MPN法培养微生物的原理
MPN法测定氨化细菌、硝化细菌和反硝化细菌
MPN多管发酵法测定氨化细菌、硝化细菌和反硝化细菌1实验原理最大可能数(或最大或然数法，most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数（具体参见《土壤与环境微生物研究法》，科学出版社，2009），适用于测定在一个混杂的微生物群落中但却具有特殊生理功能的微生物类群。
本方法是基于选择适当稀释倍数的悬液，接种在特定的液体培养基中培养，检查培养基中是否有该生理类群微生物的生长。
根据不同稀释度接种管的生长情况，用统计学方法求出该生理类群的微生物数量。
特点：利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
MPN法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
氨化作用是异养细菌将蛋白质水解为氨基酸，进而脱氨基产生氨的过程。
硝化作用是指氨经过微生物的作用氧化成亚硝酸和硝酸的过程。
第一阶段由亚硝酸菌氧化氨为亚硝酸；第二阶段由硝酸菌氧化亚硝酸为硝酸。
这两类细菌都是自养的好氧细菌，生长缓慢，培养时间长。
反硝化作用是一类异养细菌在无氧条件下，利用有机物为电子供体，以硝酸盐为呼吸作用的电子受体，将其还原为N2O、N2的过程。
2实验材料2.1样品（1）固体样品（土样或沉积物等）：取一定质量的样品（1g或10g），装入盛有100ml无菌水的三角瓶中，置于摇床上振荡30min，制成均匀悬浊液。
然后用10倍梯度稀释法将悬浊液稀释成一系列梯度（10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6等，具体视样品而定，微生物丰富的样品稀释的梯度相应大一些）。
（2）液体样品：取一定体积的样品（10ml），装入盛有90ml无菌水的三角瓶中，充分混匀，制成10-1稀释样。
大肠菌群检测(MPN法)
大肠菌群检测(MPN法)大肠菌群检测(MPN法)是一种常用的微生物学技术，可用于检测土壤、水源、食品等中的大肠菌群进行水质和食品安全监测。
本文将介绍大肠菌群及其检测方法-最可能数法(MPN法)。
一、大肠菌群概述大肠菌群是以肠道菌属为主体的一类细菌，包括肠道埃希菌、沙门氏菌、志贺菌、伤寒杆菌等成员，它们可以在人类和动物的肠道中生存并繁殖。
在自然界中，大肠菌群也是广泛存在的微生物家族，如彗星菌、副肠杆菌、耶尔森氏菌等都属于大肠菌群。
1.菌落计数法该方法主要是利用琼脂平板培养皿在水培的条件下，大肠菌群在培养基上经不同时间的生长，形成菌落来进行菌数计数。
缺点是容易受到其他微生物的干扰，只能算出概略的数值，一定误差，没有国家标准。
2. 硝酸德钠试剂法将测样加硝酸德阳试剂进行加热，最终乳黄色的镜检测前进行比色，得出含大肠菌群的细菌群落达标后延迟显色的时间。
该方法已被最可能数(MPN)法所替代。
3. 最可能数法(MPN法)该方法先将测量的样品分别稀释到不同浓度下，再将每一份稀释液添加到以琼脂平板固化培养基为基础的不同培养液中，观察哪一份培养液出现大肠菌群的生长，最后通过MPN表格计算每85ml或100ml的水样中最可能含有的大肠菌群数量，计算公式为：10^x = n / 联合效价（即dilution rate的倒数）其中，x代表最可能数，n代表测量到大肠菌群的样品数。
在实际工作中，MPN法检测显示出了较好的结果，优点是用固定方法，可重复性好，而且可以通过相关将分析获得定量值，便于与相关的标准进行比较。
三、大肠菌群的检测范围1. 水源：大肠菌群检测是办公室里检测饮用水可能携带的最佳方法。
一般情况下，检测过程是检测水中的微生物是否合乎标准。
2.食品：由于食品生产经常存在卫生要求，因此食品也是大肠菌群检测重要的一环。
例如，必须检测火腿或肉类制品中的大肠菌群是否合格以确保食品安全。
3. 其他领域：大肠菌群检测可以用于医学、农业、环境和建筑等领域，如医院污水浑浊度的检测和土壤中大肠菌群的检测。
大肠杆菌的检测MPN计数法
大肠杆菌的检测(MPN计数法) 大肠杆菌的检测在环境和食品微生物检测中至关重要，因为这些微生物的存在可能指示污染和潜在的健康风险。
MPN计数法是一种常用的检测大肠杆菌的方法，下面将详细介绍这种方法。
一、MPN计数法简介MPN计数法，全称Most Probable Number，即最可能数，是一种通过统计学方法估算微生物数量的方法。
