水中细菌总数的检测原版
自来水中细菌总数的测定
自来水中细菌总数的测定自来水是我们生活中必需的一种水源，但由于其经过管道输送，可能会受到外界环境的影响，其中细菌是其中一种污染物。
因此，对自来水中的细菌总数进行测定，有助于判断自来水是否符合生活饮用水标准。
一、实验原理本实验采用了膜过滤法对自来水中的细菌总数进行测定。
其原理是通过将水样通过微孔膜滤器，将水中的微生物捕捉在滤膜的表面，再将滤膜培养在含有营养物质的琼脂培养基中，使细菌能够生长形成菌落，然后再通过计数器进行计数。
二、实验步骤1. 实验前处理：先将实验室的玻璃仪器清洗干净，用工业酒精将滤器放入灭菌杯中斜着着火杀菌，备用。
2. 取一个样品瓶，将自来水（1L）倒入瓶中。
将样品瓶放入一个不透明的塑料袋中，用胶带密封塑料袋，防止紫外线照射导致细菌死亡。
3. 首先将滤装置组装好，将滤膜放入滤装置的中间柄内，放入开口的滤膜夹中。
然后用无菌注射器将琼脂培养基吸入滤装置的压力室中，将压力室旋好。
4. 用烧杯等容器将自来水倒入滤装置中，通过压力室将水样通过滤膜，滤膜表面残留的微生物被滤装置中的滤膜抓住，滤液通过过滤口流出。
滤液需丢弃。
5. 将滤膜夹子取下，将滤膜放入用滤膜侧朝上的营养琼脂培养基培养皿中，培养皿需用无菌手套拆开。
将其覆盖好，标明标识，并用胶带作为封口。
6. 将培养皿竖起放入培养箱中，温度设定为37℃左右，需要放置24h以上，17~25℃下也可进行培养，培养天数也需要视不同微生物而定。
7. 取出培养皿，用目镜进行菌落计数。
计数时需要注意，培养皿中的菌落数量需要控制在20~200个之间。
计数完后将数据进行转换，得出升级菌落数，即水样中的细菌总数。
三、实验注意事项1. 玻璃仪器需要在实验前清洗干净，并且需要消毒处理，防止样品污染。
2. 在进行实验前，实验人员需要洗手，并穿戴洁净的实验服和手套，防止手部细菌对实验结果的影响。
3. 滤装置和培养皿需要在无菌条件下进行处理，避免细菌的交叉感染。
4. 培养皿中需要加盖，防止紫外线照射导致细菌死亡，同时也可以避免污染。
微生物实验@实验10 水中细菌总数的测定
五、实验结果
记录各稀释平板上的菌落数，并计算出样品 中的细菌含量。
四、操作步骤
编号：取无菌培养皿9套，每3套为一组，在每组皿底分别 写上10-1、10-2、10-3。另取3支无菌空试管排列于试管架 上，依次标明10-1、10-2、10-3，并向试管中各加入9ml无 菌生理盐水。 稀释：用1ml无菌吸管精确地吸取1ml已充分混匀的菌悬液， 注入10-1试管中（注意吸管不要碰到水面）。然后另取1支 无菌吸管，于10-1试管中来回吹吸三次，使之混匀，即成 10-1稀释液。再从10-1试管中吸1ml注入10-2试管中，重复 上述操作，直至制成10-3稀释液。 取样：用三支1ml无菌吸管分别吸取10-1、10-2和10-3稀释 液各1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中。 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入 融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml， 置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而 又不使培养基荡出或溅到皿盖上。 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养 24h。
实验十 水中细菌 总数的测定
一、目的要求
学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的 方法； 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。
二、实验材料
水样 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等
饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总
数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升 水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后 所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的 总菌数不得超过100个。
菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。 若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数。
