生化工程应用Ecoli大肠杆菌之生长曲线
大肠杆菌生长曲线实验报告
测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实验用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与光密度（OD值）成正比，因此可利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度，并将所测的OD值与其对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线，此法快捷、简单。
测量时要等数字变化不大时再读取，可以读三次，最后取平均值，这样能保证实验结果更加准确。
721型分光光度计要先预热，实验过程中最好使用同一台仪器，同一个比色皿，这样可以减少仪器误差，分光光度计的使用操作要规范。比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。比色皿用擦镜纸擦干净，上面不要残留有纸纤维和水珠等。
延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。
对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。
改进措施:在试验过程中应严格按照标准的操作要求，在上述步骤时更加应该规范操作。
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2.营养肉汤培养基灭菌:将步骤一包好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌30min.
大肠杆菌生长曲线实验报告
大肠杆菌生长曲线实验报告抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。
但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。
在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。
当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。
如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。
DNA对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。
紫外线引起DNA 结构变化的形式有DNA链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。
因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。
一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265 nm。
选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。
在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。
本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。
若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。
紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。
因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。
在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。
2.材料和方法2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水2.2实验方法2.2.1制备培养基普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：牛肉膏5g蛋白胨10g Nacl 5g琼脂20g蒸馏水1000ml Ph7.0 按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
微生物生长曲线示意图
1、延迟期 特点：生长速率常为零、菌体粗大、 RNA含量增加、代谢活力强、对不良环境 的抵抗能力下降。 成因：微生物刚刚接种到培养基之上 ，其代谢系统需要适应新的环境，同时要 合成酶、辅酶、其他代谢中间代谢产物等 ，所以此时期的细胞数目没有增加。
2、对数期 特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系 活跃、活细菌数和总细菌数大致接近、细胞 的化学组成形态理化性质基本一致。 成因:经过调整期的准备，为此时期的微 生物生长提供了足够的物质基础，同时外界 环境也是最佳状态。