它的基本原理是在一定的稀释度下，通过系列梯度稀释的样本中存在微生物的概率来推算样本中实际的微生物数量。
二、MPN计数法检测大肠杆菌的步骤1.样品采集：采集被检样品，如水、食品等，并按照无菌操作的要求进行处理，以避免污染和交叉感染。
2.制备稀释液：将样品进行一系列的稀释，如10-1、10-2、10-3等。
每个稀释度的样品需要进行三份平行试验，以增加结果的可靠性。
3.选择合适稀释度的样品：根据实验结果，选择适合的稀释度的样品进行MPN计数。
这个稀释度应该是使样品中大肠杆菌的数量落在10~100之间，以提高估算的准确性。
4.培养：将选择的稀释度的样品分别接种到含有特殊培养基的试管中，培养基是为了促进大肠杆菌的生长。
每个试管中接种的样品量为10ml。
5.结果分析：经过一定时间的培养后，观察每个试管中的菌落数并记录。
根据统计学原理，通过这些数据可以得出样本中大肠杆菌的最可能数。
6.结果报告：根据实验数据，计算并报告每100ml（或者每1g）样品中大肠杆菌的最可能数。
三、MPN计数法的优势和局限性优势：1.MPN计数法是一种广泛应用的方法，可用于估计微生物的数量，不仅适用于大肠杆菌，还适用于其他微生物。
2.该方法不需要昂贵的仪器设备，操作相对简单，可用于基层实验室。
3.MPN计数法可以提供微生物数量的范围，而非单一数值，对于初步估计和趋势分析具有一定的参考价值。
局限性：1.MPN计数法的主观性较强，结果会受到操作人员的影响。
因此，需要操作者接受专业培训并遵循严格的操作规程。
2.MPN计数法的准确性相对较低，尤其是在微生物数量较少的情况下，可能存在较大的误差。
MPN大肠菌群大肠杆菌原理
MPN大肠菌群大肠杆菌原理MPN的全称是Most Probable Number，即最有可能数目。
MPN是一种用于测定微生物数量的方法。
在微生物学中，常常需要知道一个环境样品中微生物的数量，这对于病原微生物的检测、食品与饮用水质量的检验等具有重要意义。
MPN方法的原理基于一种统计学的原则，即当样品中存在微生物时，根据样本连续稀释后的阳性结果的比率可以估算样品中微生物的数量。
首先，将样品连续稀释，然后分别将稀释液接种到不同的培养基中，根据不同培养基的阳性结果来估算微生物数量。
大肠菌群是人类消化系统中的一类细菌。
它们主要分布在人体肠道的大肠中，经常与人体共生共存。
通常情况下，大肠细菌对人体有很多益处，如帮助消化食物、合成维生素等。
然而，有些大肠细菌可能是致病菌，会导致人体感染。
因此，对大肠菌群的检测对于维护人体健康具有重要意义。
大肠杆菌（Escherichia coli）是大肠菌群中的一种细菌，是最常见的肠道细菌之一、大肠杆菌是革兰氏阴性杆菌，通常呈杆状且单株分离。
它们在肠道中发挥着重要的生理功能，如参与食物消化、产生维生素和促进免疫系统的功能。
此外，大肠杆菌在医学和微生物学中也经常被用作实验模型。
大肠杆菌的检测原理一般采用培养方法。
首先，将样品中的细菌进行传代培养，为了区分大肠杆菌和其他微生物，通常会在培养基中加入选择性抑制剂。
在培养基中生长的细菌经过一段时间后会形成典型的大肠杆菌形态，如菌落大小、形状和颜色等。
此外，还可用生化试剂进行进一步检测，如糖发酵试验和气体产生试验等，以确定细菌是否为大肠杆菌。
总结起来，MPN是一种用于估算样品中微生物数量的方法，大肠菌群是人体肠道中的一类细菌，而大肠杆菌则是大肠菌群中的一种最常见细菌。
大肠杆菌的检测一般采用培养方法，通过培养基中细菌的生长和形态特征以及生化试剂的反应来确定是否为大肠杆菌。
这些检测方法对于保障人体健康和食品安全具有重要作用。
MPN法测定食品中大肠杆菌群数
知识点：MPN法测定大肠杆菌群数情境：微生物检测技术任务：MPN法测定大肠杆菌群数课程：食品微生物技术MPN 法测定大肠菌群原理一、大肠菌群什么叫大肠菌群大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48h内发酵乳糖并产酸产气。
二、MPNMPN❞食品中大肠菌群数是以每100 mL（g）检样内大肠菌群最近似数（The most probable number，简称MPN）表示。
❞据此含义，所有食品卫生标准中所规定的大肠菌群均应以每mL（g）食品内允许含有大肠菌群的实际数值为报告标准。
三、MPN法测定原理MPN法是统计学和微生物学结合的一种定量检测法。
待测样品经系列稀释并培养后，根据其未生长的最低稀释度与生长的最高稀释度，应用统计学概率论推算出待测样品中大肠菌群的最大可能数。
