酶催化荧光猝灭法测定痕量葡萄糖
碳点荧光猝灭法测定粉煤灰中痕量钴
碳点荧光猝灭法测定粉煤灰中痕量钴罗道成;罗铸【摘要】在pH 6.80的B-R缓冲溶液中,基于钴离子对水溶性碳点(CDs)的荧光具有显著的猝灭作用,建立了一种测定钴离子的荧光光度法.在5 mL比色管中,依次加入0.5 mL 3.6×10-4 mol/L荧光碳点溶液(以碳计)、1.0 mL pH 6.80的B-R缓冲溶液和适量的钴离子标准工作溶液后定容,室温下反应10 min,以350 nm为激发波长,440 nm为测定波长测定体系的相对荧光强度,结果表明,钴离子浓度在2×10-6～7.6×10-5 mol/L范围内与CDs的相对荧光强度呈良好的线性关系,其线性回归方程为△F=1.008 7+0.031 25×10-6 c(mol/L),相关系数r=0.998 5,方法检出限1.2×10-7 mol/L.方法用于粉煤灰中痕量钴的测定,测定结果与国家标准方法GB/T 15922-2010相符,相对标准偏差(RSD,n=6)为0.9％～1.0％,加标回收率在98％～104％之间.【期刊名称】《冶金分析》【年(卷),期】2015(035)009【总页数】6页(P62-67)【关键词】碳点;粉煤灰;钴;荧光猝灭法【作者】罗道成;罗铸【作者单位】湖南科技大学化学化工学院,湖南湘潭411201;煤炭清洁利用与矿山环境保护湖南省重点实验室,湖南湘潭411201;湖南科技大学化学化工学院,湖南湘潭411201【正文语种】中文粉煤灰是燃煤电厂排放的废弃物，在粉煤灰研制水处理药剂时，钴是被公认为毒性较强的微量金属元素，对于水处理药剂的应用前景有很大的影响，钴含量太高，会造成二次污染。
因此对粉煤灰中钴的准确测定有着非常重要的意义。
目前测定钴的方法主要有分光光度法[1-3]、催化光度法[4-6]、滴定法[7]、化学发光法[8]、原子吸收光谱法(AAS)[9]、荧光光谱法[10-11]、电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)[12]、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)[13]等。
用磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶测定痕量葡萄糖的方法[发明专利]
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专利名称：用磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶测定痕量葡萄糖的方法
专利类型：发明专利
发明人：李建平,熊志刚
申请号：CN201110391001.X
申请日：20111129
公开号：CN102495047A
公开日：
20120613
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种用磁性纳米粒子固定葡萄糖氧化酶测定痕量葡萄糖的方法。
在碳糊电极表面，通过磁性纳米粒子而修饰固定在电极表面的葡萄糖氧化酶氧化溶液中的葡萄糖生成双氧水，双氧水与鲁米诺溶液形成电致化学发光体系。
该体系在电极电压的作用下产生非常强的电致化学发光信号和电化学信号。
光信号强度在一定范围内与溶液中的葡萄糖浓度成正比。
据此建立了一种测定葡萄糖的电致化学发光分析方法。
在+0.2～+1.4V(vs.SCE)电位范围内进行循环伏安扫描，葡萄糖在
1×10-5～1.0×10-2mol/L浓度范围内与电致化学发光峰强度i呈良好的线性关系。
本发明克服了现有技术存在过于复杂等诸多缺点，灵敏度高，对于葡萄糖的检测易于自动化。
申请人：桂林理工大学
地址：541000 广西壮族自治区桂林市建干路12号桂林理工大学
国籍：CN
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葡萄糖氧化酶或已糖激酶的定量测定法
葡萄糖氧化酶或已糖激酶的定量测定法
葡萄糖氧化酶或已糖激酶的定量测定法有多种。
以下是其中常用的几种方法：
1. 葡萄糖测定盒法：根据葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化生成过氧化氢的特性，利用过氧化氢与酚类底物反应生成有色产物，通过测定产物的吸光度来确定葡萄糖浓度。
2. 葡萄糖氧化酶法：通过测定氧气消耗量或还原型葡萄糖氧化酶释放出的二氧化碳量来间接测定葡萄糖浓度。