在600 nm波长下，用未接种的LB液体培养 基作空白对照，分别对培养了0、4、8、12、 16和20 h的大肠杆菌培养液，进行光电比浊测 定。对于高浓度的大肠杆菌培养液,要用未接 种的LB培养基进行稀释，使其吸光值在0.10.65范围内。 比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品 润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面 只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。 比色皿之间吸光度进行比较。
2.样品测定 将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及 被测溶液倒入比色皿中。 打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位 。 将参比溶液推入光路，按100%键调满度。 将测试方式调至吸光度方式。此时,显示器显 示“0.000”。 将被测溶液推入光路，显示器显示为被测样 品的吸光值。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
一、实验目的
• 了解大肠杆菌的生长特性与规律，绘制生 长曲线 • 掌握光电比浊法测量细菌数量的方法
二、实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。 一个典型的生长曲线分为延迟期、对数期、 稳定期和衰亡期四个时期
大肠杆菌生长曲线
四川大学化学实验报告课程名称生物工艺学实验课程号 309119060学院轻纺与食品学院专业轻工生物技术学生姓名赵凤佼学号 0843095035指导教师周荣清成绩评定实验日期 2011-06-20~2011-06-22一、实验名称：大肠杆菌生长曲线的制作二、实验目的：1.通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生长特征与规律，绘制生长曲线。
2.掌握光电比浊法测量细菌数量的方法。
三、实验仪器及药品：1.菌种：大肠杆菌。
2.培养基：LB培养基100ml，分装两支大试管（5ml/支），剩余90ml装入250ml三角瓶。
3.仪器和其他药品：722型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管和无菌吸管等。
四、基本原理：在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次，将一定量的细菌转入新鲜培养液中，在适宜的培养条件下细胞要经历延迟期、对数期、稳定器和衰亡期4个阶段。
以培养时间为横坐标，细菌数目的对数或生长速率为纵坐标所绘制的曲线成为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在在相同的培养条件下其生长曲线不同，同种细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不同。
当光线微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。
在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比；而光密度或透光度可以通过光电池精确测出。
因此，可利用一系列菌悬液测定的光密度及其含菌量，做出光密度—菌数的标准曲线，然后根据样品液所测得的光密度，从标准曲线中查处对应的菌数。
本实验用分光光度计进行光电比浊，测定不同时间细菌悬浮液的OD值，绘制生长曲线。
五、关键步骤及注意事项：1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定2.严格控制培养时间六、操作步骤：1.标记取11支无菌试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
2.接种分别用5ml无菌吸管吸取2.5ml大肠杆菌过夜培养液（培养10~12h）转入盛有90mlLB培养液的三角瓶，混合均与后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌试管中。
大肠杆菌 低温生长曲线
大肠杆菌低温生长曲线大肠杆菌是一种常见的细菌，它在各种环境中都能生存和繁殖。
在低温条件下，大肠杆菌的生长速率会受到影响，但并不意味着它完全无法生长。
事实上，大肠杆菌在适应低温环境方面具有一定的适应能力。
首先，让我们来看一下大肠杆菌在低温下的生长曲线。
一般来说，大肠杆菌在低温下的生长速率较慢，但仍然能够存活下来。
在低温环境下，大肠杆菌的生长曲线会出现延迟期、对数增长期和平稳期。
延迟期是指大肠杆菌在适应低温环境时需要一定的时间来适应和调整自身的生理机制。
在这个阶段，菌落数量并没有明显增加，甚至有时会稍微减少。
这是因为大肠杆菌需要通过调整细胞膜的组成成分来增加细胞的柔软性和耐寒性，以适应低温环境。
进入对数增长期后，大肠杆菌的生长速率开始加快。
适应了低温环境后，细菌开始通过细胞分裂的方式繁殖。
这个阶段的生长速率可能比在正常温度下要慢，但仍然存在一定程度的增长。