大肠菌群测定步骤1.液体样品稀释以无菌吸管吸取25 mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）或其他无菌容器中充分振摇或置于机械振荡器中振摇，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
2.梯度稀释❞用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取（1:10）样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管混匀或换用1支1 mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，作成1:100的样品匀液。
❞根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。
每递增稀释1次，换用1支1 mL灭菌吸管或吸头。
从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。
五、初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验（证实试验），如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。
mpn法的定义
mpn法的定义MPN法是微生物学上常用的一种实验方法，用于定量分析水样等溶液中微生物的浓度。
MPN是“最概然数目”（Most Probable Number）的缩写，通过MPN法可以估计水样中微生物的数量，从而评估水质的卫生状况。
一、MPN法的原理MPN法的原理基于一种叫做“连续稀释法”的思想，即将原始水样连续稀释至一定倍数后，通过培养基中微生物的生长状况来推测原始水样中微生物的数目。
通常，MPN法需要用到一系列稀释液，每个稀释液中微生物的浓度比前一个稀释液低。
接种这些稀释液到培养基中，观察培养基中微生物的生长状况，通过统计阳性培养管的数量来估算原始水样中微生物的浓度。
二、MPN法的步骤1. 准备一系列稀释液：使用无菌的生理盐水或者其他适宜的稀释液，按照一定比例将原始水样逐级稀释。
2. 取出一定体积的每个稀释液，接种到含有适宜培养基的试管或培养皿中。
3. 培养：将接种好的培养基进行培养，一般在适宜的温度下进行，时间根据微生物的生长速度来确定。
4. 观察结果：观察培养基中是否有微生物的生长，通过阳性培养管的数量来确定MPN值。
5. 计算MPN值：根据选择性统计表，找出阳性培养管数量对应的MPN值，即可估算出原始水样中微生物的浓度。
三、MPN法的优势和局限性1. 优势(1) MPN法不需要进行精确的计数，只需要统计阳性培养管的数量，操作相对简单，不需要高度专业的技术。
(2) 适用范围广：MPN法适用于各种水质、土壤等复杂溶液中微生物的浓度估算，具有广泛的应用前景。
(3) 可以通过MPN法估计微生物的浓度变化趋势，用于监测水体的卫生状况和水污染等级。
2. 局限性(1) MPN法只能估算微生物的数量，无法区分微生物的种类和生物学特性，不适合于需要准确鉴定微生物种类的实验。
(2) 受到培养基种类、温度、培养时间等因素的影响，结果可能会存在一定的误差。
(3) MPN法需要的实验过程时间较长，约需数天至数周，无法实现实时监测。
土壤农业化学分析方法
土壤农业化学分析方法一、引言在现代农业生产中，土壤是农作物生长发育的基础，而了解土壤的化学性质对于合理施肥和提高农作物产量至关重要。
因此，土壤农业化学分析方法的研究和应用成为农业科学领域中的重要课题。
本文将介绍常用的土壤农业化学分析方法，并论述其原理、步骤以及应用。
二、土壤样品的采集与处理1. 采集样品为了保证分析结果的准确性，土壤样品的采集需要注意以下几点：（1）代表性：采集的样品要能够代表整个农田或实验区域的土壤特征。
（2）分层采集：按不同土层分别采集样品，以了解土壤的垂直差异。
（3）混合样品：将同一土层的多个样品混合均匀，避免局部杂质对分析结果的干扰。
2. 处理样品土壤样品采集后，需要经过一系列处理步骤，包括干燥、研磨和过筛等：（1）干燥：将土壤样品放置在通风干燥的环境中，待干燥至恒定质量。
（2）研磨：使用研磨仪或万能研磨机对土壤样品进行细磨，以提高分析的精度和准确性。
（3）过筛：使用具有标准孔径的筛网对土壤样品进行过筛，以去除颗粒过大或过小的杂质。
