曲克芦丁液相色谱分析验证方案

目录
HPLC法测曲克芦丁含量验证方案
一、简介
二、项目
三、内容
1、测定所用仪器设备及化学试剂一览表
2、色谱条件
3、溶液配制
4、系统适用性实验
5、方式验证：
.方式的选择性（分离度）
.精密度
.最小检测限（LOD）
.最小定量限（LOQ）
.线性范围
.方式的准确性
.方式耐用性
6、总结
HPLC法测曲克芦丁验证方案
一、简介
二、本实验的目的是为了验证测定曲克芦丁的液相分析方式的准确性和可行性。

实验首先对系统进行确认，确认系统符合作为检测方式的要求，然后对方式进行验证，包括方式的选择性、精密性、最小定量限及最小检测限、线性和不同操作人员依照该方式进行检测时是不是符合分析的要求。

三、项目
测定所用仪器设备及化学试剂一览表
色谱条件
标准溶液配制
系统适用性实验
方式验证
方式的选择性（分离度）
精密度
系统精密度（重复性）
方式精密度
中间精密度
最小检测限
最小定量限
线性范围
方式的准确性
方式耐用性
结论
附一：标准溶液配制时各溶剂浓度计算公式
附二：相邻两峰的保留时间、峰宽示意
附三：曲克芦丁的检测方式
四、内容
3、溶液配制：
.标准溶液的制备：
储蓄溶液：
a．精密称取曲克芦丁对照品，溶于流动相，并用同一流动相稀释至。

b．将对照溶液（a）用流动相稀释至。

c. 对照溶液（c）: 将曲克芦丁系统适用性对照品溶于流动相中，并用同一流动相稀释至。

.供试品溶液制备：精密称取本品约，溶于流动相，并用同一流动相稀释至。

4.系统适用性实验
.在系统稳定条件下，取对照溶液（c）60μl，进样，要求曲克芦丁峰（主峰）与其他物质峰（次峰）之间的分离度大于，理论塔板数按曲克芦丁峰计算应不低于2000。

.结果：
5.方式验证：
质量标准来源：《国家药品标准》（WS-10001-（HD-0226）-2002）【含量测定】照高效液相色谱法（中国药典2005年版二部附录ⅤD）测定。

色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以%枸橼酸溶液-乙腈-四氢呒喃(85:9:6)为流动相；检测波长254nm。

理论板数按曲克芦丁峰计算应不低于2000，曲克芦丁峰与其他物质峰的分离度应符合要求。

测定法取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml 中含曲克芦丁的溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；另精密称取曲克芦丁对照品适量(按外标含量折算并扣除水分)同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

.方式的选择性（分离度）
5.1.1.溶液制备：
空白溶液：%枸橼酸溶液-乙腈-四氢呒喃(85:9:6)
供试溶液：系统适应性标准溶液(c)
5.1.2.测定：
●将(c)进样；
5.1.3.要求：
●空白溶剂峰不干扰各溶剂峰的检测。

● (c)溶液主峰与次峰之间的分离度R应大于。

●理论塔板数按曲克芦丁峰计算应不低于2000
结论：
.精密度
5.2.1.系统精密度（重复性）
将标准溶液（a）重复进样6次，计算每一个组分峰面积的RSD%，
相对标准误差不得大于%。

结果：
结论：
5.2.2.方式精密度
5.2.2.1.供试品溶液制备：精密称取某一批号的样品约，置25ml 容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀（约相当于曲克芦丁ml ）。

平行制备6份样品，每样测定2次。

5.2.2.2.测定：
● 以标准溶液为基准，之外标法测定该批号的6个样品溶液中的含量，并计算曲克芦丁的RSD%.
● 含量计算公式：
C=
As*Cr Ar*Cs
● 其中C —样品中待测物含量（%）： ● As —样品中待测物质的峰面积 ● Cs —样品浓度：（mg/ml ） Ar —标准品中对应物质的峰面积
Cr —标准品中对应的待测物质的浓度：（mg/ml ）
● 6份RSD%应小于2%。

