微生物细胞大小地测定方法
微生物大小测定
微生物的大小测定胡雪芳 201300261033【实验目的】1.了解显微镜测定微生物大小的原理。
2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。
【实验原理】微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
1.目镜测微尺目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分（如图1所示）。
图1 目镜测微尺测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。
2.镜台测微尺镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的（如图2所示）。
图2 镜台测微尺校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
【实验材料】1.菌株酵母菌液，枯草芽孢杆菌斜面培养物2.仪器和用具普通光学显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、酒精灯、吸水纸、擦镜纸、结晶紫染液等。
【实验步骤】1.目镜测微尺的校正（1）把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。
实验十二微生物大小测定
❖ 用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别 测出高倍镜和油镜下，两重合线之间两尺分别所 占的格数。
校准目镜测微尺
注意：
观察时光线不能太强，否则难以找到镜台测微尺的刻度 换高倍镜和用油镜校正时，眼睛注视着镜头和载物台，
防止压坏镜台测微尺！
计算: 不同放大倍数下，目镜测微尺每格所代表的长度：
两重合线间镜台测微尺格数*10um 目镜测微尺每格长度(um)= ———————————————————
两重合线间目镜测微尺格数
3 菌体大小的测定
校正完后取下镜台测微尺，换上所需观察的菌体制片,细菌用 简单染色；测定酵母菌时制成水浸片也可以用美蓝染色 先用低倍镜观察找到菌体，然后选择合适的倍镜观察，在不 同倍镜观察到的格数分别乘上校正后不同倍镜目镜测微尺每格 所代表的长度，即为菌体的实际大小！ 一般情况下，细菌需用油镜观察，酵母菌用高倍镜观察即可； 对于球菌就用直径表示菌体大小，杆菌则需要分别测量细胞的 宽度和长度，用宽度×长度表示细胞大小
实验材料
❖ 菌种： 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 酿酒酵母菌
❖ 仪器： 目镜测微尺 镜台测微尺 载玻片 盖玻片 显微镜
染液：草酸铵结晶紫 吕氏碱性美蓝
不是直接测量细胞的大小！ 而是用于校正目镜测微尺的相对长度
镜台测微尺
目镜测微尺
注意： ＊ 不同Байду номын сангаас显微镜
＊ 不同的目镜和物镜组合放大倍 数 不同
＊ 目镜测微尺每一小格在不同的条 件下所代表的实际长度不同！
实验十二 微生物大小的测定
水生态工程实验室 2008.11.28
微生物大小的测定报告
微生物大小的测定报告微生物大小的测定报告微生物是生物界中一类非宏观、非个体、非生物和非细胞的微小生物的总称。
它们具有体积小、数量大、分布广、种类多、生命力旺盛等特点，与人类的生产、生活密切相关。
微生物大小的测定是微生物学研究中的一项基本技术，对于了解微生物的种类、生长和繁殖等方面具有重要意义。
本文将详细介绍微生物大小的测定方法、测定步骤以及结果分析等方面的内容。
一、测定方法微生物大小的测定方法有很多，如显微测量法、压滤法、离心法等。
其中，显微测量法是最常用的一种方法，其原理是利用显微镜对微生物的大小进行直接测量。
具体步骤如下：1.准备显微镜、血球计数板、盖玻片、吸管等实验器材。
2.用吸管吸取一定量的微生物培养液，轻轻滴在血球计数板上，然后盖上盖玻片。
3.在显微镜下观察并计数，记录每个视野中的微生物数量和大小。
4.重复以上步骤多次，求平均值，即可得到微生物的平均大小。
二、测定步骤1.准备试剂和器材（1）试剂：无菌水、生理盐水、无菌玻璃珠、无菌平皿等。
（2）器材：移液器、无菌吸管、无菌涂布器、无菌镊子、电子天平等。
2.制备菌悬液（1）用电子天平称取适量的细菌干粉，加入无菌生理盐水，摇匀。
（2）用移液器吸取上述菌悬液，加入无菌平皿中，加入无菌玻璃珠，摇匀。
（3）用无菌涂布器将上述菌悬液涂布到平皿表面，静置片刻，让细菌贴壁生长。
3.测定菌落大小（1）在上述平皿中加入无菌水，让水面覆盖平皿表面。
（2）用无菌镊子将平皿翻转，让细菌接种到无菌水表面，涂布均匀。
（3）静置约30分钟，让细菌形成单个菌落。
（4）用游标卡尺测量每个菌落的大小，记录数据。
4.数据处理和分析（1）对每个平皿中的菌落数量和大小进行统计，求出平均值。
（2）将平均值与对照组进行比较，判断细菌的生长情况。
三、结果分析通过上述测定步骤，我们得到了微生物的大小数据。
根据数据可以得出以下结论：1.同一时间内，不同微生物的大小有差异。
例如，细菌和原生动物的大小相差很大，这与它们的生物学特性有关。
微生物大小的测定
酵母细胞直径(宽度)的测定：取下镜台测微尺，换上酿酒酵母制
片，在高倍镜下测量出10－20个酵母细胞的直径。
五、实验报告
1.目微尺校正结果
接物镜 低倍镜 高倍镜 油镜 接物镜倍数 目微尺格数 台微尺格数 目微尺每格 代表长度
目镜放大倍数：————————————
五、实验报告
2.各菌测定结果
微生物名 称 目微尺 每格代 表长度 宽
实验九（Ⅰ）
微生物大小的测定
一、实验目的及要求
学习并掌握用测微尺测定微生物大小 的方法。 增强微生物细胞大小的感性认识。
1.
2.
二、实验原理