三、土壤酸碱度的测定方法土壤的酸碱度是指土壤溶液中酸性或碱性物质的浓度程度，常用的测定方法包括盐酸法、钙代换法和酸碱滴定法：1. 盐酸法盐酸法是利用盐酸与土壤中的碳酸盐反应，计算出土壤的酸性度。
具体步骤如下：（1）取一定质量的土壤样品，并加入饱和盐酸。
（2）反应一定时间后，用酚酞指示剂进行指示。
（3）用标准盐酸滴定溶液滴定反应液，记录滴定量。
（4）根据滴定量计算土壤的酸性度。
2. 钙代换法钙代换法是利用钙盐与土壤中的可交换性酸根进行置换反应，测定土壤的酸碱度。
具体步骤如下：（1）取一定质量的土壤样品，并加入确定浓度的钙盐溶液。
（2）在一定时间内，将可交换性酸根与钙盐发生置换反应。
（3）通过测定反应后土壤溶液中的钙离子浓度，计算出土壤的酸碱度。
3. 酸碱滴定法酸碱滴定法是利用酸和碱之间中和反应的滴定法，测定土壤的酸碱度。
具体步骤如下：（1）取一定质量的土壤样品，并加入适量的水溶液。
微生物计数方法
微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理测定微生物细胞数量的方法很多，通常采取的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不容易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采取血球计数板，一般细菌则采取彼得罗夫·霍泽（PetrofHausser）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不克不及使用油镜，计数板下部的细菌不容易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图211），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106 。
因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d）三、实验器材1．活资料：酿酒酵母（Saccharomycescerevisiae）斜面或培养液。
mpn法的定义
mpn法的定义MPN法，即Most Probable Number method，是一种常用于微生物计数的方法。
它基于统计学原理，通过观察微生物生长情况来估计样品中微生物的数量。
MPN法主要用于水质检测、食品卫生与安全监测等领域，被广泛应用于微生物数量极低的环境中。
MPN法以识别微生物在培养基上生长为基础，通过连续稀释后培养液中微生物的生长情况，推断原料样品中微生物数量的多少。
具体操作过程一般分为三个步骤：预处理、连续稀释培养、结果判断与计算。
首先要对样品进行必要的预处理，如过滤、破碎或浸泡等，以提高微生物的检出率。
然后，将预处理后的样品分别进行连续稀释，即从较高浓度到较低浓度稀释，每一次稀释取一定体积的样品放入培养基中。
最后，观察培养液中是否出现微生物生长，如果有，则对最高稀释度出现生长的培养液进行继续分次稀释，直至不能再观察到生长。
MPN法的原理是基于生物统计学的概念和多项分布的理论。
按照泊松分布原理，如果每次实验获取的结果仅有两个可能的结果，而这两个可能的结果的发生是相互独立且概率相等的，那么当试验次数趋向于无穷大时，可能性较小的结果出现的次数也将趋向于无穷小，可能性更大的结果出现的次数将趋向于无穷大。
而在MPN法的连续稀释过程中，每一次稀释都相当于进行了一次试验，微生物是否生长则相当于试验的结果。
通过统计每次试验中微生物生长的概率，就可以推断出原始样品中微生物的数量。
MPN法的优点是简单、快捷、不需要精确称量，能根据生物统计原理推断微生物数量。
此外，MPN法还有较高的检测灵敏度，能够检测到微生物数量很低的样品。
与传统的菌落数学进行计数相比，MPN法不仅能够消除人为误差，还考虑到微生物的非均匀分布问题。
此外，由于MPN法只需要进行液体培养，可以适用于各种微生物的检测。
然而，MPN法也存在一些缺点，如对培养基选择要求高，试验过程中需要注意反应容器的无菌处理，且仅能提供微生物数量的范围，无法给出准确的数量。
MPN法的名词解释
MPN法的名词解释MPN法（Most Probable Number Method）是一种经典的微生物计数方法，用于估计水样中微生物的数量。
该方法是通过观察微生物在一系列稀释液中的生长情况，推断出初始水样中微生物的最可能数目。
