ALDH1和Nestin在卵巢癌中的表达及临床意义

ALDH1和Nestin在卵巢癌中的表达及临床意义
钱茹; 叶郁红; 陈余朋; 王鹏程; 张声; 黄玉秀
【期刊名称】《《华中科技大学学报（医学版）》》
【年(卷),期】2019(048)004
【总页数】5页(P417-421)
【关键词】ALDH1; Nestin; 卵巢癌; 免疫组化; 预后
【作者】钱茹; 叶郁红; 陈余朋; 王鹏程; 张声; 黄玉秀
【作者单位】福建医科大学附属第一医院病理科福州350005; 福建医科大学附属第一医院妇产科福州350005
【正文语种】中文
【中图分类】R737.31
卵巢癌是女性生殖道三大常见恶性肿瘤之一，由于缺乏早期症状及有效筛查手段，大部分患者确诊时已属晚期[1]，而且卵巢癌患者化疗后易耐药易复发[2-3]，因此其预后较差，5年生存率不到30%。

寻找敏感且特异的卵巢癌分子标志物，对于卵巢癌的早期诊断、治疗及预后评估至关重要。

肿瘤干细胞(cancer stem-like cells，CSCs)是肿瘤组织中存在的一小部分具有无限增殖潜能、不断自我更新、多向分化、放化疗耐受以及高致瘤能力的细胞，它们是导致肿瘤侵袭进展、难以治愈的根源。

乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenase 1，ALDH1)和Nestin是近年来发现的CSCs标志物，它们与肿瘤的关系受到越来越多的关注。

本研究采用免疫
组化方法，检测卵巢癌中ALDH1和Nestin的表达情况，并分析其与卵巢癌患者
临床病理特征及预后的关系。

1 材料与方法
1.1 病例收集
对2006年3月～2018年3月福建医科大学附属第一医院130例卵巢癌患者的临床病理资料进行回顾性分析，所有卵巢癌患者术前均未接受化疗或放疗，术后均经病理检查确诊，病历资料完整。

年龄20～78岁，中位年龄49.5岁；浆液性癌
114例(低级别11例、高级别103例)，透明细胞腺癌12例，黏液腺癌4例；按
照2009年国际妇产科联盟(FIGO)最新修订的分期标准[4]：Ⅰ 期32例，Ⅱ 期14例，Ⅲ期58例，Ⅳ期26例；高级别卵巢癌103例，低级别卵巢癌27例。

选择
同期因子宫病变而无卵巢肿瘤，行子宫及双侧附件切除的30例卵巢组织作为正常对照组。

随访数据完整的卵巢癌患者有92例，其中死亡53例，中位生存时间32.4月；存活39例，存活者自诊断日期到随访日期最短3个月，最长100个月，中位生存时间40.6个月。

1.2 试剂及方法
制作好组织芯片，ALDH1一抗购自Abcam公司，Nestin抗体购自Thermo公司。

采用Dako Envision二步法免疫组化染色检测卵巢癌组织及正常卵巢组织中ALDH1及Nestin的表达，具体方法按试剂盒说明书进行，每批实验均同时设立
阴性对照和空白对照。

1.3 结果判读标准
ALDH1蛋白染色阳性表现为胞质着色，参见文献[5]，根据染色强度及显色细胞比例对染色结果进行判断。

染色强度：无显色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。

按显色细胞比例进行评分：0%为0分，<10%为1分，10%～为2分，50%～为3分，>80%为4分；两项相乘，0～3分为阴性，4～
12分为阳性。

Nestin蛋白染色阳性表现为胞质着色，参见文献[6]，血管内皮细胞的染色可作为阳性内对照，根据染色强度及显色细胞比例判断结果。

染色强度：无显色0分，染色比血管内皮细胞弱为1分，染色强度与血管内皮细胞相当为2分，染色比血管内皮细胞强为3分；按显色细胞比例进行评分：0%为0分，<10%为1分，10%～50%为2分，>50%为3分；两项相乘，0～3分为阴性，4～9分为阳性。

Ki-67染色以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞，阳性细胞数>20%定为阳性，20%～50%定为低表达，>50%定为高表达。

1.4 统计学方法
采用统计软件SPSS 22.0进行统计学分析，采用χ2检验或Fisher精确概率法检验进行计数资料组间比较及相关性分析；应用Kaplan-Meier生存曲线进行生存分析，用Log-rank检验分析生存曲线的差异，以Cox模型进行多因素生存分析。

以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果
2.1 ALDH1在卵巢癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系
ALDH1在卵巢癌和正常卵巢组织中的阳性表达率分别为48.5%(63/130)、
13.3%(4/30)，两者差异具有统计学意义(P<0.05)；ALDH1在浆液性癌、透明细胞腺癌、黏液性癌中的阳性表达率分别为51.8%、8.3%、75.0%，差异有统计学意义(P<0.05)(图1)；在不同分化程度组织中，高级别组ALDH1阳性表达率(56.3%)显著高于低级别组(18.5%)，差异有统计学意义(P<0.05)；淋巴结转移组ALDH1阳性表达率(74.5%)显著高于淋巴结未转移组(30.9%)，差异有统计学意义(P<0.05)；FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期ALDH1阳性表达率(34.8%)明显低于Ⅲ～Ⅳ期(56.0%)，差异有统计学意义(P<0.05)；ALDH1与Ki-67的表达明显相关
(P<0.05)(表1)。

