海虹虾青素对D-半乳糖致衰老小鼠氧化应激的影响_朱旭辉_12144105029_食品质量与安全

本科生毕业设计（论文）
海虹虾青素对D-半乳糖致衰老小鼠氧化应激的影响
院（系）：公共卫生学院
专业：食品质量与安全
年级：2012级
姓名：朱旭辉
指导教师：
年月日
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论文作者：日期：年月日
指导教师：日期：年月日
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目录
摘要 (I)
Abstract (II)
1前言 (1)
1.1 虾青素简介 (1)
1.2 虾青素的结构和理化性质 (1)
1.2.1 虾青素的化学结构 (1)
1.2.2 虾青素的理化性质 (3)
1.3 虾青素的主要来源 (3)
1.4 虾青素的生理功能 (3)
1.4.1 抗氧化作用 (3)
1.4.2 预防心血管系统疾病 (4)
1.4.3 增强机体免疫力 (5)
1.4.4 抗癌作用 (5)
1.5 虾青素的安全性和应用 (6)
1.5.1 虾青素的安全性 (6)
1.5.2 虾青素的应用 (7)
1.6 本文研究的目的及内容 (7)
2、材料与方法 (7)
2.1 实验动物 (7)
2.2 仪器 (7)
2.3 受试物与试剂 (7)
2.4 实验方法 (8)
2.4.1 D-半乳糖致衰老动物模型 (8)
2.4.2 实验动物分组 (8)
2.4.3 受试物及剂量 (8)
2.4.4 指标测定 (8)
2.5 统计处理 (8)
3、结果与分析 (8)
3.1 海虹虾青素对小鼠血浆中MDA含量的影响 (8)
3.2 海虹虾青素对小鼠肝脏中MDA含量的影响 (9)
3.3 海虹虾青素对小鼠血浆中抗氧化酶活性的影响 (9)
3.4 海虹虾青素对小鼠肝脏中抗氧化酶活性的影响 (10)
4、讨论 (11)
5、结论 (12)
参考文献 (13)
海虹虾青素对D-半乳糖致衰老小鼠血浆、肝脏氧化应激
的影响
摘要
目的：研究海虹虾青素对D-半乳糖致衰老模型小鼠血浆、肝脏抗氧化酶活性及MDA的影响。

方法：随机抽取10小鼠为空白对照组，其余50只小鼠采用D-半乳糖诱导致衰老，根据MDA水平随机分为模型组、高剂量组（150mg/kg·BW）、中剂量组（100mg/kg·BW）、低剂量组（50mg/kg·BW）。

以海虹虾青素为受试样品，考察指标为血浆及肝匀浆中MDA含量及GSH-Px、CAT、SOD的活性，评价海虹虾青素对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化功效。

结果：用不同剂量虾青素溶液灌胃30d，中剂量组、高剂量组血浆MDA 含量均显著低于模型组（P<0.05），且与空白对照组之间无显著差异性（P>0.05）。

各剂量组血浆、肝脏中SOD酶活性均升高，且显著高于模型组具有显著差异性（P<0.05），中剂量组血浆SOD活性与空白对照组之间差异不显著（P>0.05），但各剂量组肝脏中SOD酶活性均显著低于空白对照组（P<0.05）。

各剂量组血浆及肝脏中GSH-Px酶活性随剂量增加而升高，且均显著高于模型组（P<0.05），高剂量组血浆中GSH-Px酶活性与空白对照差异不显著（P>0.05），中剂量组、高剂量组肝脏GSH-Px酶活性显著高于空白对照组（P<0.05）。

各剂量组血浆及肝脏中CAT活性均有所增高，且均显著高于模型组（P<0.05），高剂量组血浆中CAT活性显著高于空白对照组（P<0.05），但各剂量组肝脏CAT活性均显著低于正常对照组水平（P<0.05）。

