flavonoids of Bidens pilosa on insulin resistance in HepG2 cellsPANG Xiaojun1，2，LU Linlin2，LI Dongwang1，2，ZHAO Yiyu3，LIU Guoyong4（1. Dept. of Pharmacy，the Second People’s Hospital of Qinzhou， Guangxi Qinzhou 535000， China;2. College of Pharmacy， Guangxi Medical University， Nanning 530021， China;3. Dept. of Rehabilitation，the Second People’s Hospital of Qinzhou， Guangxi Qinzhou 535000， China;4. Dept. of Radiology，the Second People’s Hospital of Qinzhou， Guangxi Qinzhou 535000，China）ABSTRACT OBJECTIVE To explore the effects of total flavonoids of Bidens polisa L. （TFB） on insulin resistance （IR） of HepG2 cells. METHODS B. polisa L. was refluxed and extracted with 80% ethanol to obtain TFB. Palmitic acid was used to induce IR mode of HepG2 cells in vitro. The effects of low-concentration， medium-concentration and high-concentration （20，40， 80 mg/L） of TFB on the consumption of glucose were investigated. Using metformin as positive control， the effects of low-concentration， medium-concentration and high-concentration （20， 40， 80 mg/L） of TFB on the protein expression of insulin receptor substrate-1 （IRS-1）， c-Jun N-terminal kinase （JNK） and protein kinase C （PKC） were investigated. Molecular docking technology was used to explore the interaction between eight main active components of TFB such as quercetin， quercitrin and IRS-1， JNK and PKC proteins. RESULTS The glucose consumption of TFB low-concentration， medium-concentration and high-concentration groups were increased significantly （PKEYWORDS total flavones of Bidens polisa L.; human hepatoma HepG2 cells; insulin resistance; insulin receptor substrate-1; c-Jun N-terminal kinase; protein kinase C; molecular docking胰岛素抵抗（insulin resistance，IR）是指机体对胰岛素生物反应性降低的一种现象，表现为胰岛素促进葡萄糖摄取和利用的效率下降，机体代偿性分泌过多胰岛素而产生高胰岛素血症[1]。
红芪多糖对HepG2细胞胰岛素抵抗模型糖代谢及胰岛素敏感性的影响和机制研究
的发生［1］。肝脏是糖代谢的重要部位，肝细胞胰岛 胞用含有 10% 胎牛血清的 DMEM 细胞培养液培养，
素抵抗发生时主要表现为肝糖原合成水平降低 等［2］。HepG2 细胞来源于肝癌细胞，其表型同肝细
培养条件设置为：37℃，5% CO2、95% 空气、饱和湿度 的培养箱。将 HepG2 细胞按照每个孔内加 2 000 个
取自中药红芪中的活性成分，其含有鼠李糖、阿拉 板，依次添加 15 μl 的 MTT，结合 4 h 后，弃掉孔中液
伯糖、木糖等多种复杂单糖，有降血压、抗氧化、降 体，添加 DMSO，振荡孵育 10 min，经空白孔调零以
血脂、消炎等功效，红芪多糖对糖尿病、肿瘤等临床 后，在酶标仪上检测每个孔的 OD 值，以 0 μg/ ml 红
1. 1 材料 HepG2 细胞购自深圳市百恩维生物科 技有限公司；葡萄糖氧化酶试剂盒购自上海晶抗生 物工程有限公司；p-PI3K 抗体购自上海鑫乐生物科 技有限公司；糖原含量检测试剂盒购自北京索莱宝 科技有限公司；红芪多糖购自西安天瑞生物技术有 限 公 司 ；引 物 由 南 京 金 斯 瑞 生 物 科 技 有 限 公 司 合 成；p-AKT 抗体购自上海晅科生物科技有限公司；
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贺映侠等 红芪多糖对 HepG2 细胞胰岛素抵抗模型糖代谢及胰岛素敏感性的影响和机制研究 第 7 期
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细 胞 ，以 GAPDH 作 为 内 参 ，用 qRT-PCR 方 法 检 测 PPARγ、PEPCK mRNA 水平。首先用 TRIzoi 试剂提 取各组细胞中的总 RNA，配制逆转录体系反转录合 成 cDNA，体 系 包 括 ：0. 5 μl 的 AMV Reverse Tran‐ scriptase、2 μl 的 5×RT buffer、0. 5 μl 的 Oligo-dT、1 μl 的 dNTPs、0. 5 μl 的 RNase inhibitor、2 μl 的 RNA，补 足 DEPC 水 至 10 μl，在 60℃ 孵 育 45 min，95℃ 孵 育 5 min，在冰上孵育 5 min。取合成的 cDNA，进行 qP‐ CR 反应，体系包括：0. 3 μl 的 Cap Taq 酶、0. 6 μl 的 Super Green 染料、0. 4 μl 的上游引物及 0. 4 μl 的下 游引物、10 μl 的 2×PCR Buffer for Super Green、2 μl 的 cDNA，最后添加 ddH2O 至 20 μl。PCR 仪设置程 序为：94℃ 15 s，58℃ 15 s，72℃ 20 s，共 40 个循环。 