2.2 Nestin在卵巢癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系
Nestin蛋白在卵巢癌组织中的阳性表达率38.5%(50/130)显著高于癌旁组织
6.6%(2/30)，差异有统计学意义(P<0.05)；在不同组织类型中，Nestin在浆液性癌、透明细胞腺癌、黏液性癌的阳性表达率分别为41.2%、25.0%、0.00%，差异无统计学意义(P>0.05)(图1)；在不同分化程度组织中，高级别组Nestin阳性表达率(44.7%)显著高于低级别组(14.8%)，差异有统计学意义(P<0.05)；淋巴结转移组Nestin阳性表达率(61.7%)明显高于淋巴结未转移组(21.8%)，差异有统计学意义(P<0.05)；FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期Nestin阳性表达率(26.1%)明显低于Ⅲ～Ⅳ期(45.2%)，差异有统计学意义(P<0.05)；Nestin与Ki-67的表达无明显相关性(P>0.05)(表1)。

2.3 ALDH1和Nestin在卵巢癌中表达的相关性分析
130例卵巢癌组织中，ALDH1和Nestin均为阳性表达者34例，ALDH1阳性表达而Nestin阴性表达者29例，Nestin阳性表达而ALDH1阴性表达者16例，ALDH1和Nestin均为阴性表达者51例；采用χ2检验进行相关性分析显示，ALDH1与Nestin在卵巢癌中的表达呈正相关，差异有统计学意义(r=0.301，
P=0.001)(表2)。

表1 ALDH1和Nestin蛋白的表达与卵巢癌患者临床病理特征的关系Table 1 Relationship between the expression of ALDH1 and Nestin proteins and clinicopathological features of patients with ovarian cancer临床病理特征例数ALDH1阳性阴性P值Nestin阳性阴性P值年龄(岁)0.4310.462
<505223291834 ≥507840383246肿瘤类型0.0390.069 浆液性癌11459554767 非浆液性癌16412313肿瘤级别0.0000.005 低级别27522423 高级别10358454657脉管侵犯0.2140.218 是2917121514 否10146553665大网膜转移0.0840.181 是5833252632 否7230422448淋巴结转移0.0000.000
是4735122918 否5517381243FIGO分期0.0210.032 Ⅰ～Ⅱ4616301234
Ⅲ～Ⅳ8447373846Ki-67指数0.0250.334 高表达9853454058 低表达3210221022
注：①肿瘤类型中非浆液性癌包括12例透明细胞腺癌，4例黏液腺癌；②所选130例卵巢癌患者中，有28例临床手术未做淋巴结清扫，所以淋巴结转移统计时病例总例数为102例。

A、B、C：分别为ALDH1在卵巢浆液性癌、透明细胞腺癌、黏液性癌中呈强阳性、阴性、强阳性表达(×200)；D、E、F：分别为Nestin在卵巢浆液性癌、透明细胞腺癌、黏液性癌中呈强阳性、弱阳性、阴性表达(×200)图1 免疫组化检测ALDH1和Nestin在不同组织学类型卵巢癌中的表达Fig.1 Immunohistochemical detection of ALDH1 and Nestin expression in different histological types of ovarian cancer
表2 卵巢癌组织中ALDH1和Nestin表达的相关性分析Table 2 Correlation analysis of ALDH1 and Nestin expression in ovarian cancer
tissuesNestin1ALDH1阳性阴性r值P值阳性34160.3010.001阴性2951
2.4 ALDH1和Nestin表达与卵巢癌患者生存率的关系
92例卵巢癌患者有详细的随访资料，中位随访时间为41.0个月。

以ALDH1及Nestin是否阳性表达将卵巢癌患者进行分组，绘制Kaplan-Meier曲线，比较两
组患者生存率的差异。

Log-rank检验显示，ALDH1阳性表达组卵巢癌患者生存
率显著低于阴性表达组，差异有统计学意义(P<0.01；图2A)；Nestin阳性表达组患者生存率与阴性表达组患者生存率无统计学差异(P=0.999；图2B)；ALDH1和Nestin双阳性表达的卵巢癌患者生存率显著低于ALDH1和Nestin单阳性表达或双阴性的卵巢癌患者(P=0.002；图2C)。

Cox多因素生存分析结果显示，ALDH1
和Nestin均不是卵巢癌独立的风险因素(P>0.05)。

A：ALDH1阳性表达与阴性表达组生存曲线；B：Nestin阳性表达与阴性表达组
生存曲线；C：ALDH1和Nestin双阳性表达组与ALDH1和Nestin单阳性或双
阴性表达组的生存曲线图2 卵巢癌ALDH1和Nestin不同表达模式分组的Kaplan-Meier生存曲线Fig.2 Kaplan-Meier survival curves of ovarian cancer patients with different expression patterns of ALDH1 and Nestin
3 讨论
目前卵巢癌的治疗以手术切除为主，术后辅以化疗，使得患者的临床缓解率及中位生存时间得到了提高，但是化疗耐药成为治疗的阻碍，复发和转移是影响患者预后的关键因素。