结论：海虹虾青素具有抗氧化和延缓衰老作用。

关键词：虾青素；抗氧化；MDA；SOD；GSH-Px；CAT
The Effect of Mussel Astaxanthin on Oxidative Stress in Plasma and Liver of D-Galactose Induced Aging Mice
Abstract
Objective: The effects of mussel astaxanthin on antioxidant enzyme activity and MDA in plasma and liver of D-galactose induced aging mice were observed. Methods: 10 mice were randomly selected as the control group, the remaining 50 mice were induced aging mice by D-galactose, they were randomly divided into model group, high dose group (150mg/kg·BW), middle dose group(100mg/kg·BW), low dose group(50mg/kg·BW). Then mussel astaxanthin was taken as the tested sample, the effects of mussel astaxanthin on antioxidant enzyme activity and MDA in plasma and liver homogenate were observed to evaluate the antioxidant function. Results:With different doses of astaxanthin solution lavage 30 d, MDA content in plasma, liver, blood plasma of medium and high dose group were significantly lower than that of model group (P<0.05), and there is no significant difference among medium doses, high doses and control group(P>0.05). Each dose group of SOD enzyme activity were increased in plasma, liver, and significantly higher than that of model group with significant difference (P< 0.05), the dose between plasma SOD activity andcontrol group, no significant difference (P>0.05), but liver SOD enzyme activity in each dose group were significantly lower than the control group (P<0.05). Each dose group of gsh-px in plasma and liver enzyme activity increased with the increase of dose, and were significantly higher than that of model group (P <0.05), high dose group of gsh-px in plasma enzyme activity and the blank contrast difference was not significant (P>0.05), dose group, high dose group in liver GSH - Px enzyme activity was significantly higher than that of blank control group (P<0.05). CAT activity in plasma and liver every dose group were higher, and were significantly higher than that of model group (P<0.05), high dose group had a significantly higher plasma activities of CAT in blank control group (P<0.05), but each dose group of liver CAT activity levels
were significantly lower than normal control group (P<0.05). Conclusion: Mussel astaxanthin has antioxidant and anti-aging effect.
Keywords：Astaxanthin; Antioxidant; MDA; SOD; GSH-Px; CAT
1前言
1.1 虾青素简介
虾青素（Astaxanthin，又名虾红素、虾黄质或龙虾壳色素），属于萜烯类不饱和化合物。

是一种广泛存在于虾、蟹、真菌、藻类以及鸟类羽毛中的非维生素A源红色类胡萝卜素[1-2]。

虾青素最早于20世纪30年代被研究者从虾、蟹的壳中提取出来，并命名为虾青素，但是直至20世纪80年代，虾青素才因其强大的抗氧化性从众多的抗氧化剂中脱颖而出。

研究表明，虾青素的抗氧化性是其他类胡萝卜素的10倍以上，是维生素E的550倍，有超级维生素E的美誉[3-4]。

除此之外，虾青素还具有预防心血管疾病及动脉硬化、增强免疫力、抗癌、抗肿瘤、着色、抗炎症、延缓衰老及保护细胞等方面的作用，在水产养殖、食品、化妆品、制药、饲料以及轻工、化工等行业具有很大的应用前景[5]。

1.2 虾青素的结构和理化性质
虾青素（Astaxanthin ，ASTA），化学名称为3,3’—二羟基—4,4’—二酮基—β，β’—胡萝卜素，其分子式是C40H52O4，相对分子质量596.86。

化学结构是由四个异戊二烯单位以共轭双键形式连接，两端各有一个异戊二烯单位连接成一个六元环结构，结构如图1所示。

图1 虾青素的结构
Fig1. The structure of astaxanthin
1.2.1 虾青素的化学结构
1.2.1.1 立体异构体
在虾青素的化学结构中存在着两个不对称中心（也称手性中心），这两个不对称中心是两端六元环状结构中的C-3和C-3’。

由于一个不对称中心可以有R或S两种构象，也即C-3和C-3’有R或S这两种构象，那么就产生了3S 、3’S (左旋)，3R、3’S（内消旋），3R、3’R（右旋）（如图2）三种立体异构体[6]。