水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1. 实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2. 菌落总数standard plate-count bacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48 h后，所得1 mL水样所含菌落的总数细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度。
3. 培养基与试剂2.1营养琼脂成分2.2制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后,加热溶解，调整pH为7.4~7.6, 分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤。
），经103.43 kPa（ 121°C,15 lb）湿热灭菌20 min，储存于冷暗处备用。
4. 仪器和材料仪器：高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱。
材料：灭菌平皿（直径9 cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5. 样品采集自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3-5 min，用无菌空三角瓶接取水样200 ml。
纯净水取样：用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升。
地表水的取样：应取距水面10—15 cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
6. 检验步骤生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1 mL充分混匀的水样, 注入火菌培养皿中，倾注约15 ml已融化并冷却到45 C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注培养基作为空白对照。
水中细菌总数的测定
（4）倒平板：分别取1mL纯净水原液、纯净水0.1、 自来水原液、自来水0.1放入编号号的无菌平皿内， 并混合均匀，每个稀释度做3个平板，然后在酒精 灯周围往每个平皿内倒入融化后并冷却至45℃— —50℃左右的牛肉膏蛋白胨培养基。待培养皿内 液体凝固后，将平板放入恒温培养箱中倒置培养。 （5）观察计数
实验内容与步骤
一、制备牛肉膏蛋白胨培养基： （1）称量：牛肉膏1g、蛋白胨2g、Nacl1g、琼脂4g、 自来水500mL （2）溶解 （3）加热煮沸：用瓷缸盛装溶解后的溶液，放在微 波炉上加热，并不断搅拌，直至煮沸为止 （4）装瓶：用锥形瓶盛培养基，用棉塞塞住瓶口， 再用报纸包住瓶口 （5）灭菌：将装好的培养基放入高压蒸汽灭菌板计数计数测定水中细菌总数，由 于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条 件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一 种条件下使水中所有的细菌均能生长繁殖。因此， 从一定的培养基平板上生长出来的菌落计算出来 的水中细菌总数仅是一种近似值，目前一般是采 用普遍牛肉膏蛋白胨培养基
二、倍比稀释 （1）编号：取4支灭菌试管分别标记纯净水原液、 纯净水10倍、自来水原液、自来水10倍。另取12 个培养皿分别标记纯净水原液、纯净水10倍、自 来水原液、自来水10倍各三个培养皿。 （2）取样：取10mL的纯净水放入纯净水原液的 试管中，另取10mL的自来水放入自来水原液的试 管中。 （3）倍比稀释：用灭菌的移液枪吸取纯净水原液 1mL,放入纯净水10倍的试管内（注：每吸取一次 液体，需要更换移液枪的枪头）然后吸取无菌水 9mL放入纯净水10倍的试管内。自来水的倍比稀 释也是同理。
水中细菌总数的测定
生物制药二班 五组
实验目的
1、了解和学习水中细菌总数的测定原理和测定意 义 2、学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总 数的方法
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水是一种重要的自然资源，因此水的质量非常重要。
水的污染问题已经引起了越来越多的人关注。
而微生物是水中的主要污染物之一，尤其是细菌总数和大肠菌群，这些污染物对人体的影响是非常大的。
在这篇报告中，我们将介绍我们对这两种污染物的检测结果。
