结核分枝杆菌ppt课件

22
浓缩集菌

先集菌后检查，可提高检出率。培养与动物试 验也必须经集菌过程以除去杂菌。脑脊液和胸、 腹水无杂菌，可直接离心沉淀集菌。痰、支气 管灌洗液、尿、粪等污染标本需经4% NaOH （痰和碱的比例为1:4,尿、支气管灌洗液和碱 的比例为1:1）处理15min，时间过长易使结核 分枝杆菌L型与非结核分枝杆菌死亡。尿标本 先加5% 鞣酸、5% 乙酸各0.5ml于锥形量筒内 静置，取沉淀物处理。处理后的材料再离心沉 淀。取沉淀物作涂片染色镜检。若需进一步作 培养或动物接种，应先用酸中和后再离心沉淀。
24培养?罗氏培养基一般需26周阳性结果随时报告8周无菌生长报为阴性结果阳性结果按生长菌落占斜面141234和全部划分1到425快速诊断?一般涂片检查菌数需5x1034ml培养需1x102ml标本中菌数少于此数时不易获得阳性结果且培养需时较长
一、 生物学性状

形态与染色 结核分枝杆 菌为细长略带弯曲的杆菌， 大小1～4X0.4m。牛分枝 杆菌则比较粗短。分枝杆 菌属的细菌细胞壁脂质含 量较高，约占干重的60%， 特别是有大量分枝菌酸包 围在肽聚糖层的外面，可 影响染料的穿入。

19

2.试验方法与意义：常规试验分别取2种PPD 5 个单位注射两前臂皮内，48～72h后: 硬结≤4mm者为阴性； 5-9mm为弱阳性； 10-19mm为阳性； ≥20mm或虽＜20mm，但局部出现水泡 和淋巴管炎，为强阳性。 若PPD-C侧红肿大于BCG-PPD侧为感染。反之， BCG-PPD侧大于PPD-C侧，可能系卡介苗接种 所致。
17


近来研究表明结核分枝杆菌诱导机体产生 免疫和超敏反应的物质不同。超敏反应主 要由结核菌素蛋白和蜡质Ｄ共同引起，而 免疫则由结核分枝杆菌核糖体RNA引起。二 种不同抗原成分激活不同的T细胞亚群释放 出不同的淋巴因子所致。
18
结核菌素试验

结核菌素试验是应用结核菌素进行皮肤试验来 测定机体对结核分枝杆菌是否能引起超敏反应 的一种试验。 1.结核菌素试剂：旧结核菌素：系将结核分枝 杆菌接种于甘油肉汤培养基，培养4～8周后加 热浓缩过滤制成。稀释2 000倍，每0.1ml含5u。 目前都用纯蛋白衍化物，PPD有二种：人结核 分枝杆菌制成的PPD-C和卡介苗制成的BCGPPD。每0.1ml含5u。
26
13
免疫性

免疫机制 结核分枝杆菌是胞内感染菌， 其免疫主要是以T细胞为主的细胞免疫。T 细胞不能直接和胞内菌作用，必须先与感 染细胞反应，导致细胞崩溃，释放出结核 分枝杆菌。机体对结核分枝杆菌虽能产生 抗体，但抗体只能与释出的细菌接触起辅 助作用。
14

结核分枝杆菌侵入呼吸道后，由于肺泡中 80%～90% 是巨噬细胞，10% 是淋巴细胞 （T细胞占多数）；原肺泡中未活化的巨噬 细胞抗菌活性弱，不能防止所吞噬的结核 分枝杆菌生长，反可将结核分枝杆菌带到 他处。但可递呈抗原，使周围T淋巴细胞致 敏。
20

阴性反应表明未感染过结核分枝杆菌， 但应考虑以下情况： ①感染初期，因结核分枝杆菌感染后 需4周以上才能出现超敏反应 ②老年人 ③严重结核患者或患有其他传染病， 如麻疹，水痘导致的细胞免疫低下 ④获得性细胞免疫低下，如艾滋病或 肿瘤等用过免疫抑制剂者。
21
涂片法




抗酸杆菌（－）：连续观察300视野未发现； 抗酸杆菌（±）：连续观察300视野发现13条; 抗酸杆菌（1＋）：1-9条/100视野 抗酸杆菌（2＋）：1-9条/10视野 抗酸杆菌（3＋）：1-9条/1视野 抗酸杆菌（4＋）：≥10条/1视野
15

致敏淋巴细胞可产生多种淋巴因子，如IL-2、IL-6、 INF- α，他们与TNF-α的共同作用可杀死病灶中的 结核分枝杆菌。淋巴因子中INF- α是主要的，有 多种细胞能产生INF- α，浸润的先后为NK、Ts/Th 和CD4+、CD8+α/βT细胞。上述细胞有的可直接杀 伤靶细胞，有的产生淋巴因子激活巨噬细胞，使 吞噬作用加强引起呼吸暴发，导致活性氧中介物 和活性氮中介物的产生而将病菌杀死。
9

故结核标本用4% NaOH消化时，一般细菌 很快杀死，但结核分枝杆菌可耐受数十分 钟。结核分枝杆菌入侵后荚膜还可抑制吞 噬体与溶酶体的融合。
10
脂质


据实验研究细菌毒力可能与其所含复杂的脂质 成分有关，特别是糖脂更为重要。 ①索状因子 ： 是分枝菌酸和海藻糖结合的一 种糖脂。能使细菌在液体培养基中呈蜿蜒索状 排列。此因子与结核分枝杆菌毒力密切相关。 它能破坏细胞线粒体膜，影响细胞呼吸，抑制 白细胞游走和引起慢性肉芽肿。若将其从细菌 中提出，则细菌丧失毒力。 ②磷脂：能促使单核细胞增生，并使炎症灶中 的巨噬细胞转变为类上皮细胞，从而形成结核 结节。
25
菌阴结核