l．微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在 一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之 一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜 测微尺两部分。 2. 目镜测微尺是一块圆形玻璃片，其中有精确的等分刻度，在 5mm 刻尺上分 50 份。目镜测微尺每格实际代表的长度随使用接目镜和 接物镜的放大倍数而改变，因此在使用前必须用镜台测微尺进行 标定。 3. 镜台测微尺为一专用的载玻片，中央有精确等分线将长为 1mm 的 直线等分成 100 个小格，每格长 10μm，专用于校正目镜测微尺。 4. 微生物大小的表示方法：球菌用直径范围表示大小；杆菌和螺菌 用细胞的直径和长度的范围来表示，但杆菌测量的是细胞的直接 长度，而螺菌测量的是菌体两端的距离而非细胞实际长度。
2.校正目镜测微尺
将镜台测微尺放在显微镜的载物台上，使有刻度 的一面朝上。先用低倍镜观察，调焦距，待看清镜台 测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与 镜台测微尺的刻度相平行，并使两尺左边的一条线重 合，向右寻找另外一条两尺相重合的直线。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
(1)先将计数板盖上盖片在显微镜下，从低倍找到计数器位 置，不动。
(2)将稀释好菌悬液摇匀，用滴管吸入由盖玻片边缘滴入让 其自行渗透，使室充满（不宜过多，也不可有气泡）。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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(3)静止3-5分钟，先在低倍镜观察，然后换成高倍 镜进行计数。样品不宜太浓或太稀，最好每小格 控制在5-10个菌体为宜，计数需要重复二次。取 平均值。先后二次误差太大，需再重复计数。
2.微生物大小测定
பைடு நூலகம்
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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三、器材
显微镜；血球计数板；手揿计数器；盖玻片； 目镜测微尺；镜台测微尺。
酵母菌菌悬液； 枯草杆菌和金黄色葡萄球菌染色标本。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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四、操作步骤
在计数时，通常以五个中方格总菌数（每个中方格中数四 个小方格）即20个小方格总菌数（求平均值）。
比如：设20个小方格中总菌数为A，悬液稀释度B，那么 大格（0.1立方毫米总菌数） A/20×400×B。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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测量枯草杆菌长和宽及金黄色葡萄球菌直径。
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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五、试验结果
1、P48题1 2、P92题1
微生物显微镜的直接计数法和微生物大小测定
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六、思索题
1、依据你体会，用血球计数板误差主要来自 那些方面？应怎样防止误差，力争准确？
2、当接目镜不变，目镜测微尺也不变，只改 变接物镜，目镜测微尺每格所量镜台上物体 实际长度是否相同？为何？
微生物细胞大小的测定方法
微生物细胞大小测定一、实验目得了解目镜测微尺与镜台测微尺得构造与使用原理,掌握微生物细胞大小得测定方法. 二、实验原理微生物细胞得大小就是微生物重要得形态特征之一，由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小得工具有目镜测微尺与镜台测微尺。
目镜测微尺（图－1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍm长度刻成50等分，或把10 mｍ长度刻成1０0等分。
测量时，将其放在接目镜中得隔板上（此处正好与物镜放大得中间像重叠)来测量经显微镜放大后得细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合得放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示得长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上得镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小方格所代表得相对长度.镜台测微尺（图２0-2）就是中央部分刻有精确等分线得载玻片，一般将ｌmm等分为10０格，每格长l0μm(即０、0ｌmm）,就是专门用来校正目镜测微尺得.校正时,将镜台测微尺放在载物台上，图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜得两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数得放大而放大，因此从镜台测微尺上得到得读数就就是细胞得真实大小，所以用镜台测微尺得已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表得长度,然后移去镜台测微尺，换上待测标本片,用校正好得目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
三、实验器材1.活材料：酿酒酵母（Sacchaｒomyces ｃerｅvisｉae)、枯草杆菌（Bacｃiｌlｕｓｓubｔili ｓ)染色标本片。