1. 实验材料我们使用了以下材料进行实验：- 水样：我们选择了来自自来水厂和自然水源（例如河流和湖泊）的样本。
- 培养基：我们使用了通用富营养基和多氯芬酸钠培养基进行实验。
2. 实验方法我们使用了以下步骤来检测水中的微生物：- 取样：我们使用无菌技术取样。
具体而言，我们先用消毒过的杯子收集水样，然后用无菌注射器将水转移到无菌容器中。
- 稀释：我们用无菌盘子将水样稀释至适当的浓度。
- 培养：我们将每个稀释后的水样盛放于培养基中，然后将培养皿放入孵化箱，控制温度在30℃，进行孵化48小时。
- 计数：我们使用显微镜和计数计数室对每个水样中的细菌进行计数。
3. 实验结果我们进行了3次独立的实验，每次实验都使用了来自不同水源的样本。
下面是我们的检测结果。
- 细菌总数我们使用通用富营养基在每个水样中进行了细菌总数的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源细菌总数（CFU/mL）自来水厂8 × 104 5 × 104湖泊2 × 105 3 × 105河流5 × 105 6 × 105-大肠菌群我们使用多氯芬酸钠培养基进行了大肠菌群的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源大肠菌群（CFU/mL）自来水厂不可检测不可检测湖泊1 × 103 1 × 103河流2 × 103 2 × 1034. 结论我们的实验结果表明，不同来源的水样中细菌总数和大肠菌群的数量有很大的不同。
实验10 水中细菌总数的测定
一、目的要求
❖ 学习水样的采取方法，检测水中细菌总数的 方法；
❖ 学习掌握平板菌落计数的原理和方法。
二、实验材料
❖ 水样 ❖ 培养基：营养琼脂培养基，无菌生理盐水 ❖ 1ml、10ml无菌移液管，无菌培养皿等
饮用水是否合乎标准，通常通过水中细菌总 数和大肠菌群数来确定。细菌总数是指1毫升 水样在普通琼脂培养基中，37℃24小时培养后 所生长的菌落数。一般规定，1毫升自来水的 总菌数不得超过100个。
三、基本原理
❖ 平板菌落计数法是根据在固体培养基上形成的一 个菌落是由一个单细胞繁殖而成的肉眼可见的子 细胞群体这一微生物的培养特征而设计的一种计 数方法。
❖ 将样品进行不同稀释，使微生物分散并以单细胞 存在。再用一定量的稀释液涂布于平板上，培养 后，每一个活细胞即能形成一个菌落。统计菌落 的数目，根据稀释的倍数及取样接种量即可换算 出样品中的含菌数。
❖ 倾注平板：尽快向上述盛有不同稀释度菌液的平皿中倒入 融化后冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每皿约15ml， 置水平位置迅速旋转平皿，使培养基与菌液混合均匀，而 又不使培养基荡出或溅到皿盖上。
❖ 培养：待培养基凝固后，倒置于37℃恒温培养箱中培养 24h。
❖ 菌落计数方法
（1）计算相同稀释度的平均菌落数 有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。
若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此 一半计数×2 （2）选择平均菌落数在30～300之间的平板 只有一个符合此范围时，以该平均菌落数乘稀释倍数。 有两个在30～300间时，按两者菌落总数比值决定：比值小 于2，取平均；比值大于2，取较小的菌落总数。 （3）所有菌落数均大于300，取稀释度最高的平均菌落数乘 稀释倍数。 （4） 所有菌落数均小于30，取稀释度最低的平均菌落数乘 稀释倍数。 （5） 所有菌落数均不在30～300之间，以最接近30或300的 平均菌落数乘稀释倍数。
水中细菌总数测定.
一、细菌总数测定的意义
◈可以反映水体有机污染的程度
Ⅰ 细菌总数的测定
二、培养基的制作
三、测定方法及步骤
1.稀释水样 2.接种水样 3.培养：37℃下倒置培养24h
Ⅰ 细菌总数的测1mL
1mL
1mL
1mL
1mL 1mL 1mL
ck
10-1
10-2
10-3
1mL
37℃
2、步骤 1）单用紫外灯 在无菌室内或在接种箱内打开紫外线 灯开关，照射30min，将开关关闭。 2）化学消毒剂与紫外线照射结合使用 在无菌室内，先喷洒化学消毒剂溶液， 再用紫外线灯照射15imn
水中细菌总数测定
一、水样的采集
1. 采水容器 ① 采样瓶：具磨口玻塞的500mL广口瓶 ② 采样瓶的洗涤 ③ 采样瓶的灭菌: 160～170℃干热灭菌2h，或用高压蒸汽 灭菌器，121℃灭菌15min
加水 装待灭 菌物品 加盖 加热 灭菌时间到后 断电源 压力降为零 开箱取物
（三）紫外线灭菌法 1、原理 紫外线杀菌机理主要是因为它诱导了胸 腺嘧啶二聚体的形成和DNA 链的交联，从而 抑制了DNA 的复制。另一方面，由于辐射能 使空气中的氧电离成[O]，再使O2 氧化生成 臭氧或使水氧化生成H2O2。O3 和H2O2 均有 杀菌作用。 适用于无菌室，接种箱，手术室内的空 气及物体表面的灭菌。