3. 比色法：利用已糖激酶对已糖的催化反应，产生具有特定颜色的产物。
通过测定产物的吸光度或荧光强度来确定已糖浓度。
4. 比重法：已糖在含有酸性溶剂的条件下形成有色化合物，通过测定溶液的比重来间接测定已糖浓度。
这些方法在实验室中经常用于定量测定葡萄糖氧化酶或已糖激酶的活性或浓度。
选择适合的测定方法需要考虑具体的实验要求和条件。
萃取催化光度法间接测定痕量抗坏血酸
萃取催化光度法间接测定痕量抗坏血酸孙登明Ξ(淮北煤炭师范学院化学系,淮北235000)摘 要:研究了在pH5.5的H Ac2NaAc缓冲溶液介质中,利用抗坏血酸活化Fe(Ⅲ)催化H2O2氧化邻氨基酚的显色反应,用萃取平衡控制反应时间和水相中邻氨基酚的浓度及反应程度,通过测量424nm下有机相的吸光度,建立了萃取催化光度法间接测定痕量抗坏血酸的新方法。
方法的线性范围为0～50.0μg/L,检出限为6.7×10-7g/L。
方法可用于维生素C片和西红柿中抗坏血酸的测定。
并对反应机理进行了探讨。
关键词:萃取;催化光度法;抗坏血酸;铁;邻氨基酚中图分类号:O657.32 文献标识码:A 文章编号:100020720(2005)0120001204 抗坏血酸(维生素C)是生物体内必不可少的维生素之一,它参与机体内的一系列代谢及反应,刺激肾上腺皮质激素的合成,促进肠道内铁的吸收和解毒作用。
由于该维生素人体不能自身合成,只能从食物中摄取,因此研究食物中抗坏血酸的测定方法有重要的实际意义。
目前,对抗坏血酸的测定有碘量法[1]、荧光法[2]、电化学分析法[3]、化学发光法[4]等。
用动力学光度法测定抗坏血酸的文献报道不多[5～7]。
用萃取催化光度法间接测定抗坏血酸未见报道。
本文研究发现,在pH5.5的H Ac2 NaAc缓冲溶液介质中,Fe(Ⅲ)可催化H2O2氧化邻氨基酚,在此体系中,加入痕量抗坏血酸后,催化反应速度明显加快,且在一定的浓度范围内,指示反应进行的速度与抗坏血酸的浓度呈线性关系,结合萃取手段,经条件实验,建立了萃取催化光度法间接测定抗坏血酸的新方法。
该方法在室温下进行,灵敏度高,设备简单,可用于维生素C片和西红柿中抗坏血酸的测定。
1 实验部分1.1 仪器和试剂VIS2723型分光光度计(上海第三分析仪器厂);pHS23D型酸度计(成都仪器厂)。
抗坏血酸标准溶液:0.50mg/L,用抗坏血酸按常规配制,现配现用;铁(Ⅲ)标准溶液:用NH4Fe(S O4)2・12H2O按常规配成1.00g/L的储备液,使用时再逐级稀释至0.30mg/L的工作液; H2O2溶液:体积分数3%的水溶液;邻氨基酚-氯仿溶液:2.5×10-3m ol/L溶液(避光保存在棕色瓶中);H Ac2NaAc缓冲溶液:pH5.5,用0.1m ol/L H Ac 和0.1m ol/L NaAc配制,在pH计上校准。
葡萄糖(Glu)测定氧化酶法标准操作程序SOP文件
10.3溶血：溶血指数达到850时不会有明显干扰。（血红素浓度约为850mg/dl）
10.4脂血：乳糜指数达到150明显干扰。（甘油三酯浓度约为300mg/dl）
11 临床意义
机体从碳水化合物的代谢中获得血糖。葡萄糖是人体血液中最重要的单糖；餐后血糖浓度大约为5mmol/l。血糖是维持细胞的功能的能量供体。葡萄糖以糖酵解的形式降解。检测葡萄糖的浓度用于对糖代谢紊乱（糖尿病、婴儿性低糖血症、自发性低糖血症以及胰岛细胞癌）的诊断及治疗。GOD－PAP法是建立在1969年出现的Trinder法基础之上的。
ABCD-SOP-04-23
葡萄糖（Glu）测定氧化酶法
版序：ABCD
页码：第2页，Biblioteka 3页5 仪器ROCHE MODULAR P或日立7060生化分析仪。
6 上机操作
见仪器作业指导书，参数设置见附表。
7 参考范围
55-115mg/dl(3.05-5.83mmol/l)
>60岁:80-115mg/dl(4.44-6.38mmol/l)
9 注意事项
9.1 试剂中含迭氮钠，不要吞咽，避免与皮肤及粘膜接触。
9.2血清标本出现溶血、脂血或黄疸的干扰情况参见抗干扰能力。
9.3换算公式：mg/dL×0.0555 = mmol/L
9.4仅应用于体外诊断。
9.5扔弃废物应符合当地的法规。
10 抗干扰能力：
10.1标准：回收率在90％－110％之间。
血糖降低：生理性血糖过低见于妊娠期、哺乳期、饥饿及长期剧烈体力劳动后。病理性血糖过低常见于过量的胰岛素治疗，胰岛细胞增生或瘤，严重肝病及对抗胰岛素的激素分泌不足。