PCR 引 物 为 ：PPARγ forward 5′-AAAGAAGCCAA‐ CACTAAACC-3′，reverse 5′-CTTCCTTACGGAGAGATCC-3′；PEPCK forward 5′-GCTCTGAGGAGGAGAATGG-3′，reverse 5′-TGCTCTTGGGTGACGATAAC-3′；GAPDH forward 5′-TGAACGGGAAGCTCACTGG-3′，reverse 5′-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3′。 1. 2. 6 Western blot 检 测 p-AKT、p-PI3K 蛋 白 表 达 收集 Control、Model、HPS+Model、PIO+Model 组细胞， 用 0. 25% 的胰蛋白酶消化，在细胞中加入 5 倍体积 的蛋白裂解试剂，冰上反应 20 min。4℃，10 000 g 离 心 15 min，吸取上清并分装到 EP 管中。蛋白浓度测 定按照 BCA 常规方法进行。在每个蛋白样品中添加 1/ 5 体积的 5×Loading Buffer 溶液，放在 100℃ 孵育 5 min。SDS-PAGE 电泳蛋白量为 30 μg，电压为 100 V 恒压。肉眼观察蓝色的染料进入到玻璃板的底部边 缘以后，停止电泳。取出凝胶，在冰上转膜，转膜电 压设置为 80 V。转膜结束后，将 NC 膜取出，置于封 闭液中，在室温条件下反应 1. 5 h；然后将 NC 膜放在 含有一抗的抗体孵育袋中，4℃ 环境中过夜反应；最 后把 NC 膜放在含有二抗的抗体孵育袋中，室温结合 1. 5 h。ECL 试剂盒显色，根据条带的灰度值分析蛋 白表达水平，内参设置为 GAPDH。 1. 2. 7 PI3K/ AKT 信 号 抑 制 剂 对 红 芪 多 糖 的 影 响 HepG2 细胞在用胰岛素诱导液培养细胞的同 时 ，在 培 养 液 中 同 时 添 加 10 μg/ ml 红 芪 多 糖 和 10 μmol/ L PI3K/ AKT 信号抑制剂 LY294002，设置 为 HPS+LY294002+Model 组 ，以 HPS+Model 组 为 参 照，分别检测细胞葡萄糖消耗量（步骤同 1. 2. 3）、糖 原 合 成 量（步 骤 同 1. 2. 4）以 及 细 胞 中 PPARγ、 PEPCK mRNA 表 达（步 骤 同 1. 2. 5）和 p-AKT、pPI3K 蛋白表达（步骤同 1. 2. 6）。
HepG2细胞胰岛素抵抗模型
HepG2细胞胰岛素抵抗模型文献一委陵菜黄酮衍生物抗糖尿病活性及其作用机制研究（博士）参照文献[28,29]方法建立胰岛素抵抗的模型。
以l*106/ml密度接种于96孔板,每孔l00ul,37°C, 5%C02饱和湿度培养箱内孵育过夜,以无血清的RPMI1640培养液同步化24h,模型组加入胰岛素终浓度为5*10-7mol/l的无血清RPMI1640培养液孵育24h,弃去培养液,用预冷的PH=4 RPMI1640培养液洗4次,每次3min,同时设置正常对照组。
以葡萄糖检测试剂盒应用葡萄糖氧化酶一过氧化物酶法(GOD—POD法)检测细胞上清液中葡萄糖含量,计算24h各组细胞的葡萄糖消耗量,确定胰岛素抵抗细胞模型的形成。
将模型细胞和正常细胞于倒置显微镜下观察细胞形态学变化。
将模型细胞置于不含胰岛素的培养基中24h后,用葡萄糖检测试剂盒测定培养基的葡萄糖含量,计算各组细胞的葡萄糖消耗量。
观察HepG2细胞胰岛素抵抗细胞模型的持续时间。
结果处理：以葡萄糖氧化酶法检测96孔板中每孔培养液葡萄糖的含量,与未接种细胞的空白孔糖含量均值相减,计算葡萄糖的消耗量。
于505nni处以酶标仪检测0D值。
待测液葡萄糖浓度(mmol/)=(待测液OD值/标准液0D值)*5.55mmol/l造模前后，形态的改变：倒置显微镜下观察,HepG2细胞为梭形或菱形的贴壁细胞,呈典型的肿瘤细胞形态学特征,HepG2/lR模型细胞与对照细胞相比,形态学特征未见明显改。
文献二参考文献[75-76]的基础上加以改进，将细胞以3000 个/孔接种于96 孔培养板中。
分为空白组和模型组。
待细胞贴壁长至80%后，空白组加入正常培养液（胎牛血清浓度为5%），模型组加入新配置的含有胰岛素浓度分别为20、10、5、2.5、1、0.5μg/mL的培养液（胎牛血清浓度为5%），于37℃，5%CO2 培养箱中孵育36h 后，吸弃培养液，换上无血清无酚红的培养液，孵育12h 后，用葡萄糖测定试剂盒[6]检测培养液上清液中的葡萄糖含量。
生脉散对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制
生脉散对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制郑博丹;李宝红;邢晓伟;陈稚;鄞梦珠;吴都督【摘要】目的探讨生脉散对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制。
方法建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型,分别用葡萄糖氧化酶法、RT-PCR、Western blot检测生脉散对HepG2细胞葡萄糖代谢、PPARγ表达的影响。
结果与模型组和吡格列酮组比较,生脉散组HepG2细胞上清液中葡萄糖含量降低,细胞内糖原含量增高(P<0.01或0.05)。
吡格列酮组和生脉散组PPARγ表达高于模型组(P<0.01),但高剂量生脉散组与吡格列酮组差异无统计学意义(P>0.05)。
结论生脉散可改善胰岛素抵抗HepG2细胞的糖代谢,其机制可能与上调PPARγ表达有关。
【期刊名称】《广东医科大学学报》【年(卷),期】2018(000)003【总页数】4页(P233-236)【关键词】生脉散;HepG2细胞;胰岛素抵抗;葡萄糖代谢【作者】郑博丹;李宝红;邢晓伟;陈稚;鄞梦珠;吴都督【作者单位】广东医科大学药学院;广东医科大学药学院;广东医科大学药学院;广东医科大学药学院;广东医科大学药学院;广东医科大学药学院;【正文语种】中文【中图分类】R285.5糖尿病被世卫组织列为继肿瘤和心血管疾病之后的第三大人类疾病，全世界有近两亿人受影响[1]。
2型糖尿病占糖尿病病例的90%以上，其发病机制是胰岛素相对不足、敏感性降低(即胰岛素抵抗)。
目前治疗糖尿病的药物以化学药物为主，但随之出现的高耐药率及不良反应使其疗效受到较大影响[2]。
生脉散始见于《医学启源》，由人参、麦冬、五味子组成。
方中人参为君药，具有甘温、益元气、补肺气、生津液的作用；麦冬为臣药，甘寒，养阴清热，润肺生津；五味子为佐药，酸温，敛肺止汗，生津止渴。
三药合用，一补一润一敛，具有益气养阴、保肺生脉的功效[3]。
现代药理将生脉散的应用范围不断扩大，不少研究发现生脉散对糖尿病及其并发症具有较好的治疗效果[4-6]。
长裂苦苣菜萃取物对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响