图2 虾青素立体异构体
Fig 2. The stereoisomer of astaxanthin
然而生产技术不同，得到的虾青素的立体异构体也是不一样的。

对于天然虾青素来说，用雨声红球藻生产的虾青素大多是左旋构象，而用红法夫酵母生产的虾青素则为右旋构象；通过化学合成方法获得的虾青素通常为三种立体异构体的混合物[7]。

1.2.1.2 几何异构体
由于与C-C双键结合的基团是不能围绕双键旋转或扭曲的，而其排列方式又可以是完全不相同的，当与双键连接的两个基团处于双键的同侧时称其为Z 结构（来源于德语zusammen；一起、共同），过去也称其为顺式（cis）结构，反之，两个基团在双键的异侧则称之为E结构（来源于德语entgenen；相反），过去称其为反式（tran）结构。

虾青素的分子结构中，在其线性部分含有9个C-C双键，而每一个双键又都能以Z式或者E式存在。

并且现有研究表明，在天然虾青素分子结构中的9位，13位以及15位具有Z结构，所以虾青素的可能的几何异构体为全-E，（9Z），（13Z），（15Z），（9Z、13Z），（9Z、15Z），（13Z、15Z），（9Z、13Z、15Z）八种，其中全E式结构最稳定，因为其分支基团不竞争空间位置[6-8]。

1.2.1.3 游离虾青素和虾青素酯
在虾青素两端环状结构中各有一个羟自由基，这个羟基可以与脂肪酸反应形成酯。

根据其酯化程度可以分为虾青素单酯（其中一个羟基与脂肪酸反应）和虾青素双酯（两个羟基都与脂肪酸反应）。

虾青素酯较虾青素的疏水性强，且随着酯化程度加深，其亲脂性增强。

由于游离虾青素的不稳定性，故其在细胞内很少存在[9]。

总之虾青素可以根据立体异构体、几何异构体、酯化与否以及酯化的程度
分为多种，并且这些结构形式都在自然界中存在。

1.2.2 虾青素的理化性质
虾青素是一种具有光泽的红色的针状结晶体，熔点215-216℃，不溶于水，易溶于丙酮、氯仿、二氯甲烷、四氢呋喃和苯等极性很小的有机溶剂。

在其分子中含有多个不饱和键，导致其很不稳定，在受到环境因素（光照、氧气、温度、酸等）影响时极易发生异构化和降解。

加入维生素C等抗氧化剂可以抑制其异构化和降解。

1.3 虾青素的主要来源
虾青素广泛存在于真菌、藻类、浮游生物以及一些水生物种（虾、蟹、鲑鱼等）的体内，目前虾青素的获取来源主要有生物来源和化学合成两种。

其中生物来源为：利用微生物、藻类和水产品加工废弃物来生产虾青素；人工合成虾青素较为困难且得到的多数是Z式结构（顺式结构），而FDA（美国食品与药物管理局）仅批准E式结构虾青素作为添加剂用于水产养殖的饲料中。

与天然虾青素相比，化学合成虾青素的生物效价以及着色力要低的多。

到目前为止，只有瑞士的Hoffmann-La Roche等几家公司成功合成E式结构的虾青素，并已经投放市场。

当前由于通过生物途径生产虾青素的获取率并不高，在水产养殖饲料行业化学合成的虾青素仍然具有一定的竞争优势[10-11]。

1.4 虾青素的生理功能
1.4.1 抗氧化作用
生物氧化作用无时无刻不发生在生物体内的每个细胞中，是维持生物体正常新陈代谢的非常重要的生理生化过程。

在这个过程中会产生氧自由基与过氧化物等活性氧，所谓的活性氧就是指含有未成对电子的原子或基团，但是过量活性氧的产生就会造成氧化损伤。

活性氧的性质非常活泼，可造成氨基酸氧化、DNA链断裂、蛋白质降解等细胞损害。

而且活性氧易于氧化细胞膜上的不饱和脂肪酸并通过进一步的链式反应产生大量的自由基，从而将生物体内氧自由基与抗氧化剂的平衡打破，引发心脏病、风湿性关节炎、癌症等一系列疾病[12]。