灭菌前按500ml采样瓶加入03ml10na2s2o3溶液2采集江河湖库等地表水样时可握住瓶子下部直接将已灭菌的带塞采样瓶插入水中约距水面1015cm处采集3采集一定深度的水样时可使用单层采水器或深层采水器4从自来水龙头采集样品时采水前可先将水龙头打开至最大放水35min用酒精灯火焰灼烧约3min灭菌5在同一采样点进行分层采样时应自上而下进行以免不同层次的搅扰
自来水中细菌总数的测定
自来水中细菌总数的测定摘要水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物含量越大。
本实验应用平板菌落记数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值[1]。
本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。
所谓细菌总数，是指在1mL水样在普通营养琼脂培养基中，37℃经24h培养后，所生长出来的菌落数。
通过培养观测得到平均1mL自来水中含有85个细菌菌落，符合国家标准。
关键词自来水平板菌落计数技术细菌总数测定引言水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的[2]。
良好的饮用水细菌总数应<100CFU∕mL,而>500CFU∕mL则不适宜饮用，我国饮用水卫生标准（GB5749-85）规定，每毫升水样中细菌总数37℃培养24h不得大于100个[3]。
细菌种类对人类健康更为重要，许多致病细菌常常存在于水中，人们饮用后引发各种疾病，如痢疾，伤寒等，大多是饮用水污染了这些病原菌之故，因而测定饮用水中的病原菌是必需的。
本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染。
我们可以了解水质评价的微生物学卫生标准和本地区自来水的卫生状况，从而不断的改善并很好的治理。
1材料与方法1.1时间与地点2010年10月27日太原师范学院南区微生物实验室1.2实验材料牛乳膏蛋白胨琼脂培养基、自来水、蒸馏水、烧杯、玻璃棒、培养皿、电炉、高压蒸汽灭菌锅、天平、量筒等1.3方法1.3.1牛乳膏蛋白胨琼脂培养基的制备[4]计算并称量一定量的普通标准琼脂培养基固体置于烧杯中，先加入少于所需要的水量，用玻璃棒搅拌，然后再电炉上加热使其溶解，完全溶解后补充水量至所需的总体积，不断搅拌直至沸腾，沸腾后继续加热3~5分钟。
水中细菌总数的测定
• 测定水中的细菌总数；（天然水、饮用水） • 学会制备琼脂营养培养基； • 熟练掌握超净工作台的操作。
实验前准备
• 仪器准备：培养皿（12个）、试管（25ml,4支） 、移液管（1ml,4支）、锥形瓶、烧杯、玻珠、胶 塞、棉花、洗耳球、电炉、牛皮纸、棉绳、天平 、高压锅、超净工作台 • 试剂准备：营养琼脂粉、酒精、饮用水、天然水 、无菌水
采样地点
• 天然水采样地点 • 饮用水采样地点
3楼，办公 室，饮水机
实验步骤
菌落的计数及图片
空白实验
ห้องสมุดไป่ตู้
饮用水
天然水
结果计算及报告
天然水体 1 10-1 10-2 饮用水 空白对照
N（个/ml）
116
205
2
5
1
根据我国天然水体卫生标准规定，在100-1000（个/mL）范围内的天 然水库为清洁，1.2×102个/mL在100-1000 （个/mL）范围内，所以我们 所测的湖水清洁标准。 根据我国生活饮用水卫生标准规定，细菌总数1mL自来水中不得超过 100个，由于5个/mL<100个/mL，所以本次实验所取的实训楼D栋3楼办公 室饮用水达标。
问题讨论
• 1、为什么水样稀释10倍后的细菌总数比原水样 的细菌总数还多? 答：因为在移取稀释10倍的水样到培养皿的时候 吸耳球中带有水，在吸取水样时，吸耳球中的水 流入移液管中，导致水样被污染，造成菌落总数 增加。
• 2、为什么空白对照的结果不是0？ 答：组内有一成员由于在超净工作台操作前双 手灭菌不完全，接触空白培养皿，导致被污染。 在移取稀释10的水样时，由于不小心把液 体溅到超净工作台上，导致超净工作台受污染。
(完整版)水中细菌总数的测定
水中细菌总数的检测1.实验目的1、学习并掌握水的细菌学检测方法2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。
2.菌落总数standardplate-countbacteria水样在营养琼脂上、有氧条件下37°C培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数.细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染。