长裂苦苣菜萃取物对胰岛素抵抗HepG2细胞糖代谢的影响杨艳华;林素静;刘西京;杜斌【摘要】使用高浓度胰岛素来诱导HepG2细胞,使之出现葡萄糖代谢的异常,以此建造胰岛素抵抗HepG2/IR细胞模型,利用葡萄糖测定试剂盒检测长裂苦苣菜石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位组葡萄糖消耗量,研究长裂苦苣菜不同萃取部位对胰岛素抵抗HepG2细胞模型糖代谢的影响.结果显示,106mol/L浓度的胰岛素诱导处理HepG2细胞24 h是产生胰岛素抵抗的最佳条件;与HepG2/IR模型组相比,各萃取部位均可以改善HepG22/IR细胞的葡萄糖消耗情况,以乙酸乙酯部位效果最佳.结果表明长裂苦苣菜提取物有一定的改善胰岛素抵抗的作用.【期刊名称】《深圳职业技术学院学报》【年(卷),期】2016(015)001【总页数】5页(P45-49)【关键词】长裂苦苣菜;胰岛素抵抗;HepG2细胞;葡萄糖消耗量【作者】杨艳华;林素静;刘西京;杜斌【作者单位】郑州大学药学院,河南郑州450001;深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;深圳职业技术学院应用化学与生物技术学院,广东深圳518055;郑州大学药学院,河南郑州450001【正文语种】中文【中图分类】R285糖尿病（diabetes mellitus，DM）患者中超过90%为Ⅱ型糖尿病（Type 2 diabetes mellitus， T2DM），其显著的病理生理学特征为胰岛素调节与控制葡萄糖代谢能力的下降，即胰岛素抵抗（Insulin Resistance, IR）[1].HepG2 细胞存在于动物肝细胞，其肝胚胎瘤细胞株的表型与肝细胞很相似，HepG2 细胞中的胰岛素受体数目在高剂量的胰岛素条件下呈下降趋势，且下降程度与刺激持续时间及胰岛素剂量呈正相关.因此，以HepG2细胞模型来研究体外胰岛素抵抗机制和降糖活性物质筛选是理想d的选择[2-3].长裂苦苣菜（ Sonchus brachyotus DC.）又名苦菜、苦曲菜、苦曲曲、苦苣菜、苣荬菜、苦荬菜等，具有清热解毒、凉血止血之功，常用于治疗急性咽炎、急性痢疾、阑尾炎、肠炎、痔疮肿痛等[4-6].研究表明，长裂苦苣菜具有降糖、抗菌、降压和降胆固醇、抗心律失常、抗肿瘤、保肝、抗炎、清除自由基等作用[4-8].本文以人肝癌细胞HepG2建立胰岛素抵抗模型，探究长裂苦苣菜不同萃取部位对胰岛素抵抗 HepG2 细胞糖代谢的影响.1.1 药品与试剂长裂苦苣菜（ Sonchus brachyotus DC.）采自兰州郊区； DMEM高糖培养基（Corning公司）；胰酶、四氮甲唑蓝（MTT）、胎牛血清（Gibco公司）；二甲基亚砜（DMSO）、乙醇（分析纯）、盐酸二甲双胍（上海源叶生物科技有限公司，批号：S16O5G1）；精蛋白生物合成人胰岛素注射液（规格400IU/10mL/支，诺和诺德中国制药有限公司，批号：EVG2553）；葡萄糖测定试剂盒（上海荣盛生物药业有限公司）；磷酸盐缓冲液（PBS），D-Hank’s溶液.1.2 仪器DZKW-D-2电热恒温水浴锅（郑州南北仪器设备有限公司）；Milli-Q超纯水机（Milipore）；4001 型旋转蒸发仪（德国Heidolph）；HERA cell 240 型CO2细胞培养箱（Thermo）；DM IRB 型荧光倒置显微镜（德国Leica ）；BHC-ⅡA2系列生物安全柜（苏净安泰空气技术有限公司）；电热鼓风干燥箱（上海一恒科学仪器有限公司）；SS-325高压灭菌锅（上海申安医疗器械有限公司）；Multiskan MK3 全自动酶标仪（Thermo）；BS224s电子天平（德国赛多利斯）；可调式移液器（Eppendorf）；细胞培养瓶（25cm2）、96孔细胞培养板（美国Corning公司）.1.3 细胞系及细胞培养人肝癌细胞株HepG2，由深圳市大规模细胞培养技术和细胞资源库技术平台王妍教授馈赠.将HepG2细胞置于含10%胎牛血清的DMEM培养基中培养，温度设定37℃，培养基放置在5% CO2培养箱中.传代间隔为2～3天1次，取对数生长期细胞进行实验.2.1 样品制备与溶液配制2.1.1 样品制备取长裂苦苣菜全草粉碎，过10目筛(2.0 mm)，称取60g，70%乙醇回流提取3次，每次1h，合并滤液，减压回收溶剂，所得浸膏加蒸馏水溶解混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，随后减压回收各有机溶剂，并于60℃烘干，即得不同提取部位，得率分别是0.45%、1.12%和3.25%.精密称量，用完全培养液分别配成0.001、0.01、0.1、0.25 mg/mL备用.2.1.2 配制完全培养液取胎牛血清和DMEM高糖培养液按照1: 9比例配置完全培养液.2.2 胰岛素浓度对胰岛素抵抗细胞模型的影响考察使用完全培养基将对数生长期HepG2细胞进行稀释，设定细胞浓度为1×105个/mL，将其接种在96孔细胞培养板中培养，单孔200 µL，于37 ℃、5% CO2培养箱中.当细胞贴壁达瓶底80%时，弃上清液，以D-Hank’s液清洗2次，加入新鲜调配的含10-6，10-7，10-8，10-9mol/L胰岛素的完全培养液继续培养细胞，每孔200 µL，一组3个复孔，并设正常培养细胞的平行对照组.培养时间24h，取各组的细胞上清液，以葡萄糖氧化酶法依次测定各组的葡萄糖含量，同时观察记录细胞在显微镜下的形态学变化.2.3 胰岛素抵抗细胞模型时间影响考察取对数生长期HepG2细胞，同2.2项下方法培养细胞，加入10-6mol/L的胰岛素后，各组于37 ℃、5% CO2条件下培养8、12、24、36和48 h，取各组的细胞上清液，用葡萄糖氧化酶法依次测定每组的葡萄糖含量，同时观察记录细胞在显微镜下的形态学变化.通过上述试验选取最优的胰岛素作用时间和胰岛素浓度，建立适宜的HepG2 胰岛素抵抗细胞模型.2.4 不同浓度各萃取物对HepG2细胞胰岛素抵抗模型葡萄糖消耗的影响根据上述考察参数建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型，设置二甲双胍浓度梯度组、胰岛素抵抗模型组、正常对照组和萃取部位石油醚、乙酸乙酯、正丁醇浓度梯度组，其中空白组不接种细胞，每组设置5个复孔.正常对照组每孔各加完全培养液200µL，胰岛素抵抗模型组加10-6mol/L胰岛素的完全培养液200 µL/孔，其余给药组每孔分别加入不同浓度溶液200 µL，于37 ℃、5% CO2培养箱中培养.24h后取各组上清培养液，以葡萄糖氧化酶法测定其葡萄糖含量.