MPN法被广泛应用于微生物学研究、环境监测和食品安全等领域。
MPN法的核心原理是基于统计学和概率理论。
在MPN法中，将水样进行多次稀释，然后分别将稀释液接种到含有合适培养基的培养皿中。
经过一段时间的培养后，观察培养皿中是否出现微生物生长，以及生长的程度。
根据出现生长和未出现生长的情况，利用MPN表格或统计计算方法，便可以推算出水样中微生物的数量。
MPN法的优点之一是适用于无法进行精确计数的微生物。
在某些情况下，如细菌或真菌形态相似，难以通过传统计数方法进行区分和计数。
而MPN法通过观察生长情况，以概率的方式估计数量，能够应对这种情况。
此外，MPN法还可以处理少量微生物的情况，当目标微生物数量较少时，进行稀释后的MPN法能够提高计数的准确性。
然而，MPN法也存在一些限制和局限性。
首先，该方法需要进行多个稀释液的培养，耗费时间和耗材较多。
其次，MPN法在处理大量微生物时，可能会导致结果的不确定性。
在较高的MPN值范围内，MPN法计算的误差会增大。
此外，MPN法对特定的微生物生长条件要求较高，对于某些特殊菌株或特殊培养条件，可能存在误差。
为了提高MPN法的准确性和可靠性，研究人员不断优化和改进该方法。
例如，应用分子生物学技术，如聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量PCR，可以将MPN法与分子方法结合，提高微生物检测的灵敏性和准确性。
此外，利用自动化技术、高通量技术和机器学习等方法，也可以加快MPN法的操作速度，提高数据分析和解释的效率。
MPN法在卫生学和环境科学中具有重要应用。
例如，在水质监测中，MPN法可以用于估计水样中细菌的数量，进而评估水质的安全性。
在食品安全领域，MPN法可以用于分析食品样品中的病原微生物，如沙门氏菌、大肠杆菌等，从而判断食品是否受到污染。
食品微生物学检验中大肠菌群MPN_计数法的应用与准确性分析
食品微生物学检验中大肠菌群MPN计数法的应用与准确性分析王甲芳，王娟娟，周 敏（山东省济南市历下区疾病预防控制中心，山东济南 250013）摘 要：本文借鉴国家标准GB 4789.3—2016中第一法MPN计数法，分析其在食品微生物学检验中的应用和准确性，并提出提高大肠菌群MPN计数法准确性的建议，旨在提升食品微生物学检验的精确性和可靠性，进一步保障人们的健康安全。
关键词：食品微生物学；大肠菌群；最可能数计数法；准确分析Application and Accurate Analysis of Most Probable Number (MPN) Method for Coliform in Food Microbiology TestingWANG Jiafang, WANG Juanjuan, ZHOU Min(Jinan Municipal Center for Disease Control and Prevention, Li Xia District, Jinan 250013, China) Abstract: In this paper, the first MPN counting method in GB 4789.3—2016 was used to analyze its application and accuracy in food microbiology inspection, and suggestions were put forward to improve the accuracy of coliform MPN counting method, aiming at improving the accuracy and reliability of food microbiology inspection and further guaranteeing people’s health and safety.Keywords: food microbiology; coliform; most probable number method; accurate analysis食品微生物学检验是保障食品安全和公众健康的重要手段。
大肠菌群MPN法的设计原理
大肠菌群MPN法的设计原理
大肠菌群MPN法是一种用于检测环境水样和食品样品中大肠菌群数量的方法。
它的设计原理基于以下几个方面：
1. 大肠菌群指标：大肠菌群是一类广泛存在于环境中的微生物，其中包括了多种大肠杆菌和其他肠道细菌。
大肠菌群可以作为一种指标，用来评估水质和食品中的细菌污染程度。
