1、胰岛自身抗体检测技术新进展
血清C肽及胰岛自身抗体联合检测的临床应用
血清Ｃ肽及胰岛自身抗体联合检测的临床应用摘要目的：探讨联合检测抗胰岛细胞抗体（ICA）、抗胰岛素抗体（IAA）和抗谷氨酸脱羧酶抗体（GADA）对于从临床上诊断为2型糖尿病（T2DM）的患者中发现成人隐匿性自身免疫性糖尿病（LADA）的意义。
方法：选择从2008年6月至2008年9月间来吉林大学第二医院内分泌科住院的临床诊断为T2DM 的患者100例，正常对照组50例，采用酶联免疫法（ELISA）分别检测ICA、IAA、GADA。
采用放射免疫法（RIA）分别检测空腹和餐后2小时的血清C肽水平。
结果：在100例T2DM中，43%胰岛自身抗体阳性，57%胰岛自身抗体阴性，胰岛自身抗体阳性组血清C肽水平：空腹为576.5±227.2pmol/L，餐后2小时为1186.7±489.6 pmol/L，明显低于胰岛自身抗体阴性组血清C肽水平：空腹为823.8±411.6pmol/L，餐后2小时为2017.9±672.3pmol/L，经统计学处理，两者有非常显著性差异（P3讨论从表1联合检测结果可以看出：在正常对照组只检出2例（4%）ICA阳性和1例（2%）GADA阳性，IAA均为阴性。
而在T2DM患者中ICA阳性率为35%（35/100）；IAA阳性率为12%（12/100）；GADA阳性率为32%（32/100）。
与相应的正常对照组比较，经统计学分析均有非常显著性差异（P<0.01）。
在T2DM的患者中胰岛自身抗体总阳性率（三种胰岛自身抗体中有一种或一种以上阳性即为阳性）为43%（43/100）。
从表2结果来看：胰岛自身抗体阳性组的患者无论空腹还是餐后2小时的血清C肽水平与胰岛自身抗体阴性组比较，结果均显著降低，经统计学处理，两组间有非常显著性差异（P<0.01）。
自身免疫介导的β细胞破坏是T1DM的发病基础。
由于破坏程度、速度的不同以及残存β细胞数量的差异，临床表现有以酮症方式起病的速发型和缓慢型，后者又称为成人隐匿性自身免疫性糖尿病（latent autoimmune diaetes of adults,LADA），此类患者的特点为成年发病，病情进展缓慢，早期可表现为非胰岛素依赖，胰岛β细胞存在自身免疫损伤，最终发展为胰岛素依赖。
LADA诊疗的共识
・
・பைடு நூலகம்
与其他自身免疫性疾病的关系：ＬＡＤＡ及经典１型糖尿病均易伴自身免疫甲状腺疾病，包括Ｇｒａｖｅｓ病、 桥本甲状腺炎和自身免疫甲状腺功能滴退症。ＬＡＤＡ可以作为自身免疫多内分泌腺病综合征（ＡＰＳ）的
一个组成成分而存在，多为ＡＰＳ ｍ型。ＧＡＤＡ高滴度的ＬＡＤＡ患者常伴自身免疫甲状腺疾病。推荐在
中国ＬＡＤＡ患者中常规筛查自身免疫甲状腺疾病
ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ—ｒｅｑｕｉｒｉｎｇ ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉａｂｅｔｅｓ， ｄｉａｂｅｔｅｓ
ＮＩＲＡＤ）；成人自身免疫糖尿病（ａｕｔｏｉｍｍｎｕｅ ＬＡＤＡ，在此我们仍沿用此名。 二、流行病学
ａｄｕｌｔｈｏｏｄ，ＡＤＡ）等。上述命名中最为常用的是
根据芬兰旧删、英国！¨１、意大利‘ｔ２］、美国Ｉｔ３）、日
本ⅢＪ、中国Ⅲ。１６】和韩国ｍ。１８ ３等国家研究者报道，
ＬＡＤＡ占糖尿病患者的２％～１２％。我国在２５个城 市共４６个中心联合进行了ＬＡＤＡ Ｃｈｉｎａ多中心协作 研究¨引，调查了５１２８例１５岁以上中国初诊２型糖 尿病患者，发现其中ＬＡＤＡ患病率为６．２％；若以 １８岁为成人年龄截点则ＬＡＤＡ患病率为６．１％，以 ３０岁为截点则为５．９％¨９Ｉ。在不同性别及民族亚 组中，ＬＡＤＡ患病率无显著性差异。若以秦岭一淮河 为界，则北方地区ＬＡＤＡ患病率高于南方，并呈由东 北向西南递减的趋势，这与ＷＨＯ开展的Ｄｉａｍｏｎｄ 项目调查发现的中国儿童１型糖尿病发病率的地理
ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｏｆ
无关，而ＨＬＡ．ＤＱ易感基因型与＜５５岁组ＬＡＤＡ胰 岛自身抗体相关２３；。新近研究表明，３５岁以后 ＬＡＤＡ的ＨＬＡ易感基因型与１型糖尿病存在差 异。２４：。在中国人群中，ＨＬＡ．ＤＱ易感基因型在糖尿 病疾病谱中亦呈现由经典１型糖尿病、ＬＡＤＡ至 ２型糖尿病的递减趋势一㈠，其中最为常见的易感基 因单体型为ＤＱＡｌ水０３一ＤＱＢｌ半０３０３及ＤＱＡｌ；ｌ：０３一 ＤＱＢｌ术０４０ｌ。２ ５Ｉ，这与高加索人群不同。抗体阳性 的数目联合ＨＬＡ高危基因型对于ＬＡＤＡ胰岛功能 的预测优于抗体滴度。２ ６Ｉ。２型糖尿病易感基因 ＴＣＦ７Ｌ２在ＬＡＤＡ中亦有研究口。蹦ｏ。另有研究显示 ＴＣＦ７Ｌ２基因型可以帮助区分年龄较小的自身免疫 糖尿病（１５～３４岁）［２９ ｏ；且其在ＬＡＤＡ患者中与空 腹Ｃ肽水平相关，可能与该基因可调控胰岛素分泌 有关∞…。中国人群ＬＡＤＡ的易感基因仍有待开展 大样本研究。 四、免疫反应 ＬＡＤＡ的病理研究资料有限。目前仅有日本曾 对ＬＡＤＡ患者胰腺活检发现Ｔ细胞浸润残留胰岛团 块。３１Ｉ，证实ＬＡＤＡ存在Ｔ细胞介导的免疫反应。 ＬＡＤＡ的体液免疫反应主要表现为循环血液中 存在胰岛自身抗体，包括谷氨酸脱羧酶抗体 （ＧＡＤＡ）、蛋白酪氨酸磷酸酶２抗体（ＩＡ一２Ａ）、胰岛 素自身抗体（ＩＡＡ）及锌转运体８抗体（ＺｎＴ８Ａ）等， 其中ＧＡＤＡ阳性率最高ｐ ２｛。胰岛自身抗体受 ＬＡＤＡ诊断标准、筛查人群、抗体检测方法及阳性阈 值不同等因素的影响。在不同种族中，这些抗体的 阳性率亦有所不同，如ＩＡ一２Ａ、ＺｎＴａＡ在中国人群中 的阳性率低于高加索人群［３ｓ－３ｓ。。ＵＫＰＤＳ研究显示 在不需要胰岛素治疗的糖尿病患者中约１０％ ＧＡＤＡ阳性，６％患者ＩＣＡ阳性。２５～３４岁的患者 ＧＡＤＡ阳性率高达３４％，ＩＣＡ达２１％。”。中国人群 大样本研究结果显示，在３０岁以上、起病半年不依 赖胰岛素治疗的糖尿病患者中ＧＡＤＡ阳性率为 ５．９％，而中国人初诊临床２型糖尿病患者中，ＩＡＡ 阳性率为３．３９％¨”。 ＬＡＤＡ患者外周血单核细胞（ＰＢＭＣ）可抑制大 鼠胰岛细胞分泌胰岛素，提示其体内存在细胞介导 的自身免疫反应；但其对胰岛自身抗原的免疫反应 较经典ｌ型糖尿病患者弱，而且ＬＡＤＡ患者的 ＰＢＭＣ对多种胰岛蛋白的反应较１型糖尿病异质性 更大”７。３８１。ＬＡＤＡ患者ＰＢＭＣ细胞增殖反应与胰岛 功能相关，如能常规检测患者ＰＢＭＣ增殖反应，或许 可作为ＬＡＤＡ早期诊断指标。。３９ｊ。ＬＡＤＡ患者中调