2。
器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、实验方法１．目镜测微尺得校正把目镜得上透镜旋下，将目镜测微尺得刻度朝下轻轻地装入目镜得隔板上，把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上.先用低倍镜观察，对准焦距，视野中瞧清镜台测微尺得刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺得刻度平行,移动推动器,使两尺重叠，再使两尺得“0”刻度完全重合,定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合得刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺得格数与镜台测微尺得格数.因为镜台测微尺得刻度每格长ｌ0μｍ,所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表得长度.例如目镜测微尺5小方格正好与镜台测微尺5小方格重叠,已知镜台测微尺每小方格为l0μm，则目镜测微尺上每小方格长度为=5×10μｍ/5＝10μm用同法分别校正在高倍镜下与油镜下目镜测微尺每小方格所代表得长度。
实验五微生物细胞大小的测定及显微镜下直接计数
主要实验内容：
一 显微镜下细菌细胞大小的测定 二 血球计数板测定微生物细胞的数量 （显微镜下直接计数）
一 显微镜下细菌细胞大小的测定
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
学习用镜台测微尺校正目镜测微尺的方法★ 学习并掌握用目镜测微尺测定细菌细胞大小 的方法★★ 巩固显微镜油镜的使用方法
5 实验报告
（1） 目镜测微尺标定结果记录
物镜 低倍镜 油镜 物镜放大倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格 代表长度（um）
100
×
×
0.5um
（2） 在油镜下测量枯草杆菌大小结果记录
菌体 编号 1 2 3 4 5
….
宽 目尺 格数
长
菌体宽 平均值 目尺格 菌体长 平均值 （um） （um） 数
计数方法
在计数时，用含16个中方格的计数板，要按对角线方位 计数左上、左下、右上、下等四个中方格（100个小方格） 所含有的菌数；由此可计算得出每个小方格所含有的菌数 的平均值， 计数室每个小方格容积为： 0.1×10-3÷400＝1／4×106 (ml) 计算公式：
每ml菌液含菌数 = N ×K ×d
菌体大小 （平均值） 宽 ×长（um）
20
二 血球计数板测定微生物细胞的数量
1 实验目的 2 实验原理 3 实验材料 4 实验方法步骤 5 实验报告
1 实验目的
掌握血球计数板测定微生物细胞数量的原理。 学习用血球计数板测定微生物细胞数量的方法。
2 实验原理
利用血球计数板在显微镜下直接计数，是将菌悬液 放入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，然后在显微 镜下计数，因为计数室容积一定，所以可根据测定值推 算出菌悬液单位体积所含微生物的总数量。
微生物细胞大小的测定方法
微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺与镜台测微尺的构造与使用原理,掌握微生物细胞大小的测定方法。
二、实验原理微生物细胞的大小就是微生物重要的形态特征之一,由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺与镜台测微尺。
目镜测微尺(图-1)就是一块圆形玻片,在玻片中央把5mm长度刻成50等分,或把10 mm长度刻成100等分。
测量时,将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样,因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正,以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。
镜台测微尺(图20-2)就是中央部分刻有精确等分线的载玻片,一般将lmm等分为100格,每格长l0μm(即0、0lmm),就是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时,将镜台测微尺放在载物台上,图1目镜测微尺图2 镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本就是处于同一位置,都要经过物镜与目镜的两次放大成象进入视野,即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大,因此从镜台测微尺上得到的读数就就是细胞的真实大小,所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺,即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去镜台测微尺,换上待测标本片,用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
三、实验器材1.活材料:酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、枯草杆菌(Baccillus subtilis)染色标本片。
2.器材:显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、实验方法1.目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下,将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上,把镜台测微尺置于载物台上,刻度朝上。
