染色体末端微小结构异常的分子细胞遗传检测_谭跃球

染色体末端微小结构异常的分子细胞遗传检测

谭跃球,李麓芸,

卢光①

(中南大学湘雅医学院人类生殖工程研究室,长沙　410078)

摘要:为检出易于被忽略的染色体末端微小结构异常,为生育提供指导,选取特异性7号全染色体探针、X 染色体长臂探针和7q 亚端粒(7q36※qter )探针,用荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization ,FISH )结合G 显带技术分析2个病例,其中病例1有不良妊娠史并疑有末端微小易位,病例2在G 显带水平已发现为X 和7号染色体易位的卵巢早衰患者。结果表明,FISH 确诊病例1为染色体末端的隐匿易位,病例2的易位断点得到精确定位,它不在7q36而在7q 末端。应用特异性染色体探针及亚端粒探针,通过FISH 技术可以确诊染色体末端区域的微小结构异常,在临床遗传学中有广泛的应用,是遗传咨询和生育指导的有效工具之一。

关键词:FISH ;隐匿易位;反复自然流产;卵巢早衰

中图分类号:Q343.2 文献标识码:A 文章编号:0379-4172(2002)09-0753-04

Molecular Cytogenetic Detection of Minute Chromosomal Structural

Abnormality on the Chromosomal Terminal Regions

TAN Yue -Qiu ,LI Lu -Yun ,LU Guang -Xiu ①

(Human Repr oducti ve Enginee ring Laborat or y ,Xiang -Ya Sc hool of Medicine ,C ent ral South Univ ers ity ,C hangsha 410078,China )

A bstract :In order to identify those easily overlooked minute chromosomal str uctural abnor mality on the chro -mosomal regions ,and to provide a valuable guidance for pregnancy ,fluorescence in situ hybridization (FISH )technique by whole chromosome 7painting pr obe ,Xq probe and subterminal probe of 7q36※qter was per -formed to analyze two cases .Case 1had a history of recurrence spontaneous abortion and with an uncertain minute translocation on the chromosomal terminal regions .Case 2was a premature ovarian failure patient with a balanced translocation between chr omosome X and chromosome 7by G banding .The results showed that case 1was a cryptic minute translocation on the chromosomal ter minal r egions ,and the br eakpoint of case 2was ac -curately deter mined ,that is ,the breakpoint was not on 7q36but on 7qter .Therefore FISH technique with whole chr omosome painting pr obe and subter minal probe could be used to diagnose the minute chromosomal structural abnormality on the chromosomal regions .It could be used widely in the clinical genetics and was an effective tool for genetic c ounseling and reproductive guidance .

Key words :FISH ;cr yptic translocation ;recurrenc e spontaneous abortion ;premature ovarian failure

染色体相互易位是导致自然流产、死胎、新生儿

死亡及生育智力低下患儿的原因之一,X 染色体长

臂和常染色体之间的相互易位还常常导致卵巢早

衰[1,2]。相互易位一般可通过染色体显带或高分辨

显带技术发现,但其中一些微小易位,特别是末端片

段之间的隐匿易位(cryptic translocation )通过普通细胞遗传学分析难以确认[3,4]。而荧光原位杂交(fluo -rescence in situ hybridization ,FISH )具有高灵敏度、高特异性的特点,已成为鉴别染色体异常的有力工具,国内外有多例报道。由于染色体的相互易位一

收稿日期:2002-01-29;修订日期:2002-04-09

①联系人。E -mail :lgxdirector @s ina .co m 遗传学报,29(9):753～756,2002

Acta Genetica Sinica

般涉及到染色体末端区域,因而目前染色体异常检测的一个明显进展是应用FISH技术直接检测染色体的末端区域是否有异常。本文选取特异性7号全染色体探针、Xq探针和7q亚端粒(7q36※qter)探针,用FI SH结合G显带技术分析2个病例,确诊其染色体异常并确定其断裂位点,并分析了染色体末端区域的异常类型。现报道如下。

1　材料和方法

1.1　病例资料

病例1(编号1254) 男,28岁,由于其妻连续5次不良妊娠史而来我室就诊。第一次于妊娠8个月时B超发现胸腔积液而引产,第二、三次妊娠2个月时B超发现无胎心搏动而行清宫术,第四、五次妊娠2个月时自然流产。夫妻双方在其他医院进行多项检查(包括染色体检查)均为正常,诊断为不明原因流产。

病例2(编号1997) 女,30岁,因原发闭经就诊。体查:阴毛少,无腋毛,双乳发育正常。内分泌检查FSH57.72mI U/ml,LH4.7mIU/ml,E20.018pg/ ml。B超检查:子宫(46+35)×36×47mm3,宫腔线10.9mm,III线;卵巢呈条索状,左侧为16×12mm2,右侧为19×12mm2,临床诊断为卵巢早衰。

1.2　实验方法

1.2.1　染色体检查 按常规方法取病例1和病例2两对夫妇的外周血淋巴细胞培养,制备染色体, GTG显带细胞遗传学分析,复查其染色体。荧光原位杂交的玻片不显带,杂交前-20℃冰箱保存。

1.2.2　探针 7号全染色体探针用显微切割方法制备,方法参考Guan等[6]。7q亚端粒(7q36※qter)、Xq探针为香港大学关新元博士赠送,Biotin-16-dUTP标记,用显微切割方法制备。

1.2.3　荧光原位杂交 按我室常规方法[7],将标记了Biotin-16-dUTP的探针与病例的中期分裂相进行荧光原位杂交(FISH),洗脱后经Avidin-FITC及鼠抗Avidin、兔抗鼠Avidin-FITC等免疫荧光检测及信号放大,碘化丙啶(PI)或DAPI复染。Nikon显微镜观察,用Kodak ASA400照相。

2　结果

病例1染色体复查发现,在普通G带检查两条7

号和两条18号染色体长臂末端带型有细微的差别,两条7号染色体长臂都有3条深带,但一条7号的第三条深带颜色较另一条的深;而一条18号染色体的长臂的第二条深带却不明显(图1),怀疑两条染色体的长臂末端有一个微小的隐匿易位。病例2染色体检查发现,为X和7号染色体的相互易位,其中X染色体断裂点为Xq13,7号断裂点位于7q末端,但是否包含7q36难以确定(图2)。

应用7号全染色体探针与病例1的中期分裂相

图1　病例1的G显带核型

正常染色体用细箭头表示,衍生染色体用三角形箭头表示

Fig.1　G banding chromosome and partial karyotype of case1

Normal chromos omes are marked by arro ws.

The derivati ve chromos omes are marked by arro whead

图2　病例2的G显带核型

正常染色体用细箭头表示,衍生染色体用三角形箭头表示

Fig.2　G banding chromosome and partial karyotype of case1

Normal chromosomes are marked by arrows.The derivative

chromosomes are marked by arrowhead

754遗 传 学 报 29卷