虾青素是一种链断裂型抗氧化剂，具有极强的抗氧化作用，可以清除氧自由基和过氧化物等活性氧[13]。

天然的虾青素是目前自然界中发现的最强的抗氧化剂，与现有的其他抗氧化剂相比，虾青素具有较高的抗氧化活性。

这是由于虾青素的分子结构很特殊，在其分子结构中有一段较长的共轭双键链（含11个共轭双键），有研究表明，分子中含9个或9个以上共轭双键的类胡萝卜素，都可以通过淬灭活性氧的方式来保护机体免受氧化损伤。

另外在这段共轭双键链的末端还含有一个羟基和一个酮基，而两者又构成了α-羟基酮。

无论是共轭双键链还是α-羟基酮都具比较活泼的电子效应，可以吸引自由基的电子或是给
自由基提供电子，使其更易于同自由基发生反应达到清除自由基的目的，从而发挥较好的抗氧化作用[14]。

杨艳等的动物实验结果表明，适量的虾青素可以较为明显的提升自然衰老小鼠体内SOD（超氧化物歧化酶）和GSH-Px（谷胱甘肽过氧化物酶）的活性，降低MDA（丙二醛）的产生[1]。

虾青素还有“超级抗氧化剂”的美誉，与其他抗氧化剂的对比试验结果显示，虾青素的抗氧化能力是茶多酚的200多倍，是维生素E的550倍，而且虾青素在清除活性氧等的效果方面，均优于其他抗氧化剂[15]。

研究表明，虾青素的抗氧化机制可能是由于虾青素可以穿过细胞膜，而使其可以进入细胞内部，进而对线粒体进行保护使其免受损伤。

线粒体是细胞主要的钙库，其功能是控制基因的表达和细胞凋亡。

当氧化剂含量升高时，虾青素会以稳定膜结构的方式来降低膜通透性，从而阻止氧化剂进入细胞内，以达到保护线粒体的目的[16]。

还有一种观点认为虾青素的抗氧化机制是由于其清除氧自由基、减少氧化损伤、淬灭单线态氧等的能力有关。

研究表明，虾青素淬灭单线态氧的能力与其分子结构中共轭双键的数量成正比，而其分子结构中的羟基可以抑制单线态氧的活性，酮基则被认为是激活羟基活性的关键因素[17-18]。

1.4.2 预防心血管系统疾病
近十年来，由于心血管系统疾病的发病率显著增高，人们在对心血管系统疾病有显著效果的类胡萝卜素方面的关注也越来越多。

当前认为动脉粥样硬化的发病原因是人体内低密度脂蛋白（LDL）的氧化，而且LDL的含量与心血管系统疾病的发病呈现正面相关性。

而较高含量的高密度脂蛋白（HDL）则可以预防动脉粥样硬化及冠心病，并且HDL的含量与冠心病的发病危险呈现负面相关性[19]。

低密度脂蛋白（LDL）通常为非氧化状态，当其被氧化后会将细胞转化为泡沫细胞，这些泡沫细胞的存在会造成周围平滑肌的增生、氧化能力加强以及动脉管变窄，从而引发心血管系统疾病[20]。

调查研究发现，膳食中的类胡萝卜素的抗氧化剂可以预防心血管系统疾病。

其中虾青素的效果较为显著，实验研究表明，人体每天口服虾青素3.6mg，持续两周时间，可以防止LDL-胆固醇的氧化，从而减小心血管系统疾病的发病危险[21]。

此外，在虾青素还可以增加人体内的HDL，减少LDL以减轻巨噬细胞的炎症反应，阻止巨噬细胞渗入动脉斑块中，增强斑块的稳定性，避免斑块的破裂或减少斑块的形成，从而发挥预防动脉粥样硬化、冠心病等心血管系统疾病的作用。