催化动力学光度法测定人发中痕量稀土元素的研究
催化动力学光度法测定人发中痕量稀土元素的研究催化动力学光度法测定人发中痕量稀土元素的研究一、引言稀土元素在人类生活中起着重要的作用，但在人体中的痕量含量却需要进行精密检测。
催化动力学光度法作为一种常用的分析方法，被广泛应用于稀土元素的测定。
本文将探讨催化动力学光度法在人体中痕量稀土元素测定方面的研究，从其原理、实验方法、结果分析以及意义等方面展开讨论。
二、催化动力学光度法的原理和方法催化动力学光度法是一种利用化学反应速率的变化来测定物质浓度的分析方法。
在稀土元素的测定中，常常采用催化动力学光度法来实现对痕量元素的精确测定。
其原理是利用稀土元素对反应物浓度的影响来实现催化作用，从而使反应速率发生变化，最终反映在光度计的测定结果上。
在实验方法上，首先需要准备样品的前处理工作，例如溶解、稀释等。
利用适当的催化剂和试剂进行反应，然后通过光度计测定反应的速率变化，最终计算出样品中稀土元素的含量。
这种方法不仅能够实现对稀土元素的高灵敏度测定，而且具有较高的准确性和重复性。
三、催化动力学光度法测定人体中痕量稀土元素的研究近年来，随着对人体中微量元素的重视，科学家们开始关注人体内痕量稀土元素的含量及其对健康的影响。
有研究表明，稀土元素虽然在人体中含量很少，却对人体生理功能有一定影响。
利用催化动力学光度法对人体中痕量稀土元素进行精密测定具有重要意义。
通过实验研究发现，催化动力学光度法可以在很低的浓度下对人发中的稀土元素进行准确测定。
实验结果显示，该方法具有高灵敏度和较高的准确性，可以满足对人体内痕量稀土元素的测定需求。
该方法对人体样品的前处理要求较低，操作简便，适用于大规模样品的快速分析。
四、意义和展望催化动力学光度法在人体中痕量稀土元素的测定中具有重要的应用意义。
通过该方法，可以更加准确地了解人体内痕量稀土元素的含量及其分布规律，为进一步研究稀土元素对人体健康的影响提供数据支持。
可以通过这一方法为临床诊断和预防提供更可靠的依据，有望在医学领域发挥重要作用。
荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量1
荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B 2的含量一、实验目的1、学习荧光分光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B 2的分析原理；2、掌握荧光分光光度计的操作技术和测定多维葡萄糖粉中维生素B 2的方法。
二、实验原理：1、荧光光谱法定量分析：常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态，发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下的关系：bcI I F εφ0303.2=当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：Kc I F =2、荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
3、荧光分析仪器4、维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：维生素B 2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B 2溶液在430～440 nm 蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535 nm 。
维生素B 2在pH=6～7的溶液中荧光强度最大，在pH=11的碱性溶液中荧光消失，所以可以用荧光光度法测维生素B 2的含量。
多维葡萄糖中含有维生素B 1、B 2、C 、D 2及葡萄糖，其中维生素C 和葡萄糖在水溶液中不发荧光，维生素B 1本身无荧光，在碱性溶液中用铁氰化钾氧化后才产生荧光，维生素D 2用二氯乙酸处理后才有荧光，他们都不干扰维生素B 2的测定。
维生素B 2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，故测维生素B 2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
酶促化学发光法