随后移出上清培养液，每孔加入180 µL完全培养液和20 µL 0.5% MTT，培养4h，将培养液吸弃，每孔加入150 µL DMSO，震摇10 min，于490 nm处用酶标仪测OD值.2.5 计算葡萄糖消耗量（mmol/L）=对照组葡萄糖含量-给药组葡萄糖含量.2.6 统计分析釆用SPSS 20.0统计学软件对实验数据进行分析，用来表示计量资料，采用单因素方差分析以及t检验，比较各组间差异.3.1 不同浓度胰岛素对HepG2细胞葡萄糖消耗量的影响实验结果见表1，可见随着胰岛素浓度的增大，葡萄糖消耗率越来越大，但当浓度达到10-6mol/L时，葡萄糖消耗率突然下降，几乎与正常对照组一致，说明在较低浓度范围时，胰岛素对葡萄糖的消耗具有一定的促进作用，当达到一定量时，导致了胰岛素抵抗，细胞对葡萄糖的消耗急剧降低.当胰岛素浓度在10-6mol/L时，胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗程度达到最大.倒置显微镜下观察，正常组HepG2细胞为菱形或梭形的贴壁细胞，与典型的肿瘤细胞形态学特征相似，10-6mol/L浓度模型组细胞边缘变成稍圆形，说明高浓度胰岛素对HepG2的活性有一定的抑制作用.3.2 胰岛素作用不同时间对 HepG2 细胞葡萄糖消耗量的影响加入10-6mol/L的胰岛素完全培养液，分别作用8、12、24、36、48h，测得细胞葡萄糖消耗情况见表2.根据结果可知，在最初达到12h时，胰岛素对HepG2的葡萄糖消耗率达到了最大，为41.58%，随着作用时间的延长，葡萄糖消耗率逐渐降低，在24、36、48h分别为20.29%、17.33%、8.98%，说明在24h小时已开始出现胰岛素抵抗，故本实验建立胰岛素抵抗模型中最佳胰岛素浓度为10-6mol/L，最佳作用时间为24h.3.3 不同萃取部位对胰岛素抵抗HepG2细胞葡萄糖消耗的影响及MTT检测结果由结果可知，正常组（p<0.05）单位细胞葡萄糖消耗量明显高于模型组，说明胰岛素抵抗HepG2细胞模型建立成功.另一方面，MTT检测的OD值却显著降低（p<0.05），说明高浓度的胰岛素对细胞产生了一定的毒性，这也可能是导致模型组葡萄糖消耗量下降的原因之一.与HepG2/IR 模型组相比较，二甲双胍不同浓度作用于模型细胞后，模型细胞的葡萄糖消耗量均有不同程度增加，其中葡萄糖消耗量最多的是0.25和0.1 mg/ml浓度组，但由于模型组的OD值（p<0.05）明显高于0.25 mg/ml浓度组的OD值，说明此浓度下二甲双胍的细胞毒性较强，这也可能是二甲双胍在高浓度时对葡萄糖的消耗量反而降低的缘故.不同浓度石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部位作用于模型细胞后，均不同程度地改善了模型细胞的胰岛素消耗量.尤以较高的浓度组0.1、0.25mg/ml对葡萄糖的消耗具有较显著的作用（分别为p < 0.01和 p < 0.05）.3组随着浓度的增加，OD值也随之增加，表明3个不同萃取部位对HepG2细胞的增殖有一定的促进作用，抵消了胰岛素对细胞的毒性作用，同时三组的对葡萄糖的消耗也随之增加，这也可能是长裂苣荬菜改善胰岛素抵抗的机制之一.从整体葡萄糖消耗量分析可见，模型细胞的葡萄糖消耗量在乙酸乙酯部位作用后增加最明显，说明乙酸乙酯部位改善胰岛素抵抗效果最佳.结果见表3.胰岛素抵抗参与了Ⅱ型糖尿病的发生和发展的全过程，是T2DM的重要机制之一[9].因此，从胰岛素抵抗的防治着手寻找抗糖尿病的新药是一个重要的方向.肝脏及周围组织是胰岛素作用的靶器官，HepG2 细胞在高浓度胰岛素作用下，HepG2细胞表面胰岛素受体数目下降程度与胰岛素水平及刺激持续时间呈正相关[2-3].实验结果表明，以10-6mol/L的胰岛素诱导的模型效果较佳，在培养24h后细胞对胰岛素的摄取显著降低，说明了模型的成功.实验表明，各萃取部位对模型细胞的胰岛素抵抗敏感度各异，模型细胞的葡萄糖消耗量在乙酸乙酯部位作用后增加最明显，表明乙酸乙酯部位改善胰岛素抵抗效果最佳.从实验数据可推测：有效范围内的高浓度萃取物对胰岛素抵抗模型细胞的增殖起到促进作用，保护和增强细胞的生命状态免受损伤，以此促进胰岛素抵抗HepG2细胞的葡萄糖消耗；而低浓度的萃取物则是增强细胞对胰岛素的敏感性，来改善胰岛素抵抗状况，但这有待于进一步的实验证明.根据试验情况，石油醚萃取部位主要含大量的叶绿素、脂肪烃和少量萜等极性较小的化合物；乙酸乙酯主要含倍半萜类、三萜类、黄酮类等化合物；正丁醇部位主要是苷类化合物，其中活性以乙酸乙酯和正丁醇部位相对较好.从各萃取部位的收率上来说，石油醚部位也远远低于其它2个部位，不是长裂苦苣菜的主要活性部位.可见，长裂苦苣菜萃取部位中改善胰岛素抵抗效果最佳的是乙酸乙酯部位，为长裂苦苣菜在抗糖尿病领域中的应用研究提供了一定的实验依据.2015年12月6日“华为网院杯”2015全国大学生ICT技能大赛决赛在深圳圆满闭幕，我校电信学院学生吴惠民与林晓东勇夺桂冠，王隆杰老师获得优秀指导教师奖。
藤茶主要成分对胰岛素抵抗HepG2细胞内氧化应激水平的影响
藤茶主要成分对胰岛素抵抗HepG2细胞内氧化应激水平的影响潘慧敏;姜保平;乐亮;肖伟;许利嘉;肖培根【摘要】目的:探讨藤茶主要成分,二氢杨梅素、没食子酸、二氢槲皮素、杨梅素及杨梅苷对胰岛素抵抗HepG2细胞糖消耗及细胞内活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、乳酸(LD)、三磷酸腺苷(ATP)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性的影响.方法:将HepG2细胞分为正常对照组、胰岛素抵抗模型组和样品干预组.用高糖(55 mmol·L-1)诱导HepG2细胞,建立胰岛素抵抗模型,用MTT法检测样品对HepG2细胞增殖的影响;用葡萄糖氧化酶法检测上清中葡萄糖的含量;用分光光度法检测细胞内MDA、LD含量及SOD、CAT活性;用荧光酶标仪检测细胞内ROS和ATP水平.结果:五个化合物在有效浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响;样品干预组葡萄糖消耗量较模型组显著升高;与模型组相比,五个化合物某个或某几个浓度组显著降低细胞内MDA含量,提高SOD、CAT活性及ATP水平;没食子酸、二氢槲皮素和杨梅苷显著降低细胞内ROS水平;除二氢杨梅素外,其余四个化合物均能降低细胞内LD含量.结论:胰岛素抵抗HepG2细胞与对照组细胞相比有较高的氧化应激水平,抗氧化能力减弱.藤茶主要成分能通过降低细胞的氧化应激水平,增加细胞的抗氧化能力,从而预防胰岛素抵抗.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2015(017)003【总页数】5页(P267-271)【关键词】藤茶;HepG2细胞;胰岛素抵抗;氧化应激【作者】潘慧敏;姜保平;乐亮;肖伟;许利嘉;肖培根【作者单位】中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;国家教育部中草药物质基础与资源利用重点实验室北京100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;国家教育部中草药物质基础与资源利用重点实验室北京100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;国家教育部中草药物质基础与资源利用重点实验室北京100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京 100193;国家教育部中草药物质基础与资源利用重点实验室北京100193;中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所北京100193;国家教育部中草药物质基础与资源利用重点实验室北京100193【正文语种】中文胰岛素抵抗(Insulin resistance，IR)是指机体对一定量胰岛素的生物学反应低于预计正常水平的一种现象，也就是机体对胰岛素的反应减退。