大肠杆菌通过合成特殊的蛋白质和表达耐寒相关基因来保护自身免受低温引起的伤害。
当大肠杆菌适应了低温环境后，进入平稳期。
在这个阶段，菌落数量不再明显增加，也不会减少。
这是因为细菌在低温条件下的生长速率与细胞代谢的速度达到了平衡。
在平稳期，大肠杆菌的生长速率可能会比在正常温度下要慢，但它仍然能够维持自身的生存和繁殖。
了解了大肠杆菌在低温下的生长曲线后，我们可以进一步探讨如何应对和控制低温下的大肠杆菌感染。
首先，在食品加工和贮存过程中，我们应该严格控制食物的温度。
低温会降低大肠杆菌的生长速率，但并不能完全杀灭它们。
因此，确保食物在贮存和加工过程中达到适当的温度是预防大肠杆菌感染的关键。
其次，加强个人卫生习惯也是预防大肠杆菌感染的重要措施。
勤洗手、避免生食、煮熟食物和分开储存生鲜和熟食等，都可以有效地减少大肠杆菌感染的风险。
最后，科学研究和应用是提高大肠杆菌在低温环境下的抵抗力的关键。
在农业和食品领域，通过培育抗寒性强的大肠杆菌品种和研发低温杀菌技术等，都有助于减少大肠杆菌感染的发生。
大肠杆菌m9基本培养基下的生长曲线
大肠杆菌m9基本培养基下的生长曲线大肠杆菌（Escherichia coli）是一种较为常见的革兰氏阴性杆菌，它在大肠内生活，属于肠道菌群的一部分。
大肠杆菌是一种典型的革兰氏阴性菌，它对人体的肠道有着非常重要的生态功能。
大肠杆菌的基本培养基m9是一种典型的培养基，适合用于大肠杆菌的生长和研究。
本文将通过m9基本培养基对大肠杆菌的生长曲线进行研究，以探讨大肠杆菌在不同培养条件下的生长特性。
1.大肠杆菌m9基本培养基的制备大肠杆菌m9基本培养基是用来培养大肠杆菌的一种基本培养基，它包括氮源、磷源、镁盐、硫酸铵和糖等多种成分。
其制备方法如下：1）将1.28克m9培养基粉末加入到100毫升无菌水中。
2）混匀溶解后，pH值调至7.0-7.2。
3）装管，高压灭菌20分钟即成。
2.大肠杆菌m9基本培养基的生长条件大肠杆菌在m9基本培养基下的生长条件需要注意以下几点：1）温度：37°C2）培养时间：通常在24-48小时内观察生长情况3）pH值：7.0-7.24）氧气条件：需保持通气状态3.大肠杆菌m9基本培养基下的生长曲线大肠杆菌在m9基本培养基下的生长曲线通常可以分为四个阶段：潜隐期、对数期、平稳期和衰老期。
3.1潜隐期在接种后的一段时间内，大肠杆菌需要适应新的环境，其生长速度较慢，这个阶段称为潜隐期。
3.2对数期之后，大肠杆菌进入对数生长期，细菌数量呈指数级增长。
在这个阶段，大肠杆菌的生长速度非常快，细胞数量呈现出指数级增长的趋势。
3.3平稳期当培养基内营养物质逐渐耗尽时，大肠杆菌的生长速度会逐渐减慢。
此时大肠杆菌进入平稳期，细菌数量基本保持不变。
3.4衰老期当培养基内的营养物质耗尽，甚至有些有毒物质堆积到一定程度时，大肠杆菌进入衰老期，此时细菌数量开始下降。
4.大肠杆菌m9基本培养基的应用大肠杆菌m9基本培养基在生物学领域有着广泛的应用，主要有以下几个方面：1）基因表达：m9基本培养基可以用于大肠杆菌的基因表达实验，是一种较为理想的表达载体。
大肠杆菌生长曲线
四川大学化学实验报告课程名称生物工艺学实验课程号 309119060学院轻纺与食品学院专业轻工生物技术学生姓名赵凤佼学号 0843095035指导教师周荣清成绩评定实验日期 2011-06-20~2011-06-22一、实验名称：大肠杆菌生长曲线的制作二、实验目的：1.通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生长特征与规律，绘制生长曲线。
2.掌握光电比浊法测量细菌数量的方法。
三、实验仪器及药品：1.菌种：大肠杆菌。
2.培养基：LB培养基100ml，分装两支大试管（5ml/支），剩余90ml装入250ml三角瓶。
3.仪器和其他药品：722型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管和无菌吸管等。
四、基本原理：在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次，将一定量的细菌转入新鲜培养液中，在适宜的培养条件下细胞要经历延迟期、对数期、稳定器和衰亡期4个阶段。
以培养时间为横坐标，细菌数目的对数或生长速率为纵坐标所绘制的曲线成为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在在相同的培养条件下其生长曲线不同，同种细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不同。
当光线微生物菌悬液时，由于菌体的散射及吸收作用使光线的透过量降低。
在一定范围内，微生物细胞浓度与透光度成反比，与光密度成正比；而光密度或透光度可以通过光电池精确测出。
因此，可利用一系列菌悬液测定的光密度及其含菌量，做出光密度—菌数的标准曲线，然后根据样品液所测得的光密度，从标准曲线中查处对应的菌数。
本实验用分光光度计进行光电比浊，测定不同时间细菌悬浮液的OD值，绘制生长曲线。