酶促化学发光法酶促化学发光法（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种常用于生物化学、生物医学和生物技术领域的实验技术，广泛应用于生物分析和生物探测等领域。
本文将从原理、应用、优势和限制等方面介绍酶促化学发光法。
一、原理酶促化学发光法是一种基于酶促反应的光学检测方法。
它的基本原理是利用酶作为介体，将待测物与特异性抗体进行结合，通过酶反应来放大分析信号，最后通过化学发光反应测定待测物的浓度。
二、应用 1. 生物医学研究：ELISA广泛应用于疾病的早期诊断与预测、临床生物标志物的检测、疫苗制备、药物筛选等领域。
例如，ELISA可以用于检测病毒、细菌、肿瘤标志物、激素、抗体等生物分子。
2. 环境监测：ELISA可以应用于环境中污染物的检测，如水质中的重金属、有机化合物和农药残留等。
3. 食品安全检测：ELISA 可以用于食品中有害物质（如致病菌、毒素等）的检测，如检测牛奶中的三聚氰胺、水产品中的重金属等。
三、优势 1. 高灵敏度：酶促化学发光法可以通过酶反应放大检测信号，提高检测的灵敏度，能够检测到低浓度的目标物。
2. 特异性高：ELISA可以通过特异性抗体的使用，实现对特定目标物的识别与定量分析，具有很高的特异性。
3. 操作简便：ELISA的操作相对简单，只需要进行样品处理、抗体反应、洗涤、发光反应等步骤即可完成。
4. 高通量：通过微型化技术和自动化设备的应用，ELISA可以实现对多样本、多分析物进行高通量的检测。
四、限制 1. 基质干扰：在复杂基质中进行检测时，可能受到其它物质的干扰，影响检测结果的准确性。
2. 交叉反应：一些酶促反应可能出现交叉反应，导致误判或假阳性结果。
3. 只能检测目标物浓度范围：ELISA对于样品中高浓度和低浓度的目标物检测效果可能有限，需要选用不同的检测方法来实现全面分析。
总之，酶促化学发光法是一种非常重要的实验技术，在生物医学、生物分析等领域有着广泛的应用。
酶催化
1.1 酶催化概念酶催化是介于均相与非均相催化反应之间的一种催化反应方式,它既可以看成是反应物与酶形成的一种化合物,也可以看成是酶表面产生的吸附物质,然后再进行反应的。
酶在加速或者减慢化学反应方面发挥着重要的意义,在一个活细胞中同时进行着几百种不同的反应,这都是借助于细胞内部相当数量的酶来完成的,它们的反应与其他催化反应一直,催化率与温度、酸碱值以及敏感性方面都有着一定的关系。
1.2 酶催化特点酶催化技术在应用的过程中存在着自己独特的方面,酶催化剂在通常情况下都具备着反应条件温和,具备着很高的区域选择性和立体选择性,并且反应大多数都可以在水中直接进行着。
随着制药工业对手工业化合物需求量的不断增加、人类环保意识的不断增强,酶催化技术越来越受到人们的重视,已成为化学制药领域研究最多的技术之一。
同时,近年来,随着生物技术和基因工程的应用,酶催化技术的性能也得到了很大的提升,酶催化反应以及生成成本也得到了显著的提升。
在这种社会背景下,人们对酶催化剂的认识越来越深入,极大的改变了传统酶催化反应要求提出了许多的新内容。
1.3 酶催化技术发展传统的酶催化反应主要在水相中进行,但自1987年Kilibanov等用脂肪酶粉或固定化酶在几乎无水的有机溶剂中成功地催化合成了肽以及手性的醇、脂和酞胺以来,对酶在非水相介质的催化反应技术的开发及研究报道迅速增加,特别在手性药物的不对称合成及手性药物拆分的生物技术开发中得到了很多应用。
由于脂肪酶本身是一种界面酶,在非水介质中比较稳定,因此，具有良好的工业化应用前景。
非水相酶催化反应是酶催化反应中的一个重要方面。
非水相溶剂通常具有可增加底物溶解度,改变反应的平衡方向, 提高反应的立体选择性,抑制水参与的副反应,易于消除底物和产物的抑制作用，加快生物催化的速率和效率等优点，在药物及药物中间体和食品等方面具有较大的应用价值。
目前非水相中的酶催化技术已衍生出以下几类体系:无溶剂系统无溶剂系统是指以纯底物作为溶剂,没有其他溶剂的稀释和参与。
酶催化荧光猝灭法测定土壤中痕量硒