人源肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗和逆转模型中FoxO1 mRNA和蛋白表达水平及其意义
人源肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗和逆转模型中FoxO1mRNA和蛋白表达水平及其意义孙静;魏虎来【摘要】目的:探讨人源肝癌HepG2细胞胰岛素抵抗(IR)模型(HepG2/IR)和逆转模型(HepG2/IR-PH)中叉头状转录因子O1(FoxO1)的mRNA和蛋白表达水平,阐明该基因参与IR的作用机制.方法:选择人源肝癌HepG2细胞 ,采用终浓度1×10-10、1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6和1×10-5mol·L-1胰岛素诱导24、48和72 h,对照组细胞不加胰岛素,用葡萄糖氧化酶法检测上清液中葡萄糖水平,计算各组细胞的葡萄糖消耗量,以确定IR模型建立的最佳诱导条件;采用终浓度为0.156、0.313、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000、20.000 mmol·L-1盐酸吡咯列酮(PH)诱导HepG2建立逆转抵抗模型,同时设立对照组,MTT法检测细胞增殖活性,确定PH的最佳逆转浓度;利用Real-time PCR法和Western blotting法检测各组细胞FoxO1 mRNA和蛋白表达水平.结果:1×10-7 m ol·L-1胰岛素作用36 h,葡萄糖消耗量减少45.84%,发生明显的IR,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05).与对照组比较,1.25 mmol·L-1PH逆转抵抗24 h,细胞增殖活性无明显变化(P>0.05).人源肝癌HepG2细胞发生IR时,与对照组比较,FoxO1 mRNA和蛋白的表达水平均明显升高(P<0.01);IR模型逆转后,与对照组比较,FoxO1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05).JP2结论:人源肝癌HepG2细胞IR与FoxO1 mRNA的表达有关联性,FoxO1 mRNA表达水平检测有可能作为胰岛素增敏剂的药效评估指标,降低FoxO1 mRNA表达水平可作为2型糖尿病治疗的新靶点.%Objective: To study the expression levels of forkhead transcription factor(FoxO1) mRNA and protein in the insulin resistance (IR) HepG2 cells model (HepG2/IR) and IR reversal HepG2 cells model (HepG2/IR-PH), andto explore its mechanism in IR.Methods:The HepG2/IR was induced with different doses of insulin (1×10-10, 1×10-9, 1×10-8, 1×10-7, 1×10-6 and 1×10-5 mol·L-1) for different time(24, 36 and 48 h)in the HepG2 cells.The cells in control group were not treated with insulin.The glucose levels in supernant were determined by glucose oxidase method, and the glucose consumption in HepG2 in various groups were calculated to confirm the optimum induction conditions of HepG2/IR.The HepG2/IR-PH was induced with different doses of pioglitazone hydrochloride (PH) (0.156, 0.313, 0.625, 1.250, 2.500, 5.000, 10.000 and 20.000 mmol·L-1) in the HepG2 cells, and control group was set up at the same time. The proliferation activities of cells were observed by MTT assay to confirm the optimum reversal concentration of PH.The FoxO1 mRNA and protein expression levels were detected by Real-time PCR and Western blotting methods.Results: The glucose consumption decreased by 45.84% in HepG2/IR after treated with 1×10-7 mol·L-1 insulin for 36 h, and there was significant difference compared with control group(P<0.05), the proliferation activity of cells had no change in the HepG2/IR-PH after treated with 1.25 mmol·L-1 PH for 24 h(P>0.05).Compared with control group, the expression levels of FoxO1 mRNA and protein in HepG2/IR were significantlyincreased(P<0.01);compared with control group, the expression levels of FoxO1 mRNA and protein in HepG2/IR-PH had no significant differences(P>0.05).Conclusion:The IR of HepG2/IR is associated with the FoxO1 mRNA expression.The detection of FoxO1 mRNA seems to be an indicator to evaluate the efficacy of insulin sensitizer, and inhibiting theexpression of FoxO1 mRNA may be developed as a potential therapy for type 2 diabetes.