由于结果不能说明污染的来源，因此必须结合总大肠菌群数来判断污染源和安全程度3.培养基与试剂2.1营养琼脂成分2.2制法：根据实际需要量，按照上述配方称取各成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4〜7。
6,分装于玻璃容器中（如用含有较多杂质的琼脂，应先过滤.），经103。
43kPa（121°C,15lb）湿热灭菌20min,储存于冷暗处备用。
4.仪器和材料4.1仪器:高压蒸汽灭菌器、干热灭菌箱、水热恒温培养箱、电炉、天平、冰箱.4.2材料：灭菌平皿（直径9cm）、灭菌试管、刻度吸管、三角烧瓶、采样瓶、酒精灯、消毒水、镊子、试管架等。
4.3放大镜或菌落计数器、pH计或精密pH试纸、火柴或打火机。
5.样品采集（完整版）水中细菌总数的测定5.1自来水的取样：先将自来水龙头用酒精棉擦拭，再用酒精灯火焰灭菌，打开龙头放水3—5min,用无菌空三角瓶接取水样200ml.5.2纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后，先放走部分水，再用无菌空三角瓶接取水样200毫升.5.3地表水的取样：应取距水面10-15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中,然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后,将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查,否则需放入冰箱中保存。
6.检验步骤6.1生活饮用水（自来水、纯净水）：以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌培养皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45°C左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。
实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测
2010-4-30
2、材料与方法
水样的采集
自来水：先将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌， 再开放水龙头使水流5min，以灭菌三角瓶接取水样 以备分析。(500ml采样瓶加15g/L硫代硫酸钠溶液 1.5ml)
37750
38000或3.8×104
3 多不可计 271 60 2.2
27100
27000或2.7×104
4 多不可计 多不可计 313
-
313000 310000或3.1×105
5 27
11
5
-
270
270或
6
0
0
0
-
＜10
＜10
7 多不可计 305 12
-
30500
31000或3.1×104
3、结果与分析
试剂 ： 牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红 美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水 溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂
2010-4-30
2、材料与方法
2.2 培养基的配制 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总
数测定 牛肉膏5g，蛋白胨10g， NaCl 5.0 g，琼脂8g
， 蒸馏水1000ml； 乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵 1×：蛋白胨 20g、牛胆盐 5g、乳糖 10g、
3、结果与分析
3.1 水中细菌总数：用二位有效数字。
2010-4-30
稀释度及菌落数
10-1
10-2
论文--水中细菌总数的测定
论文--水中细菌总数的测定杭州职业技术学院实习作业文件2008 /2009(二)学期题目水中细菌总数的测定专业: 生物技术及应用班级: 生物0611姓名: 吕鼎烽指导教师: 俞卫平2009 年 5 月 31 日1杭州职业技术学院顶岗实习技能训练任务书专业专业指导俞卫平生物0611 学生姓名吕鼎烽班级教师实习岗位指导化工系实验室单位教师岗位分析工 (工作分工)技能训练选题水中细菌总数测定选题依据:分析工(高级工)国家职业标准。
技能训练内容、技能要求和训练目标:1.内容:实验准备水样的采取细菌总数测定平板菌落计数2.技能训练要求:了解各环节操作原理;掌握各环节操作技能。
详见附件:专业(岗位)实习教学要求细则。
3.训练目标:达到分析工高级工水平。