●结果：
①
5.2.3.中间精密度
选择一个批号的样品，别离由两名分析人员不同时间测定，平行
称取6份样品，比较测定结果，判断中间精密度。

.最小检测限（LOD ）
以流动相为空白，在仪器最灵敏的状态下，持续进样三次，记录仪器的漂移即噪音水平，按信噪比（S/N ）3~6的要求，制备曲克芦丁的样品溶液，每一个样品进样2次，测定最小检测限。

结论：
.最小定量限（LOQ ）(以ppm 表示
)
以流动相为空白，在仪器最佳灵敏度的状态下，持续进样三次，记录仪器噪音水平，按信噪比（S/N=10±1）的要求，制备曲克芦丁
结论：
.线性范围
5.5.1.线性溶液制备：
储蓄液的制备：a.精准量取100mg的曲克芦丁样品到100ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

摇匀即得。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
1号溶液：从a号中量取的溶液到10ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
2号溶液：从a号中量取的溶液到10ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
3号溶液：从a号中量取的溶液到10ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
4号溶液：从a号中量取的溶液到10ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
5号溶液：从a号中量取的溶液到10ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
6号溶液：从a号中量取的溶液到10ml的容量瓶中，用流动相稀释到刻度。

（曲克芦丁的浓度为：ml）
5.5.2.测定：
将各线性溶液别离进样，每一个浓度点测定2次，绘制标准曲线，
结论：
.方式的准确性
5.6.1.准确度溶液的制备：
空白对照溶液：用流动相定容于三个10ml容量瓶至刻度，即得；
⑴1号溶液：精密加入定量限溶液于10ml容量瓶中至刻度，即得；
⑵2号溶液：精密加入线性下4号溶液10ml至刻度，即得；
⑶3号溶液：精密加入线性下1号溶液10ml至刻度，即得。

5.6.3.测定：每一个浓度进样2次，测定曲克芦丁含量，计算回收率S及相应的RSD%。

5.6.4.接受标准：回收率应在80%-120%范围内，相应的RSD%
含量的计算公式：()100%
j
k r h
r
A A C C A -⨯=
⨯ 其中C h ——含量
A j ——加样（定量限液、标准液、标准的120%液）中待测物质的峰面积；
A k ——空白对照液中待测物质的峰面积； A r ——标准液中待测物质的峰面积；
C r ——标准中对应的待测物质的浓度（mg/ml ）
.方式耐用性
目的：确认在测定条件有微小变更时，测定结果不受影响的程度。

操作步骤：
5.7.1.调整柱温（25℃±5%），按验证明验条件测试标准溶液，记录相邻溶剂间的分离度。

5.7.2.调整柱流速（min±20%），按验证明验条件测试标准溶液，记录相邻溶剂间的分离度。

主峰与次峰彼此之间的分离度见下表：
min ℃ C 流速 min ℃
B
C
结论：
6.总结：
附表一：标准溶液配制时各溶剂浓度计算公式： v d c V ⨯=
c ——mg/ml ； V ——定容体积ml ；v ——称取重
量mg 。

附图二：相邻两峰的保留时间、峰宽示意
附图三：曲克芦丁含量分析检测方式
编号 类型 名称 1 仪器 LC-20AT 2 衡器 分析天平 3 量具 10ml 、100ml 容量瓶 4 移液管 10ml 、5ml 、2ml 、1ml
移液管
5 进样器 微量注射器（100ul ）
6 试剂 %枸橼酸溶液、乙腈
3.溶液配制： 储蓄溶液： 储蓄溶液：
a ．供试品溶液: 精密称取本品，溶于流动相，并用同一流动相稀释至。

b ．标准溶液（a ）
: 精密称取曲克芦丁对照品，溶于二流动相，并用同一流动相稀释至。

4.检测：
.以标准溶液为基准，测定样品溶液中的曲克芦丁。

.含量计算公式：
As Cr
C Ar Cs ⨯=
⨯ ● 其中C —样品中待测物含量（ppm ）： ● As —样品中待测物质的峰面积
Cs—样品浓度：（g/ml）
Ar—标准品中对应物质的峰面积
Cr—标准品中对应的待测物质的浓度：（μg/ml）A = + ( r = 019999)。