五、关键步骤及注意事项：1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定2.严格控制培养时间六、操作步骤：1.标记取11支无菌试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20h。
2.接种分别用5ml无菌吸管吸取2.5ml大肠杆菌过夜培养液（培养10~12h）转入盛有90mlLB培养液的三角瓶，混合均与后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌试管中。
大肠杆菌标准生长曲线
大肠杆菌标准生长曲线大肠杆菌的生长曲线通常包括潜伏期、指数期、平稳期和衰老期四个阶段。
在潜伏期，细菌适应新环境，准备开始快速生长。
随后进入指数期，细菌开始以指数级增长，细胞数急剧增加。
当细菌数量达到最大值后，进入平稳期，此时细菌的生长速率和死亡速率达到动态平衡，细菌数量基本保持不变。
最终，细菌进入衰老期，生长速率下降，死亡速率加快，细菌数量开始减少。
大肠杆菌的生长曲线受到多种因素的影响，包括温度、pH值、营养物质和氧气含量等。
一般来说，大肠杆菌在适宜的温度（37摄氏度）、中性或微酸性的环境、富含营养物质和氧气充足的条件下，生长速率最快，而在极端的温度、酸碱度和氧气条件下，生长速率会受到限制甚至停止。
为了绘制大肠杆菌的标准生长曲线，通常需要进行一系列实验。
首先，将大肠杆菌接种到含有适当营养物质的培养基中，然后在不同时间点取样，通过测定细菌数量或生物量的变化，可以得到细菌在不同生长阶段的生长曲线。
通过这些数据，可以绘制出大肠杆菌的标准生长曲线，进而分析其生长规律和生长特点。
大肠杆菌标准生长曲线的绘制对于微生物学研究具有重要意义。
首先，它可以帮助我们更好地理解大肠杆菌的生长规律，包括潜伏期、指数期、平稳期和衰老期四个阶段的特点和转变规律。
其次，通过对大肠杆菌在不同环境条件下的生长曲线进行比较分析，可以揭示其对环境因素的响应和适应能力，为微生物的应用和利用提供重要参考。
此外，大肠杆菌标准生长曲线还可以为微生物的培养和应用提供理论指导，帮助我们更好地利用这一微生物资源。
总之，大肠杆菌标准生长曲线是研究其生长特性和生理代谢的重要手段，通过对其生长曲线的绘制和分析，可以更好地了解其生长规律和生长特点。
同时，它也为微生物的应用和利用提供重要参考，具有重要的理论和实践意义。
希望本文的介绍能够帮助读者更好地理解和应用大肠杆菌标准生长曲线，促进微生物学研究的发展和应用。
大肠杆菌生长曲线的测定
(一)目的要求1．通过细菌数量的测量了解大肠杆菌的生物特征和规律，绘制生长线。
2．复习光电比浊法测量细菌数量的方法。
(二)基本原理大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。
将一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期，对数期、稳定期和衰亡期四个阶段。
以培养时间为横坐标，以细菌数目的对数或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细菌的生长曲线。
不同的细菌在相同的培养条件下其生长曲线不同，同样的细菌在不同的培养条件下所绘制的生长曲线也不相同。
测定细菌的生长曲线，了解其生长繁殖规律，这对人们根据不同的需要，有效地利用和控制细菌的生长具有重要意义。
用于测定细菌细胞数量的方法已在上述实验作了介绍。
本实验用分光光度计(spectrophotometer)进行光电比浊测定不同培养时间细菌悬浮液的OD值，绘制生长曲线。
也可以直接用试管或带有测定管的三角瓶(图15-5)测定“klett units”值的光度计。
如图15—6所示，只要接种1支试管或1个带测定管的三角瓶，在不同的培养时间(横坐标)取样测定，以测得的klett units为纵坐标，便可很方便地绘制出细菌的生长曲线。
如果需要，可根据公式1 klett units=OD/0.002换算出所测菌悬液的OD值。
(三)器材1．菌种大肠杆菌2．培养基 LB液体培养基70ml，分装2支大试管(5ml/支)，剩余60ml装入250ml的三角瓶。
3．仪器或其他用具 722型分光光度计，水浴振荡摇床，无菌试管，无菌吸管等。
(四)操作步骤1．标记取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
2．接种分别用5ml无菌吸管吸取2.5ml大肠杆菌过夜培养液(培养10~12h)转入盛有50ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
大肠杆菌m9基本培养基下的生长曲线
大肠杆菌m9基本培养基下的生长曲线E. coli is a widely studied bacterium and its growth kinetics in different culture media have been extensively researched. One commonly used medium for studying E. coli growth is the M9 minimal medium. In this medium, essential nutrients like glucose, salts, and specific amino acids are provided in limited amounts.大肠杆菌是一种被广泛研究的细菌，其在不同培养基中的生长动力学已经得到了广泛的研究。