研究表明，虾青素可以降低血压并抑制血栓的形成，对心肌梗死、动脉硬化和缺血再灌注损伤等心血管疾病具有预防和治疗作用[22]。

1.4.3 增强机体免疫力
虾青素等类胡萝卜素可以显著提升抗原入侵时脾细胞抗体的产生，刺激体内免疫球蛋白的产生以及促进T细胞的作用；虾青素还可以通过促进B细胞的活性，来消灭外来入侵的病原体，从而达到调节机体的免疫能力的目的[21]。

在对小鼠淋巴细胞进行体外组织培养的实验中，对虾青素和其他类胡萝卜素的免疫调节作用进行了比较，结果显示虾青素的效果较为明显[23]。

此外在用胸腺依赖抗原刺激小鼠脾脏细胞的实验中发现，虾青素可以增加分泌免疫球蛋白IgG 和IgM的细胞，增加抗体的产生量，并且依赖于T专一抗原的体液免疫反应的作用也得到加强[24]。

虾青素可以增加免疫球蛋白IgG、IgM和IgA的分泌量、嗜中性白细胞和自然杀伤细胞的数量，从而清除掉被感染或是癌变的细胞[25]。

在机体的免疫反应（细胞免疫和体液免疫）中，虾青素可以促进植物血凝素诱导淋巴管芽生，使T、B淋巴细胞的增殖及分化能力得到加强，从而提高机体的免疫力[26]。

研究发现，虾青素对S180肉瘤的生长具有抑制作用，并且可以促进小鼠白细胞介素-1α的释放能力，对提升S180肉瘤小鼠的T淋巴细胞百分数也具有一定的作用[27]。

目前关于虾青素增强机体免疫力作用机制的分析认为，其对机体免疫力的增强作用可能源于其强大的抗氧化能力，抗氧化作用是细胞间隙连接通讯正常的重要保障，加强免疫细胞的免疫活力及其繁殖分化的能力，维持机体稳定的平衡状态，从而增强机体的免疫能力[28]。

1.4.4 抗癌作用
在对类胡萝卜素摄入量与癌症发病率或死亡率之间关系的流行病学调查中表明，随着类胡萝卜摄入量的增加，癌症的发病率和死亡率逐渐降低，二者之间呈显著负相关，且在各种类胡萝卜素的抗肿瘤活性比较实验中发现虾青素的抗肿瘤活性最强[29]。

虾青素可以通过抑制癌细胞生长、诱导癌细胞凋亡、抑制癌细胞转移扩散和调节细胞间隙通讯功能来实现其抗癌作用。

虾青素对结肠、口腔、胸腺、前列腺、纤维组织等癌细胞和胚胎成纤维组织的生长增殖具有抑制作用。

虾青素的使用可使癌细胞培养物中的S期细胞减少，G0期细胞与G1期细胞的比例增加，并且作为癌细胞增殖标志的增殖细胞核的表达能力降低，使癌细胞的增殖能力受到抑制[30-32]。

在众多癌细胞株中均表达过量的Cyclin D1（原癌基因细胞周期蛋白），在虾青素的干预下其表达下降，而且CDK（细胞周期调节蛋白激酶）抑制剂增加，使细胞停留在G1期[31]。

虾青素可能通过抑制肿瘤细胞吸收营养或PPARγ（过氧化物酶体增殖物激活受体γ）的活化，对细胞周期进行干扰，从而抑制癌细胞的增殖。

研究发现，乳腺癌小鼠喂食虾青素以后，其肿瘤细胞内的Fe、P等细胞生存必须的营养元素的含量降低较为明显，且肿瘤细胞从健康组织吸收该元素的能力也降低了，肿
瘤细胞因营养不足而抑制其增殖[33]。