酶催化荧光猝灭法测定土壤中痕量硒任凯;田丰收;聂芳;陈亚红【摘要】在牛血红蛋白催化作用下,H2O2能够氧化L酪氨酸产生荧光,而硒对该荧光体系具有较强的猝灭作用.据此,建立了一种酶催化荧光猝灭法测定痕量硒的新方法.实验从pH值、L酪氨酸溶液浓度、H2O2浓度,牛血红蛋白溶液浓度和反应时间等方面进行了探讨.在pH9.8的NH3·H2O NH4Cl缓冲溶液中,当L酪氨酸、H2O2和血红蛋白的浓度分别为7.5×10-5 mol/L、1.0×10-4 mol/L和2.0×10-7 mol/L时,测定硒的线性范围为0.3～50μg/mL,方法的检出限为0.05 μg/mL.方法应用于富硒花生土壤中痕量硒的测定,测定值与原子吸收光谱法的测定值基本一致,相对标准偏差为4.6％～4.9％.【期刊名称】《冶金分析》【年(卷),期】2014(034)007【总页数】4页(P78-81)【关键词】硒;牛血红蛋白;酶催化;荧光猝灭法;土壤【作者】任凯;田丰收;聂芳;陈亚红【作者单位】周口师范学院化学化工学院,河南周口466001;周口师范学院药物化学研究所,河南周口466001;周口师范学院化学化工学院,河南周口466001;周口师范学院药物化学研究所,河南周口466001;周口师范学院化学化工学院,河南周口466001;周口师范学院化学化工学院,河南周口466001;周口师范学院药物化学研究所,河南周口466001【正文语种】中文【中图分类】O657.32硒元素是人体必需的矿物质营养素，对提高免疫力和预防癌症非常重要。
当硒缺乏时，人体免疫能力下降，威胁人类的健康［1］。
目前，测定硒的方法有分光光度法［2－5］，原子发射光谱法（AES）［6］，原子吸收光谱法（AAS）［7－8］，电化学分析法［9－10］，气相色谱法［11］，原子荧光光谱法［12－13］，循环中子活化分析法［14］，电感耦合等离子体质谱法（ICP－MS）［15－17］等。
荧光光谱法测定生物炭／秸秆输入土壤后酶活性的变化
第３４卷，第２期 光谱学与光谱分析Ｖｏｌ畅３４，Ｎｏ畅２，ｐｐ４５５‐４５９２０１４年２月 ＳｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙａｎｄＳｐｅｃｔｒａｌＡｎａｌｙｓｉｓＦｅｂｒｕａｒｙ，２０１４ 荧光光谱法测定生物炭／秸秆输入土壤后酶活性的变化张玉兰１，陈利军１倡，段争虎２，武志杰１，孙彩霞３，王俊宇１１畅中国科学院沈阳应用生态研究所森林与土壤生态国家重点实验室，辽宁沈阳 １１００１６２畅中国科学院寒区旱区工程与环境研究所，甘肃兰州 ７３０００９３畅东北大学理学院，辽宁沈阳 １１０００４摘 要 土壤α‐葡萄糖苷酶、β‐葡萄糖苷酶直接参与土壤有机物质的矿化过程，对维持生态系统碳和养分的循环起重要作用。
秸秆或者秸秆炭化物还田是提高碳储量的一种有效措施，输入到土壤后对生物学活性产生一定影响，对碳库转化具有直接或者间接作用。
采用荧光物质作为底物，将９６微孔板和荧光检测法结合，利用多功能酶标仪测定生物炭／秸秆（２畅５ｇ／５０ｇ干土）添加条件下黑土中α（β）葡萄糖苷酶活性。
结果表明，秸秆添加到土壤后，土壤α（β）葡萄糖苷酶活性增强，水稻秸秆处理β‐葡萄糖苷酶活性高于玉米秸秆处理，４０天后仍然保持较强活性，说明秸秆的输入有助于土壤碳素转化。
可能是因为秸秆炭添加提高土壤中养分含量，促进微生物活性，使得土壤酶活性提高，水稻秸秆添加增强土壤酶活性，而玉米秸秆没有促进作用，可能与材料来源不同有关，材料来源与添加效应的关系有待进一步研究。
而生物炭添加对黑土中α（β）葡萄糖苷酶活性影响不大，这与生物炭含速效养分少、自身难降解特性有关。
与传统的分光光度法相比，微孔板荧光法可以灵敏的检测到土壤悬液中的酶活性，可批量检测样品，是一种快速、准确、简便的土壤酶活性测定方法。
关键词 荧光方法；土壤酶活性；生物炭添加；秸秆添加中图分类号：Ｓ１５３畅６ 文献标识码：Ａ ＤＯＩ：１０畅３９６４／ｊ畅ｉｓｓｎ畅１０００‐０５９３（２０１４）０２‐０４５５‐０５ 收稿日期：２０１３‐０４‐０７，修订日期：２０１３‐０７‐１５ 基金项目：公益性行业（农业）科研专项经费项目（２０１３０３０９５‐９），国家“十二五”科技支撑项目（２０１２ＢＡＤ１４Ｂ０４，２０１１ＢＡＣ０７Ｂ０４）资助 作者简介：张玉兰，女，１９７４年生，中国科学院沈阳应用生态研究所副研究员 ｅ‐ｍａｉｌ：ｙｌｚｈａｎｇ＠ｉａｅ畅ａｃ畅ｃｎ倡通讯联系人 ｅ‐ｍａｉｌ：ｌｊｃｈｅｎｃｈｉｎａ＠ｈｏｔｍａｉｌ畅ｃｏｍ引 言 土壤α（β）‐葡萄糖苷酶直接参与土壤有机物质的矿化过程，对维持生态系统碳和养分的循环起重要作用。
酶催化-荧光猝灭法测定药物中的姜黄素