其中一个常用于研究大肠杆菌生长的培养基是M9最小培养基。
在这种培养基中，葡萄糖、盐和特定氨基酸等必需营养物质被提供但限量供应。
The growth curve of E. coli in M9 minimal medium typically consists of four distinct phases: lag phase, log phase, stationary phase, and death phase. Each phase represents a different stage of bacterial growth and is characterized by specific changes in cell density over time.在M9最小培养基下，大肠杆菌的生长曲线通常由四个明显的阶段组成：潜伏期、对数生长期、平台期和死亡期。
每个阶段代表着细菌生长的不同阶段，并且以时间为轴细胞密度发生特定变化。
During the lag phase, there is little to no increase in cell density as the bacteria adapt to the new environment. This phase can last anywhere from a few minutes to several hours, depending on the growth conditions and the physiological state of the cells.在潜伏期，细菌适应新环境，细胞密度几乎没有增加。
大肠杆菌生长曲线
• 细菌培养物在生长过程中，由于原生质含 量的增加，会引起培养物混浊度的增高。 细菌悬液的混浊度和透光度成反比、与光 密度成正比，透光度或光密度可借助光电 比浊计精确测出，因此可用光电比浊计测 定细胞悬液的光密度（OD值），表示该 菌在特定实验条件下的细菌相对数目，进 而反映出其相对生长量。
方法和步骤
1．接种、培养 • 采用无菌操作技术用移液管向每个100ml营养肉汤 培养基的三角瓶中试管准确加入大肠埃希菌悬液 3ml，轻轻振荡混匀，另设一空白对照组（不加大 肠埃希菌悬液）。 将接种后的9组三角瓶置于摇床上，37℃,220r/min， 振荡培养。间隔一定时间，即0、1、2、3、4、5、 6、7、8、9~18小时后，从摇床上将取下其中一瓶 三角瓶培养物（标记时间），置4℃冰箱保存。
细菌悬液的混浊度和透光度成反比与光密度成正比透光度或光密度可借助光电比浊计精确测出因此可用光电比浊计测定细胞悬液的光密度od值表示该菌在特定实验条件下的细菌相对数目进而反映出其相对生长量
大肠杆菌生长曲线测定
实训目的
1．了解光电比浊计数法的原理。 2．了解细菌生长曲线的特点，绘制生长曲线。 3. 掌握光电比浊计数法测定大肠杆菌生长曲 线人/组 准备 • 营养琼脂120ml，生理盐水100ml(0.9gNaCl) • 平皿7套，试管2支，1ml移液管4支，10ml 移液管2支 • 预习课本260页
（1）预热仪器 将选择开关置于“T”，按下“电源”开关。 （2）选定波长 根据实验要求，转动波长手轮，调至所需要的 单色波长。 （3）固定灵敏度挡 （4）调节T=0% 轻轻旋动零旋钮，使数字显示为“00.0”， （此时试样室是打开的）。 （5）调节T=100% 将盛蒸馏水（或空白溶液，或纯溶剂）的 比色皿放入比色皿座架中的第一格内
大肠杆菌生长曲线的测定
实验结果
1、将测定的OD600值填入下表： 培养时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 OD600
2、绘制大肠杆菌的生长曲线：
OD600值
实用文档
培养时间/h
LB液体培养基配方：100ml 酵母提取物(Yeast extract): 0.5g
蛋白胨(Tryptone)：1g 氯化钠(Nacl)： 1g
床、无菌试管、无菌吸管。
实用文档
操作步骤
1、配制LB液体培养基100 ml，分装1支试管(5 ml/支)，剩余培养 基装入250 ml的三角瓶，121℃灭菌20min。
2、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。
3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放 入上述标记的11支无菌大试管中。
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黄同龙 左明星
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目的要求
1、通过光密度值的测量了解大肠杆菌的生 长规律，绘制生长曲线。
2、了解光电比浊法测量细菌数量的原理。
实用文档
基本原理
将一定量的细菌接种到恒容积的液体培养基 中，在适宜的培养条件下，该群体就会有规律的 增长。以培养时间为横坐标，以细胞数目的对数 或生长速率为纵坐标作图所绘制的曲线称为该细 菌的生长曲线。该曲线包括四个阶段：延滞期、 指数期、稳定期、衰亡期。