任务书发给日期 2009年 2 月 20 日顶岗实习时间 2009 年 2 月 20 日至2009 年 5 月 20 日专业负责人意见(签名):系部主任意见(签名):2《水中细菌总数测定》开题报告生物0611 吕鼎烽一(选题的实际应用价值及研究现状水是生命之源，人类无法离开她而生存，然而当前水质污染令人堪忧，饮水安全无法保证。
水又是微生物广泛分布的天然环境，无论是地表水还是地下水，甚至雨水或雪水，都含有多种微生物。
根据细菌对氧的需求情况，可分为三大类:厌氧菌、兼性厌氧菌、好氧菌。
当水体受到人、畜粪便、生活污水或某些工业废水污染时，水中厌氧菌和兼性厌氧菌等微生物的数量可大增。
水环境研究显示我国70,以上的河流受到了污染，全国湖泊约有75,的水域受到显著污染，90,以上城市水域污染严重。
因此，水中的细菌总数测定，特别是肠道细菌的检验，在环境质量评价、环境卫生监督等方面具有重要的意义。
但是直接检查水中各种病原微生物，方法较为复杂，有的难度大，而且检查结果为阴性也不能保证绝对安全。
所以，在实际工作中经常以检查水的细菌总数，特别是检查作为粪便污染的指示菌，来间接判断水体污染状况和环境卫生学质量。
实验5 水中细菌总数的检测
实验五水中细菌总数的检测一、实验目的1.采用标准平皿法对水样中细菌作计数。
2.掌握微生物实验中无菌操作技术方法。
二、实验原理水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关，它是评价水质污染程度的一个重要指标之一。
由于重金属及某些其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。
试验采用标准平皿法对水样中细菌作计数，这是一种测定水中好氧的和兼性厌氧的异养细菌密度的方法，由于细菌在水体中能以单独个体、成对、链状，成簇或成团的形式存在，此外没有单独的一种培养基或某一环境条件能满足一个水样中所有细菌的生理要求，所以由此法所得的菌落数实际上要低于被测水样中真正存在的活细菌的数目。
细菌总数是指l ml水样在营养琼脂培养基中，37ºC、24h 培养后所生长的菌落数。
一般规定，1ml自来水中总菌数不得超过100个。
三、材料和器皿1.培养基：营养琼脂培养基牛肉膏：3-5 g ；NaCl ：5 g ；蛋白胨：10 g ；琼脂：15-20 g；H2O ：1000 ml ；pH ：7.0-7.2.2.无菌采样瓶、灭菌移液管、灭菌培养皿，盛有90ml及9ml灭菌蒸馏水的锥形瓶和试管。
四、方法和步骤1.采集水样。
2.吸取10ml水样(河水、污水、游泳池水或港湾水等)，注入罐有90ml无菌水的三角瓶中，混匀成10-1稀释液，在吸水样前，水样应彻底搅动均匀。
3.按10倍稀释法将水样稀释成10-2、10-3、l0-4。
4.营养琼脂培养基(用于河水样)倒平皿(厚度约2-3毫米，12毫升）水平放置至固化。
5.根据水样的洁净程度，污染严重者选取10-2、10-3、l0-4稀释度；中等的选取10-1、10-2、10-3稀释度，每个稀释液分别注入两个培养皿，每皿0.2 ml，用玻璃刮刀涂匀。
稀释度的选择是本试验精确度的关键，选择适宜者，平皿上菌落总数介于30～300个之间。
6.将培养皿倒置于37ºC 培养24h，可观察出明显菌落。
水中细菌总数的检测原版
水中细菌总数的检测一．目的与要求了解水细菌学检测的卫生学意义和基本原理，学习和掌握检验水中细菌总数的方法，以评价水体的质量，确保饮水和用水的卫生和安全。
二．实验原理生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后，水中的细菌数量可大量增加，其中病原菌也随之增加，引发传染，危害人类健康，因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度，在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值，它是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数（CFU）。
我国生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水的细菌总数1mL中不得超过100CFU。
三．材料与方法1．材料①营养琼脂培养基②2216E培养基：配方如下：蛋白胨50g、酵母膏1.0g、FePO4 0.01g、琼脂18.0g、蒸馏水1000mL、pH值7.6-7.8。
2．方法水中细菌总数的平板计数测定方法。
3．仪器高压蒸汽灭菌锅；9cm培养皿；1mL、5mL移液管；45mL烧杯；250mL三角瓶四．实验步骤1．水样的采集①自来水：先将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌，再打开水龙头是水流5min后，以灭过菌的三角瓶接取水样，以待分析。