2. MPN法：MPN（Most Probable Number，最可能数）法是一种常用的微生物计数方法。
它通过对不同稀释度的样品进行对比培养，观察细菌生长情况，从而推测出细菌的数量。
3. MPN法的流程：大肠菌群MPN法的流程一般包括以下几个步骤：首先，将样品进行预处理，如加入适当的培养基和抑制剂，以排除其他非目标菌的影响；然后，将样品分成若干个不同稀释度的试管；接下来，将试管中的样品逐渐转移到培养基中进行培养；最后，观察培养基中的生长情况，根据特定的生长特征，确定大肠菌群的MPN值。
4. 数据分析：根据大肠菌群MPN法的设计原理，可以使用统计学的方法对实验结果进行分析和计算，得出大肠菌群的数量。
通过与相关标准进行比较，可以评估环境水样或食品样品是否符合卫生标准。
总而言之，大肠菌群MPN法通过稀释样品、对比培养和数据分析等步骤，可以量化环境水样和食品样品中大肠菌群的数量，从而评估细菌污染程度。
MPN计数法
实验十二稀释培养测数法（MPN）一、实验目的通过对好气性自生固氮菌的计数，了解稀释培养计数（MPN）的原理和方法。
二、实验原理最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10-8重复数 5 5 5 5 5 5 出现生长的管数 55 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8稀释液的试管全无生长。
由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5的稀释倍数为100 000）。
食品中大肠菌群的测定(MPN法)
五、实验步骤
检样 稀释
大肠菌群检验程图 （新国标MPN法）
月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）36±１℃，24~48±2h
不产气
产气 煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 36±１℃，24~48±2h
不产气
产气
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
报告
1、样品处理：
❖ 固体和半固体食品：以无菌操作取25g样品，放入装 有225 mL生理盐水的三角瓶中，充分振荡，制成 1:10样品匀液无菌均质杯或无菌均质袋内，于8000 r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液。
四、实验器材
1、培养基：月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤、煌绿乳糖 胆盐（BGLB）肉汤
2、仪器或其他用具：电子天平（感量0.1g）、无菌不锈钢 勺、无菌称量纸、无菌吸管（1 mL和25 mL）、试管、 三角瓶、无菌生理盐水（9mL/管，225mL/三角瓶内含 适量玻璃珠）、无菌1 mol/L NaOH、无菌1 mol/L HCl、 75%酒精棉球、广口瓶、灭菌剪刀、灭菌镊子、酒精灯、 精密pH 试纸、恒温培养箱、高压灭菌锅、均质器、振荡 器、接种环等。
1、样品处理：
❖ 液 体 食 品 ： 以 无 菌 吸 管 吸 取 样 品 25mL 放 入 装 有 225mL生理盐水的无菌玻璃瓶（瓶内预置适当数量 的玻璃珠）中，以30cm幅度、于7s内振摇25次（或 以机械振荡器振摇）,制成1:10的样品匀液。
2、样品稀释：
1ml
1ml 1ml
生理 盐水
1:10
25g/m
1:100 1:1000 1:10000
l样品
注意：吸管尖端不要触及稀释液面，每递增稀释1
次，用1 支1mL无菌吸管。从制备样品匀液至
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
mpn法和平板计数法的原理及适用范围
MPN法和平板计数法是微生物检测中常用的方法，用于对水样或
其他样品中的微生物数量进行估算。
这两种方法都是基于微生物在特
定条件下的繁殖规律而设计的。
MPN法（Most Probable Number）是一种间接计数法，适用于微
生物含量较低的样品。
它基于微生物在液体培养基中的繁殖规律，通
过观察培养液的变化来估算微生物的数量。
具体操作时，样品通过稀
释系列，分别接种到多个培养管中，并根据培养管内是否有微生物生
长来判断MPN。