特异性配体激活PPARγ后，细胞的增殖受到抑制[34]。

研究表明，虾青素可以诱导结肠癌、乳腺癌、肝癌等癌细胞的凋亡。

其凋亡的特征是亚二倍体峰、磷脂酰丝氨酸外翻、原位末端标记和Caspase-3活性表达为阳性[32,35,36]。

虾青素的细胞凋亡途径可能是经线粒体介导的途径实现的。

虾青素的干预会使癌细胞的线粒体受到损伤，膜电位改变，致使Ca2+ 的浓度持续上升，毁坏了电子传递链，细胞色素C释放于细胞质中，诱导细胞凋亡[36]。

虾青素对癌细胞转移的抑制可能与癌细胞自身增殖受阻，以及COX-2（环氧合酶-2）、MMP（基质金属蛋白酶）和nm23（肿瘤转移抑制蛋白）的调控有关。

在虾青素的干预下COX-2、MMP表达下调，特别是可引起结肠癌的MMP-2和MMP-9的表达下调[32,35,37]。

而nm23则表达上调，其通过编码一类核苷二磷酸激酶蛋白的表达上调，来保证细胞骨架组装以及G蛋白信号传递的正确性[35]。

大部分癌细胞间隙的连接通讯被破坏，修复细胞间的连接通讯是防治癌症的关键。

虾青素通过增强正常细胞间的通讯连接能力，将癌细胞孤立，降低正常细胞与癌细胞的接触率，抑制癌细胞增殖与生长，对癌症发挥抑制作用，较高浓度的虾青素甚至可以杀伤癌细胞[38]。

此外，有人认为虾青素的抗癌机制可能跟其诱导细胞骨架凋亡的能力有关，细胞骨架是一种很繁复的纤维网状体系，其参与细胞的凋亡过程，是癌细胞转移的关键所在，虾青素通过诱使细胞骨架的凋亡来实现癌细胞的凋亡，从而起到抗癌的作用[39]。

1.5 虾青素的安全性和应用
1.5.1 虾青素的安全性
人们日常食用的天然的虾蟹、鱼类等水生动物体内富含天然虾青素，人体日常食用并没有中毒症状和不良反应出现，表明天然虾青素对人体是绝对安全的。

美国一家公司的天然虾青素人体安全性实验结果显示，对两组健康成年人分别以3.85mg/d和19.25mg/d两个剂量组，口服雨声红球藻粉补充虾青素，连续29天，在对志愿者的眼睛健康状况、血压、皮肤颜色、体重、血样以及尿样的详细观测和分析后发现，口服的富含天然虾青素的雨声红球藻，没有对人体产生任何的毒副作用或致病效应[40]。

此外，日本的实验结果也表明，当人体以14.4mg/d的剂量口服富含天然虾青素的雨声红球藻时，持续两周时间，没有发现任何毒副作用[41]。

而通过化学合成获得的虾青素，在合成的过程中可能被其他的有害物质污染，并且获得主要是Z式结构的虾青素，其生物安全性较低。

目前美国食品与药物管理局仅批准E式结构的虾青素用于水产养殖饲料的添加剂。

虽然目前化学合成虾青素在食品医药及化妆品等上的使用受到很大的限制，但是由于生物途径获得虾青素的效率过低，化学合成虾青素的前景还是相当可
观的，而且已有几家公司成功的合成出E式结构的虾青素，并已经投放市场[10-11]。

1.5.2 虾青素的应用
虾青素在食品工业、化妆品工业和饲料添加剂等领域有着广阔的应用前景，是一种很有潜力的绿色添加剂。

随着对虾青素生物功能研究的深入，人们已经生产开发出一系列的保健食品、药品和化妆品，用于防治癌症、保护心血管、调节免疫系统功能和抗氧化。

在食品方面主要是用于开发乳品、饮料、美容食品等高品质食品和胶囊类的高端营养品，例如美国Cyanotech公司生产的缓解疲劳的虾青素产品和Now foods公司生产的天然植物虾青素胶囊，以及日本Fancl生产的抗氧化虾青素产品等。