胰岛素自身免疫综合征的诊断标准-概述说明以及解释
胰岛素自身免疫综合征的诊断标准-概述说明以及解释1.引言1.1 概述胰岛素自身免疫综合征是一种自身免疫性疾病，主要特征是机体对自身产生的胰岛素产生免疫反应，导致胰岛素的分泌受到抑制或破坏。
这种免疫反应主要通过自身产生的抗胰岛素抗体介导，进而引发胰岛素分泌不足或胰岛素抵抗，从而导致血糖水平失控，引发糖尿病等相关疾病。
胰岛素自身免疫综合征的诊断标准是为了准确识别患者是否患有此病，并且能够及早采取相应的治疗措施。
这些标准主要包括临床表现、实验室检查以及特定的生物标志物等方面的指标。
通过综合评价这些指标可以确定病情的严重程度以及判断胰岛素自身免疫综合征的诊断。
然而，胰岛素自身免疫综合征的诊断并非一件简单的工作，因为其临床表现和病因复杂多样，同时存在与其他疾病的重叠，容易产生误诊。
因此，诊断标准的制定旨在提高诊断的准确性和一致性，以避免漏诊和误诊的问题。
本文将对胰岛素自身免疫综合征的诊断标准进行详细讨论，并探讨其应用与限制。
此外，还将展望未来在此领域的研究与发展方向，旨在进一步提高对胰岛素自身免疫综合征的理解和诊断水平，为其治疗提供更有效的方案。
1.2 文章结构部分内容可以按照以下方式编写：在本文中，将按照以下结构来探讨胰岛素自身免疫综合征的诊断标准：第二部分是正文部分，主要包括胰岛素自身免疫综合征的定义、病因和临床表现三个方面的内容。
在定义部分，将介绍胰岛素自身免疫综合征的概念和基本特征。
在病因部分，将探讨导致胰岛素自身免疫综合征发生的各种原因和机制。
在临床表现部分，将详细描述由于胰岛素自身免疫综合征引起的不同症状和体征，以及可能的并发症。
第三部分是结论部分，主要总结胰岛素自身免疫综合征的诊断标准。
在总结部分，将对已有的诊断标准进行梳理，阐述其主要内容和应用范围。
此外，还将讨论诊断标准的一些限制和问题，并探讨未来发展方向，以期更准确、科学地诊断胰岛素自身免疫综合征。
通过以上结构的安排，本文将全面、系统地介绍胰岛素自身免疫综合征的诊断标准，为相关领域的研究和临床工作提供参考和指导。
胰岛自身抗体检测及其临床应用
可， 同时 自身抗体 阴性 患者 的胰 岛功 能可持 续存在 ， 因此对
这类患者不需要 长期使用胰岛素治疗。 ２ ２ ２ 青少年起病的 ＭＯ Ｙ ．． Ｄ ＭＯ Ｙ是 一种 单基 因遗传 突 Ｄ
变糖 尿 病 ， 目前 已定 位 的 ＭＯ Ｙ 突 变 基 因 包 括 Ｈ Ｆ—ｌ Ｄ Ｎ ｄ、
时， ２种及 ２种 以上 自身抗体 阳性 患者约为 ７ ％ 。联 合检测 ２
ｚ １ Ａ 时 ２种 及 ２种 以上 抗 体 阳性 者 为 ８ ％ 【 。 因此 ， 合 ｎ、 ８ ２ ７ ／ 联
检 测 ｚ Ｔ Ａ和传统的胰 岛 自身抗体会 显著 增加 Ｔ Ｄ 的检 ｎ８ １Ｍ
出率。
ＷＡ Ａ Ｉ …研 究发现 ，Ｃ ５ ２的 阳性 率 与 Ｔ Ｄ 的 病程 ＳＫ等 ＩＡ １ １Ｍ
１２ 新近发 现的锌转运体 ８自身抗 体（ ｎ ８ Ｚ Ｔ Ａ是 ． Ｚ Ｔ Ａ） ｎ ８ ２０ ０７年 新 发 现 的 Ｔ Ｄ 胰 岛 自身抗 体 之 一。 ｃ Ｉ Ｅ Ｔ １Ｍ Ｈ ＭＩＮ Ｉ 等 研究证 实 Ｚ Ｔ ｎ ８特 异性 表 达在胰 腺 Ｂ细胞胰 岛素 分 泌
囊泡膜上 ， 富集 ｚ 于囊泡中 ， ｎ 是胰 岛素六聚 体形成 的关键 因素 ， 它的基 因主 要在 胰 腺 的胰 岛细胞 中表 达 ， ｎ８是 由 ＺＴ
１８ ９３年 Ｐ ｌｅ 等在未接 受胰 岛素 治疗的 Ｔ Ｄ 患者血 ａ ｒ ｍ １Ｍ 清 里发现 Ｉ Ａ。Ｉ Ａ针 对的胰 岛 自身抗 原— —胰 岛素 是 ｐ Ａ Ａ
细胞特异性 自身抗 原。研 究显示 ， 发病 年龄愈 小，Ａ Ｉ Ａ的 阳 性率愈 高， 小于 ５岁的 患者 ，Ａ 阳性 率 为 ９ ％ ； ＩＡ ０ 而成人 患
糖尿病的研究现状及进展
糖尿病的研究现状及进展摘要：随着国民经济的迅速发展，生态环境的变化，人们生活节奏日趋加快，糖尿病已日益成为威胁人类健康的公共卫生问题，越来越高的糖尿病发病率及其导致的并发症，严重地影响着患者的身体健康和生活质量。
目前糖尿病已成为继恶性肿瘤和心脑血管疾病之后，危害人们健康的第三大非传染性疾病。
在此紧迫形势下，人类和疾病的斗争并未停顿，糖尿病的研究不断取得进展，不断有新的防治策略和方法应用于临床，人类最终根治糖尿病并非遥不可及。
关键词：糖尿病，胰岛素，药物治疗，细胞糖尿病(diabetes mellitus)是一种常见、多发的内分泌代谢性疾病，系由多种不同的病因造成胰岛素分泌绝对或相对不足以及靶细胞对胰岛素敏感性降低，导致糖、蛋白质、脂肪代谢紊乱，发生持续性高血糖。
病后倘若得不到有效控制，随病程延长可出现广泛微血管、大血管病变引起系统性损害累及眼、肾、神经、心血管等组织，最终出现这些脏器功能缺陷和衰竭。
病情严重或应激状态时可发生酮症酸中毒、非酮症高渗性昏迷等急性代谢紊乱。
糖尿病分1型糖尿病和2型糖尿病。
1型糖尿病是因为胰岛β细胞破坏导致胰岛素绝对缺乏，由自身免疫损伤引起，多数年龄较轻。
2型糖尿病是由于胰岛素阻抗作用和分泌缺乏所引起，还有特异型糖尿病和妊娠糖尿病。
1.糖尿病的发病机制1.1 1型糖尿病1型糖尿病是一种特异性针对胰岛B细胞的自身免疫性疾病，对其亚型成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)的研究进展很快，LADA与经典的1型糖尿病的自身免疫发病机制相同，不同之处在于其胰岛细胞所受免疫损害呈缓慢性。
LADA 主要具有成年起病、病程进展缓慢且有胰岛自身免疫破坏的证据(如一种或多种胰岛自身抗体阳性)3个特征。