先用低倍镜观察,对准焦距,视野中瞧清镜台测微尺的刻度后,转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行,移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“0”刻度完全重合,定位后,仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度,计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数与镜台测微尺的格数。
微生物细胞大小和数量的测定
微生物细胞大小和数量的测定
目的要求 实验材料 实验程序 思考题
目的要求
学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显 微镜下测定微生物大小的方法。 学习使用血球记数板测定微生物数量的 方法。
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细 菌染色片、血球记数板、酵母菌悬液、 盖玻片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、 香柏油、二甲苯。
谢谢大家！
实验程序
测定微生物的大小 测定微生物数量
实验程序Ⅰ （测定微生物的大小）
测定的工具：目镜测微尺 镜台测微尺
实验程序Ⅱ
（测定微生物的大小）
目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后， 转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动 器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然后， 仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜测微 尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每格长 10µm，所以可得： 目镜测微尺每格长度（ µm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜 测微尺格数 注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的 接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情 况下才可重复使用。
实 验 程 序IV 2
5. 计算方法：
酵3+X4+X5）X 5
25（或16）X
10
X
1000
x
稀释倍数
6.
注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和右
侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母时， 若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。
7. 计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用 吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
思考题
微生物细胞的大小测定
电子显微镜图像分析法是通过电 子显微镜获取微生物细胞的图像，
然后利用图像处理技术进行分析 和测量的方法。
优点
可以获得高分辨率和高清晰度的细 胞图像，通过图像处理技术可以实 现自动化测量，提高测量效率。
缺点
需要昂贵的电子显微镜设备，且图 像处理技术需要专业知识和技能。
04 微生物细胞大小的生理意 义
05 微生物细胞大小的测定实 例
单个细胞大小的测定实例
测量方法
注意事项
使用显微镜和测量工具，如测微计或 显微镜测微器，对单个细胞进行直接 测量。
为保证测量准确性，应选择处于对数 生长期的细胞进行测量，避免细胞形 态不规则或重叠影响测量结果。
测量步骤
将微生物样品制备成临时装片，放置 在显微镜载物台上，调整焦距使细胞 清晰可见，使用测量工具对单个细胞 进行长、宽、高的测量。
缺点
测量过程较为繁琐，需要 经验丰富的实验员操作， 且容易受到观察者的主观 影响。
染色法
定义
染色法是通过染色剂对微 生物细胞进行染色，使其 更容易观察和测量的方法。
优点
染色后细胞轮廓清晰，易 于观察和测量，可以提高 测量的准确性和精度。
缺点
染色过程可能对细胞造成 损伤，影响其生理状态和 活性。
电子显微镜图像分析法
微生物细胞大小与生长速率的关系
总结词
微生物细胞的大小与其生长速率密切相关。一般来说，较小的细胞具有更快的生长速度，因为它们具有更高的表 面积与体积比，有利于物质交换和能量代谢。
详细描述
微生物细胞的生长速率与其大小呈负相关。较小的细胞具有更大的表面积与体积比，这使得它们能够更有效地进 行物质交换和能量代谢，从而支持更快的生长速度。例如，细菌的繁殖速度通常与其大小呈负相关，较小的细菌 在适宜条件下能够更快地繁殖。
01试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。
01.试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。
测定微生物细胞的大小主要使用目镜测微尺。
其方法如下:1.先用长度已知的镜台测微尺校正目镜测微尺。
校正的方法是让台尺与目尺重叠,看台尺的X格正好与目尺的Y格重叠,然后用x10my⋅μ计算目尺每格的长.分别校正目镜测微尺在低倍镜,高倍镜及油镜下每格所代表的实际长度。
2.将待测微生物制成水浸片或染色涂片置载物台上,调焦找到微生物后用目镜测微尺测量其宽几格,长几格,然后乘上相应放大倍数下的校正值。
3.一般测10个微生物,然后以平均值表示。
4.若是酵母、细菌等单细胞微生物,通常测其宽和长,然后以平均宽⨯平均长表示,单位为μm。
02．以测苏云金杆菌工业菌粉中的活菌数为例,试述稀释平板计数的基本方法。