虾青素由于其强大的抗氧化和着色能力而被应用于化妆品，目前一些国际一线的化妆品公司，如欧莱雅、雅诗兰黛、曼秀雷敦、KOSE等都推出了添加虾青素的面膜、眼霜、口红和保湿霜等化妆品。

但是水产养殖和家禽、畜养殖仍然是虾青素目前最大的市场，作为添加剂用于水产养殖和家禽、畜养殖的饲料中。

1.6 本文研究的目的及内容
本试验主要研究海虹虾青素对D-半乳糖致衰老模型小鼠血浆、肝脏抗氧化酶活性及MDA的影响。

以海虹虾青素为受试样品，对D-半乳糖致衰老小鼠进行干预，考察指标为血浆及肝匀浆中MDA含量及GSH-Px、CAT、SOD活性，评价海虹虾青素对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化功效。

2、材料与方法
2.1 实验动物
选择6-8周的雄性健康昆明小鼠60只，体重为25-30g，购自长春亿斯生物技术公司，SCXK（吉）-2011-0004。

2.2 仪器
酶标仪（SYNERGY 4型，美国Biotek）；漩涡混匀器（IKA MS3 digital 型，）；冷冻离心机（TD-5A型，湖南凯达科学仪器有限公司）；电子天平（JY2001型，上海精密科学仪器有限公司）；恒温水浴箱（DK-600S型，上海精宏实验设备有限公司）；组织匀浆机（DY89-Ⅱ，宁波新芝生物科技股份有限公司）2.3 受试物与试剂
海虹虾青素由威海利达生物科技有限公司提供，低温烘干，超微粉碎至200目，备用。

D-半乳糖，SOD、GSH-Px、CAT、MDA试剂盒均购于南京建成生
物工程研究所。

冰乙酸、双蒸水。

2.4 实验方法
2.4.1 D-半乳糖致衰老动物模型
小鼠适应性喂养1周后随机选10只为空白对照组，其余动物采用D-半乳糖40mg/kg·BW颈背部皮下注射造模，注射量为0.1mL/10g·BW，每日注射1次，连续造模6周。

2.4.2 实验动物分组
造模6周后，尾尖取血测MDA，按MDA水平随机分为4组，并以造模之前选出的一组为空白对照组，共有空白对照组、模型对照组、虾青素低剂量组、虾青素中剂量组、虾青素高剂量组5组。

2.4.3 受试物及剂量
将虾青素配制成虾青素悬液，各组按以下剂量灌胃。

虾青素低剂量组：50mg/kg·BW虾青素悬液灌胃；虾青素中剂量组：100mg/kg·BW虾青素悬液灌胃；虾青素高剂量组：150mg/kg·BW虾青素悬液灌胃。

空白对照组及模型组以蒸馏水代替，灌胃剂量为0.1mL/10g·BW，每日灌胃1次，连续30d。

灌胃期间，各组均饲喂普通饲料，自由饮水。

2.4.4 指标测定
小鼠眼球取血，用含抗凝素采取管收集血液，漩涡混匀器混匀。

4℃3000r 离心10min，移取上清至2mL离心管中，-80℃保存，备用；动物处死后，分离取出肝脏，-80℃保存，备用，测定时，取肝脏组织后加适量生理盐水制成10%组织匀浆，4℃3000r离心10min，移取上清至2mL离心管中，立即测定。

MDA、GSH-Px、SOD、CAT等指标的测定参考试剂盒方法。

2.5 统计处理
实验数据采用SPSS20.0软件进行方差分析。

3、结果与分析
3.1 海虹虾青素对小鼠血浆中MDA含量的影响
海虹虾青素对小鼠血浆中MDA含量的影响见表1。

结果表明，各剂量组小鼠血浆中MDA含量均有所下降，各剂量组血浆MDA含量均显著低于模型组（P<0.05），且中、高剂量组与空白对照组之间无显著差异性（P>0.05）。