鉴于CSCs是导致肿瘤发生侵袭、复发、转移及耐药的根源，因此寻找出理想的卵巢癌干细胞分子标记物，用于指导卵巢癌的靶向治疗及预后评估具有十分重要的临床意义。

ALDH1是乙醛脱氢酶基因超家族成员之一，它主要催化视黄醛不可逆地氧化成视黄酸，参与多种组织分化与基因表达，在干细胞的早期分化中发挥重要作用[7]。

ALDH1也是肿瘤干细胞生长、发育的必需物质，参与肿瘤的发生发展[8-9]。

Ginestier等[10]首次证实ALDH1是乳腺癌干细胞表面标志物，
随后发现它也可作为头颈部鳞状细胞癌[11]、肺癌[12]、大肠癌[13]、卵巢癌[14]
等多种实体肿瘤的CSCs表面标志物。

对卵巢癌组织及细胞株中ALDH1肿瘤干细胞特性的基础研究发现，ALDH1阳性细胞比阴性细胞表现出更强的增殖分化、侵袭转移、致瘤能力及化疗抵抗性等干细胞特性，推测在卵巢癌组织中ALDH1阳性细胞恶性程度更高[14-16]。

本研究结果显示ALDH1在卵巢癌的表达明显高于正
常卵巢组织，提示ALDH1在卵巢癌的恶性转变中发挥重要作用。

其次，在多种实体肿瘤的临床病理研究中发现ALDH1表达常与肿瘤临床病理特征及不良预后相关。

Zhou等[17]在头颈部鳞状细胞癌中发现ALDH1的表达与肿瘤的分化程度、淋巴
结转移显著相关，高表达ALDH1的患者总生存率低；Xu等[18]研究发现在浸润
性膀胱癌中ALDH1的表达与肿瘤分级、TNM分期、淋巴结转移和远处转移密切
相关。

Chang等[19]研究发现在卵巢癌组织中ALDH1阳性表达率高达
48.9%(216/442)，且高表达ALDH1的患者预后不良。

类似的研究结果亦在乳腺
癌[20]、食管癌[21]、肺癌[22]等癌组织中得到验证。

在本研究中，我们发现在卵
巢癌组织中ALDH1阳性表达率为48.5%，这与Chang等[19]研究结果基本一致；本研究结果显示ALDH1的表达与卵巢癌的分级、淋巴结转移和Ki-67指数显著相关，ALDH1阳性表达组患者生存率显著低于阴性表达组，这些结果与其他文献结果类似，提示ALDH1与卵巢癌的恶性程度相关，可能参与卵巢癌的侵袭、转移过程，可作为卵巢癌预后不良的指标。

此外，本研究发现ALDH1的表达与卵巢癌组织学类型显著相关，这与Kuroda等[16]研究结果基本一致，但本研究显示
ALDH1在透明细胞腺癌中阳性表达率仅8.3%(1/12)，而Kuroda等研究发现ALDH1在透明细胞腺癌中阳性表达率高达48.6%(18/37)不一致，这可能与本研
究中透明细胞腺癌病例数较少有关，有待进一步扩大病例数证实。

Akiyama等[23]研究发现恶性黑色素瘤恶性度越高，Nestin表达越强，预后越差；Kawamoto等[24]发现发生神经侵犯及腹膜后组织侵犯的胰腺癌中，Nestin表达更强；Tabata等[25]研究表明膀胱尿路上皮癌临床分期越晚，Nestin表达越强，Nestin是提示预后差的独立因子。

本研究结果显示Nestin阳性表达率随着卵巢癌的分级升高而升高，随FIGO分期的进展而升高；Nestin表达越强，患者的生存
率越低。

虽然研究显示ALDH1和Nestin参与肿瘤细胞迁移、侵袭和转移等过程，但两者
在癌症中的相互作用和分子机制尚不清楚。

ALDH1可能通过对细胞周期以及
DNA修复方面的调控来维持卵巢癌干细胞样特性[26-27]。

Nestin参与细胞的肿
瘤转化，通过与细胞受体分子相互作用，控制细胞的极化、迁移和侵袭[28]。

本研究结果显示卵巢癌组织中ALDH1和Nestin表达呈正相关性，生存分析结果显示ALDH1和Nestin双阳性表达的患者预后最差，提示两者在卵巢癌的发展、侵袭
及转移过程中可能存在相互促进或协同作用。

肿瘤的生物学行为涉及到许多生物因子及蛋白的参与及调控，目前的数据表明，高表达ALDH1和Nestin提示卵巢癌患者预后不良，二者可能在卵巢癌的侵袭、复发和转移中起重要作用。

因此，本研究认为联合检测ALDH1和Nestin有利于阐明二者在卵巢癌发展、侵袭及转移中的演变规律，为卵巢癌早期诊断、治疗和预后判断提供参考依据。

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