4、将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(200 rpm)，在相应时间 取出试管放于冰箱中，最后一同测定OD600值。
大肠杆菌生长曲线的测定
实验结果
1、将测定的OD600值填入下表： 培养时间(h) 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 OD600
2、绘制大肠杆菌的生长曲线：
OD600值
实用文档
培养时间/h
LB液体培养基配方：100ml 酵母提取物(Yeast extract): 0.5g
蛋白胨(Tryptone)：1g 氯化钠(Nacl)： 1g
不同培养时间的菌液
实用文档
OD600 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20
2.5 2
1.5 1
0.5 0 培养时间
实用文档
OD600 OD600校正
注意事项：
1. 选用规格一致的试管； 2. 每支试管的装液量应相同(5 ml/支)； 3. 混匀的菌悬液加入到比色皿后应迅速读取OD值； 4. 保护比色皿透光面不受磨损，不要用手指直接接触； 5. 分光光度计在未测样品时应及时打开盖。
4将已接种的试管置摇床37振荡培养200rpm在相应时间取出试管放于冰箱中最后一同测定od6005进行光密度测定时以未接种的lb液体培养基为空白对照从早取出的培养液开始依次测定细胞密度大的培养液用lb液体培养基稀释后测定使od600值在01065之内
大肠杆菌生长曲线的测定
授课教师: 孙运军 研 究 生: 何浩 张晨
床、无菌试管、无菌吸管。
实用文档
操作步骤
1、配制LB液体培养基100 ml，分装1支试管(5 ml/支)，剩余培养 基装入250 ml的三角瓶，121℃灭菌20min。
2、取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、 3、4、6、8、10、12、14、16和20 h。
3、用5 ml无菌吸管取2.5 ml大肠杆菌培养液(培养12h)转入装有 LB液体培养基的三角瓶内，混匀后分别取5ml混合液放 入上述标记的11支无菌大试管中。
实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作 ppt课件
比色皿经蒸馏水清洗后，必须经待测样品
润洗。比色皿的毛面用吸水纸擦干，而光面
只能用吸水纸吸干，以免光面被划破。
比色皿之间吸光度进行比较。
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五、作业
1、结果 P88
记录不同大肠杆菌培养液的OD600值，并绘制 大肠杆菌的生长曲线。
2、思考题 第1题
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实验十二、 大肠杆菌生长曲线的制作
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一、实验目的
• 了解大肠杆菌的生长特性与规律，绘制生 长曲线
• 掌握光电比浊法测量细菌数量的方法
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2
二、实验原理
生长曲线
将少量纯种单细胞微生物接种到定量的 液体培养基中，定时取样测定细胞数量， 以培养时间为横坐标，以菌数为纵坐标作 图，得到一条反映单细胞微生物在整个培 养期间菌数变化规律的曲线。
成因：营养的消耗使营养物比例失调、有 害代谢产物积累、PH值等理化条件不适宜。
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4、衰亡期
特点:细菌死亡速度大于新生成的速度、 整个群体出现负增长、细胞开始畸形、细 胞死亡出现自溶现象。
成因：主要是外界环境对继续生长越 来越不利、细胞的分解代谢大于合成代谢、 继而导致大量细菌死亡。
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盖好样品室盖，按0%键调零透射比。 取出挡光体，按100%键调100%透射比。
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2.样品测定
将参比溶液（未接种的LB液体培养基）以及 被测溶液倒入比色皿中。
打开样品室盖，将参比溶液放在样品架的第 一个槽位中，将被测溶液依次放入其它槽位 。
将参比溶液推入光路，按100%键调满度。
将测试方式调至吸光度方式。此时,显示器显 示“0.000”。
实验六1 生长曲线
1 实验目的
1.1 掌握用分光光度法测量细菌数量的方法。 1.2 通过绘制细菌生长曲线，掌握微生物群体生长规律。 1.3 掌握细菌的摇瓶培养方法。
2 实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理)
2.1 在分批培养条件下，细菌生长经历哪几个时期? 2.2 分光光度测定细菌数量的依据是什么?