文献报道多倾向把有谷氨酸脱羧酶抗体(GAD—Ab)或血胰岛细胞抗体(ICA) 等胰岛自身抗体阳性的成人起病的 2型糖尿病称为LADA。
LADA患者临床异质性明显，根据 GAD—Ab的滴度不同，LADA又可以分成不同的亚型，有研究发现以GAD—Ab滴度 O．5或 O．1分界均体现明显不同的临床特点，表明LADA甚至糖尿病是一个连续的疾病谱，在 1型和 2型糖尿病之间可有 1．2型、1．5型、1．7型及 1．8型等过渡类型，LADA总体上可称为 1．5型。
成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)诊疗共识
关于成人隐匿性自身免疫糖尿 病（LADA）诊疗的共识
前沿
随着经济的发展和人民生活改善，糖尿病 患病率在我国迅速增加 。1999年，WHO 根据病因发病学将糖尿病主要分为1型和2 型两大类型。成人隐匿性自身免疫糖尿病 (latent autoimmunediabetes in adults, LADA) 由Tuomi等提出，被归属于免疫介 导性1型糖尿病的亚型 。LADA的早期临床 表现貌似2型糖尿病, 而以胰岛β细胞遭受缓 慢的自身免疫损害为特征, 胰岛功能衰退速 度三倍于2型糖尿病。
四、免疫反应
根据体液免疫及细胞免疫两方面的研究， Palmer等 从免疫学角度提出B-LADA（即 为B淋巴细胞分泌的自身抗体阳性的LADA） 和T-LADA（即具有抗原特异性反应T淋巴 细胞的LADA）。这有待深入研究。
五、与其他自身免疫病的关系
LADA作为一种自身免疫性疾病, 较易伴与经典1型糖尿病 关联的其他自身免疫病,包括自身免疫甲状腺病、乳糜泻 (celiac disease) 及Addison病 等。在中国人LADA中，伴 甲状腺自身抗体阳性[甲状腺过氧化物酶抗体( TPO2Ab) 16.7% , 甲状腺球蛋白抗体(TgAb)6.7% ,任一抗体阳性占 18. 9% ]和亚临床甲状腺功能异常(亚临床甲减或甲状腺功 能亢进, 27.4% )最常见 。成人起病的1型糖尿病及LADA 是自身免疫甲状腺疾病的高危因素 。上述组合提示LADA 可作为自身免疫多内分泌腺病综合征(APS)的一个重要组 成成分，且常以APS Ⅲ型存在；这可能与其携带HLADR3-DQ2 或HLA-DR4-DQ8 等高危易感基因型有关 。我 们推荐在中国人LADA患者中常规筛查自身免疫甲状腺疾 病。
糖尿病治疗的新进展
糖尿病治疗的新进展糖尿病是一种常见的慢性代谢疾病，主要表现为血糖水平异常升高。
根据世界卫生组织的统计，全球糖尿病患者人数逐年上升，预计到2030年，糖尿病患者将超过4亿人。
随着人们生活方式的改变以及饮食习惯的变迁，糖尿病已经成为全球公共卫生的重要挑战。
本文将探讨近年来糖尿病治疗的最新进展，包括新的药物、疗法以及针对个体化治疗的研究。
一、新型药物的开发1.1 胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂GLP-1受体激动剂是近年来备受关注的一类抗糖尿病药物。
该类药物通过刺激胰岛素分泌并抑制胰高血糖素释放，从而降低血糖水平。
此外，GLP-1受体激动剂还具有促进饱腹感、减轻体重等作用，对2型糖尿病患者尤其有效。
新近上市的药物如利拉鲁肽（liraglutide）和杜拉糖肽（dulaglutide），在降低血糖及其相关并发症方面表现出良好的临床效果。
1.2 钠-葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）抑制剂SGLT2抑制剂是一种通过抑制肾小管对葡萄糖再吸收来降糖的药物。
这类药物不仅能有效控制血糖，还能改善心衰竭等心血管影响。
近年来，一些新型SGLT2抑制剂进入临床，如达格列净（dapagliflozin）和恩格列净（empagliflozin），这些药物在不同程度上显示了心保护及肾保护作用。
对于糖尿病伴随心血管疾病或慢性肾脏疾病患者，SGLT2抑制剂被认为是优选的治疗方案。
1.3 新型胰岛素制剂胰岛素的使用一直是糖尿病治疗的重要组成部分。
随着技术的发展，新型快速作用胰岛素制剂及长效胰岛素制剂相继问世，这些制剂能够在一定程度上模拟生理胰岛素的分泌模式，提高餐后血糖控制。
同时，通过减少注射次数或改善注射舒适度，这些新型胰岛素制剂提高了患者依从性。
二、个体化医学的发展随着精准医学的发展，个体化治疗成为糖尿病管理的重要方向。
个体化治疗旨在根据患者的具体情况，包括基因组信息、生活方式、共病情况等，为每位患者制定独特的治疗方案。
《自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议》解读
1964
2010 RA新诊断标准( ACR/EULAR)
RA相关的自自身身抗体
名 称
类⻛风湿因子子 RA33/36抗体 Sa抗体 抗角角蛋白白抗体 抗核周因子子 抗CCP抗体 抗CB10抗体 抗BiP抗体
敏感性(%)
50--70
特异性(%)
86 93.6 78-97 87-92 70-90 96 70-88 92
特发性血血小小板减少性紫癜 干燥综合征 特发性粒细胞减少症 绝经过早（少数病例） 类⻛风湿关节炎 硬皮皮病
男性不育（少数病例） 多发性肌炎/皮皮肌炎 交感性眼炎 晶状体源性葡萄膜炎 抗磷脂综合征 混合性结缔组织病 系统性血血管炎
寻常型天疱疮
自自身身免疫性肾小小球肾炎 肺肾出血血综合征
已明确40多种，高度相关20多；可能相关100多种
《自身抗体临床应用专家共识》
n
中华风湿病学杂志,2014,18(7):437-443
n n n n n n
1.怀疑自身免疫疾病检测自身抗体 2.公认方法、定量/半定量/滴度 3.检验与临床结合 4.诊断标准中的项目应开展 5.ANA、dsDNA抗体规定 6.不同疾病推荐:RA、SLE等
n
n n n
6、ANA–IIFA依赖于试剂、设备和其他因素，因而筛查 稀释度可因地而异。 一个ANA的异常结果应是在正常 对照人群第95百分位以上的滴度。通常而言， 以 Hep-2细胞为底物检测ANA评价成人人群SARD时，所 用的稀释度为1:160； 7、 ANA阳性时，推荐同时报告荧光图型和最高稀释度； 8 、ANA–IIFA荧光图型的报告应采用标准化术语； 9、可能时，除了细胞核荧光图型外，其他的细胞浆和 有丝分裂荧光图型也应一并报告；