1.测数前先准备好测数用的1ml无菌吸管,9cm无菌平板,9ml试管无菌水和牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
2.称取10克工业菌粉加入90ml无菌水中置摇床上或用手振荡20-30分钟,让菌体分散。
3.将上述振荡过的菌液按无菌操作法进行十倍稀释直到10-8。
4.取9cm无菌平板9套用记号笔在平板底编号,10-8编3套,10-7编3套,10-6编3套。
5.用1支1ml的无菌吸管,取1ml10-8的稀释菌液放入编号10-8的平板中,如此将三个重复做完.同法取10-7稀释菌液放入三个编号为10-7平板中.同法取10-6稀释菌液放入三个编号为10-6平板中.(均要按无菌操作法做)。
6.将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化冷至45-50℃后,在酒精灯火焰边按无菌操作法倒入上述9套平板中,每个加入量大约15-20ml,边加边摇动平板,使培养基与菌液充分混匀。
7.待培养基凝固后,将平板倒过来,置28-30℃下培养48小时后计数。
03.试述划线分离的操作方法。
1.取9ml无菌平板一套在火焰旁按无菌操作法倒人15-20ml营养琼脂,让其冷凝成平板。
2.左手拿上述平板,右手拿接种环在火焰上灭菌后沾取原始分离物在平板上平行划线三条3.将接种环在火焰上灭菌,左手平板转动大约70度,用灭菌接种环通过第一次划线的地方作二次划线,亦划三条。
试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。
试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。
普通光学显微镜是一种常用的观察微生物的工具，通过该显微镜可以测定微生物细胞的大小。
其基本方法如下：
1. 准备样品：将待测微生物细胞制备成透明的薄片，例如将培养基中的细胞均匀涂于载玻片上，晾干后进行热固定或染色处理。
2. 调整显微镜：将载玻片放到显微镜上，调整光学系统，使显微镜成像清晰、亮度适中。
3. 选择目镜、物镜：根据样品大小，选择适当倍数的目镜和物镜。
一般情况下，使用40x或100x的物镜即可，目镜的倍数通常为10x。
4. 调节焦距：通过调节焦距，使细胞的图像清晰，可以清晰地观察到细胞形态。
5. 测量细胞大小：在目镜中进行标尺校准，然后在物镜下用标尺测量细胞大小，即可得到微生物细胞的尺寸。
需要注意的是，在使用光学显微镜观察细胞大小时，由于细胞形态不规则，测量尺寸时需要选择多个不同的位置进行测量，以取得更为准确的数据。
同时，在进行比较时，要注意使用相同倍数的目镜和物镜，以避免数据误差。
- 1 -。
试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法
试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法
普通光学显微镜下测定微生物细胞大小一般采用光学标定法，主要是利用显微镜观察宏观大小来测定微生物细胞的大小，即实际测量它们的长度和宽度，进而推断出它们的体积。
测量微生物细胞大小的基本方法如下：
1.首先，将微生物细胞完整地安装到显微镜底片上，然后将显微镜放大50-100倍，开始观察它们的形状。
2.用微米尺观察和测量细胞的大小，按以下方法测量：
（1）将测量细胞的真实大小的微米尺放到观察显微镜的视台上，在微米尺上测量细胞的长度；
（2）将显微镜移动90度，在微米尺上测量细胞的宽度；
（3）根据细胞的实际大小推断出细胞的体积；
（4）用酒精吹出细胞，用微米尺测量细胞的尺寸；
3.然后，记录测量得到的细胞长度、宽度和体积，为了提高测量的精度，可以对单个细胞测量多次，再平均多次测量值就能得到细胞的实际大小。
通过以上方法，便可以完成普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。
- 1 -。
3.微生物的大小测定
公式：
目镜测微尺每小格长度（μm）=
例如：目镜测微尺的5格等于物镜测微尺的2 格，则目镜测微尺1格=（2×10）/5 = 4微米
5、其他辅料的作用
糖是供给酵母能量的来源，糖的含量在5％以 内时能促进发酵，超过6％会使发酵受到抑制 ，发酵的速度变得缓慢。 油能对发酵的面团起到润滑作用，使面包制 品的体积膨大而疏松 蛋、奶能改善发酵面团的组织结构，增加面 筋强度，提高面筋的持气性和发酵的耐力， 使面团更有胀力，同时供给酵母养分，提高 酵母的活力。
製作酵母菌標本
3 5
使用鑷子拾起載玻片 4 6
過火
利用濾紙吸乾
置入玻片夾
接種針消毒
7
利用酒精燈將接種針燒至通紅,整支接種針過火三次
接種
8 10
利用雙手輕輕輕動混合均勻 9 11
取出酵母菌
轉動試管瓶口消毒
塗抹於載玻片上
接種完畢消毒
12
13
接種針消毒
試管消毒
蓋上蓋玻片
14
15
取出蓋玻片
蓋上蓋玻片
镜下测定酵母菌的长和宽。
选择有代表性的10个细胞进行测定，取平均值。
儀器與器具
裝置接目測微鏡
1 3
取出接目測微鏡 2 4
蓋回接目鏡
打開接目鏡並放置接目測微鏡
安置接目鏡並觀察是否安裝完整
安置接物測微鏡
1
2
打開接物測微鏡
微生物细胞的大小测定
目镜测微尺是一块可放在接目镜内的隔板 上的圆形小玻片，其中央刻有精确的刻度， 有等分50小格或100小格两种，每5小格间 有一长线相隔。由于所用接目镜放大倍数 和接物镜放大倍数的不同，目镜测微尺每 小格所代表的实际长度也就不同，因此， 目镜测微尺不能直接用来测量微生物的大 小，在使用前必须用镜台测微尺进行校正， 以求得在一定放大倍数的接目镜和接物镜 下该目镜测微尺每小格的相对值，然后才 可用来测量微生物的大小。
四、操作步骤