三次涂片及一次培养阴性的肺结核，诊 断标准：①典型临床症状和胸部x线表现； ②抗结核治疗有效；③临床可排除其他 非结核性肺部疾患；④PPD强阳性，结核 抗体阳性；⑤痰结核菌PCR和探针检测阳 性；⑥肺外组织病理证实结核病变；⑦ 支气管肺泡灌洗液检出分枝杆菌；⑧支 气管或肺部组织病理证实结核病变。具 备①～⑥中3项或⑦、⑧中1项可确诊。
5
抵抗力

结核分枝杆菌细胞壁中含有脂质，故对乙醇敏感， 在70%乙醇中2min死亡。此外，脂质可防止菌体 水分丢失，故对干燥的抵抗力特别强。粘附在尘 埃上保持传染性8～10d，在干燥痰内可存活6～8 个月。结核分枝杆菌对湿热敏感，在液体中加热 62～63℃15min或煮沸即被杀死。结核分枝杆菌 对紫外线敏感。直接日光照射数小时可被杀死， 可用于结核患者衣服、书籍等的消毒。
23
培养

罗氏培养基，一般需2-6周，阳性结果随时 报告，8周无菌生长，报为阴性结果，阳性 结果按生长菌落占斜面1/4,1/2,3/4和全部 划分1+到4+
24
快速诊断

一般涂片检查菌数需5x103～4/ml,培养需 1x102/ml,标本中菌数少于此数时不易获得阳性 结果，且培养需时较长。目前已将多聚酶链反 应（PCR）扩增技术应用于结核分枝杆菌DNA 鉴定，每ml中只需含几个细菌即可获得阳性， 且1-2d得出结果。操作中需注意实验器材的污 染问题，以免出现假阳性。细菌L型由于缺壁 并有代偿性细胞膜增厚，而一般常用的溶菌酶 不能使细胞膜破裂释出DNA，以致造成PCR假 阴性。用组织磨碎器充分研磨使细胞破裂后， 则可出现阳性。
6
耐药性

在固体培养基中对常用的含异烟肼1mg、链 霉素10mg、利福平50mg能生长的结核分 枝杆菌为耐药菌。耐药菌株毒力有所减弱。 异烟肼可影响细胞壁中分枝菌酸的合成， 诱导结核分枝杆菌成为L型,此可能是耐异烟 肼的一种原因。药物敏感试验表明对异烟 肼耐药，而对利福平和链霉素大多仍敏感。
7
二、致病性
1
分群（Mitchson假说）




A菌群：快速繁殖， 巨噬细胞外和肺空洞 干酪液化部分； B菌群：半静止状态， 巨噬细胞内和空洞璧 坏死组织中； C菌群：半静止状态， 可突然间歇生长。 D菌群：休眠状态， 不繁殖，数量很少。
2
染色

分枝杆菌一般用齐尼（Ziehl- Neelsen)抗酸 染色法，以5% 石炭酸复红加温染色后可以 染上，但用3%盐酸乙醇不易脱色。若再加 用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色，而其他 细菌和背景中的物质为蓝色。
3
培养特性

专性需氧。最适温度为37℃，低于30℃不 生长。结核分枝杆菌细胞壁的脂质含量较 高，影响营养物质的吸收，故生长缓慢。 在一般培养基中每分裂1代需时18～24h， 营养丰富时只需5h。
4

常用的有罗氏 （Lowenstein-Jensen）固 体培养基，内含蛋黄、甘 油、马铃薯、无机盐和孔 雀绿等。孔雀绿可抑制杂 菌生长，便于分离和长期 培养。蛋黄含脂质生长因 子，能刺激生长。根据接 种菌多少，一般2～4周可 见菌落生长。菌落呈颗粒、 结节或花菜状，乳白色或 米黄色，不透明。
16

结核的免疫属于感染免疫(infection immunity)，又称有菌免疫，即只有当结 核分枝杆菌或其组分存在体内时才有免 疫力。一旦体内的结核分枝杆菌或其组 分全部消失，免疫也随之不存在。 随着机体对结核分枝杆菌产生保护作用 的同时，也可以看到有迟发型超敏反应 的产生，二者均为T细胞介导。


结核分枝杆菌不产生内、外毒素。其致 病性可能与细菌在组织细胞内大量繁殖 引起的炎症，菌体成分和代谢物质的毒 性以及机体对菌体成分产生的免疫损伤 有关。 致病物质与荚膜、脂质和蛋白质有关。
8
荚膜




荚膜的主要成分为多糖，部分脂质和蛋 白质。其对结核分枝杆菌的作用有： ①荚膜能与吞噬细胞表面的补体受体3结 合，有助于结核分枝杆菌在宿主细胞上 的粘附与入侵； ②荚膜中有多种酶可降解宿主组织中的 大分子物质，供入侵的结核分枝杆菌繁 殖所需的营养； ③荚膜能防止宿主的有害物质进入结核 分枝杆菌，甚至如小分子NaOH也不易进 入。
11


③硫酸脑苷脂：可抑制吞噬细胞中吞噬 体与溶酶体的结合，使结核分枝杆菌能 在吞噬细胞中长期存活。 ④蜡质D:是一种肽糖脂和分枝菌酸的复 合物，可从有毒株或卡介苗中用甲醇提 出，具有佐剂作用，可激发机体产生迟 发型超敏反应。
12
蛋ห้องสมุดไป่ตู้质

有抗原性，和蜡质D结合后能使机体发生超 敏反应，引起组织坏死和全身中毒症状， 并在形成结核结节中发挥一定作用。