胰岛自身抗体临床意义
*
预测β细胞功能衰竭
多种抗体阳性患者血清C肽水平下降更快，更早出现β细胞功能衰竭。
01
胰岛β细胞功能减退与抗体滴度有关，高水平的阳性抗体常常提示将来出现完全的β细胞功能衰竭，低水平者可仅出现缓慢进展的β细胞功能不全。
02
血清抗体在预测β细胞功能衰竭时， ICA的阳性预测值要高于GADA。
03
而ICA阳性患者随病程进展可变成ICA阴性，这种阴性亦提示已经出现β细胞功能的衰竭。
谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)
抗胰岛素抗体(A-IA)
Hale Waihona Puke *胰岛细胞抗体( ICA)临床意义
*
胰岛素自身抗体(IAA)临床意义
IAA来源有两种： ①出现于糖尿病发生之前，为抗胰岛素自身抗体 。 ②出现于糖尿病发病之后，为使用外源性胰岛素造成。 其阳性意义： IAA不是糖尿病特异性抗体，在胰岛素自身免疫综合征和甲状腺疾病中也可出现。 T1DM一级亲属中，ICA阳性率为15%。 单纯的IAA阳性不能作为1型糖尿病的标志，仅表明有进展为糖尿病的自身免疫倾向。 新发T1DM，IAA阳性率为40%~50%。经胰岛素治疗后，其阳性率更高。 正常人群中IAA阳性率约为33%。 IAA在胰岛自身抗体检测中，敏感性最低。
GADA比ICA敏感
抗体阳性孕妇的婴儿发生糖尿病的危险性为2%～3%。
*
预测治疗的疗效(胰岛移植)
部分患者移植后血清GADA水平可升高，原来阴性者可出现阳性，这提示胰岛移植引起了自身抗原再次暴露给免疫系统，诱发自身免疫反应，这部分患者移植成功、不依赖胰岛素的比例较低
移植前后自身抗体均为阴性的糖尿病患者，移植成功、不依赖胰岛素的比例较高。
*
胰岛细胞自身抗体 临床意义
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
3838/55
预测β细胞功效衰竭
血清抗体在预测β细胞功效衰竭时， ICA阳 性预测值要高于GADA和IA-2A。
在诊疗糖尿病后，大多数患者GADA可连续 阳性
而ICA阳性患者随病程进展可变成ICA阴性， 这种阴性亦提醒已经出现β细胞功效衰竭。
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
1313/55
谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)
GADA可作为成人迟发本身免疫性糖尿病 (LADA)预测和早期诊疗指标，这类患者常 可出现GADA高水平，并稳定维持
与ICA和IAA相比，GADA与LADA关系更 亲密，能够将LADA与2型糖尿病区分开来， 为正确分型提供确切指标，从而更加好地 指导治疗。ຫໍສະໝຸດ 胰岛自身抗体的评价及其临床意义
77/55
胰岛细胞抗体(ICA)
在新诊疗中1型糖尿病中阳性率 为65%～85%，伴随病程延长， 阳性率逐步降低，诊疗后2～5 年阳性率降至20%。
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
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胰岛素本身抗体(IAA)
抗胰岛素抗体有两种
抗胰岛素本身抗体，属本身免疫抗体 使用了外源性胰岛素产生抗体。
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
2424/55
胰岛本身抗体检测临床意义
指导糖尿病临床分型 预测β细胞功效衰竭 在高危人群中筛查1型糖尿病 预测治疗疗效
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
2525/55
指导糖尿病临床分型
1型糖尿病临床表现存在显著差异 经典1型糖尿病常以酮症酸中毒方式急性
起病，以青少年为多数 LADA则如同2型糖尿病患者一样迟缓发
3434/55
胰岛自身抗体的评价及其临床意义
浅谈糖尿病胰岛自身抗体的检测及临床意义
糖 尿病是 由多种原 因引起 的以慢性高血 糖为特 征的代谢 紊乱性疾 病 ，临床 上 以高血 糖为 主要 特点 ，典 型 病例 可 出现多 尿 、多饮 、 多 食 及 消瘦 等表 现 ，即 “ 三多 一少 ”症 状 。临 床上对 于 糖尿 病 的诊 断 和分 型是 根据病 因和发病 机制分 为 １ 型糖 尿病 （ Ｔ １ Ｄ Ｍ） 、２ 型 糖尿病 （ Ｔ ２ Ｄ Ｍ）和 其他类 型。 １ 型糖 尿病 （ Ｔ １ Ｄ Ｍ ）是遗 传易感性个 体通过 自身 抗原介 导的免 疫反 应引起胰 岛Ｂ 细胞破 坏的 自身免疫 性疾病 ，患 者体 内存在 多种胰 岛 自身 抗体 ，这 些抗体 的检测 是将其 与一般Ｔ ２ Ｄ Ｍ
断 ，早期 手术的治疗措 施 对 于时间较 长的阑尾穿 孔患者 ，因在阑尾
周 围形成脓 肿级包块 ，传统 的治疗 观念是 采取对症治 疗后 ，择 期进行 手术治疗 。本组 的３ ０ 例 患者 ，来院就诊 时 ，临床症状 较重 ，经 临床会
诊 ，人院后立 即采取手术治疗 ，均获得 了 良好的治疗效果 。 ３ ． ２ 对 于阑尾穿 孔后伴有 弥漫性腹 膜炎的患 者 ，如患者 的生命 体征平 稳 ，应该彻 底清洗腹腔 。如果 患者 的生命 体征较差 ，应洗净脓 液 ，采
要的对症治疗 Ｊ 。
大小 合适 的荷 包包埋可有 效地减轻 荷包 内异 物反应 ，减少荷包脓 肿形 成 。阑尾根部坏 死 、穿孔 作阑尾全切 除术． ，盲肠 壁上作Ｌ ｅ ｍ ｂ ｅ ｒ ｔ ｓ ｌ ｈ ｑ 断 内缝合 ，能够 防止 阑尾 残端炎及盲肠瘘 的发生 ］ 。 本组 ３ Ｏ 例 患者均 行手术 治疗 ，治 愈２ ８ 例 ，好 转２ 例 ，无死 亡患者 发生 ，切 口甲级 愈合２ ６ 例 ，乙级愈合 ４ 例 。对于 阑尾穿 孔伴 阑尾周 围