1、装目镜测微尺 2、校正目镜测微尺 （1）放镜台测微尺 将镜台测微尺刻度面朝上放在 显微镜载物台上。 （2）先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分 移至视野中央，调节焦距，当清晰的看到镜台测微尺 的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微 尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺 在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线 之间镜台测微尺和目镜测微尺所占格数。用同样的方 法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和 油镜下，两重合线之间两尺分别所占格数。
2、标定目镜测微尺时，一定要准确对正目镜 测微尺与镜台测微尺的重合线。
五、实验报告
1.将目镜测微尺校正结果填入表格中;
2.在高倍镜下测量酵母菌的大小,填入表格中;
3.思考题:为什么更换不同放大倍数的目镜和 物镜时必须重新用镜台测微尺对目镜测微尺 进行标定?
显微测微尺
（3）计算
由于已知镜台测微尺每格长10um，根据公式 目镜测微尺每格长度（um）=两条重合线间镜台测
微尺的格数×10/两重合线间目镜测微尺的格数
微生物大小的测定
微生物大小的测定微生物学是生物学一个主要分支，研究的是微生物的结构、生长、代谢、遗传等方面。
微生物学的研究对于人类的健康、环境保护、工业发展等领域有着重要的意义。
微生物的大小是微生物学中比较基础、重要的一个特性，下文将介绍微生物大小的测定。
测定微生物大小的方法有很多种，下面介绍几种常用的方法:1.显微镜测量法显微镜观察是目前测定微生物大小的主要方法。
显微镜可以将微生物放大数百到数千倍，使得我们能够清晰地观察微生物形态和大小。
显微镜测量法的步骤如下：(1)将微生物样本制备成透明薄片，常用的制片方法有磨片法、盖玻片法等。
(2)将制好的透明薄片置于显微镜下，用高倍镜观察微生物的形态和大小。
(3)在显微镜中使用目镜目盖尺或称为目镜刻度尺，来测量微生物的大小。
根据测定微生物的具体情况可以选择使用不同倍数的物镜进行测量。
2.流式细胞仪测量法流式细胞仪是一种自动化仪器设备，可快速高效地测量微生物的大小和形态。
其工作原理是将微生物悬液通过一组激光束，利用不同大小、不同形态的微生物对激光产生的散射光进行测量，从而得到微生物的大小和形态。
流式细胞仪测量法的优点是速度快、准确度高。
但是设备成本较高，需要进行适当的预处理，操作较为复杂。
但是，电子显微镜的设备成本较高，需要专业操作和维护，使用起来较为困难。
二、微生物大小受哪些因素影响微生物的大小受到很多因素的影响，其中比较主要的因素有：1.生长状态微生物的大小会随着它们处于生长周期的不同阶段而发生变化。
2.环境条件微生物生长的不同环境条件（如温度、酸碱度、营养等）也会影响微生物的大小。
3.微生物种类不同种类的微生物在形态和大小方面也具有很大的差异，如原核生物和真核生物之间的差异。
微生物大小的测定在微生物学研究和应用中都有很重要的意义。
例如，对于药物研发和制造方面，测定微生物的大小可以用于确定药物对微生物的作用范围，寻找合适的药物治疗手段。
在工业中，测定微生物的大小可以用于微生物发酵过程的控制和监测，提高工业产品质量和产量。
实验七微生物细胞大小测定
实验七微生物细胞大小测定实验目的1．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造。
2．掌握用显微测微尺测量微生物细胞大小的方法。
实验材料1．菌种啤酒酵母菌24h液体培养物；2．其它光学显微镜、镜台测微尺、目镜测微尺、盖玻片、载玻片、香柏油、擦镜纸。
实验原理在一定条件下，各种微生物细胞的大小，是微生物形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。
由于微生物细胞很小，只能在显微镜下测量，一般采用显微测微尺来测量。
显微测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺两个部件。
镜台测微尺是在中央部分刻有精度等分线的载玻片。
一般将1mm等分为100格，每格长度为10 m，用于校正目镜测微尺。
目镜测微尺是一块可放在目镜内的圆形玻片，其中央一般有100等分的小格。
目镜测微尺可直接用于测量细胞的大小。
由于不同的显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一样。
因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的相对大小。
球菌用直径来表示大小，杆菌用宽和长的范围来表示。
如金黄色葡萄球菌直径约为0.8微米，枯草芽孢杆菌大小为0.7-0.8*2-3微米。
实验内容（一）目镜测微计的校正1．放置目镜测微尺取出目镜，旋开目镜，将目镜测微尺放在目镜的隔板上（有刻度的一面向下），然后旋上目镜，最后将此目镜插入目镜镜筒内。
2．放置镜台测微尺把镜台测微计放在显微镜载物台上（有刻度的一面向上）。
3．校正目测微尺用低倍物镜观察，对准焦距，通过调焦能看清镜台测微计的刻度；移动镜台测微尺和转动目测微尺使两者刻度平行；转动推进器从而使两测微尺某段起、止线完全重合，数出两条重合线之间的格数。
用同法分别校正在高倍镜和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。
观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜时，防止物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。
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微生物细胞大小测定一、实验目的了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造和使用原理，掌握微生物细胞大小的测定方法。
二、实验原理微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小，只能在显微镜下来测量。