【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(043)004【总页数】6页(P709-714)【关键词】人源肝癌HepG2细胞;胰岛素抵抗;胰岛素抵抗逆转;叉头状转录因子O1基因【作者】孙静;魏虎来【作者单位】兰州大学第二医院内分泌代谢科,甘肃兰州730000;兰州大学基础医学院医学实验中心,甘肃兰州730000【正文语种】中文【中图分类】R587.1胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)是指机体、器官、组织或细胞对胰岛素的敏感性和反应性降低，糖代谢紊乱的慢性病理过程，是引发2型糖尿病的主要原因之一[1]。
HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及其应用
HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及其应用许乐;逄晓阳;芦晶;张书文;张瑞华;刘鹭;吕加平【期刊名称】《核农学报》【年(卷),期】2017(31)9【摘要】为建立方便、可靠、重复性好的胰岛素抵抗细胞模型,研究胰岛素受体底物-2(IRS-2)蛋白磷酸化与胰岛素抵抗的关系以及不同铬制剂对细胞葡萄糖代谢的作用。
试验采用高胰岛素、高糖联合诱导Hep G2细胞建立胰岛素抵抗模型,通过葡萄糖氧化酶法及噻唑蓝比色法(MTT)分析受试物对细胞葡萄糖代谢及活性的影响,优化最佳造模条件;同时,利用蛋白免疫印迹法(WB)分析IRS-2的蛋白表达及其蛋白磷酸化,验证模型的胰岛素抵抗性。
在此基础上,将模型应用于分析葡萄糖耐量因子(GTF)及其它铬制剂的降糖效果。
结果表明,高胰岛素(10-6mol·L^(-1))和高糖培养基(25 mmol·L^(-1))处理细胞48h,细胞存活率达96%,与对照组相比,葡萄糖消耗量降低了5.7%,IRS-2含量减少31.02%,胰岛素抵抗效果显著,且该胰岛素抵抗模型可稳定维持48 h。
相比于吡啶酸铬和三氯化铬,GTF对细胞葡萄糖代谢有显著的改善作用,其最佳作用浓度为1.0μg·m L-1。
利用HepG2细胞建立体外胰岛素抵抗模型,方法简单可靠、重复性好,可广泛应用于天然活性物质的降糖功能研究。
【总页数】7页(P1775-1781)【关键词】HepG2细胞;胰岛素抵抗;葡萄糖消耗;胰岛素受体底物;葡萄糖耐量因子【作者】许乐;逄晓阳;芦晶;张书文;张瑞华;刘鹭;吕加平【作者单位】中国农业科学院农产品加工研究所;天津科技大学食品工程与生物技术学院【正文语种】中文【中图分类】S852.651【相关文献】1.HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立影响因素研究 [J], 刘迪迪;邱军强;程翠林;王振宇2.HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及在筛选两色金鸡菊活性化合物中的应用[J], 姜保平;乐亮;姚霞;许利嘉;肖伟;肖培根3.HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立及在筛选桑叶有效部位中的应用 [J], 方飞;吴新荣;罗明俐;吕欢4.HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立及盐酸小檗碱改善胰岛素抵抗的实验研究 [J], 龚菂;李芬;邹欣;王定坤;陆付耳;王开富5.胰岛素诱导HepG2细胞胰岛素抵抗模型的建立 [J], 李蒙;魏颖;秦灵灵;徐暾海;刘铜华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一种hepg2细胞高脂模型的构建方法及应用
一种hepg2细胞高脂模型的构建方法及应用
HepG2细胞是一类在骨髓内表达高脂酸受体(HEPG2)的胚胎干细胞,可以在许多疾病中发挥重要作用。
构建HEPG2细胞高脂模型可以帮助深入研究HEPG2细胞的功能、调节机制以及在疾病中的作用。
一种构建HEPG2细胞高脂模型的方法包括以下几个步骤:
1. 细胞筛选:从HEPG2细胞系中筛选表达HEPG2和高密度脂蛋白(HDL)-C的细胞。
可以采用高通量筛选方法,如电泳和细胞计数法。
2. HEPG2的表达及高密度脂蛋白(HDL)-C的测定:通过PCR和流式细胞术等方法检测HEPG2的表达水平和高密度脂蛋白(HDL)-C的含量。
3. 高脂模型的构建:将HEPG2表达细胞和高密度脂蛋白(HDL)-C 含量较高的细胞系进行混合,通过调质技术制备高脂模型。
4. 高脂模型的培养:将制备好的高脂模型进行培养,可以培养在含有HEPG2受体和高密度脂蛋白(HDL)-C的培养基上进行培养。
5. HEPG2细胞高脂模型的分离:将培养好的高脂模型进行分离,得到HEPG2表达且高密度脂蛋白(HDL)-C含量较高的细胞。
应用:HEPG2细胞高脂模型可以在医学研究、疾病治疗方法等领域发挥重要作用。
例如,它可以作为一种新型的药物载体,通过调节HEPG2细胞的表达水平和高密度脂蛋白(HDL)-C含量,来治疗某些疾病。
还可以用于体内移植和细胞治疗等。
一种hepg2细胞高脂模型的构建方法及应用
一种hepg2细胞高脂模型的构建方法及应用
HepG2细胞高脂模型是一种用于研究HepG2细胞代谢途径的模型,构建方法包括:
1. 采集HepG2细胞,将细胞置于含有4%脂肪的培养基中,培养24小时。
2. 取出培养基,离心处理细胞,收集细胞悬液。
3. 将细胞悬液加入含有10%葡萄糖的培养基中,培养24小时。
4. 取出培养基,离心处理细胞,收集细胞悬液。
5. 将细胞悬液加入含有100ng/mLα-淀粉酶的培养基中,培养
24小时。
6. 取出培养基,离心处理细胞,收集细胞悬液。
7. 将细胞悬液加入含有20ul乳清提取物的培养基中,培养24小时。
8. 取出培养基,离心处理细胞,收集细胞悬液。
9. 将细胞悬液加入含有10ul/mLDNA片段的培养基中,培养24小时。
10. 取出培养基,离心处理细胞,收集细胞悬液。
11. 将细胞悬液接种到3T3细胞培养平台上,培养24小时。
12. 取出细胞培养板,轻轻摇晃培养板,将细胞分离到培养基中。