血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体检测的临床意义
血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体检测的临床意义2篇血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体是两种常见的临床检测指标，对于胰岛功能异常的判断和糖尿病的诊断起着重要的作用。
本文将分别对血清胰岛细胞抗体和胰岛素自身抗体的检测临床意义进行介绍。
一、血清胰岛细胞抗体的检测临床意义血清胰岛细胞抗体（islet cell antibody，ICA）是指人体内产生的一种针对胰岛细胞的自身抗体。
血清ICA的检测主要通过间接免疫荧光法（indirect immunofluorescence assay，IFA）进行，可以帮助医生判断患者是否存在胰岛功能异常或自身免疫性糖尿病。
1. 早期糖尿病诊断血清ICA阳性对于早期糖尿病的诊断具有一定的价值。
糖尿病的早期症状不明显，但血清ICA阳性可能提示患者存在自身免疫性糖尿病的风险。
通过早期检测血清ICA阳性，可以及早发现糖尿病可能的发展趋势，有助于及时采取干预措施，延缓疾病进展。
2. 自身免疫糖尿病的筛查与诊断血清ICA是自身免疫性糖尿病（Type 1 diabetes，T1D）的重要标志物。
T1D是一种由自身免疫反应引起的胰岛细胞破坏和胰岛素分泌不足的疾病。
血清ICA阳性可以暗示患者体内免疫系统针对胰岛抗原产生异常反应，进而导致胰岛细胞受损和胰岛功能受限。
血清ICA的检测结果可以作为筛查和诊断T1D的辅助依据，有助于早期干预和治疗。
3. 鉴别胰岛功能异常的类型血清ICA的检测还可以帮助医生鉴别胰岛功能异常的类型。
血清ICA 阳性与胰岛素依赖性糖尿病（insulin-dependent diabetes，IDD）有较强关联。
如果患者血清ICA阳性，且胰岛素水平明显下降，可以进一步判断为IDD。
对于这类患者，需要密切监测胰岛功能，并在胰岛素治疗方面给予特殊的关注。
二、胰岛素自身抗体的检测临床意义胰岛素自身抗体（insulin autoantibody，IAA）指的是人体内产生的一种针对胰岛素的自身抗体。
临床医学中国1型糖尿病诊治指南
二、T1DM患病的影响因素
饮食 目前流行病学调查结果尚无定论
支持或反对婴儿早期牛乳喂养是 T1DM发生的危险因素。来自中 国一项研究显示T1DM的发病率 与不同时间给予婴儿固体辅食或 配方牛奶等有关。
二、T1DM患病的影响因素
年龄性别
T1DM多于儿童或青少年时期起病。6月龄以 内婴儿很少发病，而发病一般从9月龄开始 并持续升高。国外资料报道12-14岁患病达 高峰，然后呈下降趋势。我国11个地区的资 料显示10-14岁年龄段的发病率最高；进一 步分析发现发病率随年龄增长而持续增加， 至10岁时达最高峰(0.99/10万/年)，随后略 有下降。随着胰岛自身抗体检测技术的推广， 部分既往临床诊断为2型糖尿病患者被重新 诊断为LADA，这提示很大一部分大于18岁 的成人糖尿病患者应被诊断为T1DM。值得 注意的是，部分欧洲国家T1DM的发病
T1DM的病因分型诊断
血糖控制目标 降低高血糖和防止低血糖是T1DM血糖控制
的两大目标，因此目前公认的血糖控制标准 为：在最少发生低血糖风险的情况下应使患 者的血糖尽可能接近正常水平。对于个体患 者而言，血糖控制目标的制定应考虑到以下 方面：患者的年龄、患者本人或其家庭管理 和认识糖尿病的能力、血糖监测频率及就诊 的方便性与积极性。建议我国T1DM血糖控 制目标是：在尽量避免低血糖基础上，儿童 和青春期HbA1c<7.5%；HbA1c<7.0%；老 年人HbA1c<7.5%；不同年龄阶段的T1DM 患者的血糖控制目标不同
流行病学
T1DM约占糖尿病患者的5%，多于儿童或青 少年时期起病。在儿童及青少年患者中， T1DM所占比例约为80-90%。按照世界卫生 组织（World Health Organization，WHO） 1999年对于糖尿病的定义与分类，T1DM可分 为自身免疫性及特发性T1DM。前者的胰岛自 身抗体多为阳性，提示病因可能是自身免疫反 应破坏胰岛β细胞所致，多以酮症或酮症酸中 毒起病。
胰岛自身抗体和生化指标在糖尿病分型诊断中的应用价值
胰岛自身抗体和生化指标在糖尿病分型诊断中的应用价值目的分析探讨针对糖尿病患者检测抗胰岛素抗体、抗胰岛细胞抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体的临床应用价值。
方法选取我院2013年8月～2016年8月收治的临床DM患者230例作为研究对象，检测患者的抗胰岛素抗体、抗胰岛细胞抗体、抗谷氨酸脱羧酶抗体。
根据抗体阴性/阳性分为T1DM组和T2DM组，分别比较两组的空腹葡萄糖、空腹胰岛素及空腹C肽浓度。
结果T1DM组患者的IAA-Ab、ICA-Ab以及GAD-Ab阳性率明显高于T2DM组，差异有统计学意义（P＜0.05）。
IAA-Ab、ICA-Ab以及GAD-Ab阳性组和阴性组的空腹胰岛素浓度比较，差异有统计学意义（P＜0.05），空腹葡萄糖和空腹C-肽比较，差异无统计学意义（P>0.05）。
结论糖尿病患者检测自身抗体，对糖尿病的早期诊断、分型和治疗有很大的指导意义。