酶催化-荧光猝灭法测定药物中的姜黄素张苗;吕庆銮;岳宁宁;王怀友【摘要】酪氨酸在辣根过氧化物酶催化下被H2O2氧化为强荧光物质S,姜黄素对其荧光产生猝灭作用,据此建立了测定姜黄素的新方法.姜黄素浓度c在0.10～16.0μg/mL范围内与F0/F(F和F0分别为姜黄素存在和不存在时产物S的荧光强度)呈线性关系,线性回归方程c=5.455 2F0/F-5.4860,线性相关系数r=0.9996,检出限为0.02μg/mL,测定结果的相对标准偏差为0.79%(n=10),加标回收率为94.7%～102%.研究了pH值、各物质的量、反应时间、干扰离子等对测定的影响.该法可用于药物中姜黄素含量的测定.【期刊名称】《化学分析计量》【年(卷),期】2008(017)006【总页数】4页(P22-25)【关键词】酪氨酸;酶催化;荧光猝灭;姜黄素【作者】张苗;吕庆銮;岳宁宁;王怀友【作者单位】山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南,250014;山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南,250014;山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南,250014;山东师范大学化学化工与材料科学学院,济南,250014【正文语种】中文姜黄素(Curcumin)是从植物姜黄中提取的具有二酮的色素，已被广泛用作食品添加剂、调味品。
姜黄素具有抗炎[1]、抗肿瘤[2]、抗突变、抗氧化[3]、保肝[4]、保护DNA免受过氧化损伤[5]等广泛的药理作用，而且毒性很低，越来越受到医药工作者的重视。
美国国立肿瘤所已将其列为第三代癌化学预防药物。
目前姜黄素的测定方法主要是高效薄层色谱法[6]、高效液相色谱法[7]、紫外分光光度法[8]。
高效液相色谱法测定的线性范围相对较窄，紫外分光光度法灵敏度低，检测限较高，易受其它物质干扰。
而荧光分析法因其灵敏度高、选择性好等优点被广泛应用于化学、药学、生命科学等领域。
近年来，酶体系因其高灵敏性被广泛地应用于生物化学领域。
葡萄糖氧化酶活力测定(分光度法)
葡萄糖氧化酶活力测定（分光度法）1.原理（1）葡萄糖氧化酶的催化特性：葡萄糖氧化酶的每个酶分子中含有两单位FAD （黄素腺嘌呤二核苷酸），作为受氢体催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生过氧化氢。
C6H12O6+O2=氧化酶C6H12O7+H2O2在一定时间内葡萄糖经氧化酶催化发生反应后，测定其反应液的过氧化氢浓度即可算出葡萄糖氧化酶的活力。
（2）葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化产生的过氧化氢在一定pH值的缓冲溶液中和加热条件下能使靛蓝胭脂红发生褪色反应，并且其反应速度在一定范围内和过氧化氢浓度成正比，据此测定出产生的过氧化氢的量，进而计算出葡萄糖氧化酶活力。
（3）首先利用一系列浓度的过氧化氢标准溶液与靛蓝胭脂红反应，在615nm波长处测定吸光度，建立标准曲线。
然后，作葡萄糖氧化酶催化葡萄糖反应，再取其反应液与一定浓度的靛蓝胭脂红溶液反应随后测定其在615nm波长处测定吸光度，将吸光度值代入标准曲线方程后可推算出氧化酶活力。
2药品（1）0.2mol/L葡萄糖溶液:称取3.96g一水葡萄糖定容于100.00mL冷藏3小时备用，2天内有效。
（2）1．0×10-3mol/L靛蓝胭脂红溶液：称取0.466g靛蓝胭脂红定容于1000mL。
（2）0.2M醋酸-醋酸钠缓冲溶液(pH=5.2)：称取16.16g三水醋酸钠及2.48g冰醋酸定容至1000mL（4）12mg/L过氧化氢标准溶液：准确称取0.040g 30%的过氧化氢溶液（过氧化氢需事先标定取实际值）定容于1000mL。
3实验方法（1）标准曲线的绘制准确吸取0、1、2、3、4、5、6mL过氧化氢标准溶液(12mg/L)，分别置于25mL比色管中，加人1.3mL靛蓝胭脂红溶液(1．0×10-3mol/L)和3．0mL乙酸一乙酸钠缓冲液，再加人蒸馏水稀释至25mL配成含有过氧化氢0.00mg/L、0.48 mg/L、0.96 mg/L、1.44 mg/L、1.92 mg/L、2.40 mg/L、2.88 mg/L的溶液，于沸水浴中加热13min后，用流水冷却比色管5min。
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应 用 化 工 ＡｐｐｌｉｅｄＣｈｅｍｉｃａｌＩｎｄｕｓｔｒｙ
Ｖｏｌ．４７Ｎｏ．３ Ｍａｒ．２０１８
酶催化荧光猝灭法测定痕量葡萄糖
何顺珍１，李菲菲１，陆一松２，林茜１，徐小娜１，杨胜园１