实验报告
1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法。
2
实验结果。设计表格，将测定的OD值填入表中。并用 Excel软件绘制生长曲线。
3
实验分析。分析生长曲线各个时期的特点？实验操作中 存在什么问题，应如何改进？
3.2.2 接种。用5 mL无菌吸管取2.5mL E.coli 培养液， 按无菌操作接入盛有70 mL 的容量为250 mL的三角瓶中。 混匀后分别混合液取5 mL放入上述标记的11根试管中。 3.2.3 培养。37℃，150 rpm/min,分别培养0，1，2，3，…12h, 将标有相应时间的试管取出，立即放入冰箱中贮存。 3.2.3 比浊测定。用LB培养基作空白对照，选用600 nm波长进行 光电比浊测定。要求将培养液稀释至光密度值在0.1-0.65 之间。
3
材料与方法
3.1
实验器材Βιβλιοθήκη 3.1.1 药品：LB培养基，。
3.1.2 仪器：756PC 型分光光度计，摇床，取移器。
3.1.3 菌种： E.coli 。 3.1.4 其它物品：试管，擦镜纸，无菌吸管。
3.2 方法
3.2.1 标记。取11支无菌试卷，用记号笔标记培养时间， 即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20 h
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品在水解過程被金屬、鹽類、尿素、丙醇污染，或是界面 活性劑（detergen）沒有去除乾淨，都會使樣品在MALDI source的電離（ionization）受到極大的影響。MALDI-TOF MS對此特別敏感。
檢測流程(續)
• LCM (Laser Capture Microdissection)
Figure 26.04
Mass spectrometry matrix-assisted laser desorption-ionization (MALDI) and time-of-flight (TOF)
MALDI-TOF
matrix-assisted laser desorption inoization- time of flight
Figure 26.01
Figure 26.02 SDS polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE gel)
Western blotting
• can detect the specificity protein • detect one protein in a mixture of any
• MS本身有三個主要部份 • 第一個部份是來源（source），由樣品產生離子；第二個部份是質析
（mass analyzer），依離子質量/價數【mass/charge（m/z）】的比 例分開它們；第三個部份是偵測（detector），也就是mass analyzer 的結果。
ห้องสมุดไป่ตู้
MALDI-TOF
matrix-assisted laser desorption inoization- time of flight
• 將待測物peptides與matrix混合，matrix中的微小分子，會吸收特殊波
長的光。source這兒提供雷射光，matrix吸收光子而激發電子，釋放的 能量轉到sample中的peptide上，離開matrix表面進入空氣中。這樣的 離子化過程，依樣品的性質，產生正離子或負離子，正離子的產生是 在脫離matrix的過程中，接受了質子所致。每一個peptide分子會接受 單一的質子，因此，大部份的peptide離子都會帶一個正電。在MALDI 形成這樣的離子後，再送入TOF mass analyzer分析。
Gold nanoparticels ?
MALDI-TOF MS 優點
• 第一，操作簡便，是所有MS中最容易學會的一種，可以
在一天之內分析上百件樣品。
• 第二，需要大量製備蛋白質樣品的地方，目前從2D 電泳
膠體的製作、蛋白質點（protein spots）的取出及酵素水 解，都採用自動化的設備，MALDI-TOP也能以這樣的形式 存在，減少人力、提高效率。
• 第三，隨著TOF分析方式的改良，得到的蛋白質體數據也
愈正確。
• 第四，MALDI-TOF MS的靈敏度高，可以偵測到少量的
（可到10-18 mole）蛋白質。
MALDI-TOF MS 缺點
• 第一，MALDI-TOF MS可以提供正確的「質量（mass）」
資訊，卻不能獲得詳細的「序列（sequence data）」結 果。
• (3)blocking • (4)add primary antibody • (5)add labeled secondary antibody
(enzyme .Fluorophore….)
two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis
number of proteins.
Method
(1) Proteins are separated by gel electrophoresis
(2) The proteins are transferred to membrane
(nitrocellulose or PVDF)
Figure 26.05 Western blotimg
MALDI-TOF
matrix-assisted laser desorption inoization- time of flight
• TOF（time of flight），能測得離子由analyzer一端到另一端
（detector）的時間，m/z值愈大，時間愈短。MS的優劣是在於能區 別離子間微小m/z的差異，但是這種測量直線行進速度的TOF解析力 不夠高，造成直線型TOF低解析力的原因，在於相同m/z值的離子， 直線行進速度也有快慢之別。