[Abstract]Objective To analyze and discuss the clinical application value of detection islet cell antibodies，anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies in the diagnosis of diabetes mellitus.Methods 230 cases of clinical diabetes mellitus patients admitted to our hospital from August 2013 to August 2016 were selected as the study subjects.The indexes of islet cell antibodies，anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies were detected.The T1DM group and T2DM group were divided according to antibody negative/positive classification，the FBG，INS and CP concentrations of two groups were observed.Results The positive rate of islet cell antibodies，anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies of patients in T1DM group was significantly higher than that in T2DM group，and the differences were statistically significant （P ＜0.05）.The INS concentrations of islet cell antibodies，anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies of positive group and negative group were compared，and the differences were statistically significant （P＜0.05）；the indexes of FBG and CP of islet cell antibodies，anti-insulin antibodies and glutamic acid decarboxylase antibodies of positive group and negative group were compared，and the difference was not statistically significant （P>0.05）.Conclusion For diabetes mellitus patients，the detection of insulin autoantibodies have great guiding significance in the early diagnosis，typing and treatment.[Key words]Islet cell antibodies；Anti-insulin antibodies；Glutamic acid decarboxylase antibodies；Diabetes mellitus糖尿病（diabetes mellitus，DM）是臨床常见的慢性疾病，随着我国居民饮食习惯和生活习惯的改变，糖尿病发生率逐渐升高，引起相关专家学者的关注和重视。
成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)诊疗共识
四、免疫反应
▪ LADA的病理研究资料有限。目前仅有日本曾对LADA患 者胰腺活检发现T细胞浸润残留胰岛团块，证实LADA存 在T细胞介导的免疫反应。LADA的体液免疫反应主要表 现为循环血液中存在胰岛自身抗体，包括谷氨酸脱羧酶抗 体（GADA）、蛋白酪氨酸磷酸酶2抗体（IA-2A）、胰岛 素自身抗体（IAA）及锌转运体8抗体（ZnT8A）等, 其中 GADA阳性率最高 。胰岛自身抗体受LADA诊断标准、筛 查人群、抗体检测方法及阳性阈值不同等因素的影响。在 不同种族中，这些抗体的阳性率亦有所不同，如IA-2A、 ZnT8A在中国人群中的阳性率低于高加索人群 。UKPDS 研究显示在不需要胰岛素治疗的糖尿病患者中约10% GADA阳性，6%患者ICA阳性。25～34岁的患者GADA阳 性率高达34%，ICA达21% 。通过对中国人群的大样本研 究，在30岁以上、起病半年不依赖胰岛素治疗的糖尿病 患者中GADA阳性率为5.9%。而在中国人初诊临床2型糖 尿病患者中，IAA阳性率为3.39% 。
前沿
▪ 早期诊断和干预LADA，对于保留残存的胰岛β细 胞功能、延缓慢性并发症的发生和发展具有实际 意义。鉴于LADA的诊断与治疗目前仍存在困难 和争议 ，中华医学会糖尿病学分会组织专家于 2011年9月在长沙、11月在北京就LADA如下8个 方面（命名、流行病学、遗传学特征、免疫反应、 与其他自身免疫病的关系、代谢特征及慢性并发 症、诊断标准、治疗策略）进行讨论、征求意见 并形成共识，以期提高认识和推动我国对LADA 的转化研究与临床实践水平。
中华医学会糖尿病学分会
关于成人隐匿性自身免疫糖尿 病（LADA）诊疗的共识
前沿
▪ 随着经济的发展和人民生活改善，糖尿病 患病率在我国迅速增加 。1999年，WHO 根据病因发病学将糖尿病主要分为1型和2 型两大类型。成人隐匿性自身免疫糖尿病 (latent autoimmunediabetes in adults, LADA) 由Tuomi等提出，被归属于免疫介 导性1型糖尿病的亚型 。LADA的早期临床 表现貌似2型糖尿病, 而以胰岛β细胞遭受缓 慢的自身免疫损害为特征, 胰岛功能衰退速 度三倍于2型糖尿病。
糖尿病抗体
一．胰岛自身抗体的特征
IA-2A
◆ IA-2在胰岛、脑垂体中均有表达，但在非神经内分泌组织中不表达。 IA-2是Ⅰ型跨膜糖蛋白，由一胞外结构域、单一跨膜结构域和一胞内结 构域组成, 其抗原决定簇位于胞内结构域中。
国外 我国
9.8%(欧美 UKPDS) 6.2%(LADA China)
2.2%(高加索) 2.2%
<1% 3.4%
5. 李霞,周智广,等.中华流行病学杂志,2005,26(10):800-803.
6. Turner R, et al. Lancet,1997,350:1288-1293.
7. 王建平,周智广,等. 中华内分泌代谢杂志,2004,20(6):494-498.