（１．南华大学 公共卫生学院，湖南 衡阳 ４２１００１；２．南华大学附属南华医院，湖南 衡阳 ４２１００１）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｐｈｏｓｐｈａｔｅｂｕｆｆｅｒｓｏｌｕｔｉｏｎ（ｐＨ７．０），ｇｌｕｃｏｓｅｏｘｉｄａｓｅ（ＧＯｘ）ｃａｎｃａｔａｌｙｚｅｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｏｆｇｌｕ ｃｏｓｅｗｉｔｈｏｘｙｇｅｎｇｅｎｅｒａｔｅｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅ，ｔｈｅｎｈｙｄｒｏｇｅｎｐｅｒｏｘｉｄｅｒｅａｃｔｉｏｎｗｉｔｈｅｘｃｅｓｓＩ－ ｉｎｄｉｌｕｔｅ ｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｓｏｌｕｔｉｏｎｔｏｆｏｒｍＩ３－．ＴｈｅＩ３－ ｃｏｍｂｉｎｅｓｗｉｔｈＲｈｏｄａｍｉｎｅ６Ｇ（Ｒｈ６Ｇ）ｔｏｆｏｒｍＲｈ６ＧＩ３ａｓｓｏｃｉａｔ ｅｄｐａｒｔｉｃｌｅｓｗｈｉｃｈｒｅｓｕｌｔｉｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇａｔ５５３ｎｍ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｑｕｅｎｃｈｉｎｇｅｆｆｅｃｔ ｏｆｇｌｕｃｏｓｅｏｎｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｏｆＲｈ６Ｇ，ａｎｅｗｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｈｉｇｈｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙａｎｄｇｏｏｄｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙｆｏｒｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｕｎｄｅｒｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅｉｎｔｈｅ ｒａｎｇｅｏｆ２．０×１０－７ ～１．４×１０－５ ｍｏｌ／Ｌｉｓｌｉｎｅａｒｗｉｔｈｔｈｅｉｒｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇａｔ５５３ｎｍ，ｗｉｔｈ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎｌｉｍｉｔｓｏｆ６．７７×１０－８ ｍｏｌ／Ｌｇｌｕｃｏｓｅ．Ｔｈｉｓａｓｓａｙｗａｓａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｃｏｓｅｉｎ ｔｈｅｓｅｒｕｍｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｓａｔｉｓｆａｃｔｏｒｙｒｅｓｕｌｔｓ，ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓｏｂｔａｉｎｅｄｗｅｒｅ８５．０％ ～１０２．５％． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｇｌｕｃｏｓｅｏｘｉｄａｓｅ；ｇｌｕｃｏｓｅ；ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇ；Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ６Ｇ
收稿日期：２０１７０７１９ 修改稿日期：２０１７０８１７ 基金项目：国家自然基金青年基金项目支持（１１２０５０８５）；湖南省教育厅优秀青年项目资助（１５Ｂ２０２） 作者简介：何顺珍（１９９０－），女，贵州遵义人，南华大学在读硕士，师从杨胜园教授，主要从事化学生物物质分析检测研
究。电话：０７３４－８２８１３９３，Ｅ－ｍａｉｌ：１０３９４９７９６３＠ｑｑ．ｃｏｍ 通讯联系人：杨胜园（１９７５－），女（土家族），湖南吉首人，教授，博士，硕士研究生导师，主要从事化学生物物质分析检测
