银耳多糖对免疫功能影响的实验报告

银耳多糖对免疫功能影响的实验报告
【摘要】目的通过动物试验观察以酶解逆向提取法从银耳中提取的全价银耳多糖对免疫系统的影响。

方法取昆明种小鼠，三个不同剂量的银耳多糖，连续灌胃30d，处死后进行以下试验：①取脾脏称重求脾脏/体重比值。

②巨噬细胞吞噬试验（半体内法）。

③碳廓清试验。

④半数溶血值(HC50)试验。

⑤NK细胞活性试验。

结果①银耳多糖2.0g·kg-1时，脾脏/体重比值明显增加,与对照组比较有显著差异(P＜0.05)。

②受试组小鼠巨噬细胞吞噬能力增强,与对照组比较有显著、非常显著和极显著差异(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.001)。

③银耳多糖1.0g·kg-1和 2.0g·kg-1时，碳廓清能力增高，与对照组比较有显著和非常显著差异(P＜0.05,P＜0.01)。

④受试小鼠半数溶血值增高, 与对照组比较分别有显著、非常显著和极显著差异(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001)。

⑤受试小鼠NK细胞活力增强，与对照组比较分别有显著和非常显著差异(P＜0.05,P＜0.01)。

结论银耳多糖有增强动物免疫力作用，包括细胞免疫和体液免疫。

【关键词】银耳多糖；免疫功能；影响
传统医学认为银耳具有扶正固本，养胃补肾之效[1]。

现代医学研究证实银耳多糖有增加机体免疫力、抗肿瘤、抗溃疡病等作用[2]，本实验目的是观察银耳多糖对受试动物免疫系统的影响[3-5]。

1 实验材料
1.1 银耳多糖。

天然全价多糖，包括水溶性中性多糖、酸性多糖和酸溶性碱性多糖。

由青岛东方生物技术研究所提供。

1.2 动物。

小鼠：昆明种，健康，雄性，6～8w，体重18～22g，山东省海洋药物科学研究所提供。

1.3 仪器。

二氧化碳培养箱、离心机、721分光光度计、恒温水浴、酶标仪、细胞计数器、96孔U型细胞培养板等。

1.4 试剂。

绵羊红细胞SRBC Hank’s液、RPm11640培养液、小牛血清MTT、补体（豚鼠血清）、SA缓冲液、都氏试剂、YAC-1细胞、氧化型辅酶I、1%的NP40、印度墨汁、鸡红细胞、Giemsa磷酸缓冲液等。

2 实验方法
筛选健康昆明种小鼠40只，雄性鼠龄6～8w，体重18～22g，随机分作4组，每组10只。

一组为对照组，其余三组为试验组，分别给予三个不同剂量的银耳多糖，即0.5g·kg-1，1.0g·kg-1，2.0g·kg-1，连续灌胃30d，第31d脱颈处死，进行以下试验[6-9]。

2.1 取脾脏称重（湿重）。

以每克体重之脾重量(mg)作为脾脏/体重比值表示。

2.2 巨噬细胞吞噬试验（半体内法）。

受试小鼠腹腔注射20%(v/v)鸡红细胞（2000rpm，10min）悬混液1ml，30min后，颈椎脱臼处死动物，固定动物于鼠板上，经腹腔注入生理盐水2ml，转动鼠板1min，然后吸取腹腔洗液1ml，平均分滴于载玻片上，置于垫有湿纱布的搪瓷盘内，移入37℃孵箱内温育30min后，用生理盐水轻洗，除去未贴牢固的细胞，晾干，甲醇固定，Giemsa-磷酸缓冲液染色，再用蒸馏水漂洗，晾干，在油镜下计数，每片计100个巨噬细胞，计算吞噬鸡红细胞的细胞数和总共吞噬的红细胞数，按下式计算吞噬率和吞噬指数。

吞噬率(%)=（吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数）×100％吞噬指数=被吞噬鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数
2.3 碳廓清试验。

从受试小鼠尾静脉注射印度墨汁（按每10g体重0.1ml计量），注射后立即计时，2min、10min时分别从内眦静脉丛取血20μl，将其加到2ml 0.1% Na2CO3溶液，用721分光光度计于600nm处,测光密度值(OD)，以0.1% Na2CO3溶液作对照。

同时在处死受试动物后，取肝和脾称重，按下式计算吞噬指数。

吞噬指数=体重÷（肝重+脾重）×K1/3
K=(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)
2.4 半数溶血值(HC50)试验。

受试动物从腹腔注射2%压积SRBC（羊红血细胞）2ml进行免疫，5d后摘除眼球取血，放置1h，血液凝固，离心(2000rpm10min)分离出血清，用SA缓冲液稀释400倍。

取1ml置于试管内依次加入10%压积SRBC液0.5ml，补体1ml。

另设不加血清的对照管（以SA缓冲液取代血清），置37℃恒温水浴中，30min后转入冰浴，冷却停止反应，离心(2000rpm 10min)，取上清液1ml加都氏试剂3ml，充分混匀，放置10min后，于540nm处与空白对照管分别检测各管光密度。