抗体阴性患者9%转 为阳性。
6年 GADA能维持较高 水平，而IA-2A指数 则轻微下降。
胰岛自身抗体滴度和阳性率随着病程的延长而下降，其可能原因： 胰岛β细胞的丧失导致自身免疫反应的减弱。
三．胰岛自身抗体随病程变化
随访 0年 1年 2年 3年 4年
1.7
A
1.5
B
C
4例IAA阳性
1.3 1.1
D
，35S掺入的放射量难 以控制。
16. Sacks DB, et al. Clin Chem, 2001,47(5):803-804.
一．胰岛自身抗体的特征
GADA
★ GAD是人和动物体内的正常酶蛋白，为抑制性神经递质γ氨基丁酸（GABA）的合成酶，1990年Baekkeskov等证明 了T1DM患者血清中存在GADA,且认为GAD是T1DM自身免 疫反应的关键抗原。
胰岛素自身免疫综合征诊断标准
胰岛素自身免疫综合征诊断标准胰岛素自身免疫综合征（Insulin Autoimmune Syndrome，IAS）是一种罕见的自身免疫性疾病，其特征是血液中自身抗胰岛素抗体水平升高、低血糖发作和胰岛素过量。
目前，尚未建立IAS的国际统一诊断标准。
然而，根据临床实践和研究，可以参考以下标准进行IAS的诊断。
1. 临床症状和体征：IAS患者常出现反复发作的低血糖症状，例如头晕、出汗、心慌等。
这些症状往往在饭后或睡觉时发作，并可以通过进食或停止胰岛素治疗得到缓解。
体格检查时，可能会触及到肝脾轻度肿大。
2. 血清胰岛素水平：IAS患者血清胰岛素水平通常明显升高，超过正常范围。
正常人胰岛素水平在5-20 μU/mL，而IAS患者可达到数百上千μU/mL。
3. 血清C肽水平：血清C肽是一种合成胰岛素时产生的副产物，可以可靠地反映胰岛素分泌功能。
IAS患者的血清C肽水平通常很低，与胰岛素水平不相符。
4. 胰岛素抗体水平：IAS患者血液中常出现高水平的自身抗胰岛素抗体（IAA），其浓度可超过正常范围。
抗体水平高是IAS诊断中最重要的指标之一。
5. 排除其他原因：在进行IAS诊断时，需要排除其他可能引起低血糖的原因，如外源补充胰岛素过量、胰岛素分泌异常等。
尽管以上标准可以作为IAS的参考诊断标准，但IAS的确诊仍需要进一步的检查和评估。
以下是常用于IAS诊断的辅助检查方法：1. 胰岛素抗体亚型：胰岛素抗体可以分为IgG、IgM和IgA亚型。
IAS患者往往以IgG亚型为主，因此检测胰岛素抗体亚型可以进一步支持IAS的诊断。
2. 胰岛素抗原特异性：在实验室中，可以通过测定患者血液中的胰岛素抗体与不同胰岛素抗原结合的能力来确定胰岛素抗体的特异性。
IAS患者的胰岛素抗体通常与胰岛素的B链结合，不与A链结合。
3. 胰岛素刺激试验：该试验通过给予胰岛素注射液来评估病人对胰岛素的刺激反应。
IAS患者在胰岛素刺激后血糖水平往往不升高或只有微弱的升高，与正常人明显的胰岛素刺激反应不同。
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胰岛自身抗体检测技术新进展1型糖尿病(TIDM)患者血清中存在多种自身抗体(即胰岛自身抗体)，如胰岛细胞抗体(ICA)、谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体2(IA-2A)、胰岛素自身抗体(IAA)、锌转运体8自身抗体(ZnT8A)等等。
检测这些自身抗体对于T1DM的发病预测、诊断和鉴别诊断、治疗监控和预后评估有着重要的临床意义。
由于ICA检测难以标准化，目前应用受到限制。
而GADA和IA-2A检测方法经历的多次改良和标准化，目前已能为临床诊断和治疗监控、以及发病预测提供有力的佐证。
先前的检测方法经历了免疫印迹法、免疫荧光法、免疫沉淀酶活性分析法等，终因操作繁琐耗时，灵敏度和特异性差而极少应用于临床。
目前国内外临床应用得较多的是酶联免疫吸附分析法(ELISA)和放射免疫分析法(R1A)，国际标准化的检测方法是放射配体法(RLA)。
1．酶联免疫吸附法分析法酶联免疫吸附法分析法(ELISA)检测GADA和IA-2A在国内外各级医院应用较广，目前检测法主要基于3种不同原理设计。
①包被抗原法(直接法)将GAD抗原加入到96孔酶免板的微孔内，室温放置过夜。
然后各孔加入封闭液，再次室温放置过夜。
洗涤，加入稀释过的血清，室温反应60min，洗涤，加入连接碱性磷酸酶的羊抗人免疫球蛋白抗体，室温反应60min，洗涤。
加入对硝基苯酚磷酸盐溶液，37℃作用30min，加入NaOH溶液终止反应。
在酶免仪上于405nm处检测吸光度，与标准品对照，即可知待测血清GADA水严。
因反应模式限制，该方法最终灵敏度和特异性不高。
②包被抗体法(间接法)将GADA(1A-2A)单克隆抗体包被于96孔微量滴定板内，洗涤，加入纯GAD(或IA-2)抗原，4℃避光固定过夜。
洗涤，加入预稀释的血清，室温作用90min，再加入连接碱性磷酸酶的抗人免疫球蛋白，室温作用60min。
洗涤，加入对硝基苯酚磷酸盐溶液，37℃作用15min，加入NaOH溶液终止反应。
在酶免仪上，于405nm处检测吸光度，与标准品对照，即可知待测血清GADA(或IA-2A)水平。
该方法与直接法相比，灵敏度和特异性有所提高。
③应用亲和素和生物素放大系统的ELISA法亲和素一生物素系统在ELISA中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。
可以在固相上先预包被亲和素，应用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素一生物素反应而使生物素化的抗体或抗原固相化。
这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。
另外，在常规ELISA中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素一酶结合物，以放大反应信号。
“前放大”模式是放大了抗原包被量或使抗原表位充分暴露。
其原理是：第一步GAD —生物素(IA-2-生物素)与抗生蛋白链菌素包被的微孔板结合，洗涤后，与样品中GADA(或IA-2A)结合。
清洗后，过氧化物酶(HRP)标记的抗人IgG 与GAD(或IA-2)抗体结合。
HRP复合物与ABTS底物反应并检测吸光度。
颜色的深浅反映了GADA(或IA-2A)水平。
该方法灵敏度和特异性好，与标准的放射配体检测法结果判定上总体一致性良好，特别对厂低抗体水平的正常人标本以及高抗体水平的T1DM标本符合率高。
“后放大”模式是放大了显色信号。
其原理是：将GAD(或IA-2)抗原包被在ELISA 板上，与血清中的GADA(或IA-2A)结合，洗涤，再加入结合生物素的GAD(或IA-2)与固定好的复合物结合。
这样GAD(或IA-2)—BIOTIN与GADA(或IA-2A)水平成正相关。