平板计数法是一种直接计数法，适用于微生物含量较高的样品。
它通过将样品均匀地涂布在含有固体培养基的平板上，使其中的微生
物形成可见的菌落。
然后，通过数个平板上的菌落数量，可以估算样
品中微生物的数量。
这种方法的优点是操作简单，但对于微生物数量
较低的样品不太适用。
MPN法和平板计数法的适用范围略有不同。
MPN法通常用于对含
有微生物数量较低的样品进行估算，例如食品、饮用水等。
平板计数
法则常用于对微生物含量较高的样品进行计数，例如污水、土壤等。
选择合适的方法取决于待测试样品的特性以及所需的灵敏度和准确性。
综上所述，MPN法和平板计数法是常用的微生物检测方法，通过
对微生物繁殖规律的研究来估算样品中微生物的数量。
两种方法各有
优势，适用范围有所不同，应根据实际需要选择合适的方法进行微生
物检测。
菌落总数计数方法
菌落总数计数方法菌落总数是微生物学中常用的一种指标，用于评价食品、水、空气等样品中微生物的数量。
正确的菌落总数计数方法对于食品安全和环境卫生具有重要意义。
下面将介绍几种常用的菌落总数计数方法。
首先，最常用的方法是平板计数法。
平板计数法是将待测样品均匀涂布在富营养培养基平板上，然后在恒温箱中进行培养，待菌落生长后进行计数。
这种方法简单直观，适用于绝大多数微生物。
但是，对于某些微生物，可能会出现菌落过于密集而无法准确计数的情况。
其次，膜过滤法也是一种常用的菌落总数计数方法。
这种方法适用于水样等微生物数量较多的样品。
将待测样品通过膜过滤装置过滤到富营养培养基膜上，然后将膜培养在富营养培养基上，待菌落生长后进行计数。
膜过滤法可以避免菌落过于密集的情况，使得计数更加准确。
另外，还有一种称为MPN法的菌落总数计数方法。
MPN法适用于微生物数量较少的样品，通过对待测样品进行稀释，然后分别进行多管培养，最后根据阳性管数目来推断微生物数量。
这种方法适用于某些微生物难以培养的情况，但是操作相对复杂，需要较长时间。
除了上述几种常用的方法外，还有一些新型的菌落总数计数方法不断被提出和改进。
例如，流式细胞术结合荧光染色技术可以实现对微生物的快速计数和鉴定，大大提高了检测效率。
此外，基于图像分析的计数方法也在不断发展，可以实现对微生物菌落的自动化计数和分析。
总的来说，菌落总数计数方法的选择应根据具体的样品特点和实验要求来确定。
在进行菌落总数计数时，需要严格按照操作规程进行，避免外界微生物的污染，保证结果的准确性。
希望通过本文的介绍，可以帮助大家更好地了解菌落总数计数方法，提高微生物检测的准确性和效率。
MPN法培养微生物的原理
稀释培养测数法（MPN）最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10 -8重复数 5 5 5 5 5 5出现生长的管数 5 5 5 4 1 0根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6 稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7 稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8 稀释液的试管全无生长。
由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5 的稀释倍数为100 000）。
那么，1ml原菌液中的活菌数＝17×100 000 = 17×105 。
mpn计数法
mpn计数法MPN计数法是一种微生物计数方法，MPN的全称是Most Probable Number，中文名则为最概然数目法。
该方法适用于微生物数量比较少的情况下，是一种常用的微生物测定方法。
在水处理、食品卫生、微生物学研究等领域都得到了广泛的应用。
一、MPN计数法的原理MPN计数法是以生物学理论和数学统计学理论为基础，通过正态分布的概率推断法将微生物数目确定在一定范围内的方法。
该方法将微生物分为阳性、阴性和可疑阳性三类，根据这三类微生物所出现的频次计算出MPN。
在这个过程中关键点在于设定阳性、阴性以及可疑阳性的判断标准，并根据这些标准来确定微生物的MPN。
二、MPN计数法的操作步骤MPN计数法的操作过程比较复杂，主要包括以下几个步骤：(1) 进行前处理将要测试的样品进行预处理，根据样品的不同可以进行不同的处理方式，例如钠脱氧胆汁盐和十二烷基硫酸钠等。
(2) 常规菌落计数使用其他方法或设备进行常规的菌落计数，以知道样品中的微生物数量和种类。