若水样内含有余氯，则采样瓶在为灭菌前按采500mL水样加3%硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O溶液1mL的量，预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的余氯，以防止余氯的杀菌作用。
②江水、河水、湖水、塘水、水库等水源水：可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。
采样时，将采样器置于水体中所置的深度，水即注入采样瓶中。
待注满后取出水面，立即送检，一般不应超过4h，否则需放入冰箱中保存，但不能超过24h。
2．水样的稀释根据水被污染的程度的不同，按无菌操作做10倍系列稀释。
KJ08实验十一_水中细菌总数检测(精)
二、实验原理
细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）
三、实验材料
1、水样 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养 基（带指形管）、伊红美兰固体培养基
四、实验方法
水中细菌总数的测定（混合平板法） 1、样品采集和稀释 自来水、纯净水、饮料作原样、 10-1 、10-2三个稀释度 污水作10-1 、10-2 、10-3三个稀释度 2、取3个稀释度样品各1ml于平皿中，再倒入50℃左右牛肉 膏蛋白胨培养基约15ml，轻轻转动混合均匀。凝固后37 ℃倒置培养。每个稀释度作3个重复。 细菌总数＝同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数 （最好在30~300个之间）
五、思考题
记录每组样品中所测得的细菌总数
水质 细菌总数的测定
水质细菌总数的测定
x
《水质细菌总数的测定》
一、实验目的
通过测定水质中的细菌总数，对水质进行评价和分析；
二、实验原理
细菌总数的测定，采用兰伯特液体培养基（LB），利用LB培养基对不同浓度的水样进行营养相关发酵，在给定的温度条件下培养，待发酵后有生长的细菌菌落可用视觉检验出来，经计数即可确定样中细菌含量，从而得出水质中的细菌总数。
三、实验材料(耗材)
蒸馏水
LB培养基
紫外灯
比色皿
小瓶或蒸馏瓶
四、实验步骤
1. 将水样放入小瓶或蒸馏瓶中，用蒸馏水稀释至不同浓度水样；
2. 将LB培养基加入瓶中，搅拌均匀，使水样充分接触培养基；
3. 置于 37℃恒温箱培养，一般24-48小时即可；
4. 放至紫外灯下观察，可见菌落发生；
5. 细菌总数的测定采用比色皿法，有效的细菌数量=累加比色皿
中计数的细菌数量；
6. 对培养液中的细菌进行形态学观察，检验其计数是否准确。
五、安全注意事项
1. 本实验中使用的蒸馏水、LB培养基均为无毒无害，但建议在实验中注意安全防护；
2. 加热时要特别注意，避免出现烫伤；
3. 在使用紫外灯时，要注意身体保护，不要让紫外线直射眼睛；
4. 加热时应离火源远一些，防止烫伤；
5. 使用比色皿必须放置到无菌区进行操作，以防菌落受到外界污染；
6. 实验过程中，使用的器具要清洁，以防影响实验结果。
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水中细菌总数的检测
一．目的与要求
了解水细菌学检测的卫生学意义和基本原理，学习和掌握检验水中细菌总数的方法，以评价水体的质量，确保饮水和用水的卫生和安全。
二．实验原理
生活饮用水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后，水中的细菌数量可大量增加，其中病原菌也随之增加，引发传染，危害人类健康，因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度。
水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。
故水的细菌学检验对了解水体被污染的程度，在流行病学和提供水质标准中具有重要意义和价值，它是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数（CFU）。
我国生活饮用水卫生标准中规定生活饮用水的细菌总数1mL中不得超过100CFU。
三．材料与方法
1．材料
①营养琼脂培养基
②2216E培养基：配方如下：蛋白胨50g、酵母膏1.0g、FePO4 0.01g、琼脂18.0g、蒸馏水1000mL、pH值7.6-7.8。
2．方法
水中细菌总数的平板计数测定方法。
3．仪器
高压蒸汽灭菌锅；9cm培养皿；1mL、5mL移液管；45mL烧杯；250mL三角瓶四．实验步骤
1．水样的采集
①自来水：先将自来水龙头用火焰灼烧3min灭菌，再打开水龙头是水流5min后，以灭过菌的三角瓶接取水样，以待分析。