加入链酶素过氧化物酶结合，再加入底物TMB显色，读取450nm F的吸光度，与标准曲线对照，即可得到血清中的GADA(或IA-2A)水平。
该方法批内CV为2.4-4.2%，批间CV 3.8-25.6%，灵敏度和特异性好。
这两种放大模式原理不尽相同，但在操作程序上有很多相似之处：都采用了温育振荡方式(﹥200RPM)进行抗原抗体反应，这样能提高抗原抗体分子接触的机会，使检测灵敏度提高。
同时洗板是两种方法的关键步骤，如果清洗不充分会导致检测精密度下降和本底吸光度上升。
我们的研究显示不同原理设计的ELISA试剂盒检测灵敏度和特异性有显著差别。
2．放射免疫分析法放射免疫法检测GADA和IA-2A主要采用采用氯胺T标记法，用125I标记GAD(或IA-2)与血清在分析缓冲液中4℃作用过夜。
加入蛋白A—琼脂糖后于4℃放置1h，沉淀经洗涤3次后进行放射计数。
以阳性参考血清为标准，待测血清的活性定义为阳性血清的沉淀计数百分率。
Masuda等采用此方法检测了217例不同年龄与病程的IA-2A，发现阳性率为47%(103/217)，其中新发病的TIDM 阳性率57%(64/113)。
有2.5%(1/40)的Grave's 病患者用此方法检测山IA-2A 阳性，T2DM患者IA-2A阳性率2.5%(5/204)。
该方法与标准的放射配体检测法结果相关系数r为0.78。
我们的研究显示采用RSR放射免疫试剂盒检测GADA与放射配体法—致率达79.3%。
由于采用氯胺T标记法前，必须获得高纯度及高活性的胰岛自身抗原。
且在标记过程中，有可能导致胰岛自身抗原的损伤或空间构象的改变，从而降低方法的灵敏度，故该法较少应用标准化分析。
3．放射配体检测法主要检测方法是采用人GAD65(或IA-2)cDNA插入到原核表达质粒pcDNAⅡ SP6启动子下，构建重组质粒，并转化宿主菌E．coli．DH10B后，通过原位杂交筛选出含重组质粒的阳性菌落，碱法提取质粒进行酶切和测序鉴定。
将连接正确的重组质粒在转染的E．coli．DHl0B中繁殖扩增，并抽提纯化质粒。
GAD65(或IA-2)的质粒在无蛋氨酸的兔网织红细胞裂解液体系中，加入35S标记蛋氨酸(35S-Met)，经由体外转录/翻译直接得到35S标记GAD65(1A-2)抗原。
采用Sephadex柱凝胶层析或三氯醋酸(TCA)沉淀等方式去除游离的35S-Met。
35S标记GAD65(IA-2)与血清旋转孵育后，用蛋白A-琼脂糖沉淀抗原抗体复合物。
沉淀物经TBST缓冲液充分洗涤后，加入闪烁液置于液闪仪上计数，结果以抗体指数或国际标准单位形式报告。
目前该方法是国际上检测胰岛自身抗体的标准化方法，我们于1996年在国内首次建立了该方法。
2000年，Woo等报道了一种新的平板放射配体法检测胰岛自身抗体，其采用微孔平板对抗原抗体进行孵育，所需血清量小，适宜于大规模儿童人群的筛查；采用了Millipore分离技术取代了传统的试管法洗涤沉淀复合物，使洗涤更加充分完全，更易于自动化和大样本检测。
目前大多数欧美发达国家的权威实验室均同时建立了该检测法，我们于2004年在国内首次建立了该方法。
4．胰岛自身抗体检测的标准化为了使各实验室检测胰岛自身抗体的结果具有可比性，以降低室间检测结果的变异系数。
近几年，国际标准化重点已放在如何采用有效通用的标准物，以统一的国际标准化单位报告结果。
目前，由国际糖尿病免疫学会(IDS)与美国疾病预防控制中心(CDC)共同举办的糖尿病自身抗体标准化方案(DASP)机构，专门从事胰岛自身抗体检测标准化评估。
通过评估检测方法以及采用新的WHO 国际参考标准物，将结果报告换算成统一的国际单位形式，使各国(地区)实验室间抗体检测结果具有可比性。
其方法是50例新诊断为T1DM的患者血清、100例健康人血清以及WHO参考标准物和稀释血清，发往13个国家的53个实验室盲法检测，并在规定时间内回报结果。
目前，DASP已成为胰岛自身抗体检测的权威评估机构。
我们分别作为国内唯一一家医疗单位参加了2003年和2005年的两次DASP评估，在2003年计估中综合检测质量在全球53个权威实验室中位于第15位，2005年讦估进入第9位，标志着胰岛自身抗体检测水平步入国际先进行列。
5．胰岛自身抗体异质性研究胰岛自身抗体的检测是诊断T1DM的重要依据，而对自身抗体的异质性研究能进一步阐明自身免疫的发生与发展过程。
融合蛋白构建技术初步明确了抗体针对胰岛抗原的粗略区域，单克隆抗体封闭技术进一步辩明了抗体识别抗原某一肽段及表位扩展规律。
然而，自身抗原具有高度构象和线性不连续的表位，抗体实际识别和接触抗原的特定氨基酸难以确定。
利用特异性抗体筛选噬菌体随机肽展示文库结合位点指导下突变技术，有利于分析构象型的表位，最终有望能鉴别抗体互补结合抗原的关键氨基酸残基。
采用生物素化单克隆亚类特异性抗体，并籍助链霉亲合素琼脂糖沉淀剂是目前检测自身抗体亚类／同种型的主要手段。
单克隆抗体技术可用于区分IA-2A／IA-2βA。
采用蛋白变性剂洗脱或裂解法同样能适用于胰岛自身抗体亲合力的检测。
诸多研究显示，在T1DM前期的患者中，抗体识别自身抗原表位的变化呈动态扩展。
对于GADA，最初出现与GAD分子中段结合特性，并迅速扩展到C端，扩展到N端与发病高风险性相关联；对于1A-2A，直接针对JM区和C末端，多IA-2／IA-2β表位的反应性抗体存在与疾病进展相关联。
目前临床研究显示，自身抗体亲和力指数与抗体的滴度并无相关性，但与随后多种抗体阳性发生率明显相关，具有发病预测价值。
多种IgG亚类存在与高滴度的自身抗体水平相关，GADA业类／同种型分析未能区分GAD65-Ab阳性的T1DM一级亲属进展者与非进展者。
而IA-2A IgG亚类／同种型分析能显著改进T1DM风险性评估，且目前发现IgE-IA-2抗体是保护性的指标。
6．新的胰岛自身抗体-锌转运体8自身抗体(ZnT8A)①ZnT8蛋白ZnT8属于CDF(阳离子扩散易化)家族，含369个氨基酸。
为基因SLC30A8(染色体8q24．11)编码，所有的蛋白有着相同的染色体组织结构，即8个外显子和7个内含子。
与IGRP等其他糖尿病自身抗原一样，ZnT8是一种6次跨膜蛋白。
预测序列在第四和第五螺旋结构中包含丰富的组氨酸区域。
哺乳动物与人ZnT8蛋白非常相似(98%保守的氨基酸)，提示其进化过程的高度保守性。
②ZnT8表达部位研究证实，ZnT8mRNA主要表达在胰岛细胞上，激光共聚焦显微分析进一步显示，ZnT8仅定位于胰岛p细胞分泌囊膜上。
③ZnT8生理作用在胰岛素合成中，ZnT8能使锌掺入到胰岛素囊泡山，易化锌—胰岛素固相六聚体的形成。
分泌性的锌是胰岛α细胞和β细胞分泌的胰高血糖素以及胰岛素旁分泌和自分泌的调节剂。
研究发现，ZnT8表达增高能刺激锌的富集和增加胰岛素分泌Ins—1E细胞内锌浓度。
而且，ZnT8高表达的细胞显示高的葡萄糖刺激胰岛素分泌(与对照组比较)现象。
糖刺激诱导的ATP／ADP比率增高封闭了ATP依赖钾通道，因此激活浆膜的去极化。