用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。
目镜测微尺（图-1 ）是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50 等分，或把10 mm长度刻成 100 等分。
测量时，将其放在接目镜中的隔板上( 此处正好与物镜放大的中间像重叠) 来测量经显微镜放大后的细胞物象。
由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小方格所代表的相对长度。
镜台测微尺（图20-2 ）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm 等分为 100 格，每格长 l0 μ m（即 0.0lmm ），是专门用来校正目镜测微尺的。
校正时，将镜台测微尺放在载物台上，图 1 目镜测微尺图2镜台测微尺由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。
即三、实验器材1．活材料：酿酒酵母( Saccharomyces cerevisiae) 、枯草杆菌(Baccillus subtilis) 染色标本片。
2．器材：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。
四、实验方法1．目镜测微尺的校正把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把镜台测微尺置于载物台上，刻度朝上。
先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺重叠，再使两尺的“ 0”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和镜台测微尺的格数。
因为镜台测微尺的刻度每格长l0 μ m，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。
例如目镜测微尺 5 小方格正好与镜台测微尺 5 小方格重叠，已知镜台测微尺每小方格为l0 μm，则目镜测微尺上每小方格长度为=5× 10μ m/5 ＝10 μ m用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小方格所代表的长度。
由于不同显微镜及附件的放大倍数不同，因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用，当更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。
2．细胞大小的测定移去镜台测微尺，换上酵母菌标本片，先在低倍镜下找到目的物，然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量酵母菌菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。
测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值，即等于该菌的长和宽。
一般测量菌体的大小要在同一个标本片上测定 10 —20 个菌体，求出平均值，才能代表该菌的大小。
而且一般是用对数生长期的菌体进行测定。
同法用油镜测定枯草杆菌染色标本的长和宽。
五、实验报告将实验结果填入下列表格物镜目尺格数表 1台尺格数目镜测微目尺校正结果目尺校正值（μ m）10 ×40 ×100 ×表 2酵母菌大小测定记录123456789101112131415（格）平均值长宽细胞数表 3 枯草杆菌大小测定记录123456789101112131415（格）平均值长宽结果计算长μm＝平均格数×校正值宽μ m＝平均格数×校正值大小表示：宽μm×长μm微生物的显微直接计数法一、实验目的了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。
二、实验原理测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。
显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。
菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser ）细菌计数板。
两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。
而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。
血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有 4 条槽而构成 3 个平台。
中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区，计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16 个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25 个小方格；另一种是一个计数区分成25 个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16 个小方格。
但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400 个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为22l mm ，每个小方格的面积为 1/400mm 。
盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。
使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。
33已知： 1mm 体积 =10 mm× 10 mm×10 mm= 1000mm3336个小方格，即系数6。