若水样内含有余氯，则采样瓶在为灭菌前按采500mL水样加3%硫代硫酸钠（Na2S2O3·5H2O溶液1mL的量，预先加入采样瓶内，用以采样后中和水样内的余氯，以防止余氯的杀菌作用。
②江水、河水、湖水、塘水、水库等水源水：可应用采样器，器内的采样瓶应先灭菌。
采样时，将采样器置于水体中所置的深度，水即注入采样瓶中。
待注满后取出水面，立即送检，一般不应超过4h，否则需放入冰箱中保存，但不能超过24h。
2．水样的稀释
根据水被污染的程度的不同，按无菌操作做10倍系列稀释。
3．细菌总数的测定
（1）自来水：
①用灭菌移液管吸取1mL水样，注入灭菌培养皿中。
②分别倾注15mL已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基，并立即在桌面上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
③另取一空的灭菌培养皿，倾注45℃左右的灭菌营养琼脂培养基15mL，作空白对照。
④培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24h，进行菌落计数。
两个平板的菌落数平均值即为1mL水样的细菌总数。
(2)水源水
①稀释水样：取4个灭菌试管，分别加入4.5mL灭菌水。
取0.5mL水样注入盛有4.5mL 灭菌水的第一试管中，摇匀成10-1稀释液，再从第一试管取0.5mL至下一试管灭菌水中，如此稀释到第三试管，稀释度分别为10-1，10-2，10-3。
稀释倍数看水样污染程度而定，以培养后平板的菌落数在30-300个为最合适。
若三个稀释度的菌落数都多到或少到无法计数，则需加大或减少稀释倍数。
一般中等污染的水样，取10-1，10-2，10-3三个稀释度，污染严重的取10-2，10-3，10-4三个连续稀释度。
②自最后两个稀释度的试管中各取1mL稀释水样加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两个培养皿。
③各倾注15mL已融化并冷却到45℃左右的灭菌营养琼脂培养基，立即放在桌面上摇匀。
④凝固后倒置于37℃培养箱中培养24h。
五．实验报告
（1）菌落数计算原则
记录各平皿的菌落数后，计算相同稀释度的平均菌落数，供下一步计算用。
若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌苔的大小不到平皿的一半，而其余的一半菌落分布有很均匀时，则将此一般菌落数乘2以代表平板的全部菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
（2）细菌总数计算方法：按已获得的同稀释度的平均菌落数的不同情况进行计算。
①首先选择平均菌落数在30-300之间，查表进行计算。
当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数，报告该水样的细菌总数（表1例1）。
②若有两个稀释度，其平均菌落数均在30-300之间，则应按两者菌落总数之比值来决定。
若其比值小于2应报告两者的平均数，若大于2则报告其中较小的菌落总数（表1例2及例3）。
③若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例4）
④若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例5）
⑤若所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，则以最接近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（表1例6）
（3）报告水样品中细菌总数。
从水质细菌检测结果，分析饮用水、水源水是否符合标准。
（4）水的细菌学检测中应注意哪些关键事项？
表1 稀释度选择及菌落总数报告方式
例次不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌
落数之比
菌落总数/
个·mL-1
报告方式/个·mL-1 10-110-210-3
1 1365 164 20 —16.400 16000或1.6×104
2 2760 295 46 1.6 37.750 37750或3.8×104
3 2890 271 60 2.2 27.100 27100或2.7×104
4 无法计数10650 513 —513.000 510000或5.1×15
5 27 11 5 —270 270或2.7×102
6 无法计数305 12 —30.500 30500或3.1×104
六．注意事项
（1）严格无菌操作，防止污染。
（2）注意正确培养方法。