摘 要：在 ｐＨ７．０的磷酸盐缓冲液中，葡萄糖氧化酶（ＧＯｘ）催化葡萄糖与氧反应生成 Ｈ２Ｏ２，在 Ｈ２ＳＯ４介质中 Ｈ２Ｏ２与 Ｉ－ 发生氧化还原反应生成 Ｉ２，过量的 Ｉ－与 Ｉ２生成 Ｉ３－，Ｉ３－ 使阳离子荧光剂罗丹明 ６Ｇ位于 ５５３ｎｍ波长处的荧光发生猝灭，猝 灭程度与葡萄糖浓度相关，据此建立检测葡萄糖的新方法。方法线性范围为 ２．０×１０－７～１．４×１０－５ｍｏｌ／Ｌ，检出限为 ６．７７ ×１０－８ｍｏｌ／Ｌ。将该方法用于血糖样品测定，加标回收率为 ８５．０％ ～１０２．５％，操作简便、结果准确可靠。 关键词：葡萄糖氧化酶；葡萄糖；荧光猝灭；罗丹明 ６Ｇ 中图分类号：ＴＱ０４１＋．７；Ｏ６５７．３９ 文献标识码：Ａ 文章编号：１６７１－３２０６（２０１８）０３－０６１１－０３
１ 实验部分
１．１ 试剂与仪器 葡 萄 糖、罗 丹 明 ６Ｇ、葡 萄 糖 氧 化 酶、ＤＥＰＣ、
ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ２ＨＰＯ４、ＫＩ、硫酸均为分析纯；实验用水 为超纯水（电阻 １８．２５Ω）。
Ｆ４５００荧 光 光 度 计；ＡＢ２０４Ｓ电 子 分 析 天 平； ＰＢ２０（ＰＢＳ）型精密酸度计。
葡萄糖为体内一种重要化合物，与人类生命活 动息息相关。血糖高低是衡量临床相关疾病的重要 指标［１］。 健 康 人 群 一 天 内 血 糖 水 平 在 ３．８９～ ６．１１ｍｍｏｌ／Ｌ范 围 内［２］，血 糖 过 低 或 过 高 均 会 影 响 人体正常功能，因此发展一种简便、实惠、准确度高 的测定葡萄糖含量的方法十分重要［３］。
研究。电话：１３８７３４４３２３１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙａｎｇｓｈｙｈｙ＠１２６．ｃｏｍ
６１２
应用化工
第 ４７卷
１．２ 溶液配制 １．２．１ 葡 萄 糖 储 备 液 （２．５ｇ／Ｌ） 准 确 称 取 ０．５００７ｇ葡萄糖，溶于 ２００ｍＬ超纯水中。 １．２．２ 罗丹明 ６Ｇ储备液（１×１０－２ ｍｏｌ／Ｌ） 准确 称取 ０．４７９０ｇ罗丹明 ６Ｇ溶于 １００ｍＬ超纯水中。 １．２．３ ＧＯｘ溶液 准确称取 ０．０１００ｇ葡萄糖氧 化酶溶于 １ｍＬＤＥＰＣ溶液中。 １．２．４ Ｎａ２ＨＰＯ４ＮａＨ２ＰＯ４ 缓冲液（ＰＢＳ）（ｐＨ７．０） 均匀混合 ０．２ｍｏｌ／ＬＮａＨ２ＰＯ４ 溶液和 ０．２ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ２ＨＰＯ４溶液，用精密酸度计测定 ｐＨ，直至调制成 ｐＨ７．０。 １．２．５ ＫＩ储备液（１ｍｏｌ／Ｌ） 准确称取１．６６ｇＫＩ 溶于 １０ｍＬ超纯水中。 １．２．６ 硫 酸 溶 液 （０．５ｍｏｌ／Ｌ） 准 确 吸 取１ｍＬ浓 硫酸至 ７ｍＬ超纯水中混匀得 ２ｍｏｌ／Ｌ稀硫酸溶液。 １．３ 实验方法
Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｑｕｅｎｃｈｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｒａｃｅｇｌｕｃｏｓｅ ｕｓｉｎｇｇｌｕｃｏｓｅｏｘｉｄａｓｅ
ＨＥＳｈｕｎｚｈｅｎ１，ＬＩＦｅｉｆｅｉ１，ＬＵＹｉｓｏｎｇ２，ＬＩＮＸｉ１，ＸＵＸｉａｏｎａ１，ＹＡＮＧＳｈｅｎｇｙｕａｎ１
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｕｂｌｉｃＨｅａｌｔｈ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ４２１００１，Ｃｈｉｎａ； ２．ＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＮａｎｈｕａＨｏｓｐｉｔａｌ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＳｏｕｔｈＣｈｉｎａ，Ｈｅｎｇｙａｎｇ４２１００１，Ｃｈｉｎａ）
目前，葡萄糖的检测方法主要有：高效液相色谱 法［４］、离 子 色 谱 法［５］、分 光 光 度 法［６］、生 物 传 感 器 法［７９］、荧光法［１０１１］等。
本文利用罗丹明 ６ｘ）氧化葡萄糖
生成过氧化氢，过氧化氢氧化 ＫＩ生成 Ｉ２，过量的 Ｉ－ 与 Ｉ２生成 Ｉ３－，Ｉ３－ 与阳离子荧光剂罗丹明 ６Ｇ结合形 成缔合物微粒，使其荧光猝灭的原理建立了一种灵 敏、准确检测葡萄糖的方法，可用于血糖的检测。