13. 将细胞培养箱的温度设定在37°C左右,培养细胞24小时。
14. 收集细胞培养物,进行PCR检测,确定细胞高脂模型的构建
成功。
该高脂模型的构建方法可以用于研究HepG2细胞的脂肪酸代谢途径、脂肪储存和利用等方面的问题,有助于进一步深入了解HepG2细胞的生物学特性。
体外胰岛素抵抗细胞模型的建立及在药物筛选中的应用
体外胰岛素抵抗细胞模型的建立及在药物筛选中的应用张汝学;贾正平;李茂星;郭丽民;张小华【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2008(24)7【摘要】目的在体外建立肝胰岛素抵抗细胞模型和脂肪细胞胰岛素抵抗模型,并初步应用于中药有效成分的胰岛素抵抗活性筛选中.方法采用高胰岛素诱发HepG2细胞建立肝胰岛素抵抗模型,地塞米松诱发3T3-L1脂肪细胞建立脂肪细胞胰岛素抵抗模型,研究不同药物对胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗的影响.结果将HepG2细胞置于10-6 mol·L-1的胰岛素中36 h,HepG2细胞对胰岛素的抵抗作用最为明显,该特性可维持48 h,但未发现细胞形态学变化;地塞米松作用3T3-L1脂肪细胞后,96 h空白组与模型组葡萄糖消耗量差值最大,此时为胰岛素抵抗的最高状态;脂肪细胞胰岛素抵抗模型成立后,撤掉地塞米松,胰岛素抵抗细胞模型能够在24 h内稳定.某些中药提取成分(如水苏糖、小檗碱和人参皂苷等)能促进HepG2胰岛素抵抗模型和3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的葡萄糖消耗.结论高胰岛素诱导培养法可以复制出稳定可靠的肝胰岛素抵抗细胞模型;地塞米松诱导3T3-L1脂肪细胞也可建立稳定的脂肪细胞胰岛素抵抗模型.【总页数】6页(P971-976)【作者】张汝学;贾正平;李茂星;郭丽民;张小华【作者单位】兰州军区兰州总医院全军临床药理基地,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院全军临床药理基地,甘肃,兰州,730050;兰州军区兰州总医院全军临床药理基地,甘肃,兰州,730050;甘肃省疾病预防控制中心,甘肃,兰州,730000;兰州军区兰州总医院全军临床药理基地,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R284.1;R329.2;R329.24;R363-332;R343.23;R458.5【相关文献】1.胰岛细胞损伤体外模型的建立及在药物筛选中的应用 [J], 孙海峰;常虹;郭雪莹;刘丽佳2.利用新型细胞转移力测定装置建立人前列腺癌细胞（PC-3M）体外筛药模型[J], 刘向云;孙祖越;3.以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用 [J], 陈嘉盛;吴婷;丘玉昌;曹莹;庞建新4.基于荧光素酶的抗巨细胞病毒体外药物筛选模型的建立及应用 [J], 周丹云;吴俊文;蒋情;王庆林;刘如石;全梅芳5.地塞米松体外诱导胰岛素抵抗细胞模型的建立 [J], 谢洁;杨瑞仪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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.论HepG2细胞胰岛素抵抗模型建立影响因素研究刘迪迪，邱军强，程翠林，王振宇*(哈尔滨工业大学化工与化学学院，黑龙江哈尔滨150001)摘要：目的建立体外肝癌（HepG2)细胞胰岛素抵抗（IR)模型，研究血清添加、诱导剂浓度和培养时间 对模型建立的影响。
方法采用不同浓度胰岛素对肝癌HepG2细胞进行不同时间的诱导，建立肝细胞IR模型；以葡萄糖氧化酶法研究不同诱导浓度、培养时间及血清添加对胰岛素抵抗模型细胞葡萄糖消耗量（AGC)的影响。
采用噻唑蓝（MTT)法评价细胞活性，并计算葡萄糖比消耗率（AGC/R)，得到最佳建模条件。
结果 适当提高胰岛素诱导浓度可缩短诱导时间，或可通过延长诱导时间来降低诱导浓度。
胰岛素能促进HepG2细 胞增殖，且在含血清培养基中增殖较迅速。
诱导后的细胞在含血清培养基中培养24 h即能得到理想的胰岛素 抵抗模型。
结论可通过胰岛素诱导培养法建立稳定的IR模型，在含5X10-8m ol/L胰岛素的培养基中诱导48 h再换含血清培养基继续培养24 h，易形成明显的胰岛素抵抗模型。
此HepG2细胞模型在较长时间内（72 h)均 可维持胰岛素抵抗特性。
关键词：胰岛素抵抗；HepG2细胞模型；胰岛素诱导；葡萄糖消耗；血清中图分类号：Q493.4 Q2-33 文献标识码：A文章编号：1672-979X (2018) 01-0001-06 Influencing Factors on Establishment oflnsulin-Resistant HepG2 Cell ModelLIU Di-di,QIU Jun-qiang,CHENG Cui-lin,WANG Zhen-yu(School of C hemistry and Chemical Engineering,Harbin Institute of T echnology,Harbin150001, China) Abstract:Objective To establish a hepatom a carcinom a cell (HepG2 cell)m odel of in su lin resistance (IR)in vitro an d to explore th e effect of serum addition,inducer concentration an d culture tim e on th e model.Methods The HepG2 cells were in duced by different con cen tration s of in su lin for different tim e to establish IR m odel.The effect of in ducer concentration,cu ltu re tim e an d seru m ad d itio n o n th e glucose consum ption(AGC)of IR cell m odel was determ ined by glucose oxidase m ethod.The cell activity was estim ated by MTT m ethod,an d th e rate of glucose consum ption (AGC/R)was calculted to obtain th e optim al condition for establishm ent of IR m odel.Results The in d u ction tim e could be sh o rten