(3) 设定阴阳性界限根据实验对象确定阳性和阴性的判定标准，例如，可以采用白水样品中的菌落数来判定阴阳性，通常阳性为有菌落生长的样品数除以样品总数，阴性则为未检测到菌落的样品数除以样品总数。
(4) 观察可疑阳性结果根据实验结果观察到可疑阳性片段和形态，然后确定该段为可疑阳性。
根据阳性、阴性和可疑阳性的比例测出对应的MPN值。
(5) 统计分析利用数学统计学方法计算出样品中微生物的MPN值，并进行相应的数据分析。
三、MPN计数法的优缺点优点：(1) 适用范围广：该方法可以用于测定微生物数目比较少的样品，也可以直接用于水体和土壤等复杂环境样品的分析。
(2) 准确率高：MPN计数法是一种很精确的微生物计数方法，可以提供准确的微生物量测定结果。
(3) 操作方法简单：相对于其他微生物计数方法，MPN 计数法的操作步骤简单，易于操作。
缺点：(1) 时间成本较高：MPN计数法需要在特定的培养基上进行细菌培养，并且要有一定的时间才能观察出所需结果。
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稀释培养测数法（MPN）
最大或然数(most probable number，MPN)计数又称稀释培养计数，适用于测定在一个混杂的微生物群落中虽不占优势，但却具有特殊生理功能的类群。
其特点是利用待测微生物的特殊生理功能的选择性来摆脱其他微生物类群的干扰，并通过该生理功能的表现来判断该类群微生物的存在和丰度。
本法特别适合于测定土壤微生物中的特定生理群（如氨化、硝化、纤维素分解、固氮、硫化和反硫化细菌等。
见附表23-1）的数量和检测污水、牛奶及其他食品中特殊微生物类群（如大肠菌群）的数量，缺点是只适于进行特殊生理类群的测定，结果也较粗放，只有在因某种原因不能使用平板计数时才采用。
MPN计数是将待测样品作一系列稀释，一直稀释到将少量（如lm1）的稀释液接种到新鲜培养基中没有或极少出现生长繁殖。
根据没有生长的最低稀释度与出现生长的最高稀释度，采用“最大或然数”理论，可以计算出样品单位体积中细菌数的近似值。
具体地说，菌液经多次10倍稀释后，一定量菌液中细菌可以极少或无菌，然后每个稀释度取3—5次重复接种于适宜的液体培养基中。
培养后，将有菌液生长的最后3个稀释度（即临界级数）中出现细菌生长的管数作为数量指标，由最大或然数表（见附录九）上查出近似值，再乘以数量指标第一位数的稀释倍数，即为原菌液中的含菌数。
如某一细菌在稀释法中的生长情况如下；
稀释度 lO-3 10-4 10-5 lO-6 10-7 10 -8
重复数 5 5 5 5 5 5
出现生长的管数 5 5 5 4 1 0
根据以上结果，在接种lO-3—10-5稀释液的试管中5个重复都有生长，在接种lO-6 稀释液的试管中有4个重复生长，在接种10-7 稀释液的试管中只有1个生长，而接种10-8 稀释液的试管全无生长。
由此可得出其数量指标为“541”，查最大或然数表得近似值17，然后乘以第一位数的稀释倍数（10-5 的稀释倍数为100 000）。
那么，1ml原菌液中的活菌数＝17×100 000 = 17×105 。
即每毫升原菌液含活菌数为
l700000个。
在确定数量指标时，不管重复次数如何，都是3位数字，第一位数字必须是所有试管都生长微生物的某一稀释度的培养试管，后两位数字依次为以下两个稀释度的生长管数，如果再往下的稀释仍有生长管数，则可将此数加到前面相邻的第三位数上即可。
如某一微生物生理群稀释培养记录为：
稀释度 lO -1 10-2 10 -3 lO-4 10-5 10 -6
重复数 4 4 4 4 4 4
出现生长的管数 4 4 3 2 1 0
以上情况，可将最后一个数字加到前一个数字上，即数量指标为“433”，查表得近似值为30，则每毫升原菌液中含活菌30×102 个。
按照重复次数的不同，最大或然数表又分为三管最大或然数表、四管最大或然数表和五管最大或然数表。
应用MPN计数，应注意两点，一是菌液稀释度的选择要合适，其原则是最低稀释度的所有重复都应有菌生长，而最高稀释度的所有重复无菌生长。
对土壤样品而言，分析每个生理群的微生物需5—7个连续稀释液分别接种，微生物类群不同，其起始稀释度不同(见附表1)；二是每个接种稀释度必须有重复，重复次数可根据需要和条件而定，一般2—5个重复，个别也有采用2个重复的，但重复次数越多，误差就会越小，相对地说结果就会越正确。
不同的重复次数应按其相应的最大或然数表计算结果。