按下式计算溶血素量，以半数溶血值(HC50)表示。

半数溶血值=[样品光密度(OD)/SRBC半数溶血时光密度(OD)]×稀释倍数
2.5 NK细胞活性测定。

用乳酸脱氢酶LDH测定法，酶标仪于490nm处测光密度(OD)，NK细胞活性按下列公式计算。

NK细胞活性(%)=[（反应孔OD-自然释放孔OD）/（最大释放孔OD-自然释放孔OD）]×100％
3 结果
3.1 银耳多糖对受试动物脾脏/体重比值的影响（表1）。

*P＜0.05
表1可见：3组与对照组比较其增加值有显著差异(P＜0.05)。

3.2 银耳多糖对受试动物巨噬细胞吞噬能力的影响（表2）。

表2显示：1组、2组、3组的吞噬率较对照组分别提高26.88%、35.38%、53.63%，与对照组比较有显著、非常显著和极显著差异，P值分别为P＜0.05、
P＜0.01和P＜0.001。

2组、3组的吞噬指数与对照组比较有显著和非常显著差异，P＜0.05和P＜0.01。

表明银耳多糖有增强小鼠巨噬细胞吞噬能力。

*P＜0.05,**P＜0.01,***P＜0.001
3.3 银耳多糖对受试动物单核—巨噬细胞碳廓清能力的影响（表3）。

*P＜0.05，**P＜0.01
表3可见：2组、3组与对照组比较有显著和非常显著差异，P＜0.05和P＜0.01。

表明饲喂银耳多糖1.0g·kg-1，2.0g·kg-1，两组单核—巨噬细胞碳廓清能力显著提高。

3.4 银耳多糖对受试动物半数溶血值(HC50)的影响（表4）。

*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
表4显示：1组与对照组比较有显著差异P＜0.05；2组、3组与对照组比较有非常显著和极显著差异P＜0.01和P＜0.001。

表明饲喂银耳多糖组均出现半数溶血值(HC50)增高。

3.5 银耳多糖对受试动物NK细胞活力的影响（表5）。

*P＜0.05,**P＜0.01
表5显示：1组、2组、3组与对照相比较NK细胞活力分别增高40.93%、51.30%、56.68%，分别有显著和非常显著差P＜0.05、P＜0.01，表明银耳多糖对小鼠NK细胞的活力有显著的激活作用。

4 结论
实验结果显示：①银耳多糖增至2.0g·kg-1时，脾脏体重比值增高，与对照组比较具有显著差异(P＜0.05)。

②银耳多糖对小鼠巨噬吞噬细胞吞噬能力有显著提高作用，3个实验组的吞噬率较对照组分别提高26.8%、35.38% 和53.63%。

0.5g·kg-1与对照组比较有显著差异(P＜0.05)；1.0g·kg-1、2.0g·kg-1组与对照组比较有非常显著差异(P＜0.01)和极显著差异(P＜0.001)。

③银耳多糖剂量1.0g·kg-1 组和2.0g·kg-1组的碳廓清能力明显提高，与对照组比较有显著和非常显著差异(P＜0.05，P＜0.01)。

④银耳多糖各剂量组的半数溶血值HC50均有明显增高，0.5g·kg-1组与对照组比较有显著差异(P＜0.05)，1.0g·kg-1组和2.0g·kg-1组与对照组比较有非常显著差异(P＜0.01)和极显著差异(P＜0.001)。

⑤银耳多糖3个剂量组的NK细胞活力分别提高40.93%、51.30%、56.68%，与对照组比较分别有显著和非常显著差异(P＜0.05，P＜0.01)，并与剂量成正相关。

上述实验结果提示：经胃给予小鼠不同剂量的银耳多糖能激发单核—吞噬细胞系统，促进增殖（脾脏），提高吞噬细胞活力（巨噬细胞、单核—巨噬细胞吞噬能力和NK细胞的活性），同时增加体液免疫（半数溶血值HC50升高）。

由此可见，银耳多糖具有激发免疫系统增强免疫力的作用[9，10]。

参考文献
1邓文龙，廖渝英.银耳多糖免疫药理研究.中草药，1984，15(9)：23
2杨吉成，徐鸿贞，刘静山，等.银耳多糖的干扰素促诱生效应.中药信息，1985，7(1)：52
3马宝骊，肖祥熊.医学免疫学.上海：同济大学出版社，1987
4Roitt IM，et al.ImmunologyLondon Gorer Medical Publishing，1985
5Emil RU,Baruj B.Textbook of Immunology(2)，BaltimoreWilliams & Wiskings，1984
6孙敬方.动物实验方法学.北京：人民卫生出版社，2001
7徐叔云.药理实验方法学(Ⅱ).北京：人民卫生出版社，1991
8James G.F, Bennett J.C,Franklin boratoryAnimal MedicineNew York Academic Press，1984.37-65
9中华人民共和国卫生部.保健食品功能学评价程序和检验方法论.卫生部卫生监督司，2000
10李瑞，主编.药理学.第4版.北京：人民卫生出版社，1999.385-394
(收稿日期：2007-07-06)。