所以： 1mm体积应含有小方格数为1000mm/1/4000mm =4× 10K=4× 10因此：每 ml 菌悬液中含有细胞数= 每个小方格中细胞平均数（N）×系数（ K）×菌液稀释倍数（ d）三、实验器材1．活材料：酿酒酵母培养液。
2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm× 22mm）、擦镜纸等。
四、实验方法1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（。
2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。
也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。
然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。
由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。
5．计数时若计数区是由 16 个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小方格）的菌数。
如果是25 个大方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央l个中方格的菌数（即 80个小方格）。
如菌体位于中方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。
每个样品重复计数 2— 3 次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），求出每一个小方格中细胞平均数（N），按公式计算出每ml（ g）菌悬液所含酵母菌细胞数量。
7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。
洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。
五、实验报告将实验结果填入下表中：计数次数每个大中方格菌数稀释1ml 菌液总菌数平均值12345倍数第一次第二次实验室环境和人体表面微生物的检查一、实验目的1.证明实验室环境与体表存在微生物。
2．比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型。
3．观察不同类群微生物的菌落形态特征。
4．体会无菌操作的重要性。
二、实验原理平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养 1～ 2d 内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体集落，称为菌落。
每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。
因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。
三、器材l ．培养基肉膏蛋白胨琼脂平板。
2．仪器或其他用具无菌水，灭菌棉签( 装在试管内 ) ，接种环，试管架，酒精灯或煤气灯等。
四、操作步骤l．写标签任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源 ( 如实验室空气或无菌室空气或头发等 ) ，字尽量小些，写在皿底的一边，不要写在当中，以免影响观察结果。
培养皿的记号一般写在皿底上。
如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。
2．实验室细菌检查(1) 空气将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面lh 暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。
后盖上两个皿盖。
(2)实验台和门的旋钮①用记号笔在皿底外面中央画一直线，再在此线中间处画一垂直线。
②取棉签左手拿装有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞(或试管帽)，将其取出，将管口很快地通过煤气灯( 或酒精灯) 的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出。
塞回棉塞 (或试管帽 )，并将空试管放在试管梁上。
③弄湿棉签左手取灭菌水试管，如上法拨出棉塞( 或试管帽 )并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，塞回棉塞(或试管帽 ) ，并将灭菌水试管放在试管梁上。
2cm2的范围．④取样将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约⑤接种在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝．再将棉签伸人，在琼脂表面顶端接种，即滚动一下，立即闭合皿盖。
将原放棉签的空试管拨出棉塞(或试管帽 )，烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放回试管架。
⑥划线另取接种环在火焰上灭菌，进行划线，整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。
3．人体细菌的检查（1）手指 (洗手前与洗手后 )①分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后(班级、姓名．日期 )。
②移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。
③用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。