ed by proper raise of th e in su lin concentration,or th e in su lin con cen tration could b e reduced by prolongation of th e induction tim e.In sulin may prom ote th e proliferation of HepG2 cells especially in m edium contain in g serum.The in duced cell cu ltu red24 h in th e m edium con tain in g seru m could establish ideal IR cell m odel.Conclusion A stab le IR cell m odel can be establish ed by in su lin in du ction cu ltu re m ethod.The resu lts suggest th at after culture in th e m edium containing 5 X10-8m ol/L insulin for48 h，an d sequential cu lture in th e m edium contain in g seru m for24 h,a n obvious IR m odel was successfully established.This HepG2 cell m odel can m ain tain in su lin resistance for a long tim e(72 h).Key Words:in su lin resistance;HepG2 cell m odel;in su lin induction;glucose consum ption;seru m收稿日期：2017-04-13基金项目：国家重点研发计划项目（子课题）“东北森林区生态保护及生物资源开发利用技术及示范一一红松籽综合加 工利用技术研发与产业化实施”（编号2016YFC0500305-02)作者简介：刘迪迪，博士研究生，主要从事植物化学物与人体健康研究E-mail: 86064396@*通讯作者：王振宇，教授，博士生导师，研究方向：天然产物分离纯化，植物化学与人体健康胰岛素抵抗（insulin resistance，IR)是II型糖尿病的主要致病因素，其特征为机体靶组织对胰岛 素反应不敏感，外周组织利用葡萄糖水平下降，肝 脏细胞不能有效抑制糖异生和糖原分解，即胰岛素 抑制肝脏葡萄糖输出能力下降，造成血糖调节能力 紊乱[1-2]。
研宄表明，机体胰岛素抵抗还易引发并 促进肥胖症、高血压、心血管及动脉粥样硬化等代 谢疾病的发生和发展[3-4]。
从食品或中草药中筛选有效活性成分来改善 胰岛素抵抗，治疗相关疾病已成为研宄的热点[5-10]。
建立稳定可靠的人体外IR细胞模型不仅便于筛 选防治IR的有效药物及活性成分，还可在细胞及分 子水平探索IR发病机制[11]。
肝脏是糖代谢最主要器官之一，对维持血糖 稳定有重要作用。
HepG2细胞来源于肝细胞，是一 种表型与肝细胞极为相似的肝胚胎瘤细胞株，保留 了肝细胞的许多生物学特性，因此，HepG2细胞是 建立体外胰岛素抵抗模型的理想之选[12]。
目前相关研宄中普遍以高浓度胰岛素为模型 诱导剂，但文献报道中，胰岛素诱导浓度及作用 时间存在一定差异[13-18]，且缺乏更为详细系统的研 宄，培养基中是否含血清也很少有明确说明，而诸 多因素均会影响到HepG2细胞对葡萄糖的消耗及细 胞活性，进而影响胰岛素抵抗细胞模型的准确性与 稳定性，因此，本试验展开系统研宄，为建立可靠 稳定的胰岛素抵抗细胞模型提供依据。
1材料与方法1.1仪器与设备二氧化碳培养箱（美国Thermo公司）；SW-C J-1F单人双面净化工作台（上海蓝豹实验仪器 公司）；XD S-1B倒置生物显微镜（上海精密仪 器仪表公司）；mindray MR-96A酶标仪（深圳迈瑞）。
1.2材料与试剂人肝癌细胞（HepG2，哈尔滨肿瘤医院）；牛胰岛素（INS，源叶生物）；噻唑蓝（MTT)，RPMI Medium1640培养基，灭活胎牛血清(F B S)，胰蛋白酶，磷酸盐缓冲液（P B S，Solarbio公司）；葡萄糖测定试剂盒（葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法，上海荣盛）。
2方法2.1 HepG2细胞的培养[19]HepG2细胞复苏，转入100 ml细胞培养瓶中，用含 10 °% FBS的1640培养基，在37 °C、5 °% CO2条件下无菌培养。
当细胞贴壁长满后，弃去培养 基，以PBS洗涤细胞，再以0.25 %胰蛋白酶消化，传代，取对数生长期的细胞用于实验。
2.2 HepG2细胞培养及分组将处于对数生长期的细胞消化后，以含10 °% F B S的RPMI1640培养基调整细胞密度为105个/ ml，接种于96孔板中，每孔100叫继续培养，每块 板均分为空白组（无细胞）、对照组（无胰岛素刺 激，正常培养细胞）及模型组。
待24 h细胞单层贴 壁后，弃去含血清培养基，并以PBS洗涤，更换无 血清培养基继续孵育24 h，弃去培养基，空白组、对照组加无血清培养基，模型组则加入以无血清培 养基配制的胰岛素培养液，胰岛素终浓度分别为 5X10-9，5X10-8，5X10-7，5X10-6、5X10-5mol/ L，每组10个复孔，每孔100 pl。
2.3HepG2细胞对葡萄糖的消耗试验[18’20】考察不同胰岛素浓度及作用时间对细胞消耗 葡萄糖的影响：于37 °C，5 %C O2培养箱中孵育 72 h，每12 h取培养基上清，葡萄糖氧化酶-过氧化 物酶法检测葡萄糖含量，按下式计算葡萄糖消耗 量。
A GC= GC0-GCx式中：A G C为各组细胞的葡萄糖消耗量；GC。
为未接种细胞的空白组中葡萄糖含量；GCx为 测得各组培养液中葡萄糖含量。
2.4模型稳定性研究试验胰岛素作用48 h后，弃去含胰岛素的培养基，每孔以PBS洗涤1次，两块板分别加入无血清培养 基及含10 %血清培养基100叫，继续培养，分别于 24, 48, 72 h取上清培养基测定葡萄糖消耗情况，每24 h更换一次培养基。
按2.3项公式计算葡萄糖消 耗量。
2.5细胞增殖试验葡萄糖消耗试验结束后，移出培养液，每孔加入5 mg/ml MTT 溶液10叫，37 °C 培养4 h ，弃去培养液，每孔加入DMSO 150叫，用酶标仪中速振 荡10 min 至紫色结晶完全溶解，再于490 nm 波长下 检测各孔吸光度（X )，根据^值计算细胞存活率 (%)。
细胞存活率（％) = 乂模型组/X 对照组X 100 %2.6数据统计分析每组试验设10个复孔，结果以5 士s 表示，采 用Ongin 85软件进行数据处理，用SPSS 13.0软件进行单因素方差分析（one way ANOVA )与显著性检 验，以P <0.05为差异有统计学意义。